Acteoside, składnik Stachys Sieboldii MIQ, może być obiecującym środkiem przeciwnerkowym: wpływ akteozydu na zapalenie nerek typu półksiężycowego anty-GBM u szczurów

Po więcej informacji:ali.ma@wecistanche.com

Kazumi Hayashi, Tadashi Nagamatsu, Mikio Ito, Tomohisa Hattoria i Yoshio Suzuki

Wydział Farmakologii, Wydział Farmacji, Uniwersytet Meijo, 150 Yagotoyama, Tenpaku-Ku, Nagoya 468, Japonia

ABSTRAKCYJNY

Efektyakteozyd(ACT) na anty-GBM typu półksiężycowegozapalenie nereku szczurów. Kiedy szczury były leczoneAkteozydod 1. dnia po podaniu iv surowicy anty-GBM,Akteozydhamował wzrost wydalania białka z moczem. wAkteozydleczonych szczurów, zawartość cholesterolu i kreatyniny oraz wytwarzanie przeciwciał przeciwko króliczej r-globulinie w osoczu były niższe niż u szczurów kontrolnych z nerczycą. Obserwacje histologiczne wykazały, że czynnik ten hamował hiperkomórkowość i częstość powstawania półksiężyców, adhezji ściany naczyń włosowatych do torebki Bowmana oraz martwicy włóknikowatej kłębuszków nerkowych. Ponadto depozyty szczurzych IgG i C3 na GBM były znacznie mniejsze wAkteozydleczonej grupie niż w kontrolnej grupie nerczycowej. Gdy leczenie rozpoczęto od 20 dnia po dożylnym wstrzyknięciu surowicy anty-GBM, dzięki której choroba została ustalona,Akteozydspowodowało podobny wpływ nanerkowyszczury, jak podano powyżej. Wyniki te sugerują, że Acteoside może być użytecznym lekiem przeciwko szybko postępującemu kłębuszkowemu zapaleniu nerek, które charakteryzuje się ciężkimi zmianami kłębuszkowymi z rozlanymi półksiężycami.

Słowa kluczowe: anty-GBM typu półksiężycowegozapalenie nerek,Akteozyd, Szczur-IgG,Szczur-C3

Kliknij, aby użyć Cistanche z Acteoside

Chyorogi Stachys sieboldii MIQ (Labiatae) jest przepisywany na wiele chorób, a bulwa ta jest używana jako pokarm przez Chińczyków, Rosjan i Japończyków. Ostatnie badania wykazały, że chyrogi mają działanie przeciw niedotlenieniu (1), hamujące aktywność hialuronidazy (2) i immunosupresyjne (3).

Z drugiej strony wspomniano, że odpowiedź immunologiczna uczestniczy w rozwoju zapalenia nerek. Mówiąc bardziej konkretnie, w uszkodzeniu kłębuszków pośredniczy odkładanie się kompleksu immunologicznego w kłębuszkach, po którym następuje reakcja immunologiczna, obejmująca aktywację dopełniacza i uwalnianie innych mediatorów zapalnych. W ostatnich badaniach wiele uwagi poświęcono udziałowi komórkowej odpowiedzi immunologicznej w rozwoju kłębuszkowego zapalenia nerek (4, 5). Ponadto Neild i in. (6) stwierdzili, że supresja funkcji komórek T przez cyklosporynę A (CyA) zablokowała dalszy rozwój zmian kłębuszkowych w ostrym zapaleniu nerek. Donieśliśmy, że mizorybina (7), azatiopryna (7), CyA (8), metyloprednizolon (9) i niektóre składniki roślinne (10) wykazują działanie immunosupresyjne, wykazując zbawienny wpływ na zapalenie nerek przeciw GBM. Chociaż te leki immunosupresyjne wywierają działanie przeciwnerkowe, trudno jest je stosować w badaniach klinicznych ze względu na ich skutki uboczne (11). Dlatego oczekuje się, że zostanie opracowany nowy środek immunosupresyjny do leczenia zapalenia nerek w stadium klinicznym.

Celem niniejszego badania było wyjaśnieniedziałanie przeciwnerczycowe akteozydu, składnik chyorogi, na zapalenie nerek typu półksiężycowego u szczurów przeciwko GBM.

MATERIAŁY I METODY

Zwierząt

Samce szczurów rasy Sprague-Dawley, ważące około. Do wszystkich eksperymentów użyto 160 g (Nihon SLC, Hamamatsu). Zwierzęta te trzymano w klimatyzowanym pomieszczeniu w 23 ± 1 C podczas okresu doświadczalnego.

Leki

Strukturę chemiczną akteozydu (ACT) (Tsumura Co., Ltd., Tokio) przedstawiono na ryc. 1. Składnik ten wyekstrahowano z nadziemnych części cyorogów (Stachys sieboldii MIQ). Czystość ACT zweryfikowano metodą HPLC (kolumna: żel TSK ODS-80TM (4.0 id x 250 mm); faza ruchoma: 20 procent CH3CN/H2O, zawierający 10 AcOH; Szybkość przepływu: 0,7 ml/min; Temp.: temperatura pokojowa; Detekcja: UV 254 nm) w Tsumura Co., Ltd. ACT zastosowany w tych eksperymentach miał czystość większą niż 9970. ACT rozpuszczono w wodzie destylowanej. Stosowano również dipirydamol (Dip) (Boehringer Ingelheim, Niemcy) i azatioprynę (Aza) (Sigma, St. Louis, MO, USA); Leki te zawieszono w 1070 gumie arabskiej.

Indukcja zapalenia nerek typu półksiężycowego przeciw GBM

Zapalenie nerek typu półksiężycowego anty-GBM wywołano przez immunizację szczurów, które otrzymały nerkogenną dawkę króliczej surowicy przeciwko szczurzym GBM (anty-GBM) króliczą r-globuliną (rG) zgodnie z niewielką modyfikacją wcześniej opisanej metody ( 12). W tym eksperymencie szczury ważyły ​​około. 160 g podano 0,6 ml/zwierzę surowicy anty-GBM do żyły ogonowej.

Działanie badanych leków oceniano podając je od 1. dnia po wstrzyknięciu surowicy antyGBM (faza heterologiczna) lub 20 dnia po wstrzyknięciu surowicy antyGBM (fazy autologiczne). W doświadczeniach pobrano próbki moczu 24-h, a następnie szczury podzielono na 5 lub 6 grup po 8 szczurów, tak aby średnia zawartość białka w moczu w 24-h w każdej grupie wynosiła podobnym poziomie.

Ocena przeciwnerkowego działania badanych leków

W eksperymencie leczenia farmakologicznego z fazy heterologicznej, czterem grupom podawano doustnie odpowiednio 3, 10 lub 30 mg/kg/dzień ACT lub 100 mg/kg/dzień Dip, w objętości 1 ml na 100 g masy ciała, codziennie od 1 dnia lub dzień po dożylnym wstrzyknięciu surowicy anty-GBM do 40 dnia. W eksperymentach leczenia lekami z fazy autologicznej, trzem lub czterem grupom podawano doustnie 3, 10 lub 30 mg/kg dziennie ACT (A) lub 30 mg/kg/dzień ACT, 100 mg/kg/dzień Zanurzanie lub odpowiednio 50 mg/kg/dzień Aza (B), w objętości 1 ml na 100 g masy ciała, codziennie od 20 dnia po dożylnym wstrzyknięciu surowicy anty-GBM do 40 (A) lub 45 dnia (Urodziny. Pozostała grupa otrzymała doustnie nośnik (wodę destylowaną) zamiast badanych leków i służyła jako kontrola nerczycowa. Ponadto, do porównania z grupami nerczycowymi zastosowano grupę nieleczoną (normalną).

Pobieranie moczu i krwi

Próbki moczu {{0}h pobierano przez trzymanie każdego zwierzęcia w indywidualnej klatce metabolicznej przez 24 godziny. Na początku zbierania moczu każde zwierzę otrzymało doustnie bez karmienia 8 ml wody destylowanej. Następnie mocz wirowano przy 3 000 obr./min przez 15 min w 41°C i supernatant stosowano do oznaczania białka. Ostatniego dnia eksperymentu za pomocą jednorazowej strzykawki pobrano 20 ml krwi z żyły nerkowej każdego znieczulonego szczura i umieszczono w probówce zawierającej 0,125 ml heparyny. Krew wirowano przy 5,000 obr./min w celu uzyskania osocza do określenia niektórych parametrów.

Oznaczenia zawartości białka w moczu oraz cholesterolu i kreatyniny w osoczu

Wydalanie białka z moczem określono metodą Kingsbury et al. (13) i wyrażone jako mg/24h moczu. Zawartość cholesterolu oznaczono komercyjnym zestawem testowym (Determine TC-5; Kyouwa Medix Co., Ltd, Tokio) (14) i wyrażono jako mg/dl osocza. Zawartość kreatyniny określono przy użyciu zestawu do oznaczania kreatyniny (CRE-EN; Kainos, Inc., Tokio) i wyrażono jako mg/dl osocza/100 g masy ciała.

Pomiar miana przeciwciał w osoczu przeciwko -G

Miano przeciwciał w osoczu przeciwko rG określono przez pośrednią hemaglutynację z użyciem uwrażliwionych krwinek czerwonych owcy (15).

Pomiar poziomu dopełniacza w osoczu CH50

Poziom CH50 dopełniacza w osoczu określano metodą Mayera (16).

Ocena parametrów histopatologicznych

Do badania pod mikroskopem świetlnym nerki wyizolowano od szczurów znieczulonych pentobarbitalem, a następnie odwodniono i utrwalono, zanurzając tkanki stopniowo w różnych tradycjach alkoholu etylowego od niskiego do wysokiego. Tkanki następnie zatopiono w parafinie i pocięto na 2 do 3 plastrów o grubości em. W badaniach nad zapaleniem nerek typu półksiężycowego przeciw GBM, skrawki barwiono hematoksyliną i eozyną oraz trichromem Massona. Pod mikroskopem świetlnym obserwowano liczbę jąder (hiperkomórkowość), tworzenie sierpów, adhezję torebki Bowmana do ścian naczyń włosowatych (adhezja) oraz martwicę włóknikowatą w kłębuszkach. Do oceny tych parametrów wybrano przekrój równikowy metodami losowego doboru próby. Zaobserwowano pięćdziesiąt kłębuszków/przekrojów, a tempo pojawiania się tworzenia sierpów, adhezji i martwicy włóknikowatej wyrażono jako procent kłębuszków (przypadki) mających te zmiany morfologiczne, jak opisano wcześniej (17). Oceny dokonywała inna osoba, która nie znała tożsamości każdej próby. Do oceny hiperkomórkowości wybrano przekrój równikowy metodą losowego pobierania próbek. Liczbę jąder (w tym jąder komórek kłębuszków i wysiękowych leukocytów) zliczono i wyrażono jako średnią liczbę na przekrój kłębuszków w 10 kłębuszkach/przekrój.

Immunohistochemia

W tkankach do barwienia immunoenzymatycznego szczurzej IgG, skrawki parafinowe pocięto jak opisano powyżej, a skrawki potraktowano 0,1% proteazą w 0.05 M Tris- Bufor HCl przez 7 min, a następnie płukany w schłodzonej 0,01 M soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS), pH 7,4. Skrawki następnie inkubowano z mysim przeciwciałem monoklonalnym (mAb) przeciw szczurzym IgG (Cappel, West Cester, PA, USA) w rozcieńczeniu 1:100 przez 90 min. Skrawki ponownie płukano PBS, traktowano 0,3% nadtlenkiem wodoru w metanolu przez 20 minut w celu zablokowania endogennej peroksydazy i inkubowano z biotynylowaną oczyszczoną przez powinowactwo anty-mysią IgG i awidyną peroksydazą chrzanową z tetrachlorowodorkiem 3,3'-diaminobenzydyny (DAB). (Vecta stain ABC Kit; instytucja Vector, Burlingame, CA, USA). Wszystkie etapy prowadzono w temperaturze pokojowej.

Tkanki do barwienia immunoenzymatycznego proliferującego antygenu jądrowego komórki (PCNA), który jest markerem proliferacji komórek, utrwalono w 10% formalinie w PBS, a tkanki zatopione w parafinie wybarwiono według tej samej procedury, co w przypadku szczurzego IgG, z wyjątkiem zastosowanie mAb (19A2; Coulter Immunology, Hialeah, FL, USA) wobec PCNA.

Oznaczanie ilościowe szczurzych IgG, C3 i PCNA na skrawkach tkanek

Całkowitą powierzchnię immunoreaktywnych szczurzych IgG i C3 w kłębuszku mierzono w 30 kłębuszkach na skrawek za pomocą analizatora obrazu (Toyobo Image Analyzer V1; Toyobo Co., Ltd., Tokio) i przedstawiono jako przekrój mm2/kłębuszkowy (GCS). ). PCNA-dodatnie komórki w kłębuszku zliczono za pomocą analizatora obrazu, a wyniki wyrażono jako liczba komórek/GCS

Analizy statystyczne

Dane reprezentują średnią ± SD, a wyniki oceniono statystycznie za pomocą ANOVA. Gdy te wyniki były parametryczne, były one oceniane statystycznie za pomocą testu Duncana. Gdy wyniki były nieparametryczne, oceniano je statystycznie testem Kruskala-Wallisa. Procent hamowania obliczono w następujący sposób:

Procent hamowania ( procent )=(Kontrola - Testowany lek) x 100 / (Kontrola - Normalny)

WYNIKI

Wpływ Acteoside na zapalenie nerek typu półksiężycowego przeciw GBM

Wydalanie białka z moczem (Ryc. 2 i 3): Gdy leczenie ACT rozpoczęto od dnia po wstrzyknięciu surowicy anty-GBM (faza heterologiczna), pierwszą znaczącą supresję białka w moczu zaobserwowano w 5. dniu przy dawce 30 mg /kg, po; w 20 dniu przy 3 i 10 mg/kg, po; a 40 dnia z Dip w 100 mg/kg, po

Gdy ACT podawano od 20 dnia po wstrzyknięciu surowicy antyGBM (faza autologiczna), ACT w dawce 10 i 30 mg/dobę hamował wzrost wydalania białka do moczu do 30 dnia. Z drugiej strony, Aza przy 50 mg/kg był słabszy niż ACT przy 30 mg/kg, chociaż nie znacząco, a Dip nie miał wpływu.

Zawartość cholesterolu i kreatyniny w osoczu (Tabela 1): Zawartość cholesterolu i kreatyniny w osoczu oznaczano 40 lub 45 dnia. Zawartość cholesterolu w osoczu nerkowych szczurów kontrolnych była znacznie podwyższona. W przeciwieństwie do tego, podwyższenie zawartości cholesterolu zostało zmniejszone z ACT (30 mg/kg) z fazy heterologicznej o 60 procent poziomu kontrolnego i z ACT (30 mg/kg) z fazy autologicznej o 62'o kontroli poziom. Podwyższona była również zawartość kreatyniny w osoczu szczurów z nerkami. Z drugiej strony, w ACT (30 mg/kg) od szczurów leczonych obydwoma fazami, zawartość kreatyniny w osoczu była podobna do tej u normalnych szczurów.

Miano przeciwciał w osoczu przeciwko rG: Szczury z nerkami wykazały znacznie przyspieszone wytwarzanie przeciwciał. Przyspieszone wytwarzanie przeciwciał zostało stłumione do 72% poziomu kontrolnego przez traktowanie ACT (10 i 30 mg/kg) z fazy heterologicznej (Tabela 2), ACT (30 mg/kg) z fazy autologicznej i Aza do 70 i 51 procent poziomu kontrolnego, odpowiednio (dane nie pokazane) i nie miało na to wpływu Dip.

Obserwacja histologiczna (Tabela 3, Ryc. 4 i 5): Badanie pod mikroskopem świetlnym kłębuszków nerkowych ujawniło zmiany charakteryzujące się silnym tworzeniem się półksiężyców, adhezją, martwicą włóknikowatą i proliferacją komórek mezangialnych. Obserwacja histologiczna wykazała, że ​​ACT (zarówno z fazy heterologicznej, jak i autologicznej) hamuje hiperkomórkowość i częstość tworzenia sierpów, adhezji i martwicy włóknikowatej w kłębuszkach do 40 lub 45 dnia. Uszkodzenia szczurów z nerkami traktowanych Dip i Aza były również mniejsze niż u szczurów kontrolnych z nerkami. Jednakże, gdy szczury z nerkami leczono Dip z fazy autologicznej, Dip w niewielkim stopniu wpływał na zmiany histologiczne (dane nie pokazane).

Proliferację komórek kłębuszków, a mianowicie wzrost liczby komórek PCNA-dodatnich w kłębuszkach obserwowanonerczycowe szczury. W przeciwieństwie do tego, 30 dnia, 52 procent redukcjizaobserwowano w proliferacji komórek, co było związane wze znaczną redukcją komórki kłębuszkowejlularność w porównaniu z kontrolą (tab. 3).

Odkładanie się reagenta immunologicznego (Tabela 2 i Fig. 6): Możliwe było zaobserwowanie osadów szczurzych IgG i C3 na GBM u kontrolnych szczurów z nerkami; jednak nie znaleziono ich u normalnych szczurów. ACT (30 mg/kg) z fazy heterologicznej zmniejszył osadzanie się szczurzej IgG na GBM o 72% poziomu kontrolnego. Co więcej, ACT (3, 10 i 30 mg/kg) z fazy heterologicznej zmniejszył osadzanie się szczurzego C3 na GBM o 60 do 69 procent do 40 dnia. Nawet gdy podawano ACT z fazy autologicznej, hamowanie odkładania szczurzych IgG i C3 było podobne do powyższych wyników. Zanurzenie nie miało wpływu na odkładanie szczurzych IgG i C3. Jednakże Aza zmniejszyła odkładanie szczurzych IgG i C3 na GBM odpowiednio o 67 i 68 procent (dane nieprzedstawione).

Wpływ ACT na aktywność dopełniacza i złogi C3 na GBM w pierwotnym zapaleniu nerek przeciwko GBM (ryc. 7)

Zapalenie nerek anty-GBM typu pierwotnego indukowano u szczurów przez wstrzyknięcie 0,6 ml surowicy anty-GBM do żyły ogonowej, jak opisano wcześniej (18). Szczury z nerkami leczono wstępnie i po leczeniu ACT w dawce 30 mg/kg, po i czynnikiem jadu kobry (CVF) (Sigma) w dawce 10 fig/szczura, ip, trzy razy, co 8 godzin. Leczenie ACT i CVF zmniejszyło wydalanie białka z moczem, przy czym odsetek hamujący wynosił ok. odpowiednio 35 stopni i 71 proc. CH50 u szczurów kontrolnych z nerkami był znacznie niższy niż u normalnych szczurów w ciągu 24 godzin po wywołaniu zapalenia nerek. ACT hamował zmniejszone CH50 i zwiększone odkładanie się C3 na GBM u szczurów kontrolnych z nerkami. CVF zniósł osadzanie się CH50 i C3. Ponadto, w eksperymencie in vitro, ACT hamował aktywację dopełniacza o 37 procent. Gdy ACT podawano normalnym szczurom, ACT zmniejszał aktywację dopełniacza w eksperymencie ex vivo (dane nie pokazane).

DYSKUSJA

Szybko postępujące kłębuszkowe zapalenie nerek i choroby nerek w zespole Goodpasture'a są chorobami nowotworowymi, które przechodzą w niewydolność nerek po 2 lub 3 miesiącach od rozwoju choroby (19). Cechy charakterystyczne tego zapalenia nerek obejmowały hiperkomórkowość, wyraźną infiltrację neutrofili i monocytów oraz tworzenie się półksiężyców w kłębuszkach. W tej chorobie stosowano głównie terapię koktajlową środkami immunosupresyjnymi, lekami przeciwpłytkowymi i steroidami. Z drugiej strony, chociaż CyA jest lepszym lekiem immunosupresyjnym, który wywiera korzystny wpływ na eksperymentalne zapalenie nerek (6, 8), doniesiono, że CyA powoduje dysfunkcję nerek i powoduje nieodwracalne zmiany histologiczne w kłębuszkach nerkowych (11). Metyloprednizolon ma wiele skutków ubocznych. Co więcej, zjawisko odbicia i zespół odstawienia po długim leczeniu tym lekiem to dwa problemy. Dlatego należy opracować nowy środek immunosupresyjny do leczenia zapalenia nerek, który ma mniej skutków ubocznych.

Półksiężycowe zapalenie nerek przeciw GBM jest modelem eksperymentalnym, który wykazuje zmiany histologiczne i patologiczne podobne do tych w szybko postępującym kłębuszkowym zapaleniu nerek i chorobie nerek w zespole Goodpasture (20). Rozwój i progresja tego zapalenia nerek składa się z 2 faz, w których pośredniczą odpowiedzi immunologiczne. Wczesna reakcja, tak zwana faza heterologiczna, jest spowodowana odkładaniem się przeciwciała anty-GBM, po którym następuje zależna od dopełniacza akumulacja granulocytów wielojądrzastych (21, 22). Faza późna (faza autologiczna) rozwija się przez wiązanie autologicznych przeciwciał osadzonych wzdłuż GBM i napływ monocytów/makrofagów do kłębuszków po tej reakcji (22, 23). To zapalenie nerek charakteryzuje się dwufazowym białkiem w moczu i hiperkomórkowością, która obejmuje tworzenie się półksiężyców i martwicę włóknikowatą. Uważa się, że w tworzeniu sierpów pośredniczą migrujące makrofagi i proliferujące komórki nabłonka (22, 24).

Wcześniej informowaliśmy, że mizorybina i Aza, środek immunosupresyjny (7), hamowały podwyższenie poziomu przeciwciał w osoczu przeciwko króliczej IgG i Pachymanowi, głównemu składnikowi kokosów Poria (18), zmniejszały stopień odkładania się C3 na GBM i oba były wyraźnie skuteczny przeciwko zapaleniu nerek anty-GBM.

Terapie ACT hamowały rozwój kłębuszkowego zapalenia nerek przeciw GBM, ocenianego przez zmniejszenie białkomoczu i cholesterolu w osoczu, zapobieganie zaburzeniom czynności nerek i zapobieganie postępującym zmianom histologicznym, w tym rozwojowi półksiężyców kłębuszkowych i hiperkomórkowości. Czterdziestego dnia sam ACT w dawce 30 mg/kg znacząco zmniejszył ilość odkładania się szczurzej IgG na GBM, w której pośredniczy hamowanie wytwarzania przeciwciał w tym modelu nerczycowym. Z drugiej strony ilość osadów C3 na GBM została zmniejszona przez ACT przy 3, 10 lub 30 mg/kg. Co więcej, ACT znacząco hamował aktywację dopełniacza zarówno w doświadczeniach in vitro, jak i ex vivo. Redukcja CH50 u szczurów kontrolnych z nerkami była hamowana przez ACT. Powyższe dane sugerują, że ACT hamuje uszkodzenie nerek poprzez hamowanie aktywacji dopełniacza, ponieważ kompleks ataku błony dopełniacza (MAC) jest zaangażowany w patogenezę uszkodzenia kłębuszków nerkowych (25), a podlityczny MAC ma potencjalne mediatory zapalne, które mogą być związane z uszkodzeniem kłębuszków nerkowych, proliferacja komórek mezangialnych i dyfuzja macierzy zewnątrzkomórkowej, takich jak reaktywne formy tlenu (26), proteaza (27), prostaglandyny (28) i interleukina -1 jak cytokiny (29), jak również kolagen (30).

Uważa się, że aktywacja dopełniacza jest ściśle związana z naciekaniem leukocytów. W ostatnich badaniach stwierdzono, że C5a prowokuje adhezję monocytów i neutrofili odpowiednio do komórek mezangialnych i komórek śródbłonka (31, 32). Dlatego w kolejnym badaniu zamierzamy zbadać wpływ ACT na akumulację leukocytów w kłębuszkach nerkowych.

BIBLIOGRAFIA

1 Yamahara J, Kitani T, Kobayashi H i Kawahara Y: Studia nad Stachys sieboldii MIQ. II Działanie antyoksydacyjne i składniki aktywne. Yakugaku Zasshi 110, 932-935 (1990) (abstrin angielski)

2 Takeda Y, Fujita T, Satoh T i Kakegawa H: O składnikach glikozydowych Stachys sieboldii MIQ. i ich wpływ na aktywność hialuronidazy. Yakugaku Zasshi 105, 955-959 (1985) (abstr w języku angielskim)

3 Sasaki H, Nishimura H i Morita T: Immunosupresyjne zasady Rehmannia gluttons var. hueichingensis. Planta Med 55, 458-462 (1989)

4 Saito T i Atkins RC: Wkład jednojądrzastych leukocytów w postęp eksperymentalnego ogniskowego stwardnienia kłębuszków. Nerka Int 37, 1076-1083 (1990)

5 Tipping PG, Neale TJ i Holdsworth SR: Udział limfocytów T w indukowanym przez przeciwciała doświadczalnym kłębuszkowym zapaleniu nerek. Nerka Int 27, 530-537 (1985)

6 Neild GH, Ivory K i Williams DG: Cyklosporyna A hamuje chorobę posurowiczą sactus u królików. Clin Exp Immunol 52, 586-594 (1983)

7 Okamoto K, Ito M i Suzuki Y: Badania nad działaniem przeciwnerkowym na mizorybinę (p-INN, Bredinin®), nowy środek immunosupresyjny, oraz azatioprynę (2): Wpływ na zapalenie nerek typu półksiężycowego przeciw GBM u szczurów. Jpn J Pharmacol 34, 33-41 (1984)

8 Nagamatsu T, Kojima N, Kondo N, Hattori T, Kojima R, Ito M i Suzuki Y: Tłumienie przez cyklosporynę A zapalenia nerek przeciw GBM u szczurów. Jpn J Pharmacol 58, 27-36 (1992)

9 Taniguchi H, Nagamatsu T, Kojima R, Ito M i Suzuki Y: Wyraźne działanie przeciwnerkowe i mniej niepożądanych skutków sułtanatu metyloprednizolonu przez przerywane podawanie szczurom. Jpn J Pharmacol 64, 79-88 (1994)

10 Hattori T, Furuta K, Hayashi K, Nagamatsu T, Ito N i Suzuki Y: Badania nad działaniem przeciwnerczycowym składników roślinnych (6): Działanie przeciwnerkowe i mechanizmy działania drine z Phellogenu (OB-5) na typu anty-GBM zapalenie nerek u szczurów (2). Jpn J Pharmacol 60, 187-195 (1992)

11 Mason J: Wpływ Sandimmune na nerki. Clin Res Bull 6, 47-51 (1989)

12 Ito M, Yamada H, Okamoto Y i Suzuki Y: Półksiężycowe zapalenie nerek wywołane przez surowicę przeciw kłębuszkowej błonie podstawnej (GBM) u szczurów. Jpn J Pharmacol 33, 1145-1154 (1983)

13 Kingsbury FB, Clark CP, Williams G i Post AL: Szybkie oznaczanie albuminy w moczu. J Lab Clin Med 11, 981-989 (1926)

14 Żurkowski P: Szybka metoda oznaczania cholesterolu za pomocą jednego odczynnika. Clin Chem 10, 451-453 (1964)

15 Mcleish KR, Clark CP, Williams G i Post AL: Tłumienie syntezy przeciwciał przez prostaglandynę E jako mechanizm zapobiegania kłębuszkowemu zapaleniu nerek mysich kompleksów immunologicznych. Lab Invest 47, 147-152 (1982)

16 Mayer MM: Fiksacja dopełniacza i dopełniacza. W eksperymentalnej immunochemii, str. 133-240, Charles C. Thomas, Springfield (1961)

17 Hattori T, Ito M, Nagamatsu T i Suzuki Y: Badania nad działaniem przeciwnerczycowym TJ-8014, nowego japońskiego leku ziołowego (3): Wpływ na zapalenie nerek typu półksiężycowego przeciw GBM u szczurów. Jpn J Pharmacol 52, 131-140 (1990)

18 Hattori T, Hayashi K, Nagao T, Furuta K, Ito M i Suzuki Y: Badania nad działaniem przeciwnerczycowym składników roślinnych (3): Wpływ pachymana, głównego składnika Poria cocos Wolf na pochodzenie anty-GBM typu nal zapalenie nerek u szczurów i jego mechanizmy. JpnJ Pharmacol 59, 89-96 (1992)

19 Shibata S, Miyakawa Y, Naruse T, Nagasawa T i Takuma T: glikoproteina, która indukuje przeciwciało nefrotoksyczne: jej izolacja i oczyszczanie z błony podstawnej kłębuszków szczura. J Immunol 102, 593 601 (1969)

20 Falk RJ: Choroba nerek związana z ANCA. Kidney Int 38, 998-1010 (1990) 21 Mulligan MS, Johnson KJ, Todd RF III, Issekutz TB, Miyasaka M, Tamatani T, Smith CW, Anderson DC i Ward PA: Wymagania dotyczące cząsteczek adhezji leukocytów w nefrotoksycznym zapaleniu nerek. J Clin Invest 91, 577-587 (1993)

22 Nahas AME: Czynniki wzrostu i stwardnienie kłębuszków nerkowych. Nerka Int 41, Supp 36, S15-S20 (1992)

23 Boyce NW, Holdsworth SR, Dijkstra CD i Atkins RC: Ocena ilościowa wewnątrzkłębuszkowych jednojądrzastych fagocytów w eksperymentalnym kłębuszkowym zapaleniu nerek u szczurów przy użyciu specyficznych przeciwciał monoklonalnych. Patologia 19, 290-293 (1987)

24 Becker GJ, Hancock WW, Stow JL, Glasgow EF, Atkins RC i Thomson NM: Zaangażowanie makrofagów w eksperymentalnym przewlekłym kłębuszkowym kompleksie immunologicznym. Nephron 32, 227-233 (1982) 25 Perkinson DT, Baker PT, Couser WG, Johnson BJ i Adler S: Odkładanie kompleksu ataku błony w eksperymentalnym uszkodzeniu kłębuszków. Am J Pathol 120, 121-128 (1985)

26 Alder S, Baker PJ, Johnson RJ, Ochi RF, Pritzl P i Couser WG: Kompleks atakujący błonę dopełniacza stymuluje wytwarzanie reaktywnych metabolitów tlenu przez hodowane szczurze komórki mezangialne. J Clin Invest 77, 762-767 (1986)

27 Johnson RJ, Couser WG i Alpers CE: Ludzka proteaza neutrofilistynowa, esteraza i katepsyna G mogą pośredniczyć w uszkodzeniu kłębuszków nerkowych in vivo. J Exp Med 168, 1169-1174 (1988)

28 Cybusky AV, Lieberthal W, Quigg RJ, Rennke HG i Salant DJ: Rola tromboksanu w uszkodzeniu kłębuszkowym za pośrednictwem dopełniacza. Am J Pathol 128, 45-51 (1987)

29 Lovett D, Hansch G, Resch K i Gemsa D: Aktywacja kłębuszkowych komórek mezangialnych przez końcowe komponenty dopełniacza. Stymulacja uwalniania czynnika prostanoidowego i podobnego do interleukiny. Immunobiologia 168, 34-35 (1986)

30 Torbohm I, Schonermark M, Wingen AM, Berger B, Rother K i Hansch GM: C5b_8 i C5b_9 modulują uwalnianie kolagenu z ludzkich kłębuszkowych komórek nabłonka. Nerka Int 37, 1098-1104 (1990)

31 Lo SK, Detmers PA, Levin SM i Wrigh SD: Przejściowa adhezja neutrofili do śródbłonka. J Exp Med 169, 1779 -1793 (1989) 32 Brady HR, Denton MD, Jimenez W, Takata S, Palliser D i Brenner BM: Chemoatraktanty wywołują adhezję monocytów do ludzkich komórek mezangium i uszkodzenie komórek mezangium. Nerka Int 42, 480-487 (1992)