Właściwości chemiczne mannoglukanu z Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

1. Materiały

Stosowano pasty doustne dla koni od dwóch różnych producentów, zawierające odpowiednio 10 mg/g (A) lub 20 mg/g (B) iwermektyny. Wykonano oznaczenie ilościowe dla iwermektyny, której zawartość wynosiła 104,4– 107,7 procent deklarowanego stężenia.

2. Test rozpuszczania

Test przeprowadzono za pomocą Ph. Eur. aparat łopatkowy (Pharma Test, Heinberg, Niemcy), przy mieszaniu 75 obr./min lub 50 obr./min, w temperaturze 37 -00,5°C. /v) jako ośrodek rozpuszczania zastosowano roztwór wodny (900 ml). Pastę (4 g A lub 2 g B) umieszczono w naczyniu za pomocą strzykawki z kaniulą (A) lub wkroplono próbkę na powierzchnię ośrodka rozpuszczającego (B). Po odstępach czasu (15, 30, 45, 60 min i 2 godz.) pobrano próbkę ośrodka rozpuszczającego (2 ml), przefiltrowano przez szklany filtr i analizowano.

3. Analiza HPLC

Oznaczenie iwermektyny przeprowadzono zmodyfikowaną metodą HPLC, jak opisano w Ph. Eur. Analizowane roztwory rozcieńczono metanolem (1:10). System HPLC składał się z kolumny oktadecylowej (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), integratora D-12500 A, detektora UV-Vis L{{7} }, pompa L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Niemcy). Jako fazę ruchomą zastosowano mieszaninę acetonitryl:metanol:woda (64:24:16) o szybkości przepływu 1,9 ml/min. Objętość wstrzykniętej próbki wynosiła 20 ml, a detekcję prowadzono przy 254 nm.

4. Badania rozpuszczalności

Dostęp substancji wytrząsano w szczelnie zamkniętych szklanych kolbach z odpowiednim rozpuszczalnikiem (Tabela 1) przez 20 hw 37 0.1 C. Zawiesiny przesączono i przesącz po rozcieńczeniu w metanolu zanalizowano metodą HPLC .

5. Stabilność w roztworze kwaśnym

Roztwory iwermektyny w HCl {{0}}.1 M przechowywano w szczelnie zamkniętych fiolkach szklanych w 20°C i 37°C. Chromatogramy roztworów rejestrowano przy t=0 i po 1, 2 i 6 godz. Obliczono powierzchnię iwermektyny (czas retencji 10,5 min) i dodatkowe piki.

Bibliografia

Wytyczne FDA dla przemysłu: niesterylne półstałe postacie dawkowania SUPAC-SS. Zmiany na większą skalę i po zatwierdzeniu: chemia, produkcja i kontrole; testowanie uwalniania in vitro i dokumentacja biorównoważności in vivo. Maj 1997. Wytyczne FIP dotyczące badania rozpuszczalności stałych produktów doustnych (1997) Dissolute. Technol. 4: 5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) Wytyczne FIP/AAPS dotyczące rozpuszczania/badania uwalniania in vitro nowych/specjalnych postaci dawkowania, AAPS PharmSciTech, 4 (1) artykuł 7 Nowoczesne Centrum Badawcze Tradycyjnej Medycyny Chińskiej, Szkoła Nauk Farmaceutycznych, Centrum Nauk o Zdrowiu Uniwersytetu Pekińskiego, Pekin, Chiny

Xiang mei Wu, Pengfei Tu Otrzymano 13 lutego 2004 r., zaakceptowano 4 kwietnia 2004 r. Prof. dr Pengfei Tu, Nowoczesne Centrum Badawcze Tradycyjnej Medycyny Chińskiej, Szkoła Nauk Farmaceutycznych, Centrum Nauk o Zdrowiu Uniwersytetu Pekińskiego, nr 38, Xueyuan Road , dystrykt Haidian, Pekin 100083, Chiny Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)

Nowy mannoglukan odCistanche deserticolaz Chin jest scharakteryzowany. Związek odpowiada za łagodną stymulację proliferacji limfocytów T i B indukowanej mitogenami.

Cistanche deserticolaYC Ma jest holopasożytem rosnącym na korzeniach dwuliściennej rośliny Haloxylon ammodendron Bunge, która jest szeroko rozpowszechniona w północno-zachodnich Chinach. Ponieważ jest to ważny tonik w medycynie orientalnej, twierdzono wiele aktywnych składników i właściwości farmakologicznych (Karasawa i wsp. 1986; Yoshizawa i wsp. 1990). Te właściwości mogą być związane z niektórymi składnikami polisacharydowymiCistanchektóre nie zostały jeszcze zbadane. Wyizolowano i scharakteryzowano mitogenne polisacharydy pektynowe i polisacharydy obojętne zCistanche deserticolaz Mongolii (Radna i wsp. 1996; Anna i wsp. 1997; Bożena i wsp. 1999). Tutaj przedstawiamy właściwości chemiczne nowego mannoglukanu zCistanche deserticolaz Chin, który odpowiada za łagodną stymulację indukowanej mitogenami proliferacji limfocytów T i B. Po łodygachCistanche deserticolaYC Ma wyekstrahowano 95 procentowym etanolem, a pozostałość wyekstrahowano zimną wodą destylowaną. Ekstrakt zimnej wody wytrącono EtOH, białko usunięto i dializowano, otrzymując surowy polisacharyd CCDP. Surowy polisacharyd frakcjonowano na kolumnie DEAE i kolumnie Sephadex G-150 w celu uzyskania polisacharydu wolnego od białka (CDP-6), który zawierał glukozę (89,2%) i mannozę (1{{58} },4 procent), z czego średni Mr oszacowano na 6,8 -104. Polisacharyd CDP-6 wykazał [a 20 D 42 (c 1, H2O). Konfiguracje absolutne cukrów określono metodą GC TMS (– )-2-butyloglikozydów. CDP-6 był metylowany (Needs et al. 1993), hydrolizowany, przekształcany w octany alditolu i analizowany za pomocą GC i GC-MS (Tabela). Ten wynik wraz z danymi dotyczącymi stosunku molowego z analizy metylacji sugerował, że CDP-6 ma głównie 1,6-połączony Glcp i szkielet 1,6- połączony w mniejszym stopniu rozgałęziony w O{{ 24}} mannozy. Analiza metylacji dwóch polimerów (CDP-6-1, CDP-6–2) z częściowej hydrolizy potwierdziła, że ​​CDP-6 ma szkielet składający się z 1,6-połączonych reszt glukozylowych i 1,6-połączone reszty mannozylowe, które są podstawione przy O-3 mannozy przez rozgałęzienia składające się z końcowych, 1,6- połączonych reszt glukozylowych i 1,3,{{38} }połączone reszty mannozylowe. Zgodnie ze stosunkami molowymi i literaturą (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996), widmo 13C NMR CDP-6 wykazało sygnały z powodu anomerycznych węgli a-d-Glcp (C{{45). }} przy 98,4 ppm), bd-Map (C-1 przy 104,3–104,9 ppm) i ad-Map (C-1 przy 1000,0 ppm). Widmo 1H NMR CDP-6-2 w D2O wykazało sygnały protonowe odpowiadające ad-Glcp (H-1 przy 4,94-4,95 ppm) i a-d-Map (H-1 przy 4,96–5,00 ppm). Widmo 13C NMR CDP-6-2 w D2O wykazało sygnały protonowe odpowiadające aD-Glcp (C-1 przy 98,6 ppm) i ad-Map (C-1 przy 98,4 ppm). Doniesiono, że mannoglukany mają 1,4-połączony szkielet glukopirannanu i 1,4-połączony szkielet mannopirannanu (Radjabi Nassab i wsp. 1984; Tanabe i wsp. 2000). CDP-6 ma kilka różnych cech strukturalnych dzięki a-1,6-połączeniom Glcp i b-1,6-połączonym szkielecie mapy i jest zastępowany przez gałęzie mannoglukanu (Figa.). W celu zbadania użyciaCistanche deserticolaw medycynie ludowej oceniano wpływ CDP-6 na układy limfocytów T i B. Stwierdzono, że łagodnie stymuluje proliferację limfocytów T i B indukowaną mitogenami.

Eksperymentalny

1. Procedury ogólne

Skręcalność optyczną zmierzono automatycznym polarymetrem W22-1S. Widma IR oznaczono na spektrometrze Perkin-Elmer 599B. Analizę GC przeprowadzono na aparacie Agilent HP6890N wyposażonym w detektor FID. GC-MS przeprowadzono na instrumencie Finnigan Trace GC-MS. Jednorodność i Mr of CDP-6 oszacowano z krzywej kalibracyjnej objętości elucji standardowego dekstranu, którą wykonano na

aparat serii Agilent 1100 z kolumną Shodex KS-805. Widma 1H NMR i 13C NMR rejestrowano za pomocą aparatu INOVA-500. Zawartość białka analizowano metodą Bradforda (Andre i wsp. 1975). Monosacharydy analizowano pod kątem ich octanu alditolu po ich hydrolizie (2 M TFA, 2 godz., 110°C), redukcji i octanowaniu. Hydrolizaty analizowano metodą TLC na płytce z żelem krzemionkowym zawierającej 5% diwodorofosforan sodu w BuOH-EtOAc-alkohol izopropylowy-HOAC–H2Opirydyna (3,5:10:6:3,5:3:3), a cukry wykrywano przez spryskiwanie orcynolem -H2SO4. Otrzymane octany alditolu analizowano metodą GLC stosując kolumnę kapilarną HP-5 (30 m 0,32 mm). CDP-6 metylowano metodą Ciucanu, a następnie hydrolizę i analizowano jako częściowo zmetylowane octany alditolu metodą GC-MS. Po częściowej hydrolizie produkty poddano dializie i rozdzieleniu, otrzymując dwa polimery, CDP-6-1 i CDP-6–2.

2. Materiał roślinny

Roślina została zebrana z prowincji Mongolia Wewnętrzna w Chinach w sierpniu 2001 r. i została zidentyfikowana przez Hu-Biao Chen z Wydziału Medycyny Naturalnej Szkoły Nauk Farmaceutycznych Uniwersytetu Pekińskiego Health Science Center. Wzór kuponu [E-1-(9)] tej rośliny został zdeponowany w Szkole Nauk Farmaceutycznych Uniwersytetu Pekińskiego. 3. Ekstrakcja, izolacja i oczyszczanie polisacharydu CDP-6 TrzonCistanche deserticolaYC Ma (1500 g) wyekstrahowano 95 procentowym etanolem (6 l) we wrzeniu. Osuszoną nierozpuszczalną pozostałość w etanolu macerowano trzykrotnie zimną wodą destylowaną przez 12 godzin. Ekstrakt zimnej wody przefiltrowano, a filtrat odwirowano. Po wytrąceniu czterema objętościami EtOH (mieszanie i odstawienie na 24 hw 4°C) otrzymano wytrącony produkt (35,5 g). Białko z osadu usunięto metodą Savage'a. Po rozpuszczeniu w wodzie destylowanej pozostałość (25,5 g) dializowano i liofilizowano (wydajność: 10,6 g). Surowy polisacharyd (8 g) rozpuszczono w wodzie destylowanej (100 ml, 8% wag./obj.) i rozdzielono na kolumnie DEAE (70 5 cm, gradient 0–2 M NaCl, na 1,5 l). Otrzymano frakcję eluowaną wodą (600 mg). Próbkę (250 mg) oczyszczono metodą kolumnowej chromatografii żelowo-permeacyjnej na kolumnach Sephadex G- 150 (4 - 80 cm, 1600 ml, 5 ml na frakcję). Frakcje CDP-6 (1500-1600 ml) połączono, dializowano i liofilizowano. Po odsoleniu przez Sephadex G-25 (60 1 cm). CDP-6 (110 mg) otrzymano i oznaczono jako pojedynczy pik za pomocą HPSGC.

Potwierdzenie:Autor dziękuje dr Baomei Shao i prof. Xiaoming Gao z School of Basic Medical Sciences, Beijing University Health Science Center za zmierzenie immunomodulacyjnej aktywności CDP-6.