Składniki Chemiczne Liści Cistanche
Apr 13, 2023
Streszczenie: CistancheLiście od dawna są wykorzystywane jako tradycyjna medycynaleczyćudar niedokrwienny, dusznica, Inadciśnienieoraz jako zdrowy napój ikosmetyk dlaprzeciw starzeniu. Badanie to miało na celu wyizolowanie jak największej liczby związków z ekstraktu etanolowegoliści persymony w celu identyfikacji związków biologicznie czynnych. Działanie antyoksydacyjnewarstwy octanu etylu z etanolowego ekstraktu z liści persymony wykazano przez2,2-difenylo-1-pikrylhydrazyl (DPPH) i wysokosprawna chromatografia cieczowa online-2,20 Analiza -kasyno-bis(3-etylobenzotiazolino-6-kwasu sulfonowego) (HPLC-ABTS). nowy flawonoid,kempferol-3-O- -D-2"-kumaroilgalaktozyd (1) i nowy naturalny związek, kemferol-3-O- -D-2"-feruloiloglukozyd (3) wyizolowano z warstwy octanu etylu wraz z 25 poprzednioznane związki, m.inczternaście flawonoidów, jeden jonon, dwie kumaryny, siedem triterpenoidów,i jeden acetofenon. Interpretacja danych spektrometrycznych i spektroskopowych pozwoliła określić ich struktury. Wszystkie wyizolowane związki zostały szybko ocenione przy użyciu InternetuHPLC-ABTSanaliza, a spośród nich związki4–8, 11, 13, 15, I16 wyraźnie pokazałdziałanie antyoksydacyjne. Theilość tych związków wynosiła {{0}},3–0,65 procent ekstraktu.
Słowa kluczowe:Diospyros kaki; liście persymony; flawonoid; przeciwutleniacz
1. Wstęp
Diospyros kakikciuk. (persimmon) należy do rodziny Ebenaceae i jest szeroko rozpowszechnionydystrybuowane w Korei, Chinach i Japonii. Jego owoce są spożywane świeże lub suszone, podczas gdy liście mająod dawna stosowana jako tradycyjna medycyna w leczeniu udaru niedokrwiennego, dusznicy bolesnej, nadciśnienia,miażdżyca i choroby zakaźne [1]. Ponadto wykorzystano jego liściejako zdrowe napoje i kosmetyki ze względu na swoje właściwości przeciwstarzeniowe i zdolność dopomagają zapobiegać gromadzeniu się cholesterolu i melaniny [1]. Zasugerowały ostatnie badaniaże ekstrakty z liści persymony posiadają szerokie spektrum właściwości biologicznych,w tym wychwytywanie rodników, neuroprotekcja, hamowanie zakrzepicy, przeciwmiażdżycowe,i antyalergiczny [2–6]. Poprzednie badanie fitochemiczne sugerowało, że różnerodzajeflawonoidya terpenoidy są głównymi składnikami [7] i kilka garbników,odnotowano również naftochinony, kumaryny, jonony i kwasy tłuszczowe [8–12]. Reaktywne formy tlenu (ROS) to reaktywne cząsteczki wytwarzane w układach biologicznych,a równowaga między wytwarzaniem i eliminacją ROS jest dobrze kontrolowana w normiefizjologia komórki [13]. Jednak nadmierne wytwarzanie RFT powoduje uszkodzenia oksydacyjne,a z kolei starzenie się i choroby związane z wiekiem, w tym rak, cukrzyca i choroba Parkinsonachoroba [14]. Stąd odkrywanie przeciwutleniaczy, takich jak flawonoidy i związki fenolowemoże być obiecującą strategią leczenia tych chorób.
W ramach naszego ciągłego projektu poszukiwania związków biologicznie czynnych [15],działanie przeciwutleniające ekstraktu etanolowego (EtOH) i przegród rozpuszczalnikowych z persymonyliści oceniono za pomocą testu 2,2-difenylo-1-pikrylhydrazylu (DPPH) i wysokowydajnejchromatografia cieczowa-2,20 -casino-bis (3-etylobenzotiazolina-6-kwas sulfonowy)analiza (HPLC-ABTS). Badanie fitochemiczne na liściach persymony doprowadziło do izolacjijednego nowego flawonoidu (1), jeden nowy związek naturalny (3) oraz25 wcześniejznane związki. Zastosowano metody spektroskopowe i spektrometryczne do scharakteryzowania struktur. Wszystkie wyizolowane związki szybko przebadano pod kątem ich obecnościdziałanie przeciwutleniające przy użyciu online HPLC-ABTS. Ponadto analiza ilościowawszystkie wyizolowane związki przeprowadzono w niniejszym badaniu.
2. Wyniki i dyskusja
2.1. Działanie antyoksydacyjne liści persymony
Oceniono działanie przeciwutleniające etanolowego (EtOH) ekstraktu z liści persymonydo wstępnej kontroli przez DPPH (ryc1A). 0,125 mg/mlekstrakt zmiatał około 80 procent rodników DPPH, podczas gdy 0,025 mg/ml kwasu askorbinowegokwas stanowił 94 procent rodnika. Test online HPLC-ABTS przeprowadzono szybkozapewnić wiarygodność tych wyników (ryc1D). Jako wewnętrzne zastosowano kwas galusowy i Troloxstandardy. Chromatogram przy 734 nm (pik ujemny) sugerował, że w przybliżeniudziewięć składników może mieć działanie przeciwutleniające. Kwas galusowy i Trolox (6-hydroksy- 2,5,7,8-tetrametylochroman-2-karboksylkwas) zostały użyte jako wewnętrzne standardy w celu zapewnieniawiarygodność wyników. Wywnioskowano, że większość tych pików była pochodnymi flflawonoidówtakie jak glikozyd flawonoidowy i flawanol, na podstawie przeprowadzonej analizy dereplikacjiporównując widma ultrafioletowe (UV) i masowe związków z opublikowanymidane. Frakcjonowanie kierowane testem biologicznym sugerowało, że te związki przeciwutleniające byłyobficie w warstwie octanu etylu (EtOAc), podczas gdy woda (H2Warstwa O) okazała się słabaaktywność (ryc1B,C).
Rycina 1. Efekty usuwania DPPH ekstraktu EtOH (A), warstwy EtOAc (B) i warstwy HO (C) Warstwa HhO liści persymony: (D) chromatogram online ABTS-HPLC ekstraktu EtOH.
2.2. Badania fitochemiczne
Aby zidentyfikować te związki przeciwutleniające, stosuje się różne techniki chromatograficzne i spektroskopoweprzeprowadzono metody izolacji i charakterystyki strukturalnejzwiązki. Nowy flawonoid (1) i nowy naturalny związek (3) uzyskano zwarstwa octanu etylu ekstraktu etanolowego wraz z 25 wcześniej zgłoszonymi związkami,mianowicie kemferol-3-O- -2"-kumaroilglukozyd (2) [16], (plus)-katechina (4) [17], hiperozyd(5) [17], izokwercytryna (6) [18], kwercetyna-3-O- -2"-galloilogalaktozyd (7) [19], kwercetyna-3-O- -2"-galloiloglukozyd (8) [20], trifolina (9) [18], astragalina (10) [18], kemferol-3-O- - 2"-galloilogalaktozyd (11) [21], kemferol-3-O- -arabinozyd (12) [22], kemferol-3-O- - 2"-galloiloglukozyd (13) [23], kwercetyna-3-O- -2"-kumaroilglukozyd (14) [24], kwercetyna(15) [15], kemferol (16) [25], (6S,9S)-rozozyd (17) [26], skopoletyna (18) [27], umbeliferon(19) [28], 1-(2,4-dihydroksy-6-metylofenylo)etanon (20) [29], kwas barbinerwowy (21) [30], kwas diospirowy B (22) [7], kwas rotungenowy (23) [31], kwas pomolowy (24) [32], kwas siaresinolowy(25) [33], kwas oleanolowy (26) [25] i kwas ursolowy (27) [25] za pomocą spektroskopii idane spektrometryczne i fizyczne w porównaniu z opublikowanymi danymi, a także z cienkimianaliza metodą chromatografii warstwowej (TLC) (ryc2 I3). Wśród nich związki2, 16, 17, 19, 20, I24 zostały po raz pierwszy wyizolowaneD. kaki.
Związek 1 otrzymano w postaci żółtego proszku, którego wzór cząsteczkowy określono jako C3olO3 na podstawie danych ze spektrometrii masowej o wysokiej rozdzielczości (HRMS). Widmo wykazało pasma absorpcji przy 207 i 315 nm, co wskazuje, że związek 1 ma szkielet flawonolowy. Dane z magnetycznego rezonansu jądrowego (NMR) „H” (tabela 1, rysunek S1) wykazały typowy wzór kumaroilowanego glikozydu flawonolu, pokazując dwa zestawy sygnałów typu AA'BB' ({{10}}.{{11 }} (2H, d, J= 8,5 Hz, H-2' i H-6),6,87 (2H, d, J{{20}} 0,5 HzH-3' i H-5')) w pierścieniu B kempferolu, jak również sygnały (0 7,45 (2H, d, J=8. 5 HzH-2 i H{{3{{104}}}}"), 6,81 (2H, d, J=8,5 Hz, H-3 i H-5 procent ) w pierścieniu aromatycznym grupy kumaroilowej. Dwa sygnały dubletów (8H 7,65 (1H, d, J=15,5 Hz, H-7"") i 6,35 (1Hd, J=16.0 Hz, H-8"), co wskazuje na transolefinowe protony z grupy krajów. Dodatkowo anomeryczny sygnał protonowy (0H 5,57 (1H, d, J=8, 0 Hz, H -1) zaobserwowano w regionie cukrowym, co sugeruje obecność cyklicznej grupy cukrowej o konfiguracji B. Dane NMR 13C i bez zniekształceń dzięki transferowi polaryzacji (Iable 1Rysunek S2) pokazał 30 rezonansów obejmujących dwa węgle trans-olefinowe, dziesięć węgli aromatycznych i sześć węgli ugrupowania glukozylowego oraz dziesięć nieprotonowanych węgli, w tym dwa węgle karbonylowe. W szczególności przesunięcia chemiczne przy C-2, C-3 i C-4 (8c 158,1, 134,9 i 179,2) były sygnałami charakterystycznymi dla glikozydu flawonolu3-0-. Dodatkowo sygnał węgla karbonylowego przy C-1" (8c 168,7) i dwa sygnały węglowe trans-olefinowe przy C-2'" i C-3"(6 146,9 , 115,2) były typowymi przesunięciami chemicznymi grupy kumaroilowej. Anomeryczny sygnał węglowy przy C-1(6C 100,4) i inne sygnały dla ugrupowania glikozylowego od C-2" do C-6" Zaobserwowano (6c74,3, 73,4, 70,5, 77,4 i 62,0). Te jednowymiarowe (1D) dane NMR można było nałożyć na te dla kempferolu-3-0-B-2"-kumaroilglukozydu (2) (16). Jednak dokładne porównanie danych 13C NMR między dwoma związkami sugerowało, że związek 1 miał ugrupowanie galaktozy, co zostało dodatkowo wykazane przez dane NMR jądrowej spektroskopii wzmacniającej Overhausera (NOESY) (Rysunek S6). Podczas gdy korelacja NOES między H-2 i H-4 zaobserwowano w związku 2, nie było korelacji między tymi protonami w związku 1. Ogólnie interpretacja danych 13C NMR i NOESYNMR jest skuteczną metodą określania rodzaju ugrupowania glikozylowego Wywnioskowano, że położenie ugrupowania galaktozy znajduje się w C-3 zgodnie z przesunięciem w dół pola C-2i C-4, co dalej potwierdza korelacja heterojądrowych wiązań wielokrotnych (HMBCbetween H{ {123}}” i C-3 (Rysunek S5). Wykazano, że pozycja grupy kumaroilowej znajduje się w C-2" na podstawie przesunięcia w dół pola (0 5,36 (1H, dd, J=10,0, 8,0 Hz, H{ {134}}")) oraz korelacji HMBC między H-2' i C-1. W rezultacie struktura związku 1 została określona jako kemferol-3-0-B-2"-kumaroilgalaktozyd. Chociaż związek 2 został wcześniej wyizolowany z różnych źródeł, w tym z Ouercus suber (16) i Alliumporrum (34), związek 1 został wyizolowany i scharakteryzowany strukturalnie po raz pierwszy.
Mieszanina3 wyodrębniono w postaci żółtego proszku i ustalono wzór cząsteczkowyjako C31H28O14 analizując dane HRMS. Widmo UV wykazało UVabsorpcja przy 210 i 327 nm dzięki temu samemu aglikonowi ze związkami1 I2. The1H Dane NMR (Tabela1, Rysunek S10) były podobne do związków2, ale złożone3 miał grupę feruloilową zamiast grupy kumaroilowej, o czym świadczy obecność andodatkowa grupa metoksy (δH 3.91 (3H, s, 3000 -OK3)). Dodatkowo anomeryczny protonsygnał (δH 5.64 (1H, d, J {{0}}.0 Hz, H-100 )) zaobserwowano, co wskazuje, że wiązanie glikozylowebył-konfiguracjai sygnał przesunięty w dół pola (5,03 (1H, t,J = 8,5 Hz, H-200 )) został pokazany w obszarze cukru, podobnie jak w przypadku związku1. The13Dane C NMR (Tabela1, RysunekS11) wykazało 31 rezonansów składających się z dwóchtrans-węgle olefinowe, dziesięć węgli czwartorzędowych,dziesięć węgli aromatycznych, sześć węgli ugrupowania glukozylowego i jeden węgiel metoksylowy oraz dziesięć nieprotonowanychwęgle, w tym dwa węgle karbonylowe odpowiadające kempferolowi, feruloilowi,i grup glukozy. W szczególności sygnały węglowe z C-200 do C-600 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 i 62.5) sugerowały obecność ugrupowania glukozy. Umiejscowienie cząsteczki glukozyi grupa feruloilowa zostały przypisane przez korelacje HMBC dalekiego zasięgu między H-100 IC-3 (δC 134,8) i H-200 i C-1000 (δC 168.4) (Rysunek S14). Stanowisko dodatkowegrupę metoksylową określono na podstawie kluczowej korelacji między 3000 -OK3 i C-3000 (δC 149,4). Powyższe wyniki sugerowały budowę związku3 jako kemferol-3-O- - 2"-glukozyd feruloilu. Zgodnie z naszą najlepszą wiedzą, związek3 został zgłoszony tylko jako aprodukt hydrolizy 3-O- -(2-O-feruloilo)-glukozyl-7,40 -di-O- -glukozylo-kempferol, odizolowany odAllium tuberosum[35]. Dlatego struktura3 została wyjaśniona jako nowanaturalny związek.
Mieszanina11 wyodrębniono w postaci żółtego proszku. The1Dane H NMR (Rysunek S19)pokazał zestaw AA0 nocleg ze śniadaniem0 -sygnały typu (δH 8.06 (2H, d, J {{0}}.0 Hz, H-20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {{0}},0 Hz, H-30, H-50 )) w pierścieniu B kemferolu i sygnał singletowy wδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) ugrupowania galoilowego w regionie aromatycznym, co jest sygnałem charakterystycznymprzydzielonego flawonolu. Anomeryczny sygnał protonowy (δH 5.78 (1H, d, J {{0}}.0 Hz, H-100 )) wskazało, że wiązanie glikozylowe było a-konfiguracja. Ponadto pole dolneprzesunięty sygnał protonu (5,27 (1H, t,J = 9,5 Hz, H-200 )) zasugerował, że grupa galoilowazostał przyłączony do grupy hydroksylowej C-200 ponieważ tę zmianę można przypisaćanizotropowy wpływ tzwOugrupowanie -galloilowe [21]. The13Dane C NMR (Rysunek S20)wykazywał 26 rezonansów, wskazując na przydzielony glikozyd flawonolu. Sygnały węgloweod C-200 do C-600 (δC 71.1, 72.7, 68.2, 76.{7}} i 60.1) sugerowały obecność galaktozyugrupowanie. Dlatego struktura związku11 został potwierdzony jako kemferol-3-O- -200 - galoilogalaktozyd. Chociaż złożone11 został wcześniej wyizolowany z różnych źródeł,w tymD. kaki[21,36], tylko1Dane H NMR i MS były wcześniej zgłaszane. Zatem,the13Dane C NMR zostały zgłoszone po raz pierwszy w tym badaniu
2.3. Aktywność antyoksydacyjna wyizolowanych związków
Wszystkie wyizolowane związki oceniano pod kątem ich działania przeciwutleniającego za pomocą metody Rapid onliniową analizę HPLC-ABTS w celu określenia, które związki przyczyniły się do działania przeciwutleniającegodziałanie liści persymony. związki4–8, 11, 13, 15, I16 wykazał silne działanie przeciwutleniająceczynności idatywne (ryc4). Większość z tych związków to kemferol i kwercetynapochodne, ale niektóre pochodne (1–3, 9, 10, 12, I14) nie wykazało aktywności. Thezwiązek struktura-aktywność nie został w pełni określony, ale częściowo ujawniony. Ww szczególności kwercetyna i kemferol z ugrupowaniami galoilowymi (7, 8, 11, I13) stwierdzonomają silne działanie, ale te z ugrupowaniami kumaroilowymi lub feruloilowymi (1–3 I16) niepokazywać jakąkolwiek aktywność.
Rysunek 4.Zmiatanie wolnych rodników przez wyizolowane związki (4–8, 11, 13, 15, I16) zostały ocenione przez InternetTest HPLC-ABTS.
2.4. Analiza ilościowa izolowanych związków
Analiza ilościowa wszystkich wyizolowanych związków w ekstrakcie rozpuszczalnym w EtOAcprzeprowadzono w celu potwierdzenia, że działanie przeciwutleniające liści persymony może byćspowodowane przez te związki czynne. Specyficzna metoda HPLC z detekcją matrycy diodowej ido równoczesnego oznaczania opracowano detektor rozpraszania światła wyparnegoz 27 związków. Zawartość wszystkich wyizolowanych triterpenoidów wynosiła około 5,9 procentekstrakt, a z nich kwas siaresinolowy (25), kwas oleanolowy (26) i ursolskichkwas (27) stanowiły znaczną część, jak podano w poprzednich badaniach [7]. Thezawartość flawonoidów wynosiła około 5,4 procent, w tym związków aktywnychwyniosły 3,2 proc. (tab2). W szczególności zawartość kaempferolu-3-O- -200 -galloilogalaktozyd(9), kemferol-3-O- -2"-galloiloglukozyd (10), izokwercytryna (13) i kwercetyna-3-O- -2"- galloiloglukozyd (15) były o ponad 0,3 procent . Metodę analityczną zweryfikowano za pomocą aprosta procedura walidacji w celu zapewnienia przydatności metody, która okazała się odpowiedniaspecyficzność, liniowość, dokładność i precyzja.
Zapytaj o więcej:
E-mail:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950
