Zmiany w poziomach glikozydów fenyloetanoidowych, aktywności przeciwutleniającej i innych cechach jakościowych w plasterkach Cistanche Deserticola poddawanych obróbce parowej

Cistanche desericola Y. C. MA(Orobanchaceae), powszechnie znane jako „pustynny żeń-szeń”, od dawna stosowane są jako środek tonizujący w Chinach i Japonii. Mięsiste łodygi są krojone w plasterki w celu leczenia różnych chorób, w tym impotencji, niepłodności u kobiet, uczucia zimna w lędźwiach i kolanach oraz zaparć geriatrycznych. W ostatnich latach kilka badań ujawniło jego skuteczność w modelach eksperymentalnych związanych z zaburzeniami neurologicznymi, zwłaszcza chorobą Alzheimera i chorobą Parkinsona.Rynek zdrowej żywności cieszy się coraz większym zainteresowaniem tym przydatnym, naturalnym suplementem diety. Wino i herbata z soczystych łodyg to popularna zdrowa żywność, która łagodzi zmęczenie oraz poprawia zdolność uczenia się i pamięć.C. desericolajest bogatym źródłem glikozydów fenyloetanoidowych, polisacharydów i cukrów rozpuszczalnych, które wykazują głównie działanie przeciwutleniające,neuroprotekcyjne,hepatoprotekcyjne,wzmacniające odporność,przeczyszczający,i przeciwstarzeniowe efektów, wśród których uważa się, że działanie przeciwutleniające jest podstawą pozostałych działań farmakologicznych. Echinakozyd i akteozyd są reprezentatywnymi markerami kontroli jakości Cistanches Herba w Farmakopei Chińskiej (wydanie z 2015 r.) ze względu na ich przeważającą liczebność, specyficzność rodzajową i znaczącą aktywność biologiczną. Oznaczanie rozcieńczonych ekstraktów rozpuszczalnych w etanolu zawarte jest także w kontroli jakości Cistanches Herba. Donoszono również, że cistanozyd A, izoakteozyd i 2′-acetylakteozyd występują w dużych ilościach wC. desericola. 

NATURALNY EKSTRAKT Z CISTANCHE SUPLEMENT DIETY PRZECIW ZMĘCZENIU PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Wzrastającypopyt na C. desericola znacznie pobudził jej uprawę. C. desericola należy do wieloletnich ziół pasożytniczych, rosnących głównie na suchych lub półsuchych obszarach północno-zachodnich Chin. Natychmiast po zbiorze te bardzo słodkie, ciężkie surowe łodygi muszą zostać wysuszone, aby zapobiec utracie składników odżywczych i zepsuciu. Świeże łodygi zawierają zwykle 75–85% wody, a w celu ich konserwacji poziom wody należy obniżyć do poniżej 10%. W większości regionów produkujących Cistanche całe świeże łodygi umieszcza się na otwartych polach na około 2 miesiące w celu wstępnego suszenia. Wysuszony materiał jest następnie transportowany do fabryk, moczony w wodzie, krojony w plasterki i ponownie suszony. Opóźnienia w przetwarzaniu plasterków mogą być skutkiem słabo wykształconych lub źle wyposażonych rolników. Jednak głównym problemem jest brak wiedzy i technologii, które umożliwiłyby efektywny proces produkcyjny.

Obróbka wysoką temperaturą jest szeroko stosowana w przypadku warzyw i owoców i może hamować rozwój drobnoustrojów i wydłużać okres przydatności do spożycia. Może jednak również powodować zmiany w wyglądzie i składzie składników odżywczych. Wykazano, że działanie niektórych bioaktywnych składników i właściwości farmakologicznych, takich jak działanie przeciwutleniające, zwiększa się w ziołach leczniczych po gotowaniu na parze. Zatem gotowanie na parze C. desericola może poprawić kilka korzyści zdrowotnych. Donoszono również, że stosowanie gotowania na parze lub blanszowania świeżo pokrojonych C. desericola zwiększa ilośćechinakozyd i akteozyd.19,20) Jednakże nie przeprowadzono szczegółowych badań w celu porównania zmian w związkach bioaktywnych i aktywności przeciwutleniającej świeżo pokrojonego C. desericola podczas procesu gotowania na parze. Celem pracy było zatem zbadanie wpływu czasu gotowania na parze (1, 3, 5, 7 min) na zawartość glikozydów fenyloetanoidowych, polisacharydów, cukrów rozpuszczalnych, rozcieńczonych ekstraktów rozpuszczalnych w etanolu, utratę masy ciała oraz właściwości przeciwutleniające w plasterkach C. desericola w porównaniu z trzema innymi grupami (świeże, bezpośrednio suszone w piecu, blanszowane).

Eksperymentalny

Chemikalia

Substancje chemiczne klasy analitycznej: metanol, etanol, D-glukoza, kwas siarkowy, wodorofosforan potasu i monohydrat diwodorofosforanu potasu zakupiono od Beijing Chemical Works (Pekin, Chiny). Kwas mrówkowy i fenol zakupiono od Sinopharm Chemical Reagent Co. (Szanghaj, Chiny). Metanol o jakości HPLC zakupiono od Fisher Scientific (Toronto, Kanada). Wodę dejonizowaną otrzymano przy użyciu systemu Milli-Q (Millipore Corp., Bedford, MA, USA). 2,2-Difenylo-1-pikrylhydrazyl (DPPH) dostarczyła firma Alfa Aesar (Ward Hill, MA, USA) i dichlorowodorek 2,2′-azobis(2-aminopropanu) (AAPH ) przez Adamas-beta (Szanghaj, Chiny). Kwas 6-metoksy-2,5,7,8-tetrametylochromano-2-kwas karboksylowy (Trolox), 2,6-di-tertbutylo-p-krezol (BHT) i fluoresceinę (sól sodową) (FL) otrzymano z TCI (Tokio, Japonia), a zestaw do oznaczania całkowitej zdolności przeciwutleniającej (T-AOC) z Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Nanjing, Chiny). Wzorce dla akteozydu (111530-200706) i echinakozydu (111670-200503) zakupiono w Narodowym Instytucie Kontroli Żywności i Leków (Pekin, Chiny). Standardy dot2′-acetyloakteozyd, cistanozyd A i izoakteozyd zostały podarowane przez dr Zhiguo Ma w prezencie. Czystość każdego związku odniesienia określono na ponad 98% poprzez normalizację obszaru piku wykrytego za pomocą detektora z matrycą diodową HPLC (DAD).

Obróbka materiału i oznaczanie utraty masy

Próbki pobrano wiosną 2{{10}}14 na plantacji Ningxia w Cistanches Herba (106.08 stopień N, 38,24 stopień E, 1124,2 m ) w Chinach i zidentyfikowany przez jednego z nas (prof. Jun Chen). Wzór kuponu zdeponowano w Instytucie Rozwoju Roślin Leczniczych Chińskiej Akademii Nauk Medycznych, Peking Union Medical College. Zebrano losowo około 3 kg łodyg C. desericola i przepłukano je czystą wodą. Za pomocą noża ceramicznego usunięto części kwiatostanów, a następnie łodygi pocięto na 3 mm plasterki. W powtórzeniu mierzono masę (W0) każdego plastra o masie 100 g. Oceniono siedem eksperymentalnych zabiegów z trzema powtórzeniami na zabieg. W celu gotowania na parze cztery porcje plasterków umieszczono w parze wodnej o temperaturze 93 stopni na 1, 3, 5 lub 7 minut. W celu blanszowania jedną obróbkę umieszczono w wodzie o temperaturze 96 stopni na 5 minut. Pozostałe dwa zabiegi zgłoszone w tym eksperymencie to świeże i bezpośrednio suszone w piecu plastry. Potraktowane plastry zważono (W1) i wysuszono w temperaturze 60 stopni w piecu. Wysuszone plastry następnie ponownie zważono (W2), zmielono i sproszkowano (65 mesh). Próbki proszków przechowywano w workach próżniowych w temperaturze -20 stopni do dnia analizy. Utratę masy obliczono w następujący sposób: ubytek masy po obróbce wysoką temperaturą (%)=[(W0−W1)/ W0]×100, ubytek masy po suszeniu w piecu (%)=[(W0 −W2)/W0]× 100, gdzie W0 jest wagą początkową, a W1 i W2 są masami zmierzonymi odpowiednio po obróbce wysokotemperaturowej i suszeniu w piecu.

Glikozydy fenylotanoidowe i właściwości przeciwutleniające

Ekstrakcja próbek

Sproszkowaną próbkę o wadze {{0}.5-g ekstrahowano 25 ml 60% wodnego roztworu metanolu za pomocą ultradźwięków KQ-250DE (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Jiangsu, Chiny) przy 40 kHz, 200 W i 40 stopniach przez 30 min. Po ekstrakcji traktowane próbki wirowano przez 10 minut przy 4600 x g (TD5; Hunan Herexi Instrument & Equipment Co., Hunan, Chiny). Supernatant przefiltrowano przez filtr o wielkości porów 0,45-µm do kolejnych analiz.

Oznaczanie glikozydów fenylotanoidowych

Oznaczanie echinakozydu, cistanozydu A,akteozyd, izoakteozyd i 2′-acetyloakteozydz próbek C. desericola przeprowadzono w sposób opisany przez Ma i wsp. 21) z pewnymi modyfikacjami. Analizę przeprowadzono przy użyciu instrumentu HPLC 2695–2996 (Waters Corp., Milford, MA, USA) z monitorowaną absorpcją ultrafioletu przy 330 nm. Rozdział przeprowadzono na kolumnie Merck Purospher® Star RP-C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 µm) pracującej w temperaturze 30 stopnia. Faza ruchoma przy natężeniu przepływu 1 ml/min składała się z rozpuszczalnika A (metanol) i rozpuszczalnika B (0,1% wodny roztwór kwasu mrówkowego, v/v). Elucję gradientową przeprowadzono w następujący sposób: 28% A ({{30}}–10 min), 28–38% A (10–30 min), 38% A (30– 45 minut), a objętość wstrzyknięcia wynosiła 10 µl. Mieszany roztwór zawierający pięć standardów referencyjnych przygotowano poprzez rozpuszczenie standardów referencyjnych w 60% metanolu do końcowego stężenia 0,20 mg/ml dla echinakozydu, 0,21 mg/ml dla akteozydu, 0,20 mg/ml dla 2′-acetyloakteozydu, 0,05 mg/ml mL dla cistanozydu A i 0,05 mg/ml dla izoakteozydu. Roztwór następnie rozcieńczono do siedmiu różnych stężeń w celu ustalenia krzywych kalibracyjnych. Stężenie glikozydów fenyloetanoidowych w próbkach wyrażono w g/kg świeżej masy (FW).

NATURALNY EKSTRAKT Z CISTANCHE POPRAWIA PAMIĘĆ SUPLEMENT DIETY PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Oznaczanie zdolności absorpcji rodników tlenu (ORAC)

Test ORAC przeprowadzono w sposób opisany przez Huanga i wsp.22) z pewnymi modyfikacjami. Jako kontrolę pozytywną zastosowano syntetyczny przeciwutleniacz BHT. W skrócie, 25 µl rozcieńczonych ekstraktów próbek i 160 µl FL zmieszano w mikropłytce 96-studzienkowej. Mieszaninę inkubowano w temperaturze 37 stopni przez 15 minut, przed dodaniem 20 µl AAPH. Fluorescencję monitorowano przy użyciu 485 nm (wzbudzenie) i 520 nm (emisja) w odstępach 3-min przez 72 minuty przy użyciu Fluoroskan Ascent FL (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Jako wzorzec odniesienia zastosowano Trolox (2,5–50,0 µmol/L), a wyniki wyrażono w mikromolach Troloxu na masę świeżego plastra, µmol TE/g FW.

Oznaczanie aktywności wychwytywania wolnych rodników 2,2-difenylu-1-pikrylohydrazylu (DPPH)

Test DPPH przeprowadzono w sposób opisany przez Goupy i wsp.23) z pewnymi modyfikacjami. Jako kontrolę pozytywną zastosowano syntetyczny przeciwutleniacz BHT. W skrócie, 1 ml rozcieńczonego ekstraktu próbki zmieszano z 1 ml roztworu metanolu DPPH o wartości 2 mmol/l. Roztwory trzymano w ciemności w temperaturze 25 stopni przez 90 min, następnie zmierzono absorbancję przy 517 nm. Jako wzorzec odniesienia zastosowano Trolox (4,0–119,5 µmol/L), a wyniki wyrażono w mikromolach Troloxu na masę świeżego plastra, µmol TE/g FW.

Oznaczanie właściwości przeciwutleniających redukujących żelazo (FRAP)

Test FRAP przeprowadzono przy użyciu zestawu testowego T-AOC zgodnie z instrukcjami producenta.

Rozpuszczalne cukry i polisacharydy

Przygotowanie próbek rozpuszczalnych cukrów

Sproszkowaną próbkę o wartości 0.5-g ekstrahowano 25 ml 80% wodnego roztworu etanolu za pomocą ultradźwięków KQ-250DE przy 40 kHz, 150 W i 80 stopniach przez 30 minut. Pierwszy roztwór ekstrakcyjny przefiltrowano i przeniesiono do kolby miarowej o pojemności 50-ml. Osady ponownie ekstrahowano, a przesącz połączono z pierwszym roztworem ekstrakcyjnym w kolbie miarowej o pojemności 50- ml i dopełniono do kreski 80% wodnym roztworem etanolu.

Następnie 1 ml tego roztworu odpipetowano do szklanej probówki o pojemności 10- ml w celu odparowania etanolu we wrzącej łaźni wodnej. Dodano wodę destylowaną (5 ml) w celu rozpuszczenia pozostałości, następnie przeniesiono ją do kolby miarowej o pojemności 100- ml i uzupełniono wodą destylowaną do kreski. Na koniec 2 ml tego rozcieńczonego roztworu użyto do oznaczenia rozpuszczalnych cukrów.

Przygotowanie próbek polisacharydów

Osady z ekstrakcji rozpuszczalnych cukrów wysuszono na powietrzu i ekstrahowano 25 ml wody destylowanej za pomocą ultradźwięków KQ- 250DE przy 40 kHz, 150 W i 80 stopniach przez 30 minut. Pierwszy roztwór ekstrakcyjny przefiltrowano i przeniesiono do kolby miarowej o pojemności 50-ml. Osady ponownie ekstrahowano, a przesącz połączono z pierwszym roztworem ekstrakcyjnym w kolbie miarowej o pojemności 50- ml i dopełniono do kreski wodą destylowaną. Następnie jego roztwór o pojemności 5-ml odpipetowano do kolby miarowej o pojemności 50-ml i uzupełniono wodą destylowaną do kreski. Na koniec 2 ml tego rozcieńczonego roztworu użyto do oznaczenia polisacharydów.

Oznaczanie rozpuszczalnych cukrów i polisacharydów

Oznaczenie rozpuszczalnych cukrów i polisacharydów przeprowadzono metodą fenolowo-kwasowo-siarkową, jak opisał Wang i in.24) Jeden mililitr 6% roztworu fenolu dodano do 2 ml roztworu próbki i dobrze wymieszano. Następnie szybko dodano 5 ml stężonego kwasu siarkowego i wytrząsano przez 5 minut. Mieszaninę przeniesiono do wrzącej łaźni wodnej na 15 minut i szybko ochłodzono do temperatury pokojowej w celu detekcji w ultrafiolecie. Absorpcję ultrafioletu monitorowano przy 490 nm w spektrofotometrze UV2550 (Shimadzu Co., Kioto, Japonia). Jako ślepą próbę wykorzystano wodę destylowaną. Wzorcową bezwodną D-glukozę dokładnie odważono i rozpuszczono w wodzie destylowanej do końcowego stężenia 0,10 mg/ml. Następnie 1, 2, 3, 4, 5, 6 i 7 ml roztworu podstawowego odpipetowano do siedmiu kolb miarowych 10- ml i uzupełniono do kreski wodą destylowaną. Następnie do ustalenia krzywych kalibracyjnych wykorzystano siedem różnych stężeń roztworów wzorcowych.

Rozcieńczone ekstrakty rozpuszczalne w etanolu

Próbki (4,0 g) dokładnie zważono w celu określenia ich rozcieńczonych ekstraktów rozpuszczalnych w etanolu, zgodnie z metodą opisaną w Farmakopei Chińskiej (wydanie z 2015 r.).25) Sproszkowaną próbkę zważono (W3) i ekstrahowano za pomocą 100 ml 50% wodnego roztworu etanolu w 250-ml kolbie stożkowej, od czasu do czasu wstrząsając przez 6 godzin i odstawiane na 18 godzin. Roztwór ekstrakcyjny przesączono, a 20 ml przesączu odparowano do sucha, suszono w temperaturze 105 stopni przez 3 godziny i chłodzono w eksykatorze (żel krzemionkowy) przez 30 minut. Na koniec dokładnie odważono ilość (W4). Zawartość rozcieńczonego ekstraktu rozpuszczalnego w etanolu wyrażono jako g/kg FW próbki. Rozcieńczone ekstrakty rozpuszczalne w etanolu obliczono w następujący sposób: rozcieńczone ekstrakty rozpuszczalne w etanolu (g/kg FW)=[(W4×5)/W3]×(100−W5)×10, gdzie W3 to masa początkowa , W4 to masa zmierzona po ekstrakcji, a W5 to utrata masy po suszeniu w piecu (%).

Analiza statystyczna

Aby wyjaśnić wszelkie różnice między grupami terapeutycznymi, zastosowano jednoczynnikową analizę ANOVA przy użyciu SPSS 13.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Różnice oceniano za pomocą testu Duncana z granicą istotności wynoszącą 0,05. Dane wyrażono jako odchylenie standardowe (SD) (n=3).

Wyniki i dyskusja

Utrata wagi

Masa plastrów C. Deserticola bezpośrednio decyduje o jej wartości handlowej na rynku ziół leczniczych. Jak pokazano w Tabeli 1, analizowano utratę masy C. desericola po obróbce wysoką temperaturą i suszeniu w piecu. Stwierdzono niższy poziom utraty masy, gdy plastry suszono bezpośrednio w piekarniku, a nie gotowano na parze lub blanszowano. Próbki blanszowane wykazały najwyższy poziom utraty masy. Próbki gotowane na parze charakteryzowały się większym stopniem utraty masy przy dłuższym czasie gotowania. Wyraźnie pokazało się siedem minut gotowania na parze, czyli najdłuższy czas, w którym świeżo pokrojone plastry zachowały kształt (str<0.05) higher levels of weight loss after oven-drying than 5 min of steaming. Since phenylethanoid glycosides had been detected in the hot water (data not shown), it suggested that blanching/steaming promoted more water-soluble compounds to be dissolved in the hot water. Concerning weight loss after high-heat exposure, samples steamed for 1 minute exhibited extremely low weight loss. Therefore, 1 min of steaming was too short to make the Cistanche tissue brittle, so it was less able to release bioactive compounds (such as phenylethanoid glycosides) during the subsequent extraction procedure, compared with samples that had been steamed longer.

Glikozydy fenylotanoidowe

Poziomy echinakozydu, cistanozydu A, akteozydu, izoakteozydu i 2′-acetyloakteozydu w plasterkach C. desericola przetworzonych różnymi metodami przedstawiono na ryc. 1. Próbki gotowane na parze przez 7 minut zawierały 2,16 g/kg FW echinakozydu i {{6} },29 g/kg FW cistanozydu A, co oznacza wzrost odpowiednio -140 i -6-krotny w porównaniu ze świeżymi plasterkami. Zawartość glikozydów fenyloetanoidowych gwałtownie wzrosła, gdy świeże próbki poddano działaniu wysokiej temperatury i suszeniu, zwłaszczaakteozyd, izoakteozyd i 2′-acetylakteozyd,podczas gdy nie wykryto ich w świeżych próbkach. Jedną z możliwych przyczyn może być degradacja glikozydów fenyloetanoidowych przez peroksydazę i -glukozydazę. Enzymy te ulegną inaktywacji w próbkach suszonych w wysokich temperaturach i zmniejszonej zawartości wody, co doprowadzi do zatrzymania w ekstraktach wysokiego poziomu glikozydów fenyloetanoidowych. Ponadto glikozydy fenyloetanoidowe są związkami fenolowymi, które mogłyby być syntetyzowane w świeżych roślinach w odpowiedzi na stres związany z wysoką temperaturą i utratą wilgoci.

NATURALNY CISTANCHE TUBULOSA POPRAWIA FUNKCJĘ NEREK PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Doniesiono, że zarówno gotowanie na parze, jak i blanszowanie świeżo pokrojonej C. desericola zwiększa zawartość echinakozydu i akteozydu.19,20). Jednakże w niniejszym badaniu blanszowanie dało znaczący (p<0.05) lower concentration of acteoside and cistanoside A than drying directly. Regarding the total concentration of the five phenylethanoid glycosides, the blanched samples were still lower than the directly oven-dried ones (1.73, 2.35 g/kg FW, respectively). Slices steamed for 5 and 7 min contained significantly (p<0.05) higher amounts of acteoside, isoacteoside, and 2′-acetylacteoside than directly oven-dried samples. In general, the highest levels of phenylethanoid glycosides were found in the steamed samples, suggesting that the above-mentioned pharmacological activities produced by glikozydy fenyloetanoidoweu C. desericola plastry można wzmocnić poprzez obróbkę parową.

Ponadto odkryliśmy, że czas parowania miał kluczowe znaczenie w określaniu zawartości glikozydów fenyloetanoidowych. Echinakozyd, cistanozyd A, akteozyd i izoakteozyd wykazywały podobną tendencję wzrostową podczas procesu gotowania na parze, która gwałtownie wzrosła (po 1, 3 min) i osiągnęła maksymalny poziom po 7 minutach. Nie zaobserwowano istotnych zmian w czterech wyżej wymienionych glikozydach fenyloetanoidowych podczas procesu parowania od 3 do 7 minut. Wręcz przeciwnie, znacząco wzrósł poziom 2′-acetyloakteozydu (str<0.05) with processing time. Notably, the levels of phenylethanoid glycosides in slices steamed for 1 min were significantly (p<0.05) lower than in directly oven-dried slices, except isoacteoside. Therefore, 1 min steaming of 3-mm fresh-cut C. deserticola was not long enough to inactivate the above-mentioned enzymes. Higher total levels of the five phenylethanoid glycosides were observed when the slices were steamed for 5 and 7 min (3.20, 3.52 g/kg FW, respectively) rather than directly oven drying. Steaming from 5 to 7 min more effectively promoted the extraction of phenylethanoid glycosides from C. deserticola, leading to a higher level of phenylethanoid glycosides in the extracts.

Ryc. 1. Stężenie (g/kg mc) echinakozydu (A), cistanozydu A (B), akteozydu (C), izoakteozydu (D) i 2′-acetylakteozydu (E) w plasterkach Cistanche desericola według różnych metod przetwarzania Różne litery (a–e) oznaczają statystycznie istotne różnice pomiędzy sposobami leczenia (test Duncana, s<0.05, n=3).

Aktywność antyoksydacyjna

Właściwości przeciwutleniające skrawków, oznaczone za pomocą ORAC, DPPH i FRAP, przedstawiono na ryc. 2. Zgodnie z oczekiwaniami, wartości ORAC wykazały duże zróżnicowanie pomiędzy próbkami, w zakresie od 13,34 µmol TE/g FW w świeżych próbkach do 108,62 µmol TE/g FW po 7 minutach gotowania na parze. Podczas procesu gotowania na parze wartość ORAC wzrosła 4-krotnie w czasie od 1 do 7 minut gotowania na parze. Podobne tendencje zaobserwowano zarówno w testach DPPH, jak i FRAP, wykazując szybki wzrost podczas obróbki parą. Chociaż próbki poddane obróbce parą początkowo miały niższą wartość przeciwutleniającą (po 1 minucie), wykazały znacznie lepsze zachowanie zdolności przeciwutleniającej w trakcie procesu. W przypadku blanszowania nie zaobserwowano istotnych różnic we właściwościach przeciwutleniających w porównaniu z bezpośrednim suszeniem w piecu.

Ryc. 2. Poziomy (µmol TE/g FW) zdolności pochłaniania wolnych rodników tlenu (ORAC) (A), aktywności wychwytywania wolnych rodników 2,2-difenylu-1-pikrylhydrazylu (DPPH) (B) oraz Właściwości przeciwutleniające redukujące żelazo (FRAP) (C) plasterków Cistanche desericola według różnych metod przetwarzania Różne litery (a–f) oznaczają statystycznie istotne różnice między zabiegami (test Duncana, str.<0.05, n=3).

Aktywność przeciwutleniająca ORAC w surowych łodygach lub plasterkach C. desericola nie była wcześniej opisywana. Jednakże ekstrakty etanolowe z surowych łodyg C. desericola mierzono w testach DPPH i FRAP28), wykazując wysoką aktywność przeciwutleniającą, nieco niższą niż 2(3)-t-butylo-4-hydroksyanizolu (BHA) i wyższy niż BHT. Ponadto glikozydy fenyloetanoidowe wyizolowane z C. desericola wykazywały silne działanie wychwytujące DPPH, nieco niższe niż kwas askorbinowy29) i wyższe niż -tokoferol.2) C. desericola może być potencjalnym źródłem naturalnych przeciwutleniaczy, ponieważ właściwości przeciwutleniające izolowanych czystych związków z C. desericola były wyższe niż w przypadku niektórych syntetycznych przeciwutleniaczy. Jak pokazano w Tabeli 2, BHT wykazywał znacząco (str<0.05) higher antioxidant properties than C. deserticola slices steamed for 7 min. Therefore, there is still a big gap between C. deserticola slices and synthetic antioxidants of equal quality.

Test DPPH wykorzystuje zarówno mechanizm transferu atomu wodoru (HAT), jak i transfer pojedynczego elektronu (SET), podczas gdy testy ORAC i FRAP opierają się odpowiednio na zasadach reakcji HAT i SET.30) W niniejszym badaniu ogólne trendy zdolności przeciwutleniającej ocenione w trzech testach były bardzo podobne. W ten sposób potwierdziliśmy, że suszone plastry C. desericola (gotowane na parze, bezpośrednio suszone w piekarniku i blanszowane) znacząco (p.<0.05) higher levels of antioxidant activity than fresh ones. Furthermore, steaming for 5 and 7 min significantly (p<0.05) enhanced levels of antioxidant activity compared with direct oven drying and blanching. Overall, our results showed that steaming fresh-cut C. deserticola slices was effective in preserving phenylethanoid glycoside levels and antioxidant activity.

Rozpuszczalne cukry, polisacharydy i rozcieńczone ekstrakty rozpuszczalne w etanolu

As shown in Fig. 3, levels of soluble sugars and polysaccharides exhibited the following descending order: fresh>directly oven-dried>steamed>blanszowane. Blanszowane plastry miały bardzo niski poziom rozpuszczalnych cukrów, polisacharydów i rozcieńczonego ekstraktu rozpuszczalnego w etanolu, co odpowiadadobrze sobie radzą z dużą utratą wagi. Świeże próbki miały znacząco (p<0.05) higher content of soluble sugars (62.89 g/kg FW) and polysaccharides (17.36 g/kg FW) than the other samples, suggesting that heat treatment (oven drying, steaming, blanching) on fresh-cut samples would reduce the extraction of soluble sugars and polysaccharides. Heat treatment inhibited the hydrolysis of phenylethanoid glycosides to release the glucose, rhamnose, and so on. Moreover, heat treatment, used as an abiotic stress factors on fresh slices, gave rise to the synthesis of several phenylpropanoid compounds including phenylethanoid glycosides.27) Particularly, sugars contained in the slices were dissolved in the hot water to different extents by steaming or blanching. Thus, it is not surprising to see that the content of soluble sugars decreased by 23.88% in steaming and by 60.82% in blanching, while the content of polysaccharides decreased by 41.33% in steaming and by 53.83% in blanching, compared with fresh slices. It has been reported that the steaming process can increase reducing sugars and acidic polysaccharides in Ginseng Radix et Rhizoma,18) and mono sugars, including galactose and glucose, in Rehmanniae Radix.17) However, the whole dried crude drugs studied in the above-mentioned literature were quite different from the fresh-cut slices used in the present study.

Ryc. 3. Stężenie (g/kg mc) rozpuszczalnych cukrów (A), polisacharydów (B) i rozcieńczonych ekstraktów rozpuszczalnych w etanolu (C) plasterków Cistanche desericola według różnych metod przetwarzania Różne litery (a–e) oznaczają statystycznie istotne różnice pomiędzy sposobami leczenia (test Duncana, s<0.05, n=3).

Największą zawartość rozcieńczonych ekstraktów rozpuszczalnych w etanolu miały plastry suszone bezpośrednio w piecu (89,26 g/kg mc), a najmniejszą plastry blanszowane (47,60 g/kg mc). Chociaż wszystkie przetworzone plastry C. desericola spełniały standardy Farmakopei Chińskiej (wydanie z 2015 r.), aby zostać zakwalifikowane jako Cistanches Herba, blanszowane plastry przyniosłyby mniej korzyści zdrowotnych niż próbki bezpośrednio suszone w piecu ze względu na poważną utratę rozcieńczonego rozpuszczalnego w etanolu ekstrakty. Jeśli chodzi o proces parowania, tendencja w przypadku cukrów rozpuszczalnych była bardzo podobna do tendencji obserwowanej w przypadku rozcieńczonych ekstraktów rozpuszczalnych w etanolu, stopniowo malejąc bez znaczących zmian w okresie od 3 do 7 minut. Stężenie polisacharydów wahało się z niewielkim wzrostem przez cały okres parzenia. Warto zauważyć, że 7 minut gotowania na parze wykazało dobrą konserwację polisacharydów, ale dużą utratę rozpuszczalnych cukrów, podczas gdy 5 minut gotowania na parze wykazało odwrotnie w porównaniu z bezpośrednim suszeniem w piecu.

Wniosek

Po raz pierwszy opisaliśmy wpływ gotowania na parze na związki bioaktywne i aktywność przeciwutleniającą świeżo pokrojonej C. desericola i dostarczyliśmy ważnych informacji do opracowania skutecznych procesów obróbki łodyg C. desericola po zbiorach. Świeże plastry wykazały najgorszą skuteczność ekstrakcji glikozydów fenyloetanoidowych i związków przeciwutleniających, co wykazało, że substancje te są podatne na degradację enzymatyczną. Natomiast próbki gotowane na parze charakteryzowały się najwyższym poziomem glikozydów fenyloetanoidowych i aktywnością przeciwutleniającą. Chociaż blanszowanie nieznacznie zwiększyło zawartość akteozydu, izoakteozydu i 2′-acetyloakteozydu w porównaniu z bezpośrednim suszeniem w piecu, wartości masy, rozpuszczalnych cukrów, polisacharydów i rozcieńczonych ekstraktów rozpuszczalnych w etanolu dramatycznie spadły. W przypadku procesu gotowania na parze poziom glikozydów fenyloetanoidowych i polisacharydów nieznacznie wzrósł z biegiem czasu. Duszenie przez 5 i 7 minut znacznie (str<0.05) enhanced total levels of the five phenylethanoid glycosides than directly oven drying. However, the longer the steaming process, the greater the decrease in weight, soluble sugars, and dilute ethanol-soluble extracts. No significant decrease in soluble sugars was observed when slices were steamed from 1 to 5 min compared with directly oven-dried samples. The steaming time had a consistent effect on the antioxidant properties, with a significant increase evaluated by the DPPH, ORAC, and FRAP assays. It was concluded that C. deserticola slices can be successfully treated with 5 to 7 min of steaming to improve the phenylethanoid glycoside levels and antioxidant activity while preserving the amounts of soluble sugary, polisacharydy i rozcieńczone ekstrakty rozpuszczalne w etanolu.

Cistanche TUBULOSA ANTI-FATIGUE ANTYOKSYDANT PHGS75% ECH 30% ACT 12%