13-Tygodniowe badanie toksyczności podprzewlekłej 2-(l-mentoksy)etanolu w nerkach szczurów F344
Mar 03, 2022
Po więcej informacji:emily.li@wecistanche.com
Takeshi Toyoda, Kohei Matsushita, Hirotoshi Akane, Tomomi Morikawa i Kumiko Ogawa
1 Wydział Patologii, Narodowy Instytut Nauk o Zdrowiu, 3-25-26 Tonomachi, Kawasaki-Ku, Kawasaki 210-9501, Japonia
Abstrakcyjny:
{{0}}(-Mentoksy)etanol był często stosowany jako środek aromatyzujący; jednak dane dotyczące toksyczności 2-(I-mentoksy)etanolu pozostają ograniczone. Przeprowadziliśmy 13-tygodniowe badanie toksyczności podprzewlekłej 2-(I-mentoksy)etanolu u samców i samic szczurów F344, z dawkami 0,15 d. lub 250 mg/ke masy ciała (podawany doustnie dziennie średnia przy użyciu oleju kukurydzianego jako nośnika W żadnej z grup nie zaobserwowano istotnych zmian toksykologicznych w stanie ogólnym, masie ciała ani przyjmowaniu pokarmu Ocena hematologiczna wykazała zmniejszenie stężenia hemoglobiny, hematokrytu, średniej objętości krwinki i średniej hemoglobiny w krwinkach w grupie samców 250 mg/kg. Biochemia surowicy wykazała podwyższony całkowity cholesterol w grupie samców i samic szczurów 250 mg/kg, obniżony poziom trójglicerydów w grupie samic 250 mg/kg i wzrost całkowitego białka w grupie samców 250 mg/kg, wskazuje na wpływ na metabolizm lipidów i syntezę białek.W przypadku masy narządów, bezwzględna i względna masa wątroby i nadnerczy wzrosła odpowiednio w grupie 250 mg/kg obu płci i grupie mężczyzn w dawce 250 mg/kg. wykazała przewlekłą nefropatię u mężczyzn w grupach 15 mg/kg lub wyższych, ze zwiększoną wartością bezwzględną i względnąnerkaciężary, jak również podwyższony poziom kreatyniny w surowicy u mężczyzn w grupach 60 i 250 mg/kg. Jednak w kanalikach proksymalnych zidentyfikowano granulki eozynofilowe zawierające β-globulinę, co sugeruje nefropatię 2-globulin specyficzną dla samców szczurów i bez znaczenia toksykologicznego. Wyniki te wskazują, że poziom nie obserwowanych działań niepożądanych w przypadku 2-(-mentoksy)etanolu wynosił 60 mg/kg masy ciała/dzień dla obu płci, (DOI; 10.1293tox2020-0091:J Toxicol Patho 1 2021;34:309-317)
Słowa kluczowe:2-(-mentoksy)etanol, 2-1-mentoksyetandl,jedzenieprzyłączeniowy, aromat, szczur Fischer, menthd
Wstęp
{{0}}(-Mentoksy)etanol (nr CAS 38618-23-4) jest klarowną i bezbarwną cieczą o charakterystycznym zapachu i jest szeroko stosowany jako środek aromatyzujący. Wspólny Komitet Ekspertów FAO/WHO ds. Dodatków do Żywności (JECFA) ocenił 2-(1-metoksy)etanol jako środek aromatyzujący sklasyfikowany jako substancja strukturalnie powiązana z mentolem. Na podstawie strukturalnej klasy środków aromatyzujących 2-(-metoksy)etanol został przypisany do Klasy I. W Stanach Zjednoczonych i Europie poziomy spożycia 2-(I-metoksy)etanolu przez ludzi były szacuje się, że wynosi odpowiednio 12 ug/osobę/dzień i 0,01 ug/osobę/dzień, oba poniżej progu klasy I wynoszącego 1800 ug/osobę/dzień. Na podstawie tych szacunków uważa się, że 2-(1-metoksy)etanol może nie stwarzać obaw związanych z bezpieczeństwem podczas rutynowego stosowania jako środek aromatyzujący.
As part of the risk assessment, it has been revealed that 2-(1-menthoxy)ethanol was not mutagenic in the Ames test, and the only in vivo study performed to date was an oral acute toxicity study in male and female rats (LD.:>2,000 mg/kg masy ciała [BW)1. Pomimo użycia 2-(1-mentoksy)etanolu jako środka smakowego. dostępne są ograniczone dane dotyczące toksyczności po podaniu wielokrotnym tego związku. Nasze laboratorium zbadało toksyczność kilku dodatków do żywności, w tym reprezentatywnych środków smakowych z każdej kategorii, na modelach gryzoni2-7. Aby wyjaśnić profil toksykologiczny i ustalić poziom, na którym nie obserwuje się działań niepożądanych (NOAEL), przeprowadziliśmy 13-tygodniowe badanie toksyczności podprzewlekłej 2-(1-etoksy)etanolu, który został podawano doustnie szczurom F344 przez zgłębnik.
Materiały i metody
Testowana substancja chemiczna
2-(I-Mentoksy)etanol (partia nr 510002, czystość 99,9 procent) wyprodukowany przez Takasago Int. Corp. (Tokio, Japonia) została zapewniona przez Wydział Standardów i Oceny, Departament Bezpieczeństwa Żywności, Ministerstwo Zdrowia, Pracy i Opieki Społecznej, Japonia, przy wsparciu Japońskiego Stowarzyszenia Materiałów Smakowych i Zapachowych (Tokio, Japonia). Chociaż substancja testowa została dostarczona jako mieszanina izomerów optycznych (nr CAS 38618-23-4), została potwierdzona przez producenta jako 1-enancjomer (nr CAS 75443-64-0). Jako nośnik wybrano doustny zgłębnik z olejem kukurydzianym (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japonia) ze względu na nierozpuszczalność w wodzie i lotność 2-(1-mentoksy)etanolu. Roztwory 2-(1-mentoksy)etanolu przygotowywano codziennie, bezpośrednio przed podaniem. Po przechowywaniu przez 2 godziny w temperaturze pokojowej, proporcje pozostałości 2-(-mentoksy)etanolu w Roztwór 4, 40 i 400 mg/ml potwierdzono jako odpowiednio 96,8 procent, 99,8 procent i 96,5% za pomocą chromatografii gazowej (Japońskie Stowarzyszenie Inspekcji ds. Środowiska Przemysłu Żywnościowego i Spożywczego, Tokio, Japonia).
Zwierzęta eksperymentalne
W sumie 40 samców i 40 szczurów wolnych od patogenów swoistych dla samic (F344/DuCrlCrlj, 5-tygodniowe) zakupiono z Charles River Laboratories Japan (Yokohama, Japonia) i wykorzystano po aklimatyzacji przez jeden tydzień. Podczas badania zwierzęta trzymano w klatkach z poliwęglanu z miękką ściółką wiórową, utrzymywanych w pomieszczeniu z systemem barierowym do kontroli cyklu światło/ciemność (12 h), wentylacji (szybkość wymiany powietrza 18x/h), temperatury (24h). ±1 stopień) i wilgotność względną (55±5 procent). Klatki i ściółkę wiórową wymieniano dwa razy w tygodniu. Każde zwierzę miało swobodny dostęp do wody z kranu i podstawowej diety (CRF-1; Oriental Yeast, Tokio, Japonia). Na początku doświadczenia zwierzęta przydzielono losowo do czterech grup po 10 samców i samic szczurów w oparciu o masę ciała zmierzoną bezpośrednio przed rozpoczęciem leczenia badaną substancją chemiczną.
Projekt badania
We wstępnym {{0}}dniowym badaniu oceniającym 2-(1-mentoksy)etanol podawany w dawkach 0.200,400 i 800 mg/kg mc/dzień, bezwzględna i względna masa wątroby była znacząco zwiększona we wszystkich leczonych grupach obu płci (dane nie pokazane). Na podstawie tych wyników wybraliśmy dawki 2-(-mentoksy)etanolu 0,15,60 i 250 mg/kg masy ciała/dzień do podawania zarówno samcom, jak i samicom szczurów w obecnym 13- tygodniowe badanie toksyczności.
Stan ogólny i śmiertelność oceniano codziennie. Masę ciała, jak również ilość dostarczanej i resztkowej diety mierzono raz w tygodniu w okresie doświadczalnym. Wszystkie szczury głodzono przez noc po zakończeniu leczenia, a próbki krwi do hematologii i biochemii surowicy pobrano z aorty brzusznej w głębokim znieczuleniu wziewnym przy użyciu izofluranu. Projekt badania był zgodny z wytycznymi dotyczącymi oznaczeń dodatków do żywności i rewizji standardów stosowania dodatków do żywności w Japonii (1996) i zatwierdzony przez Komisję ds. Opieki nad Zwierzętami i Utylizacji w Narodowym Instytucie Nauk o Zdrowiu w Japonii.
Hematologia i biochemia surowicy
Następujące parametry hematologiczne analizowano za pomocą automatycznych analizatorów hematologicznych ProCyte Dx (IDEXX Laboratories, Westbrook, ME, USA): liczba białych krwinek (WBC), liczba krwinek czerwonych (RBC), stężenie hemoglobiny (HGB), hematokryt (HCT) ), średnia objętość krwinki czerwonej (MCV), średnia hemoglobina krwinki czerwonej (MCH),
średnie stężenie hemoglobiny w krwinkach (MCHC), liczba płytek krwi (PLT) i różnicujące leukocyty, w tym neutrofile (neutrofile), limfocyty (limfa), monocyty (mono), eozynofile (Eosino) i bazofile (Baso). Analiza biochemiczna surowicy została przeprowadzona przez Oriental Yeast dla następujących parametrów: białko całkowite (TP), albumina (Alb), stosunek albumina/globulina (A/G), bilirubina całkowita (Bil). glukoza, cholesterol całkowity (T-Chol), triglicerydy (TG), azot mocznikowy (BUN), kreatynina (Cre), wapń (Ca), fosfor nieorganiczny (IP), sód (Na), potas (K), chlor (Cl), aminotransferaza as-paraginianowa (AST), aminotransferaza alaninowa (ALT), fosfataza alkaliczna (ALP) i transpeptydaza y-glutamylowa (y-GTP).
Masy narządów i ocena histopatologiczna
U wszystkich zwierząt przeprowadzono pełną sekcję zwłok. i mózg, grasica, płuca, serce, śledziona,wątroba, nadnerkowyżołądź,nerkiważono jądra i jajniki. Narządy te, a także tkanki z rdzenia kręgowego, nerwu trójdzielnego, przysadki, jamy nosowej, gruczołów ślinowych, języka, przełyku, tchawicy, aorty, tarczycy, przytarczyc, trzustki, żołądka, jelita cienkiego i grubego, podżuchwowego i krezkowego węzły chłonne, pochwa, macica, pęcherz moczowy, gruczoł krokowy, pęcherzyki nasienne, najądrza, kość udowa i mostek ze szpikiem kostnym, kręgami, mięśniami szkieletowymi, nerwem kulszowym, skórą i gruczołem sutkowym utrwalano w 10% formalinie buforowanej obojętnie; następnie przygotowano skrawki zatopione w parafinie i wybarwiono hematoksyliną i eozyną do badania histopatologicznego. Jądra i oczy z gruczołami Hardera utrwalono odpowiednio w utrwalaczu Bouina i roztworze Davidsona. Tkanki kostne, w tym jamę nosową, kręgi, mostek i kość udową, były odwapniane przy użyciu mieszaniny 10% kwasu mrówkowego i 10% buforowanej formaliny przez okres do 2 tygodni. Ocenę histopatologiczną przeprowadzono dla wszystkich tkanek uzyskanych od zwierząt w grupie kontrolnej i grupie, której podawano najwyższą dawkę, chyba że zaobserwowano jakiekolwiek zmiany związane z leczeniem.
Immunohistochemia dla ,-globuliny
U samców szczurów akumulację globuliny w nerkach zbadano za pomocą analizy immunohistochemicznej skrawków zatopionych w parafinie. W celu odzyskania antygenu skrawki otrzymane od 5 szczurów w każdej grupie inkubowano z proteinazą K (DAKO, Glostrup, Dania) przez 1 min w temperaturze pokojowej. Wszystkie skrawki zanurzono w 3% roztworze H2O/metanol na 10 minut w temperaturze pokojowej w celu inaktywacji aktywności endogennej peroksydazy. Po zablokowaniu reakcji nieswoistych 10 procentową normalną surowicą królika, skrawki inkubowano z pierwszorzędowym przeciwciałem dla β-globuliny (rozcieńczone 1:400; anty-szczurze przeciwciało globulinowe; R&D Systems, Minneapolis, MN, USA) przez noc w 4 stopniach s. Wizualizację wiązania przeciwciała przeprowadzono przy użyciu zestawu Vecta-Stain Elite ABC Kit (Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) i 3,3'-diaminobenzydyny. Wszystkie skrawki wybarwiono kontrastowo hematoksyliną.
Analiza statystyczna
Zmienność wartości danych dotyczących masy ciała w okresie doświadczalnym, a także hematologii, biochemii surowicy i masy narządów, oceniono pod kątem jednorodności za pomocą testu Bartletta. Dla danych jednorodnych i heterogenicznych zastosowano odpowiednio jednokierunkową analizę wariancji i test Kruskala-Wallisa. W celu określenia statystycznie istotnych różnic zastosowano test wielokrotnego porównania Dunnetta do porównania grup kontrolnych i leczonych. Porównanie zachorowalności i stopni histopatologicznych analizowano stosując odpowiednio test dokładnego prawdopodobieństwa Fishera i test U/ Manna-W-Whitneya. Wartości P z<0.05 were="" considered="" statistically="">
Wyniki
Parametry życiowe, hematologia i biochemia surowicy Nie odnotowano żadnych istotnych objawów klinicznych przez cały okres doświadczalny, a wszystkie zwierzęta przeżyły do zaplanowanej sekcji. Ponadto nie zaobserwowano znaczących różnic w masie ciała i dziennym przyjmowaniu pokarmu u samców i samic szczurów (ryc. 1A i B).
Dane hematologiczne i biochemiczne surowicy przedstawiono odpowiednio w Tabelach I i 2. Analizy hematologiczne wykazały znaczne obniżenie HGB, HCT, MCV i MCH oraz wzrost PLT u samców szczurów, którym podawano 250 mg/kg masy ciała/dobę 2-(1-mentoksy)etanol (Tabela 1). W biochemii surowicy u samców w grupie otrzymującej 250 mg/kg odnotowano znaczny wzrost TP, T-Chol i Ca oraz spadek Bil i ALP (Tabela 2). Znaczący wzrost Cre i spadek A/G odnotowano u samców z grup 60 i 250 mg/kg. U kobiet znaczny wzrost Ca i spadek ALP odnotowano w grupach 60 i 250 mg/kg, podczas gdy podwyższony T-Chol i obniżony A/G, Bil, TG.AST i ALT wykryto w grupie 250 mg/ grupa kg.
Chociaż u samców, którym podawano 60 mg/kg zaobserwowano znaczny wzrost TG i spadek Cl, brak jakiegokolwiek związku z dawką sugerował, że różnice te nie były związane z ekspozycją na badaną substancję.
Masy narządów
Dane dotyczące masy narządów podsumowano w Tabeli 3. Bezwzględna i względna masa wątroby znacznie wzrosła u obu płci w grupie otrzymującej 250 mg/kg (Tabela 3). Istotny wzrost względnej masy wątroby zaobserwowano u samców w grupie 60 mg/kg. U samców bezwzględna i względnanerkamasy znacznie wzrosły w grupach 60 i 250 mg/kg. W grupie samców w dawce 250 mg/kg odnotowano znaczny wzrost bezwzględnej i względnej masy nadnerczy oraz względnej masy śledziony i jąder.
Histopatologia i immunohistochemia
Dane dotyczące wyników histopatologicznych i immunohistochemicznych podsumowano odpowiednio w Tabelach 4 i 5. Wyniki badań histopatologicznych wykazały, że częstość akumulacji ziarnistości eozynofilowych (ryc. 2A-D), kanalików zasadochłonnych i szklistości oraz ogniskowego zapalenia śródmiąższowego wnerka, były istotnie zwiększone w grupach leczonych wyłącznie mężczyznami w porównaniu z grupą kontrolną (Tabela 4). Na podstawie analiz immunohistochemicznych samce szczurów traktowane badaną substancją wykazywały wzrost immunoreaktywności globulin w komórkach nabłonka kanalików proksymalnych, wykazując wyraźną zależność od dawki (Fig. 2E-H) (Tabela 5).
Podczas sekcji jeden samiec szczura w grupie 250 mg/kg wykazał poważne powiększenie prawej stronynerkaze względu na histologicznie charakterystyczny nerczak zarodkowy. Chociaż nerczak zarodkowy występuje rzadko u większości szczepów szczurów9, ten przypadek uznano za incydentalny, ponieważ żadne inne zwierzęta nie wykazywały podobnych zmian. Ponadto w badaniach rakotwórczości jamy ustnej częstość występowania spontanicznego nerczaka zarodkowego u samców szczurów F344/DuCrlCrlj wahała się podobno między 0-2.0 procent 10. Chociaż sporadycznie wykrywano kilka zmian w innych narządach, nie było znaczącego leczenia- Widoczne były zależne zmiany w częstości występowania tych zmian.
Dyskusja
Do tej pory 24 czynniki sprzyjające, w tym 2-(-mentoksy)etanol, zostały ocenione przez JECFA jako substancje strukturalnie powiązane z mentolem i wszystkie są wymienione jako „brak obaw o bezpieczeństwo” przy obecnym szacowanym poziomie spożycia. 2-(1-Mentoksy)etanol jest klasyfikowany w podgrupie alicyklicznych alkoholi lub eterów i uważa się, że jest głównie sprzężony z kwasem glukuronowym, a następnie wydalany z moczem!. Chociaż doustne wartości LD tych substancji u gryzoni są stosunkowo wysokie, dane z badań toksyczności po podaniu wielokrotnym pozostają ograniczone. 13-Tygodniowe badanie toksyczności po podaniu wielokrotnym ujawniło, że karboksylan mentylopirolidonu (nr CAS 68127-22-0), związek strukturalnie podobny do mentolu, może być związany ze zwiększeniem względnej aktywności wątroby inerkamasy u samców i samic szczurów rasy Wistar. Akumulację β-globuliny w proksymalnych kanalikach samców szczurów zaobserwowano również przy dawce 1,1 μg/kg masy ciała/dzień, a NOAEL określono na 109 mg/kg masy ciała/dzień.
W obecnym 13-tygodniowym badaniu toksyczności podprzewlekłej 2-(1-mentoksy)etanolu nie zaobserwowano zmian toksykologicznych w stanie ogólnym, masie ciała i przyjmowaniu pokarmu. Po ocenie hematologicznej zaobserwowaliśmy spadek HGB (96,6 procent do średnich wartości kontrolnych), HCT (96,3 procent), MCV (98,4 procent) i MCH (98,2 procent) oraz wzrost PLT (111 procent) u mężczyzn Grupa 250 mg/kg, która została uznana za toksykologiczny wpływ leczenia 2-(1-mentoksy)etanolem Zarówno bezwzględny (115 procent u obu płci), jak i względny (119 procent u mężczyzn i 111 procent u kobiet Masa wątroby była znacząco zwiększona u obu płci w grupach 250 mg/kg. Chociaż nie było zmian histopatologicznych w wątrobie, zwiększone poziomy T-Chol w surowicy (110 procent u mężczyzn i 121 procent u kobiet) i TP (105% u mężczyzn) oraz zmniejszenie TG (60,1 procent u kobiet) w 250 Grupy mg/kg wskazują na toksyczne zmiany związane z metabolizmem lipidów i syntezą białek w wątrobie. Wykryto również obniżone stężenie HGB i MCH oraz podwyższone PLT, T-Chol i TP u mężczyzn oraz obniżone TG i zwiększoną bezwzględną i względną masę wątroby u obu płci, z istotnością statystyczną w 28-dniowym badaniu wstępnym (dane nieprzedstawione ), potwierdzając, że te zmienione parametry hematologiczne i biochemiczne surowicy, a także masy wątroby, nie były przypadkowe, ale związane z substancją badaną. W przeciwieństwie do tego, znaczącemu wzrostowi względnej masy wątroby wykrytemu w grupie mężczyzn 60 mg/kg w niniejszym badaniu nie towarzyszył wzrost bezwzględnej masy lub zmiany powiązanych parametrów biochemicznych, co sugeruje, że ten wzrost był zmianą adaptacyjną.
Uznano, że istotnie zwiększona (120 procent) i względna (118 procent) masa nadnerczy u mężczyzn w grupie 250 mg/kg była związana z badaną substancją chemiczną. Ponadto zwiększone bezwzględne i względne masy nadnerczy u obu płci wykazały wyraźną zależność od dawki w 28-dniowym badaniu wstępnym (dane nieprzedstawione), co wskazuje na związek z leczeniem badaną substancją chemiczną. Chociaż przerost nadnerczy mógł wynikać ze stresu, nie było wyników sugerujących stres, takich jak zmniejszenie przyrostu masy ciała lub atrofia grasicy i innych narządów limfatycznych, zarówno w niniejszych, jak i wstępnych badaniach. Ponieważ w przypadku zahamowania enzymów związanych ze steroidogenezą mogą nie wystąpić zmiany histopatologiczne w nadnerczach nawet przy upośledzonym wytwarzaniu glikokortykosteroidów1, nie można wykluczyć możliwości, że zwiększona masa nadnerczy jest objawem toksycznym. W przeciwieństwie do tego, zwiększone względne masy śledziony i jąder w grupie mężczyzn 250 mg/kg, nie obserwowane we wstępnym badaniu, zostały uznane za nieistotne toksykologicznie ze względu na brak zmian histopatologicznych lub znacząco zwiększone masy bezwzględne. Podobnie, biochemia surowicy wykazała spadek A/G i wzrost Ca u obu płci, co uznano za niemające znaczenia toksykologicznego, biorąc pod uwagę, że nie wykryto żadnych nieprawidłowości w powiązanych parametrach. Ponadto obniżone poziomy Bil i ALP u obu płci oraz obniżone AST i ALT u kobiet były sprzeczne z oczekiwanymi efektami toksycznymi i zostały uznane za nieistotne.
Przewlekła nefropatia charakteryzująca się kanalikami zasadochłonnymi, szklistym wałeczkiem i ogniskowym zapaleniem śródmiąższowym obserwowano z istotnością statystyczną u mężczyzn we wszystkich leczonych grupach. Ponadto zwiększone Cre w surowicy oraz bezwzględne i względnenerkamasy wykryto w grupach samców 60 i 250 mg/kg; zmian tych nie zaobserwowano w grupach leczonych kobiet. W tych przypadkach stopień akumulacji granulek eozynofilowych w komórkach nabłonka kanalików proksymalnych był zwiększony w sposób zależny od dawki. Ziarna te zostały potwierdzone immunohistochemicznie jako 2globulina, co wskazuje na występowanie nefropatii xglobulinowej. -Globuliny związane z niektórymi substancjami chemicznymi, takimi jak d-limonen, gromadzą się w lizosomach i są obserwowane w kanalikach proksymalnych jako granulki eozynofilowe lub hialinowe9. Ta akumulacja może uszkadzać komórki nabłonka, prowadząc do przewlekłej postępującej nefropatii i w konsekwencji powstawania guza. Tak więc, chociaż NOAEL dla 2-(1-men-toksy)etanolu związanego z ., nefropatią globulinową u samców szczurównerkinie został zidentyfikowany, ten typ nefropatii jest podobno specyficzny dla samców szczurów, a zatem nie ma znaczenia dla oceny ryzyka u ludzi. Zwiększone ryzyko niewydolności nerek za pośrednictwem mechanizmów związanych z akumulacją β-globuliny jest wysoce nieprawdopodobne, ponieważ białko to nie występuje u ludzi14. Dlatego uznano za uzasadnione wykluczenie zmian związanych z przewlekłą nefropatią obserwowanych u mężczyzn z określania NOAEL.
Podsumowując, obecne 13-tygodniowe badanie toksyczności podprzewlekłej wykazało, że leczenie 2-(/-mentoksy)etanolem w dawce 250 mg/kg masy ciała/dobę powodowało toksyczne zmiany w hematologii, biochemii surowicy i masie narządów u mężczyzn i samice szczurów F344. Na podstawie zaobserwowanych wyników NOAEL dla 2-(1-mentoksyetanolu został oszacowany na 60 mg/kg masy ciała/dzień dla obu płci).
Bibliografia
1 JEFF. Seria dodatków do żywności WHO: 60. Ocena bezpieczeństwa niektórych dodatków do żywności. 579-593. 2009.
2. Akagi J, Cho YM, Mizuta Y, Toyoda T i Ogawa K. Ocena podchronicznej toksyczności izotiocyjanianu 5-heksenylu, identycznej z naturalnymi substancji smakowej z Wasabia japonica, u szczurów F344/DuCrj. Chemia żywnościowa Toxicol. 122: 80–86. 2018. [Medline] [Odsyłacz]
3. Matsushita K, Toyoda T, Morikawa T i Ogawa K. 13--tygodniowe badanie toksyczności podprzewlekłej acetalu glikolu propylenowego waniliny u szczurów F344. Chemia żywnościowa Toxicol. 132: 110643. 2019. [Medline] [CrossRef]
4. Matsushita K, Toyoda T, Morikawa T, Takahashi M, Inoue K i Ogawa K. 13-Tygodniowe badanie toksyczności podprzewlekłej 2-etylobutanalu u szczurów F344. Reguluj Toxicol Pharmacol. 100: 118–126. 2018. [Medline] [Odsyłacz]
5. Toyoda T, Cho YM, Matsushita K, Tachibana S, Senuma M, Akagi J i Ogawa K. 13-Tygodniowe badanie toksyczności podprzewlekłej octanu heksylu u szczurów SD. J Toksykol Pathol. 32: 205–212. 2019. [Medline] [Odsyłacz]
6. Akagi J, Cho YM, Mizuta Y, Tatebe C, Sato K i Ogawa K. Ocena podchronicznej toksyczności eteru metylowego izoeugenolu u szczurów F344/DuCrj przez 13-tygodniowe podawanie doustne. Reguluj Toxicol Pharmacol. 102: 34–39. 2019. [Medline] [Odsyłacz]
7. Ide T, Mizuta Y, Akagi J, Masumoto N, Sugimoto N, Sato K, Ogawa K i Cho YM. 90-dniowe badanie toksyczności powtarzanej dawki doustnej czterech stereoizomerów 2,4-dimetylo- 4-fenylotetrahydrofuranu, syntetycznej substancji aromatyzującej, u szczurów F344. Reguluj Toxicol Pharmacol. 114: 104664. 2020. [Medline] [CrossRef]
8. Furukawa S, Nagaike M i Ozaki K. Bazy danych technicznych aspektów immunohistochemii. J Toksykol Pathol. 30: 79–107. 2017. [Medline] [Odsyłacz]
9. Seely JC, Hard GC i Blankenship B. Kidney. W: Patologia szczura Boora, wyd. AW Suttie (red.). Wydawnictwo akademickie, Londyn. 125-166. 2018.
10. Takanobu K, Aiso S, Umeda Y, Senoh H, Saito M, Katagiri T, Ikawa N, Ishikawa H, Mine T, Take M, Haresaku M, Matsumoto M i Fukushima S. /DuCrlCrlj szczury]. Sangyo Eiseigaku Zasshi. 57: 85–96. 2015 (po japońsku). [Medline] [Odsyłacz]
11. JEFF. Seria raportów technicznych WHO: 891. Ocena niektórych dodatków do żywności (pięćdziesiąty pierwszy raport Wspólnego Komitetu Ekspertów FAO/WHO ds. Dodatków do Żywności). 111–118. 2000.
12. mgr Wallig. Układ hormonalny. W: Podstawy Patologii Toksykologicznej, wyd. MA Wallig, WM Haschek, CG Rousseaux, B Bolon i BW Mahler (red.). Prasa akademicka, Londyn. 565-624. 2018.
13. Swenberg JA. Nefropatia 2u-globulinowa: przegląd zaangażowanych mechanizmów komórkowych i molekularnych oraz ich implikacji dla oceny ryzyka u ludzi. Perspektywa zdrowia środowiska. 101 (Suppl 6): 39–44. 1993. [Medline] [Odsyłacz]
14. Nagolenniki P. Układ moczowy. W: Histopatology of Preclinical Toxicity Studies, wyd. Prasa akademicka, Londyn. 537-614. 2012.
