Zwiększenie aktywności przeciwnowotworowej Aspergillus Favus „endofit Jojoba” taksolu poprzez koniugację z nanocząstkami złota za pośrednictwem napromieniowania Ⅱ

Tożsamość chemiczna i aktywność przeciwnowotworowa taksolu A. favus

Domniemane plamy TLCA. favusTaksol usunięto i rozpuszczono w metanolu,a właściwości chemiczne związku zostały rozdzielone z różnych HPLC,Analizy chromatograficzne i spektroskopowe HNMR, FT-IR. Protonowy magnetyzm jądrowysygnały rezonansowe (1 H NMR) zA. favuswyekstrahowanego taksolu rozdzielono między 1.0i 8,0 ppm, z trzema rozdzielonymi sygnałami protonowymi przy 1, 0–3, 0 ppm odpowiadającymi metylowi,grupy octanowe i acetylenowe, podczas gdy sygnały protonowe przy 6,5–9,{3}} ppm odpowiadająugrupowania aromatyczne (ryc.3). Wzór i rozkład sygnałów protonówA. faprzeciwkoTaxol potwierdza tożsamość strukturalną i podobieństwo próbki do wzorcataksol (ryc.3). Ponadto taksol zA. favusma takie same widma FTIR autentycznego taksolu.Szczyt na 3393,3 cm−1przypisano hydroksylowi (OH), podczas gdy pik przy 2923,5 byłprzypisany do alifatycznego odcinka CH, piki przy 1661.0 cm−1odpowiadają C=Oczęstotliwość rozciągania. Zaobserwowane piki przy 1452,0 cm−1i 14{1}}4.0, o których mowaczęstotliwość rozciągania NH, podczas gdy pik przy 1109,0 cm−1odnosi się do grupy karbonylowejczęstotliwość rozciągania tlenu. Piki w przedziale od 1020,0 do 979,77 cm−1byłodniósł się do obecności aromatycznych zakrętów C i H. Podsumowując, wzór widmowyFTIR w odniesieniu do grup funkcyjnychA. favusTaksol był identyczny z autentycznymtaksol (ryc.3). Ostatecznie, z analiz chromatograficznych i spektralnych, domniemanepróbka została rozpoznana i uwierzytelniona jako związki taksolu w porównaniu z oryginałemmieszanina.

Kliknij tutaj, aby poznać chińskie zioła CistancheAktywność antyproliferacyjna

Wpływ różnych typów pożywek na produkcję taksolu przez A. favus

Wpływ składu pożywki na produkcję taksolu wgA. favuszostał ocenionypoprzez uprawę na PDB, M1D, Czapek's-Dox i ekstrakt słodowy. Po kulturowej inkubieTaksol ekstrahowano i oznaczano ilościowo, jak opisano w Materiałach i metodach. odwyniki na rys.4, najwyższa wydajność taksolu wgA. favusuzyskano przez uprawę na słodzieekstrakt (170 µg/l) i Czapek's-Dox (166 µg/l), w porównaniu z pożywką wzrostową PDB jako kontrolą(89 µg/l). Zatem wydajność taksolu wgA. favuswzrosła około 2-krotniepoprzez wzrost na pożywkach Czapek's-Dox i ekstraktu słodowego w porównaniu z pożywką kontrolną.Tak więc dalsze badania optymalizacyjne w celu maksymalizacji wydajności taksolu przezA. favusprzez odpowiedźwdrożono podejście statystyczne metodologii powierzchni.

Optymalizacja zmiennych bioprocesowych przy użyciu metodologii powierzchni odpowiedziBadanie przesiewowe projektu Placketta-Burmana pod kątem czynników krytycznych

Wydajność taksolu wgA. favuszostał zoptymalizowany przez statystyczny projekt eksperymentalnyPlackett-Burman [18, 28]. Minimalne i maksymalne zakresy wybranych parametrówwybrane przez projekt Placketta-Burmana podsumowano w tabeli2. Stężenie taksolu byłookreślono za pomocą TLC i HPLC. Wszystkie eksperymenty były

uwzględniono średnie stężenie taksolu. Ilustruje to analiza statystyczna tego projektuthat the model F-value of 5.98 implies the model is significant and values of "Prob>F" mniejwykonane w trzech egzemplarzach iniż 0,0500 zgodnie z tabelą3. Rzeczywista i przewidywana wydajność taksolu w odpowiedzi naparametry eksperymentalne ujawnione w projekcie Placketta-Burmana zostały pokazane zmacierz w tabeli4. „Pred R-Squared” z 0}.3061 nie jest tak blisko „Adj R-Squared”0.5760, jak można by się spodziewać. Maksymalna rzeczywista (255,35 µg/l) i przewidywana(280,4 µg/l) wydajność taksolu wgA. favusna podstawie projektu czynnikowego według projektu Placketta-Burmanauzyskano w przebiegu nr 8. Z uzyskanych danych (ryc.4), najwyższa wydajność taksolu wgA. favus(225 µg/l) uzyskano stosując ekstrakt słodowy (20 g/l), pepton (2 g/l), sacharozę (20 g/l), sojton(2 g/l), cysteina (0,5 g/l), glutamina (0,5 g/l), ekstrakt wołowy (1 g/l), w temperaturze inkubacji3 0 stopnia, początkowe pH 6,0 i po 12 dniach inkubacji przy szybkości wytrząsania (150 obr./min). W tym kulturalnymprzebieg (12), wydajność taksolu wgA. favusuległ istotnemu zwiększeniu o około 1,4-krotnie,w porównaniu z pożywką kontrolną (170 µg/l). Redukcja modelu, transformacja odpowiedzi,i Adeq Precision mierzą stosunek sygnału do szumu, a stosunek większy niż 4 jest pożądany[46]. Na podstawie oszacowanego parametru i stosując analizę regresji wielokrotnej nadane eksperymentalne, zmienne testowe i zmienna odpowiedzi były powiązane w następujący sposóbrównanie modelu: równanie pierwszego rzędu pod względem zakodowanych czynników — Taxol Con.= plus 11,51 plus 1,91E plus 2,92 J plus 0,81 K. Rzeczywiste i przewidywane poziomy taksolu wedługA. favusna Plackett-Burbioproces optymalizacji człowieka podsumowano w tabeli4i Ryc.4. Maksymalna rzeczywista(255,35 µg/l) i przewidywana (280,4 µg/l) wydajność taksolu przezA. favuswedług projektu czynnikowego wgProjekt Placketta-Burmana uzyskano w przebiegu nr 8 przy średnim składniku. Efekt indparametry wizualne ujawnione w projekcie Placketta-Burmana zostały przedstawione w ParetoWykres przedstawiający kolejność istotności zmiennych zaangażowanych w produkcję taksolu Ryc.4. Zatem najbardziej znaczące zmienne wpływające na produktywność taksolu wgA. favusbyły cysteina,pH i czas inkubacji ujawniono na podstawie projektu Placketta-Burmana.

Zlicowany centralny projekt kompozytowy został przyjęty do dalszych badań optymalizacyjnych przy użyciuznacząca zmienna, która pochodzi z projektu Placketta-Burmana. Wyniki 20 biegów po trzyzmienne z pozytywnymi efektami wykazały, że produkcja taksolu była znacznie zróżnicowanaz tym schorzeniem badano w zakresie 96,5–302,7 µg/l. Maksymalna wydajnośćTaksol wgA. favus(302,7 µg/l) obserwowano przy użyciu cysteiny (0,50 g/l) przy pH 6,0 i inkubowanoprzez 15 dni, jak podano w tabeli5. Minimalną produkcję taksolu odnotowano wseria numer 15, gdzie cysteina (1,0 g/l) przy pH 7, 0 i inkubowana przez 7 dni. Statystycznyanaliza projektu modelu liniowego pokazuje, że wartość F wynosi 87,08, co implikujesignificance of the model, and the values of "Prob>F” mniejszy niż 0,050 wskazuje na ten modelterminy są znaczące (tab6). Dlatego cysteina, pH i czas inkubacji są istotnewzorcowe warunki. Analiza wykazała, że ​​„Pred. R-Squared” dla 0,8972 jest na rozsądnym poziomieumowa z „Adj. R-Squared” z 0.9315. Współczynnik „Wystarczająca precyzja” 30.800 pomiarówstosunek sygnału do szumu, ponieważ pożądany jest stosunek większy niż cztery, Adeq.Wyniki otrzymane z eksperymentu CCD przeanalizowano metodą ANOVA, która dała wyniknastępujące równanie regresji na poziomie produkcji taksolu: model pierwszego rzędu equawyrażenia zakodowanych czynników — Taxol Conc.{{0}} plus 11,47 plus 1,60A plus 2,43B plus 0,67C. Trójwymiarowykrzywe powierzchni odpowiedzi pokazujące wpływ interakcji najbardziej znaczącychparametry przechyłki, cysteina, pH i czas inkubacji pokazano na ryc.4.

Tabela 2Minimalne i maksymalnezakresy wybranych parametróww P-BD do optymalizacjiProdukcja taksolu

Tabela 4Projekt Placketta-Burmana do oceny czynników wpływających na produkcję taksolu przezA. favus

zmienne z pozytywnymi efektami wykazały, że produkcja taksolu była znacznie zróżnicowanaw badanym stanie w zakresie 96,5–302,7 µg/l. Maksymalna wydajnośćTaksol wgA. favus(302,7 µg/l) obserwowano przy użyciu cysteiny (0,50 g/l) przy pH 6,0 i inkubowanoprzez 15 dni, jak podano w tabeli5. Minimalną produkcję taksolu odnotowano wseria numer 15, gdzie cysteina (1,0 g/l) przy pH 7, 0 i inkubowana przez 7 dni. Statystycznyanaliza projektu modelu liniowego pokazuje, że wartość F wynosi 87,08, co implikujesignificance of the model, and the values of "Prob>F” mniejszy niż 0,050 wskazuje na ten modelterminy są znaczące (tab6). Dlatego cysteina, pH i czas inkubacji są istotnewzorcowe warunki. Analiza wykazała, że ​​„Pred. R-Squared” dla 0,8972 jest na rozsądnym poziomieumowa z „Adj. R-Squared” z 0.9315. Współczynnik „Wystarczająca precyzja” 30.800 pomiarówstosunek sygnału do szumu, ponieważ pożądany jest stosunek większy niż cztery, Adeq.Wyniki otrzymane z eksperymentu CCD przeanalizowano metodą ANOVA, która dała wyniknastępujące równanie regresji na poziomie produkcji taksolu: równanie modelu pierwszego rzęduwyrazy zakodowanych czynników — Taxol Conc.{{0}} plus 11,47 plus 1,60A plus 2,43B plus 0,67C. Trójwymiarowykrzywe powierzchni odpowiedzi pokazujące wpływ interakcji najbardziej znaczącychparametry, cysteina, pH i czas inkubacji pokazano na ryc.4.