Zasady przeciwzapalne z igieł Pinus Taiwanensis Hayata oraz badania in silico ich potencjalnego działania przeciwstarzeniowego Ⅱ

Igły sosnowe ekstrahowano metanolem i rozdzielono heksanami, etylemoctanu i wody, otrzymując odpowiednio trzy rozpuszczalne warstwy. Theprzeciwzapalnyfrakcja,warstwa octanu etylu, poddano ciągłemu konwencjonalnemu chromatografiikombinacji technik graficznych i scharakteryzowano pięć nieopisanych związkóww tym dwa nowe lignany, 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -dihydroksy-70 -(4-hydroksyfenylo)propan-80 -kwas yloksy]benzoesowy (1), 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -dihydroksy-70 -(4-hydroksy-3-metoksyfenylo)-propan-80 -yloksy]-2-kwas hydroksybenzoesowy (2), jeden nowy diterpenoid, (13E,12R)-12 -hydroksyagatycznykwas (3), jeden monoterpenoid, kwas 5-izopropyl-3-oksocykloheks-1-en-1-karboksylowy (4), i jedenfenylopropan, kwas styraksinolowy (5). Struktury chemiczne tych nowych związkówzostały skonstruowane przy pomocy wyjaśnienia widmowego NMR i widma MSanaliza metryczna. Ponadto siedemdziesiąt dwa znane związki, w tym jeden steroid, -sitosterol (6); jeden seskwiterpenoid, (-)-oplopan-4-jeden-10- -O- -D-glukozyd (7); jedenkumaryna, umbeliferon (8); jedenalkaloid, indol-3-aldehyd (9); cztery diterpenoidy,

Kliknij tutaj, aby otrzymać przeciwzmarszczkowy krem ​​Cistanche

3-metoksyfenylo)-1-propanon (64), 3-hydroksy-1-(4-hydroksyfenylo)-1-propanon (65),2-(4-hydroksyfenylo)kwas octowy (66), kwas fenylooctowy (67), to kwas wanilinowy (68), benzoesowykwas (69), wanilina (70), p-hydroksyacetofenon (71), salicylan sodu (72), kwas wanilinowy4-O- -L-ramnozyd (73), trans-Kwas ferulowy (74), sodup-kumaran (75), p-kumarowykwas (76), trans-metylp-kumaran (77), odpowiednio, zostały zidentyfikowane przez badanieich dane fizyczne i spektroskopowe z wcześniej opublikowanymi (odniesienia do znanychzwiązki zostały dostarczone w materiałach uzupełniających Dodatek B).

3.1. Wyjaśnienie strukturalne związków 1–5

Mieszanina1 wyizolowano w postaci optycznie czynnego, bezbarwnego syropu, a cząsteczkowyformuła została oznaczona jako C16H16O6 za pomocą analizy HR-ESI-MS ([M− H]−, m/z 303.0855, oblicz.dla C16H15O6, 303.0869, rysunek S1). Widmo IR wskazuje na obecność hydroksylu(3412cm−1 ) i sprzężoną grupę karbonylową (1598 cm−1 ). The1Dane H-NMR (rysunek S2)pokazał sygnały dla dwóchust-podstawione ugrupowania aromatyczne [δH 6.72 (2H, d, J = 8,4 Hz,H-30 , -50 ), 6.86 (2H, d, J = 8,8 Hz, H-2, -6), 7,24 (2H, d,J = 8,4 Hz, H-20 , -60 ) i 7,83(2H, d, J = 8.8 Hz, H-3, -5)], dwie utlenione metyny [δH 4.48 (1H, m, H-80 ) i 4,85(1H, d, J = 5,6 Hz, H-70 )] i dwie metyny [δH 3,81 (1H, dd,J {{0}}.0, 4,0 Hz, H-90 a), i 3.86 (1H, dd,J {{0}}.0, 5,6 Hz, H-90 B)]. The13Widma C i DEPT NMR (Rysunek S3)z1 pokazywał szesnaście atomów węgla, odpowiadających jednej grupie metylenowej, dwóm utlenionymwęgle, dwanaście węgli aromatycznych i jeden sprzężony karbonyl (Tabela1). The2 J- I3 J- Korelacje HMBC od H-2, -6 do C-1 i 4; od H-3, 5 do C-1 i 7; z H-20, 60 DoC-40 i 70 ; z H-70 do C-80 i 90 ; i od H-80 odpowiednio do C-1 zaobserwowano wwidmo HMBC1 (Rysunek S4). Ponadto duża stała sprzężenia między H-70 i H-80 (J = 5.6 Hz) obsługiwał względną konfigurację1 w C-70 /C-80 Jaktreo[44]. Konfiguracje bezwzględne w C-70 i C-80 z1 zostały określone w elektronicznym okólnikuanaliza dichroizmu (ECD). Pozytywny efekt bawełny przy 230 nm (∆ε plus 0.17) dał 8S konfiguracja dla1, według opublikowanej literatury [37,38], a zatem 70 R był teżokreślony. Inne widma 2D (rysunek S5 – S7) dostarczyły pełnego przypisania protonu isygnały węglowe. W związku z tym struktura1 został przypisany jako 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -dihydroksy-7 0 -(4-hydroksyfenylo)propan-80 kwas -yloksy]benzoesowy, jak pokazano na rysunku1. 

Wzór cząsteczkowy2 został przydzielony jako C17H18O8 na podstawie HR-ESI-MSdane analityczne (m/z 349.0936 [M − H]−, Rysunek S8). Absorpcja w widmie IR(3425 i 1541 cm−1 ) wskazali funkcyjność hydroksylową i sprzężoną karbonylową,odpowiednio. W porównaniu z widmami NMR1 I2, mógł zauważyć, że oniposiadał różne ugrupowania aromatyczne. Dwa zestawy pierścieni aromatycznych sprzężonych z ABX i jedengrupę metoksylową można wykryć w1H- (Rysunek S9) i13Dane C-NMR (rysunek S10).z2 (Tabela1) i zasugerował ten związek2 posiadał raczej dwa trójpodstawione niżust-dipodstawione ugrupowania aromatyczne. Istotne korelacje HMBC (Rysunek S11) zH-3 do C-1, C{2}} i C-7; od H-6 do C-4; z OC3-30 do C-30 ; z H-60 do C-40 IC-70; z H-70 do C-10 , C-20 , C-80 i 90 ; z H-80 odpowiednio do C-1 ustalił tostruktura2 był również szkieletem neolignańskim. Poprzez połączenie dużego sprzęgłastała (J7,8 = 5.2 Hz) i pozytywny efekt bawełny przy 230 nm (∆ε plus 1,14), absolutkonfiguracja2 został przydzielony jakotrzy- i (70 R,80 S)-forma, taka sama jak1 [44,45]. InnyWidma 2D (rysunek S12 – S14) dostarczyły pełnego przypisania sygnałów protonowych i węglowych.Ustalenia te zakończyły strukturę2 jako 1-[(70 R,80 S)-70 ,90 -dihydroksy-70 -(4-hydroksy-3-metoksyfenylo)propan-80 -yloksy]-2-kwas hydroksybenzoesowy (rys1). 

Mieszanina3 otrzymano w postaci bezbarwnego proszku, a jego wzór cząsteczkowy byłprzypisany jako C20H30O5 na podstawie danych analitycznych HR-ESI-MS (m/z 349.2024 [M − H]−, Rysunek S15). Mieszanina3 wykazał piki absorpcji przy 3450 (OH) i 1648 (karboksylkwas) cm−1 w jego widmie IR. Świadczyły o tym m.in13Widmo C-NMR (Rysunek S16) wprzy których zaobserwowano dwie grupy karboksyloweδC 167,2 (C{2}}) i 181,5 (C-19). Wjego1H-NMR (rysunek S17), rezonanse przyδH 4,03 (1H, dd,J = 9.2, 2,8 Hz, H-12) iδC 75,5 (C-12) wskazuje na obecność drugorzędowej grupy alkoholowej. Końcowy metylengrupę można było ustalić dzięki rezonansom protonów wδH 4,53 (1H, s, H-17 a) i4,91 (1H, s, H-17b), a sygnały węglowe przyδC odpowiednio 106,9 (C{2}}) i 150,2 (C{5}}).Dwie grupy metylowe wδH 0.63 (3H, s, CH3-20) i 1,21 (3H, s, CH3-18) były połączonewęgle czwartorzędowe (C-10 i C-4) potwierdzone przez korelacje HMBC (Rysunek S18).Efekt osłaniający grupy karboksylowej w C-4 spowodował przesunięcie CH w górę pola3-20 (δH 0.63), sugerując jego-konfiguracja [46]. Ponadto przesunięcie chemiczne H-17a (δH 4.53) pojawił się w regionie upfield, sugerując 12R konfiguracja [47]. W swoim HMBCwidmo, korelacje od H-12 do C-9, C{2}} i C-16; od H-17 do C-7 i C-9;z CH3-16 do C-12 i C-14; z CH3-18 do C-3, C{2}} i C-19; z CH3-20 do C-1, C-5,Odpowiednio C-9 i C-10 skonstruowały płaską strukturę3 jak wcześniej informowaliśmydla 12-kwasu hydroksyagatowego [46]. Jednak konfiguracja C-133 był zdeterminowanyJakE przez dane analityczne NOESY (Rysunek S19), które pokazały efekty NOE wśródH-5/H-9, H-5/H-18 i H-12/H-14. Ponadto NOE między H-14 a CH3-16, co należy zapisać w 12-kwasie hydroksyagatowym [46], nie został wykryty w3. InnyWidma 2D (Rysunek S20–S21) dostarczył pełnego przypisania sygnałów protonowych i węglowych.Konsekwentnie, struktura3 ustalono jako (13E,12R)-12-kwas hydroksyagatonowy aspokazano (Rys1).

Widmo HR-ESI-MS4 wystawił [M− H]− szczyt jonowy o godzm/z 181.0855 (Rysunek S22), zgodne z pseudomolekularnym wzorem C10H13O3. Absorpcjapiki na 3456 i 1635 cm-1 w swoim widmie IR wykazywał hydroksyl i sprzężony karbonylgrupy, odpowiednio. Dwa protony metinowe wδH 2,09 (1H, m, H-5) i 6,32 (1H, dd,J = 2.4, 1,2 Hz, H-2), dwie grupy metylenowe przyδH 1.84 (1H, m, H-4a), 2.02 (1H, m, H-4b), 2.50 (1H, dddd,J = 19.2, 9,2, 4,8, 2,4 Hz, H-6 a) i 2,70 (1H, dddd,J = 19.2, 5,2, 5,2, 1,2 Hz,H-6b) i jeden zestaw protonów izopropylowych wδH 0.88 (3H, d, J = 6,8 Hz, CH3-9), 0.98 (3H, d, J = 6,8 Hz, CH3-10) i 2,31 (1H, hept,J = 6.8 Hz, H-8) pojawił się w1Widmo H-NMRz4 (Rysunek S23). Ponadto jeden sprzężony węgiel karbonylowy wδC 174,8 (C{2}}) i jedenwęgiel karboksylowy wδC 205,7 (C{2}}) można było w nim zaobserwować13Widma C i DEPT NMR(Rysunek S24). Zaobserwowane korelacje HMBC (Rysunek S25) od H-2 do C-7; od H-4 doC-3; od H-6 do C-1, C{3}} i C-5; z CH3-9 do C-5 i CH3-10; z CH3-10 do C-8,odpowiednio zbudował strukturę4 jako 5-izopropyl-3-oksocykloheks-1-en-1-karboksylkwas (fot1). Inne widma 2D (rysunek S26–S28) dostarczyły pełnego przypisania protonui sygnały węglowe. Jednak stereochemia w C-5 pozostała nieokreślona.

Mieszanina5 posiadał wzór cząsteczkowy C11H14O5 wyznaczona z deprotonowanejpik jonów cząsteczkowych w trybie ujemnym analiza HR-ESI-MS (m/z 225.0767 [M − H]−, RysunekS29). W swoim widmie IR, hydroksyl (3421 cm−1 ) i karboksyl (1572 cm−1 ) funkcje można wykryć. The1Widmo H-NMR (rysunek S30) ujawniło dwa dalekiego zasięgusprzęganie aromatycznych protonów wδH 6.86 (1H, d, J = 2,4 Hz, H-4) i 7,31 (1H, d,J = 2,4 Hz, H-6), jedna grupa metoksylowa wδH 3.56 (2H, t, J = 6,8 Hz, H-9) i jeden zestawprotony propanolu wδH 1,82 (2H, tt,J {{0}},0, 6,8 Hz, H-8), 2,61 (2H, t,J {{0}},0 Hz, H-7) i 3,56(2H, t, J = 6,8 Hz, H-9). Ponadto jedna grupa karboksylowa znajdowała się wδC 176,2 (C{2}}) wjego13Widmo C-NMR (Rysunek S31). Planarna struktura5 została założona przez znaczącegoKorelacje HMBC (rysunek S32) OCH3-3 do C-3; H-6 do C-2, C-4, C-7 i C-10; H-7do C-4, C-5 i C-8; odpowiednio H-9 do C-7 i C-8. Inne widma 2D (rysunek S33–S35)dostarczył pełnego przypisania sygnałów protonowych i węglowych. Powyższe dowody sugerująstruktura5 jako kwas 2-hydroksy-5-(3-hydroksypropylo)-3-metoksybenzoesowy (rysunek1), który został już opisany jako kwas styraksinolowy we wcześniejszej literaturze syntetycznej [48]. Niemniej jednak niniejsze badania są pierwszym doniesieniem5 ze źródeł naturalnych.

3.2. Działanie przeciwzapalne

Stan zapalny jest jednym z głównych mechanizmów samoobrony stymulowanych przez bakterie,wirus, rany lub różne inne czynniki środowiskowe. Jest to pierwsza reakcja układu odpornościowegosystem chroniący przed infekcjami i podrażnieniami. Neutrofile należą do obfitego rodzajumakrofagów i odgrywają główną rolę w stanach zapalnych i są zwykle pierwszym chłoniakiemcytów, aby dotrzeć do zakażonego regionu [49]. Neutrofile wydzielają szereg cytotoksyn, takich jakanion ponadtlenkowy i elastaza w odpowiedzi na aktywację układu odpornościowego [50]. WW ostatnich latach wykazano, że różne choroby ludzkie są związane z neutrofilaminadekspresja [51–55]. Ustalono związek między stanem zapalnym a rakiem, a autorzy wskazali, że tworzenie się komórek rakowych było bezpośrednio powiązanedo stanu zapalnego [49]. Dlatego warto szukać nowych związków przeciwzapalnychdalsze badania nad leczeniem raka. Oceniono czterdzieści trzy wyizolowane związkihamowanie wytwarzania anionów nadtlenkowych i uwalniania elastazy przez ludzkie neutrofilew odpowiedzi na fMLF/CB [56] (patrz Materiały dodatkowe, Tabela S2). Znaczący wwyniki hibitorowe (tab2) wykazało tylko to45, 47, 48, 49, I50 (Postać2) wyświetlanyznaczące hamowanie generowania anionów ponadtlenkowych, z IC50 wartości od3.3 ± 0.9 Do7.7 ± 0.9 µM w porównaniu z kontrolą pozytywną LY294002 (IC50 1.1 ± 0.3 µM). Ponadto,48, 50, I51 (Postać2) wykazały istotne zahamowanie uwalniania elastazyz IC50 wartości od 5,3± 0.2 do 8.3± 0.8 µM w porównaniu z pozytywnymsterowanie LY294002 (IC50 3.2 ± 1.0 µM) (Tabela2). związki48 I50 wyświetlane obahamowanie generowania anionów ponadtlenkowych i uwalniania elastazy, wskazując na ich wielokrotnośćbioaktywności przeciwzapalne. IgłyP. morrisonicolazostały zgłoszonedziałanie przeciwzapalne na makrofagi RAW 264.7 [13]. Tak zaproponowali autorzyepikatechina ip-kwas kumarowy zidentyfikowany wP. morrisonicolamogą być składnikami aktywnymi.W prezentowanych badaniach wszystkie związki aktywne zawierały podobny szkielet flawonowydo epikatechiny ipugrupowanie -kumaroilowe można również zaobserwować w49, 50, I51. Wskazuje to, że flflawonoidy ip-kumaroilowe grupy funkcyjne mogą mieć swój udziałbioaktywność przeciwzapalną w niniejszym badaniu. Sugerują to wyniki testów biologicznychFlawonoidy odgrywają kluczową rolę wPinusgatunków o bioaktywności przeciwzapalnej.

Tabela 2.Hamujące działanie oczyszczonych związków na wytwarzanie anionów ponadtlenkowych i uwalnianie elastazyprzez ludzkie neutrofile w odpowiedzi na fMLF/CB.

Rysunek 2.Struktury zasad przeciwzapalnych45, 47, 48, 49, 50, I51. 

3.3. Badanie dokowania molekularnego

Związany z wiekiem spadek poziomu GH jest uważany za objaw neuroendokrynnystarzenie się [57]. Zjawisko to występuje u kilku gatunków ssaków, takich jak ludzie, zwierzęta domowepsy i gryzonie laboratoryjne [57]. U ludzi poziom GH w osoczu zaczyna spadaćz wiekiem po pełnej dojrzałości fizycznej i trwa przez dziesięciolecia życia [57]. Grelina jest identyfikowana jako endogenny ligand dla GHSR i jest głównym regulatoremwydzielanie GH [18,19]. Grelina bierze udział w różnych procesach fizjologicznych i patofizjologicznychmechanizmy u ludzi, takie jak starzenie się [24,25]. Ponadto można pomyśleć o greliniebyć związane z działaniem przeciwzapalnym. Aktywacja komórek odpornościowych była ograniczona przez grelinęleczenie poprzez hamowanie NF-κAktywacja B i późniejsza sekrecja MCP{0}} [26]. Zgłoszono syntetyczny analog greliny, peptyd uwalniający hormon wzrostu-2 (GHRP{2}}).w celu zmniejszenia czynników zapalnych u szczurów z zapaleniem stawów i wspiera komórki odpornościowepośredniczyła aktywacja receptorów greliny [27]. Neves i in. również proponowaneregulacja stanu zapalnego jako interwencja przeciwstarzeniowa [58]. Tym samym, zgodnie zdane eksperymentalne z testów biologicznych przeciwzapalnych,45, 47, 48, 49, 50, I51 (Postać2) pokazałznaczące działanie hamujące i zostały wybrane w celu określenia ich zdolności wiązania zreceptor greliny. Przed symulacją dokowania natywny ligand (8QX) zawarty w 6KO5Plik PDB został ponownie zadokowany w celu weryfikacji. Interakcje między 8QX i 6KO5 oraznajlepsza pozycja obliczonych wyników wykazała duże podobieństwo i powtarzalność z danymi natywnymi(dane nie pokazane). Wyniki wskazują na wysoką dokładność istniejącego systemu symulacyjnegoi wspierał dalsze obliczenia.

Za najlepszą konformację uznano najniższą energię wiązania każdego ligandu. Thepowinowactwa wiązania wymieniono w tabeli3. Peptyd uwalniający hormon wzrostu 6 (GHRP-6).stosowany jako kontrola pozytywna do dokowania do kieszeni wiążącej receptora greliny, jak w naszympoprzedni raport. Chociaż AutoDock Vina nie jest skonstruowany do dokowania między peptydamii białek, w poprzednich raportach opublikowano kilka pomyślnych wyników [59–61]. Dlatego w tym badaniu najpierw obliczono GHRP{0}}, aby określić dokładnośćobecny model dokowania, a wyniki dobrze się pokrywały (ryc3A). W porównaniu z GHRP-6,energie wiązania49, 50, I51 były niższe niż−10,3 kcal/mol (tab3). Tensugeruje, że49, 50, I51 może zadokować do kieszeni receptora greliny podobnie lubnawet lepszy niż GHRP-6. Dla49, między którymi można było zaobserwować wiązania wodorowedwie grupy karbonylowe (C-4 ip-kumaroil) i Arg283, C-5 hydroksyl i Gln120,C-7 hydroksyl i Tyr313 oraz C-40 odpowiednio hydroksyl i Cys304. Arg199 utworzył akonwencjonalne wiązanie wodorowe z grupą karbonylowąp-kumaroil. Ponadto,49 byłpołączone z resztami Arg283, Arg102, Asp99, Phe279, Phe312, Leu181 i Pro200receptor greliny poprzez różne efekty, takie jakπ-kation,π-anion,π–π w kształcie litery T iπoddziaływania -alkilowe. Te dozwolone związki49 i białka, tworząc stabilny kompleks(Postać3B). 50 był związany z Asp99, Arg102, Gln120, Arg283, Leu103, Asn305 iArg199 poprzez różne wiązania wodorowe, podczas gdy inne interakcje (π-kation,π–anion,π–π w kształcie litery T iπ–alkil) obserwowano również z Asp99, Arg102, Arg283, Phe279, Phe312,Leu181 i Leu210 (ryc3C). 51 również utworzone wiązania wodorowe lub węgiel-wodórz Tyr313, Ser123, Arg283, Arg102 i Asn305, wraz z innymi interakcjami (π-kation,π-anion,π-sigma,π–π w kształcie litery T iπ-alkil) do połączenia z Asp99, Arg283, Arg102, Leu181,Można było wykryć reszty Phe312 i Pro200 receptora greliny (ryc3D). W porównaniu dozwiązki45, 47, I48 z49, 50, I51, pierwsza grupa posiadała flflawonoidtylko szkielet, podczas gdy ta ostatnia grupa miała ugrupowania cukrowe i kumaroilowe. Poinformowano, żegrupa kumaroilowa przyłączona do cukru była kluczowa dla powinowactwa wiązania z grelinąreceptor [34]. Struktura przerwy GHSR oddziałująca z ugrupowaniem kwasu acylowego grelinyskutkowało przekształceniem receptora greliny w aktywną konfigurację [43]. Ponadto kieszeń wiążąca GHSR jest rozwidlona przez mostek solny między Glu124i Arg283, a region ten jest bogaty w aminokwasy hydrofobowe [43]. Nawiazujac do naszejdane, wyniki dokowania49, 50, I51 były wyższe niż np45, 47, I48, Któryzasugerował lepszą zdolność wiązania. Głównymi cechami konstrukcyjnymi byłygrupy kumaroilowe, a nie ugrupowania cukrowe, co może być dodatkowo potwierdzone przezbadanie większej liczby związków posiadających grupy funkcyjne kumaroilowe. W tym badaniu,Składniki aktywne49, 50, I51 posiadał nie tylko bioaktywność przeciwzapalną, ale równieżpotencjał wiązania receptora greliny. Wskazywało to, że deklarowane działanie przeciwstarzenioweherbata z igieł sosny może być również oparta na tych herbacianych związkach podobnych do greliny.

4. Konkluzje

Ogółem oczyszczono siedemdziesiąt siedem izolatów zawierających piętnaście nieopisanych związków.zweryfikowane na podstawie ekstraktów metanolowychP. taiwanensisigły. Scharakteryzowano ich strukturypoprzez analizy spektroskopowe i spektrometryczne. Czterdzieści trzy oczyszczone związki byłyzbadane pod ich kątemprzeciwzapalne działalnośćprzezhamowanie generowania anionów nadtlenkowychIuwalnianie elastazy na modelu neutrofili. Sugerują to wyniki45, 47, 48, 49, 50, I51 posiadać znaczącepotencjały przeciwzapalne. Dalsze dokowanie molekularneobsługiwane wyniki obliczeń49, 50, I51 wykazujące powinowactwo wiązania do substancji czynnejkieszonka receptora greliny. Dlatego surowe ekstrakty i oczyszczone składnikiP. taiwanensismają potencjał do opracowania jako nowe wiodące leki przeciwzapalne lubskładniki żywności.

Materiały uzupełniające:Poniższe są dostępne w Internecie pod adresem, Dodatek A: Pełne procedury ekstrakcji i izolacji,Dodatek B: Referencjeznanych związków, Tabela S1: Wstępne badanie przesiewowe bioaktywności igiełP. taiwanensisna nadtlenkugenerowanie anionów i uwalnianie elastazy przez ludzkie neutrofile w odpowiedzi na fMLF/CB,Tabela S2: Hamujące działanie oczyszczonych związków na wytwarzanie anionów ponadtlenkowych i elastazęuwalnianie przez ludzkie neutrofile w odpowiedzi na fMLF/CB, Rysunek S1–S35: Widma HRMS i NMRnowe związki

1–5. Autorskie Wkłady:Konceptualizacja, P.-CK i JTCT; Metodologia, P.-CK i T.-LH;Dochodzenie, Y.-CL, AMK i M.-LY; Zasoby, S.-YW; Kuracja danych, Y.-CL i G.-HY;Pisanie — przygotowanie autorskiego szkicu, P.-CK i Y.-CL; Pisanie — recenzja i redakcja, P.-CK Allautorzy przeczytali i zgodzili się na opublikowaną wersję manuskryptu.

Finansowanie:Badanie to było sponsorowane przez Ministerstwo Nauki i Technologii Tajwanu (MOST). Thebadania były częściowo wspierane przez Higher Education Sprout Project, Ministerstwo Edukacji NarodowejSiedziba ds. Postępu uniwersyteckiego na Narodowym Uniwersytecie Cheng Kung (NCKU).

Oświadczenie Instytucjonalnej Komisji Rewizyjnej:Badanie przeprowadzono za zgodą instytucjiKomisja rewizyjna szpitala Chang Gung Memorial Hospital (nr IRB 201800369A3).Oświadczenie o świadomej zgodzie:Oświadczenie może być dostarczone na żądanie.

Oświadczenie o dostępności danych:Oryginalne dane można uzyskać na żądanie od odpowiedniego autora.

Podziękowanie:Autorzy są również wdzięczni Chang Gung Memorial Hospital (CMRPD1B0281~3,CMRPF1D0442~3, CMRPF 1F0011~3, CMRPF1F0061~3 i BMRP450 przyznane T.-LH) zaczęściowe wsparcie finansowe niniejszych badań. Autorzy dziękują za wykorzystanie NMRsprzęt należący do Centrum Instrumentów Narodowego Uniwersytetu Cheng Kung.

Konflikt interesów:Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Bibliografia

1. Xie, Q.; Liu, Z.; Li, Z. Skład chemiczny i aktywność przeciwutleniająca olejku eterycznego z sześciuPinustaksony pochodzące z Chin.Cząsteczki2015, 20, 9380–9392. [Odnośnik krzyżowy] 

2. Kim, KY; Chung, HJ Związki smakowe herbaty z kiełków sosny i herbaty z igieł sosny.J. Agric. Chemia spożywcza.2000, 48, 1269–1272. [Odnośnik krzyżowy] 

3. Park, G.; Paudyal, DP; Hwang, I.; Tripathi, GR; Yang, Y.; Cheong, H. Produkcja sfermentowanych ekstraktów z igieł sosny czerwonej iich charakterystyka funkcjonalna.Biotechnologia. Bioprocess inż.2008, 13, 256. [Odnośnik krzyżowy]

4. Idžojti´c, M.; Kajba D.; Franji´c, J. Różnicowanie mieszańców F1P. czarnyJF Arnold× P. sylvestrisL., P. czarnyJF Arnold× P. densifloraSiebold et Zucc.,P. czarnyJF Arnold× P. ThunbergianaFranco i ich gatunki rodzicielskie za pomocą lotnego składu igieł.Biochem.Syst. eko.2005, 33, 427–439. [Odnośnik krzyżowy] 

5. Kim, YS; Shin, DH Składniki lotne i działanie przeciwbakteryjne igły sosnowej (Pinus densiflfloraS. i Z.) ekstrakty.Mikrobiol pokarmowy.2005, 22, 37–45. [Odnośnik krzyżowy] 

6. Dob, T.; Berramdane, T. Kompozycja olejków eterycznychPinus halepensisMłyn. z trzech różnych regionów Algierii.J. istota. Rez. oleju2007, 19, 40–43. [Odnośnik krzyżowy] 

7. Nam, AM; Tomi, F.; Gibernau, M.; Casanova, J.; Bighelli, A. Skład i zmienność chemiczna oleju z igiełPinus halepensisrośnie na Korsyce.chemia bioróżnorodni.2016, 13, 380–386. [Odnośnik krzyżowy] 

8. Sezik, E.; Üstün, O.; Demirci, B.; Baser, KHC Kompozycja olejków eterycznychPinus czarnyArnold z Turcji.Turek. J. Chem.2010, 34, 313–325.