Skuteczna metoda leczenia zwłóknienia nerek
Mar 17, 2022
więcej informacji:ali.ma@wecistanche.com
Część Ⅰ: Białko retikulum endoplazmatycznego TXNDC5 promuje zwłóknienie nerek poprzez wymuszanie sygnalizacji TGF w fibroblastach nerek
Yen-Ting Chen, Pei-Yu Jhao i in.
Wstęp
Zwłóknienie nerek, charakteryzujący się tubulointerstitialzwłóknieniei stwardnienie kłębuszków nerkowych, jest powszechnym objawem patologicznym większości, jeśli nie wszystkich, typówchronicznynerkachoroby(PChN)(1). Postępnerkowyzwłóknienieu pacjentów z PChN prowadzi do stopniowej utratynerkafunkcjonować, co może ostatecznie doprowadzić do schyłkowej niewydolności nerek (ESRD), która wymaga dializy lubnerkaprzeszczep (2). Chociaż wykazano, że wiele determinant i szlaków molekularnych przyczynia się do procesuzwłóknienie nerek, transformujący czynnik wzrostu beta (TGF-) jest ogólnie uważany za główny regulator fibrogenezy nerek (3). Po urazienerka, uszkodzone komórki nabłonka kanalików (TEC) są zatrzymywane w fazie G2/M i wydzielają duże ilości TGF- , wywołując aktywację i transformację sąsiednich fibroblastów nerkowych w miofibroblasty (4-6). Aktywowane miofibroblasty, charakteryzujące się ekspresją aktyny mięśni gładkich (SMA), są wysoce proliferacyjne i wytwarzają białka macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM), takie jak kolagen włóknisty, elastyna, fibronektyna i CCN2 (powszechnie znane jako czynnik wzrostu tkanki łącznej, CTGF) (7,8). We wczesnych stadiach uszkodzenia nerekzwłóknieniezostała zainicjowana jako adaptacyjna i samoograniczająca się reakcja fizjologiczna, która pomaga naprawić tkankę i utrzymać integralność strukturalną(9). Jednak po przewlekłym, powtarzającym się uszkodzeniu nerek utrzymuje się aktywacja i proliferacja miofibroblastów, co powoduje nadmierną produkcję i akumulację ECM, prowadząc do utraty funkcjonalnego miąższu nerki i ostatecznie do niewydolności nerek (10,11).
Kliknij, aby przejść do Cistanche para que sirve na chorobę nerek
Pomimo postępów we współczesnej medycynie, niewiele terapii klinicznych ma udowodnione skuteczność przeciwkozwłóknienie nerek. Wykazano na przykład, że inhibitory konwertazy angiotensyny (ACEI) i blokery receptora angiotensyny (ARB) zmniejszają białkomocz, łagodząnerkowyzwłóknieniei spowolnić postęp PChN (12,13). Z drugiej strony wykazano, że pentoksyfilina, niespecyficzny inhibitor fosfodiesterazy, hamuje indukowaną przez TGF- 1- ekspresję ECM i CCN2, prowadząc do osłabienia kanalikowo-śródmiąższowegozwłóknienie(14). Stosowanie ACEI i ARB jest jednak ograniczone ze względu na ich działanie hipotensyjne i potencjalne działania niepożądane, takie jak hiperkaliemia. Ponadto ani ACEl/ARB, ani leczenie pentoksyfiliną nie mogły powstrzymać progresjinerkowyzwłóknieniei CKD (15,16). Dlatego konieczne jest zidentyfikowanie nowych mediatorów lub szlaków, które są kluczowe dla patogenezynerkowyzwłóknienieopracowanie skutecznych leków na PChN(przewlekłe choroby nerek).
Ostatnio zidentyfikowaliśmy domenę tioredoksynową zawierającą 5 (TXNDC5), rezydentne białko wzbogacone w fibroblasty o aktywności enzymatycznej białkowej izomerazy dwusiarczkowej (PDI), jako krytycznego mediatora sercowegozwłóknienie(17). Wykazaliśmy, że nadmierne TXNDC5 sprzyja rozwojowi sercazwłóknieniepoprzez zależną od redoks aktywację fibroblastów sercowych i produkcję ECM. Genetyczna delecja Txndc5 poprawia pracę sercazwłóknieniei zaburzenia kurczliwości wywołane przez agonistę u myszy (17). W oparciu o zaobserwowaną istotną rolę TXNDC5 w fibrogenezie mięśnia sercowego postawiliśmy hipotezę, że TXNDC5 może również mieć istotny wpływ na rozwój tkanekzwłóknieniew narządach niesercowych, szczególniezwłóknienie nerek.
W niniejszym badaniu wykazaliśmy, że TXNDC5 był silnie podwyższony zarówno w ludzkich, jak i mysich zwłóknionych nerkach, w szczególności w fibroblastach nerkowych wydzielających kolagen. Globalne usunięcie Txndc5 znacznie osłabiło zakresnerkowyzwłóknieniew wielu mysich modelach uszkodzenia nerek. Mechanicznie wykazaliśmy, że nadmierne TXNDC5, indukowane przez TGF- 1 za pośrednictwem szlaku stresu ER zależnego od ATF6-, wzmacnianerkowyzwłóknieniepoprzez promowanie aktywacji/proliferacji fibroblastów nerkowych i wytwarzania ECM poprzez stabilizację potranslacyjną i regulację w górę receptora TGF typu I (TGFBR1). Co ważne, wykazaliśmy, że indukowanie specyficznej dla fibroblastów delecji Txndc5 skutecznie polepszyło rozwój i progresjęzwłóknienie nerekwywołane różnymi rodzajami urazów u myszy, co sugeruje, że celowanie w TXNDC5 może być nowatorskim i skutecznym podejściem do leczenianerkowyzwłóknieniei zachowajnerkafunkcjonować.
Rycina 1. TXNDC5 był znacząco podwyższony w mysich zwłóknionych nerkach i próbkach nerek od pacjentów z CKD( przewlekłe choroby nerek).
(A) Barwienie IHC (n=3) i (B) immunobloty (n=6) wykazały, że ekspresja białka TXNDC5 była podwyższona w mysich zwłóknionych nerkach indukowanych przez UUO lub uIRI, w porównaniu z nerkami kontralateralnymi (CL) . Skala: 50 μm.
(C) Ilościowa RT-PCR wykazała, że transkrypt Txndc5 był podwyższony w mysich zwłóknionych nerkach indukowanych przez UUO i uIRI (n=4–7).
(D) Ponowne analizy danych z mikromacierzy na próbkach z ludzkiej nerki od pacjentów z PChN (GSE66494) wykazały, że TXNDC5, COL3A1 i FN1 były znacząco podwyższone w tkankach nerek od pacjentów z PChN (zdrowa kontrola n=8, CKD n {{ 6}}). W przypadku A–C dane są reprezentatywne dla 3 lub więcej niezależnych powtórzeń eksperymentalnych.
Dla wszystkich paneli dane przedstawiono jako średnie ± SEM. *P < {{0}}.05,="" **p="">< 0,01,="" ***p="">< 0,001="" w="" 2-stronnym="" teście="" t="" (a–c)="" lub="" mann-="" test="" whitneya="">
Wyniki
TXNDC5 był znacząco podwyższony w ludzkich i mysich zwłóknionych nerkach. Aby zbadać potencjalny udział TXNDC5 w patogeneziezwłóknienie nerek, najpierw określiliśmy jego poziomy ekspresji białka w tkankach włóknistej nerki myszy indukowanej jednostronną niedrożnością moczowodu (UUO), jednostronnym uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym (uIRI) lub podaniem kwasu foliowego (FA). Badania immunohistochemiczne wykazały znaczny wzrost intensywności barwienia TXNDC5 w skrawkach nerki ze wszystkich 3 mysich modelinerkowyzwłóknienie(Rysunek 1A i Rysunek uzupełniający 1A; materiały uzupełniające dostępne online w tym artykule; https://doi.org/10.1172/JCI143645DS1). Immunoblotting i ilościowa reakcja PCR z odwrotną transkrypcją (RT-PCR) również wykazały znaczną regulację w górę poziomu ekspresji białka (Rysunek 1B) i transkryptu (Rysunek 1C i Rysunek uzupełniający 1B) TXNDC5 w zwłóknionych nerkach myszy. Zgodnie z tymi wynikami, ponowna analiza danych z mikromacierzy uzyskanych z biopsji nerki pacjentów z CKD (GSE66494)(18) wykazała, że poziomy ekspresji TXNDC5 (2,24-krotnie, P<0.001), as="" well="" as="" of="" markers="" for="">zwłóknienie nerektakich jak COL3A1 i FN, były również znacznie zwiększone w próbkach nerek od pacjentów z CKD w porównaniu z próbkami ze zdrowych kontroli (Rycina 1D i Rycina uzupełniająca 1C). Podsumowując, obserwowana regulacja w górę ekspresji TXNDC5/Txndc5 w zwłóknionych nerkach ludzkich/mysich i jej pozytywna korelacja z fibrogennymi genami białek ECM sugerują potencjalną rolę TXNDC5 w patogeneziezwłóknienie nerek.
Rycina 2. TXNDC5 był silnie podwyższony w fibroblastach nerek, ale nie w TEC, komórkach śródbłonka lub podocytach włóknistych nerek.
(A i C) Barwienie IF TXNDC5 (czerwony) na skrawkach włóknistych nerek indukowanych przez UUO u myszy Col1a1-GFPTg wykazało, że TXNDC5 był wyrażany głównie w fibroblastach nerek wydzielających kolagen (zielony), zarówno w korze nerkowej, jak i rdzeniu nerkowym (n=6). Jądra komórkowe wybarwiono DAPI (niebieski). Skala: 100 μm.
(B) Barwienie IF TXNDC5 (zielony) na skrawku włóknistych nerek indukowanych przez UUO u myszy Cdh16-Cre, NPHS2-Cre i Tie2-Cre/ERT2 tdTomato. Jądra komórkowe wybarwiono DAPI (niebieski). Skala: 100 μm.
(D) Wykres kołowy ilustrujący proporcję komórek TXNDC5 plus w różnych typach komórek nerkowych w nerkach z włóknieniem wywołanym przez UUO.
Dane są reprezentatywne dla 3 lub więcej niezależnych powtórzeń eksperymentalnych. Dane w C przedstawiono jako średnią ± SEM.
TXNDC5 był wysoce wzbogacony w fibroblasty nerkowe wydzielające kolagen w zwłóknionych nerkach. Wiele typów komórek nerkowych jest zaangażowanych w proces fibrogenezy nerki. Po urazach nerek wykazano, że rezydentne (19) i okołonaczyniowe (20) fibroblasty nerkowe różnicują się w aktywne miofibroblasty i powodują akumulację macierzy zewnątrzkomórkowej. Donoszono również, że TEC i komórki śródbłonka przyczyniają się do rozwojuzwłóknienie nerekpoprzez przejście odpowiednio z nabłonka i śródbłonka do mezenchymów (10,21). Określenie typów komórek, w których TXNDC5 ulegał ekspresji podczas procesuzwłóknienie, linie myszy z wieloma reporterami, które umożliwiają znakowanie fluorescencyjne fibroblastów nerek (Colla1-GFP', GFP kierowane przez wzmacniacz/promotor Collala, ref.22), TEC (Cdh16-Cre ROSA26- tdTomato), komórki śródbłonka (Tie2-Cre/ERT2 ROSA26-tdTomato) i podocyty (NPHS2-Cre ROSA26-tdTomato) poddano UUO, uIRI lub Leczenie FA w celu wywołaniazwłóknienie nerek. Barwienie immunofluorescencyjne (IF) skrawków nerki tych zwierząt wykazało, że TXNDC5 był znacznie podwyższony i silnie zlokalizowany z GFP-dodatnimi, wydzielającymi kolagen fibroblastami nerek w włóknistych nerkach myszy indukowanych przez UUO (81%) (Figura 2, A i C) , uIRI (76,8%) i leczenie FA (73,4%) (rysunek uzupełniający 2, A i B). procent) i komórki śródbłonka (2,05 procent) (Figura 2, B i D). Analiza metodą cytometrii przepływowej fibroblastów izolowanych z nerek myszy poddanych UUO wykazała wyraźną ekspansję fibroblastów nerkowych TXNDC5*, jak również znaczącą regulację w górę TXNDC5 w tych komórkach, w porównaniu z tymi z kontrlateralnych nerek kontrolnych (rysunek uzupełniający 2C). Obserwowane silne wzbogacenie TXNDC5 w fibroblasty nerkowe u chorych na zwłóknienie sugeruje, że TXNDC5 może przyczyniać się dozwłóknienie nerekpoprzez regulację aktywności/zachowania tych komórek fibrogennych wydzielających kolagen.
TXNDC5 był zarówno niezbędny, jak i wystarczający do wywołania aktywacji, proliferacji i produkcji ECM fibroblastów nerkowych. Następnie określiliśmy funkcjonalną rolę TXNDC5 w fibroblastach nerek. Pierwotne ludzkie fibroblasty nerkowe (HKF) stymulowane TGF- 1(10 ng/ml) wykazywały silną regulację w górę poziomu ekspresji białka (ryc. 3A) i transkryptu (ryc. 3B) TXNDC5, jak również periostyny markera aktywacji fibroblastów oraz białka ECM (COL1Al, fibronektyna i CCN2). Powalenie TXNDC5 za pomocą shRNA znacząco osłabiło indukowaną przez TGF- 1- regulację w górę białka/mRNA periostyny i wielu białek ECM w HKF (Figura 3, A i B). Ponadto traktowanie TGF1 wzmocniło aktywność proliferacyjną HKF, która została całkowicie zniesiona przez knockdown TXNDC5 (Figura 3D). Wyniki te sugerują, że TXNDC5 ma zasadnicze znaczenie dla aktywacji, proliferacji HKF i produkcji ECM indukowanej przez TGF- 1-. Z drugiej strony nadekspresja TXNDC5 spowodowała wyraźną regulację w górę periostyny, COL1A1 i fibronektyny (Figura 3C), jak również zwiększoną aktywność proliferacyjną (Figura 3E) w HKF. Podsumowując, wyniki te pokazują, że TXNDC5, poniżej TGF- 1, jest zarówno niezbędny, jak i wystarczający do promowania aktywacji, proliferacji i wytwarzania ECM fibroblastów nerkowych.
Rysunek 3. Uśpienie aktywacji HKF indukowanej przez TXNDC5 atenuowanego TGF- 1 i produkcji ECM; nadekspresja TXNDC5 była wystarczająca do wywołania aktywacji HKF i wytwarzania ECM.
(A) Poziomy ekspresji białka i (B) transkryptu markera aktywacji fibroblastów (periostyna) i białek ECM (COL1A1, fibronektyna i CCN2) wzrosły w kontrolnych (Scramble) HKF po TGF- 1 (10 ng/ml) leczenie. Uderzenie TXNDC5 osłabiło regulację w górę tych fibrogenicznych markerów indukowaną przez TGF- 1 w HKF (n=5-10).
(C) Nadekspresja TXNDC5 była wystarczająca do wywołania regulacji w górę markera aktywacji fibroblastów (Periostin) i białek ECM (COL1A1, fibronektyna) w HKF (n=3-10).
(D) Traktowanie TGF- 1 (10 ng/ml) zwiększyło aktywność proliferacji komórkowej HKF, która została zniesiona przez knockdown TXNDC5.
(E) Nadekspresja TXNDC5 zwiększyła aktywność proliferacji komórkowej HKF. W D i E n=10. Dane są reprezentatywne dla 3 lub więcej niezależnych powtórzeń eksperymentalnych.
Dla wszystkich paneli dane przedstawiono jako średnie ± SEM. Istotność statystyczną różnic dla 2 grup określono za pomocą 2-stronnego testu t, a wśród 3 lub więcej grup za pomocą 1-way ANOVA, a następnie testów post hoc Sidaka. *P < 0.05,="" **p="">< 0.01,="" ***p=""><>
Globalna delecja Txndc5 chroniona przed nerką Aby określić wymagania TXNDC5 w rozwojuzwłóknienie nerekin vivo, WT i Tndc5-/myszy poddano działaniu UUO, uIRI i FA. Barwienie Picrosirius red i trichromia Massona na skrawkach nerki wykazały rozległenerkowyzwłóknienieu myszy WT po UUO (Figura 4A), uIRI (Figura 5A) i podaniu FA (Figura uzupełniająca 3A). Globalne usunięcie Txndc5 znacznie zmniejszyło zasięgnerkowyzwłóknieniewe wszystkich 3 modelach uszkodzenia nerek (ryc. 4A, ryc. 5A i uzupełniający ryc. 3A).
Rycina 4. Usunięcie osłabionego Txndc5 zwłóknienia nerek wywołanego przez UUO.
(A) Barwienie Picrosirius red (górne 2 panele) i barwienie trichromem Massona (dolne 2 panele) skrawków nerek myszy WT i Txndc5-7 10 dni po UUO. Wykresy słupkowe wyników ilościowych dla obszarów barwienia Picrosirius red i trichromii Massona są pokazane po prawej stronie (n=5-10). Skala 100 μm.
(B) Obrazy SHG skrawków nerki z WT i Txndc5-/myszy 10 dni po UUO. Ilościowe wyniki obszarów SHG-dodatnich wykazały zwiększoną akumulację kolagenu włókienkowego (zielony) w nerkach WT, ale nie w nerkach myszy Txndc5 po urazie.
Dla każdego skrawka nerki zobrazowanego pod kątem SHG uzyskano obrazowanie TPEF, aby pokazać profil skanowanej tkanki (czerwony kolor na dolnych panelach)(n=3). Skala: 50 µm. (C) Immunobloty wykazały poziomy ekspresji białka markera aktywacji fibroblastów (Periostin) i ECM (COL1A1) w ekstrakcie z całej nerki z WT i Txndc5-/myszy 10 dni po UUO (n= 3-6). Dane są reprezentatywne dla 3 lub więcej niezależnych powtórzeń eksperymentalnych.
Dla wszystkich paneli dane przedstawiono jako średnie ± SEM. Istotność statystyczną różnic między 3 lub większą liczbą grup określono za pomocą 1-way ANOVA, a następnie testów post hoc Sidaka.**P<><>
Aby określić ilościowo patogenny kolagen włóknisty (typu I i II) specyficznie i uniknąć przeszacowania obszarów zwłóknionych tradycyjnymi metodami barwienia, mikroskopia drugiej harmonicznej generacji (SHG), nowy optyczny system obrazowania tkanek, który umożliwia wizualizację tkanki włóknistej, ale nie niewłóknistej, kolagenu w narządach włóknistych(23,24), zastosowano do oceny stopniazwłóknieniew WT i Tndc5 plus nerki myszy po urazie. Zgodnie z powyższymi wynikami, mikroskopia SHG wykazała znaczny wzrost odkładania włókien fibrylarnych w nerkach WT po leczeniu UUO (Rysunek 4B), uIRI (Rysunek 5B) i FA (Rysunek uzupełniający 3B), którego zasięg był znacznie zmniejszony w Txndc{{ 4}}/ myszy (ryc. 4B, ryc. 5B i uzupełniający ryc. 3B).
Zgodnie z osłabioną odpowiedzią zwłóknienia po urazie w nerkach myszy Txndc5 obserwowaną w badaniach obrazowych, usunięcie Tendc5 łagodziło również regulację w górę genów białek ECM, w tym Collar, Eln, Fnl i Ccn2 w nerkach myszy po uszkodzeniu (rysunek uzupełniający 3, CE). Immunobloty lizatów całej tkanki nerkowej wykazały również obniżony poziom białka ECM (COLIA1) i markera aktywacji fibroblastów (peristyna) u Txndc5-/myszy w porównaniu z myszami WT po UUO i uIRI (Figura 4C i Figura 5C).
Figura 5. Delecja Txndc5 złagodzonego zwłóknienia nerek wywołanego przez ulRI.
(A) Barwienie czerwienią Picrosirius (dwa górne panele) i barwienie trichromianem Massona (dwie 2 panele) skrawków nerek myszy WT i Txndc5-728 dni po ulRI.Wykresy słupkowe wyników ilościowych czerwieni Picrosirius i trichromii Massona Obszary zabarwienia są pokazane po prawej stronie (n=6). Skala 100 μm.
(B) Obrazy SHG skrawków nerki od myszy WT i Txndc5- 28 dni po ulRI. Ilościowe wyniki obszarów SHG-dodatnich wykazały zwiększoną akumulację kolagenu włókienkowego (zielony) w nerkach WT, ale nie w nerkach myszy Txndc5 po urazie. Dla każdego skrawka nerki zobrazowanego pod kątem SHG uzyskano obrazowanie TPEF, aby pokazać profil skanowanej tkanki (kolor czerwony w dolnych panelach) n=3）. Skala 50 μm.
(C) Immunobloty wykazały poziomy ekspresji białka markera aktywacji fibroblastów (Periostin) i ECM (COL1A1) w ekstrakcie z całej nerki z WT i Txndc5/myszy 28 dni po ulRI (n=5-9). Dane są reprezentatywne dla 3 lub więcej niezależnych powtórzeń eksperymentalnych.
Dla wszystkich paneli dane przedstawiono jako średnie ± SEM. Istotność statystyczną różnic między 3 lub więcej grupami określono za pomocą 1-way ANOVA, a następnie testów post hoc Sidaka.*P<><><>
Aby wykluczyć możliwość, że TXNDC5 ulegający ekspresji w innych typach komórek nerkowych, takich jak TEC, podocyty i komórki śródbłonka, może nadal przyczyniać się do rozwojunerkowyzwłóknienie, wygenerowaliśmy myszy z warunkowym nokautem Txndc5 specyficzne dla TEC (Cdh16-cre*Txcndc5i lub Txndc5Epeko), podocyty (NPHS2-cre*Txndc5/n lub Tendc5Podxko) i komórki śródbłonka (Tie{{ 7}}cre/ERT2*Tendc5/ lub Txndc5Endo.eko). w doświadczeniach na myszach Txndc5EMio-eko, delecję Txndc5 indukowano przy użyciu tamoksyfenu, jak opisano na Figurze 9A, gdzie traktowane tamoksyfenem myszy Tie2-Cre/ERT2 zastosowano jako kontrole. Ukierunkowana delecja Txndc5 w TEC, podocytach lub komórkach śródbłonka nie wpłynęła jednak na zakreszwłóknienie nerekwywołane przez UUO lub FA (rysunek uzupełniający 6, BE). Wyniki te sugerują, że TXNDC5 ulegający ekspresji w TEC, podocytach i komórkach śródbłonka ma niewielki, jeśli w ogóle, udział w patogenezienerkazwłóknienie.
Delecja Txndc5 w fibroblastach nerek chroni przed apoptozą TEC w odpowiedzi na uszkodzenie nerek. W trakcienerkowyzwłóknienie, uszkodzone TEC tracą funkcję mitochondrialną i polaryzację apikopodstawną, po czym następuje apoptoza i śmierć komórki(30). Aby zbadać, czy usunięcie Txndc5 wpływa na apoptozę komórek TEC w odpowiedzi na uraz, przeprowadziliśmy barwienie TUNEL na WT i Txndc5-nerce myszy sekcje 10 dni po UUO. Liczba apoptotycznych TEC znacznie wzrosła w indukowanych przez UUO zwłóknionych nerkach myszy WT, podczas gdy delecja Txndc5 osłabiła zakres TECapoptozy. Doniesiono, że aktywowane fibroblasty nerek mogą indukować apoptozę TEC poprzez efekty parakrynne (31). Ponieważ Tendc5 jest słabo wyrażany w TEC, prawdopodobne jest, że zmniejszona apoptoza TEC obserwowana u myszy Txndc5-7 po UUO nie była efektem autonomicznym wobec komórek, ale raczej wtórna do zmniejszonej śródmiąższowejzwłóknieniea tym samym mniej sygnałów proapoptotycznych z otaczających fibroblastów nerkowych. Zgodnie z tą hipotezą, specyficzna dla fibroblastów delecja Txndc5 (Tendc5kO) osłabiła apoptozę TEC w stopniu podobnym do obserwowanego u Txndc5-/myszy 10 dni po UUO (uzupełnienie). W przeciwieństwie do obserwowanego zmniejszenia apoptozy TEC, liczba F4/80-dodatnich makrofagów i komórek śródbłonka CD31-dodatnich była porównywalna w nerkach myszy WT i Txndc5-, z lub bez UUO, co sugeruje, że delecja Txndc5 nie wpływa na infiltrację makrofagów lub gęstość naczyń włosowatych okołokanalikowych w nerkach myszy. Podsumowując, dane te sugerują, że ochronne działanie nerkowo-ochronne delecji Txndc5 wynika ze zmniejszenia ilości śródmiąższowych kanalikówzwłóknieniei apoptoza TEC, bez wpływu na gęstość naczyń włosowatych nerek lub makrofagów.
Indukowana delecja Tendc5 w fibroblastach nerkowych zmniejszyła progresję ustalonegozwłóknienie nerek. Aby ustalić, czy celowanie Txndc5 w nerkach może być korzystne w ustalonychnerkowyzwłóknienie, delecja Txndc5 w fibroblastach nerkowych była indukowana u myszy Txndc5eko 10 dni po UUO, w punkcie czasowym, kiedy rozległenerkowyzwłóknieniemożna zaobserwować. W tych eksperymentach jako kontrolę wykorzystano myszy Colla2-Cre, którym podawano tamoksyfen. Jak pokazano, myszy Colla2-Cre i Tcndc5eko miały podobny zasięgnerkowyzwłóknienie10 dni po UUO przed leczeniem tamoksyfenem. Jednak jedenaście dni po wstrzyknięciu tamoksyfenu, stopień zwłóknienia nerek nadal postępował u myszy kontrolnych (obszar zwłóknienia wzrósł z 5,1 do 10,6 procent), podczas gdy progresjanerkazwłóknieniezostał prawie zatrzymany (obszar zwłóknienia zmienił się z 5,3 do 6,9 procent) u myszy Txndc5eko. Immunoblotting wykazał również znacznie osłabioną regulację w górę CCN2, periostyny i TGFBR1 u myszy Txndc5eko w porównaniu z myszami kontrolnymi między D10 a D21 po UUO. Wyniki te pokazują, że interwencyjna delecja Txndc5 w fibroblastach nerek znacząco zmniejsza progresjęzwłóknienie nerek, co sugeruje, że celowanie in vivo w TXNDC5 może być nowatorskim i skutecznym podejściem terapeutycznym do poprawynerkazwłóknieniei spowolnić postęp PChN.