Medycyna chińska Cistanche Skład chemiczny i analiza składników organizmu Ⅲ

Rozdział 3 Analiza ilościowa wieloskładnikowych składników Cistanche desericola na podstawie RPLC-HILIC-MS/MS

Skład chemiczny tradycyjnej medycyny chińskiej jest złożony i zawiera różnorodne związki, takie jak metabolity pierwotne i wtórne [55-561. Uzyskanie kompleksowej i wiarygodnej analizy składników chemicznych tradycyjnej medycyny chińskiej (w tym składników hydrofilowych i hydrofobowych) nadal stanowi poważny problem techniczny. Co więcej, zawartość każdego składnika w tradycyjnej medycynie chińskiej jest bardzo zróżnicowana, a konwencjonalne metody spektrometrii mas cieczowych są trudne do dokładnego określenia ilościowego jednocześnie głównych i śladowych składników. 1571 Tradycyjna separacja jednokolumnowa nie wystarczy, a analiza związków śladowych w tradycyjnej medycynie chińskiej będzie ograniczona stałymi. Z powodu interferencji związków zjawisko nakładania się pików jest poważne. Chociaż w celu poprawy rozdziału złożonych matryc zastosowano różnorodne zaawansowane techniki chromatograficzne, takie jak kolumny do chromatografii typu rdzeń-powłoka i kolumny do chromatografii cząstek submikronowych, kolumny do chromatografii oddziaływań hydrofilowych itp., osiągnięcie kompleksowego rozdzielenia różnych związków przy użyciu pojedyncza kolumna [58 -59. Chromatografię wielokolumnową, która łączy co najmniej dwa ortogonalne mechanizmy chromatograficzne, takie jak dwuwymiarowa LC, LC z przełączaniem kolumn i tandemowa dwukolumnowa LC, uznano za wykonalne narzędzie, które może znacznie rozszerzyć zakres metabolitów. Nie ma wątpliwości, że zarówno dwuwymiarowy LC, jak i LC z przełączaniem kolumn mogą znacznie zwiększyć wydajność szczytową 160). Jednakże obie metody zależą od zaworów, oprzyrządowanie jest złożone i czasochłonne, a rury łączące i regulatory są łatwe w montażu. Istnieją pozostałości i te dwie metody mogą wprowadzać szereg czynników niepewności prowadzących do ilościowej nieodtwarzalności1571. Chociaż tandemowa chromatografia oddziaływań hydrofilowych z odwróconą fazą (RPLC-HILIC) nie może znacząco zwiększyć wydajności szczytowej, wyposażenie instrumentu jest proste, w rurkach łączących i regulatorach nie ma pozostałości, a mimo to nadal może realizować zmianę z hydrofilowej na hydrofobową. Kompleksowa retencja dużej liczby szeroko polarnych związków [61-66. Ponadto tryb monitorowania wielu reakcji (MRM) unikalny dla spektrometru mas z potrójnym kwadrupolem (QgQ) może zostać wykorzystany jako kolejny wymiar separacji w celu dalszej poprawy zdolności separacji RPLC-HILIC. Krótko mówiąc, RPLC-HILIC-MRM łączy w sobie nieodłączne zalety RPLC, HILIC i MRM i oczekuje się, że stanie się niezawodną metodą analityczną.

JAK DŁUGO DZIAŁA CISTANCHE?

Zawartość każdego składnika tradycyjnej medycyny chińskiej jest bardzo zróżnicowana. W porównaniu z głównymi składnikami ludzie zwracają większą uwagę na rozwój bardziej czułych metod, aby zakończyć wykrywanie tych związków śladowych, a nawet ultraśladowych. Tryb MRM jest często zalecany ze względu na jego doskonałą czułość i dobry liniowy zakres dynamiki167. Jednakże, ze względu na nasycenie mnożenia elektronów końcowych komory Q3 spektrometru mas QqQ, zakres liniowy jest zwykle zawężony, a górna granica oznaczalności (ULOQ) nie może w pełni pokryć zawartości niektórych głównych związków bez niezawodnego monitorowania te składniki śladowe. Dlatego tłumienie produkcji jonów produktu może rozszerzyć ULOO. Stosując osłabione parametry związku, takie jak pary jonowe,magazynowy(DP) ienergia zderzenia(CE) może zmniejszyć liczbę docelowych jonów produktu i tym samym poszerzyć ULOQ[68-69]

Tradycyjna medycyna chińskaCistancze Herbato suszona mięsista łodyga z łuskowatymi liśćmiRoślina Cistanches. Jest to jeden z powszechnie stosowanych tradycyjnych chińskich leków i znany jest jako „pustynny żeń-szeń”. Glikozydy fenyloetanoidowe zawsze były gorącym tematem badań w Cistanche Deserticola, ale w ostatnich latach dobrze poznano również farmakologiczne działanie innych składników hydrofilowych, takich jak mannitol! 70-721. Jednakże w naszej rutynowej analizie ilościowej CH zawartość głównych składników, takich jakechinaceas,werbaskozydi mannitol były czasami zbyt wysokie, aby przekroczyć zakres pomiarowy detektora UV lub detektora rozpraszania światła przez parowanie (ELSD). Dlatego z punktu widzenia ogólnej oceny jakości ważne jest opracowanie metody analitycznej, która umożliwia jednoczesne monitorowanie składników hydrofilowych i hydrofobowych oraz dokładne oznaczanie ilościowe zarówno składników głównych, jak i śladowych.

Eksperyment opisany w tym rozdziale ustalił niezawodną metodę odpowiednią do analizy złożonych matryc - spektrometrię mas w cieczy RPLC-HILIC-MS/MS (chromatografia oddziaływań hydrofilowych z odwróconymi fazami szeregowo sprzężona chromatografia oddziaływań hydrofilowych-tandemowa spektrometria mas), która umożliwiła wykrycie 23 polarności w Cistanche Deserticola . Jednoczesne rozdzielanie, analiza i oznaczanie zawartości szerokiej gamy związków (obejmujących składniki hydrofilowe i hydrofobowe); podczas korzystania z trybu SMRM, aby zapewnić powtarzalność tej metody, przy użyciu odpowiednich wartości CE i różnych par jonów w celu rozszerzenia szyszki. ULOQ głównych składników, takich jak inulina i werbaskozyd, umożliwia jednoczesne oznaczenie ilościowe głównych składników i składników śladowych Cistanche Deserticola, zapewniając wykonalne narzędzie poprawy kontroli jakości Cistanche desericola i pomagające w osiągnięciu powszechnego docelowego metabolizmu roślin. Genomika.

Sekcja 1 Materiały doświadczalne

1. Instrument

Cieczowy spektrometr mas HPLC-Qtap-MS wyposażony jest w Shimadzu HPLC (wyposażony w 2 pompy LC-20ADxR, automatyczny próbnik SIL-20ACxR, detektor UV SPD-M20A, CTO-20AC termostat, DGU-20odgazowanie online A3R Składa się z maszyny, sterownika CBM-20A, Shimadzu Corporation, Japonia) i spektrometru mas SCIEX5500 Qtrap (źródło jonów ESI, SCIEX, Foster City, Kalifornia, USA) . Akwizycję danych i obliczenia przeprowadzono za pomocą oprogramowania Analyst Software 1.6.2. System oczyszczania wody ultraczystej Mili-Q (Milipore Company, USA), elektroniczna waga analityczna Mettler ME204 (Mettler Toledo Company, Szwajcaria), ekstraktor ultradźwiękowy (230V, Bransonmodel 5510, Danburry, CT, USA).

2. Materiały i odczynniki

Kolumna Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 mm, 1,8 µm), kolumna Waters XBridge Amide (4,6 mm x 150 mm, 3,5 µm).Polieteroeteroketon(PEEK) (Agilent Company, USA). Metanol, acetonitryl i kwas mrówkowy klasy chromatograficznej i spektrometrii masowej zakupiono od ThermoFisher (Pittsburgh, Pensylwania, USA), a wodą była ultraczysta woda Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA) wyprodukowana w laboratorium . Niacynę (kwas nikotynowy, cLogP, 0.799), kwas bursztynowy (cLogP, -0.526) zakupiono od Sigma-Aldrich Company (St. Louis, MO, USA): urydyna (cLogP, -2.219), migdałek adenozyny (cLogP, -2.158), inozyna (cLogP, {{10}}.106) i guanozyna (cLogP , -3.326) zakupiono od Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. Salidrozyd (cLogP -0.296), 6-deoksykatalpol (cLogP, -3.071), fenyloalanina (cLogP, -1.556), 8-kwas epiloganowy (cLogP, -2.366), mannitol (cLogP, -2.046), sacharoza (cLogP , -3.087), glurozyd (cLogP, -1.757), alaschaniozyd A (alaschaniosyd A, cLogP -0.971 ), echinakozyd (echinakozyd, cLogP, -1 .811), kwas ferulowy (cLogP, 1.421), akteozyd (cLogP, -0.890), izoakteozyd (cLogP, -0.057) i pinorezynol- -D-glukopiranozyd (cLogP, -0.384) zostało dostarczone przez Kluczowe Laboratorium Leków Naturalnych i Biomimetycznych Uniwersytetu w Pekinie, cistanozyd F (cistanozyd F, cLogP, -2.211) zakupiony od Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanozyd A (cistanozyd A, cLogP, -1.365), 2'-acetylakteozyd (cLogP, -0.040) i apiozyd likwirytyny (cLogP, -0.267) zakupiono w Szanghaju Shidande Biotechnology Co., Ltd. i tubulozyd A (tubulozyd A, cLogP, 0,287) zakupiono od Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd. Czystość wszystkich substancji referencyjnych zbadano metodą HPLC-DAD-IT-TOF-MS, a czystość była większa niż 98%. Wszystkie wartości cLogP substancji kontrolnej obliczono za pomocą oprogramowania ChemBioDraw Ultra14.0 (CambridgeSoftCambridge, MA, USA).