Medycyna chińska Cistanche Skład chemiczny i analiza składników organizmu Ⅱ

Skrót

CistancheOd czasów starożytnych uważana jest za silną i odżywczą, cenną tradycyjną medycynę chińską. Jest znany jako "pustynny żeń-szeń„. Po raz pierwszy został nagrany w „Materia Medica Shen Nonga" i jest wymieniony jako najwyższej klasy. Posiada funkcjeodżywczy Yang nerek,uzupełnianie esencji i krwi, nawilżanie jeliti defekacja, iopóźnianie starzenia. Często stosuje się go w leczeniu impotencji u mężczyzn, niepłodności u kobiet, przeziębienia i biegunki, bólu spowodowanego przeziębieniem w talii i kolanach, suchości krwi i zaparć. Cistanche opisane w Części 1 „Farmakopei Chińskiej (wydanie z 2015 r.)” to suszone, mięsiste łodygi z łuszczącymi się liśćmiCistanche desericola YCMaICistanche tubulosa (Schenk) R. Wight. Ze względu na zamieszanie dotyczące materiałów leczniczych Cistanche znajdujących się obecnie w obiegu na rynku, większość kontroli jakości Cistanche koncentruje się wyłącznie na glikozydach fenyloetanoidowych. Aby lepiej ocenić jakośćCistanchei zapewnienia skuteczności materiałów i produktów leczniczych, w tym artykule dokonano przeglądu postępu badań w zakresie analizy składu chemicznego i analizy składu in vivo Cistanche, w celu ustalenia bardziej wszechstronnej i skutecznej metody analizy, aby zrekompensować obecną analizę jakości i niedociągnięcia in vivo studia.

Suplement Cistanche

Dział 1. Postęp badawczy w zakresie analizy składników chemicznychTradycyjna medycyna chińska Cistanche

Środowisko naturalne i warunki regionalne bezpośrednio wpływają na jakość chińskich materiałów lub preparatów leczniczych, a jakość chińskich materiałów lub preparatów leczniczych jest ściśle powiązana z bezpieczeństwem leków klinicznych. Dlatego w celu poprawy poziomu kontroli jakości materiałów lub preparatów leczniczych Cistanche szczególnie ważne jest ustalenie dokładnych, niezawodnych i szybkich metod oznaczania. W ostatnich latach uczeni krajowi i zagraniczni wykonali wiele pracy nad analizą składników chemicznych Cistanche, a także wypróbowali różne metody analizy, w tym pobieranie odcisków palców, kolorymetrię, HPLC-DAD, HPLC-ELSD, LC-MS, i GC-MS. , FT-IR i 2D-IR itp.

1. Wzór odcisku palca

Metoda odcisków palców jest zgodna z koncepcją „integralności” w tradycyjnej medycynie chińskiej. Jest to praktyczna metoda kontroli jakości, służąca do identyfikacji autentyczności tradycyjnej medycyny chińskiej i oceny jej spójności jakościowej. Cieszy się dużym uznaniem w społeczności międzynarodowej.

Zhu Nailiang i in.! wykorzystał UPLC do ustalenia odcisków palców pustynnych materiałów leczniczych Cistanche i Cistanche tubulosa, skalibrował 15 wspólnych pików i zidentyfikował 5 wspólnych pików, wskazując, że odciski palców dwóch Cistanche zebrane w Farmakopei są znacząco różne. Metoda ta jest prosta i powtarzalna i pozwala na rozróżnienie pustynnych materiałów leczniczych Cistanche i Cistanche tubulosa oraz ocenę ich jakości. Zhu Xujiang i wsp.12 wykorzystali HPLC do ustalenia odcisków palców 10 partii Lanzhou Cistanche w celu zbadania nieodłącznej różnicy w jakości pomiędzy Lanzhou Cistanche i Cistanche Deserticola.

Wyniki pokazują, że w porównaniu z Cistanche, Lanzhou Cistanche ma wiele brakujących charakterystycznych pików, szczególnie brak charakterystycznych pików dla echinaceazydu: a podobieństwo pomiędzy Lanzhou Cistanche i kontrolnymi materiałami leczniczymi Cistanche wynosi tylko około {{0}}.04 , co wskazuje, że Lanzhou Cistanche różni się od prawdziwego Cistanche. Jest duża różnica. Ma Zhiguo i in. wykorzystał HPLC do ustalenia odcisków palców 10 partii kawałków wywaru Sha Rong i skalibrował 7 wspólnych pików. Wszystkie wyniki oceny podobieństwa były większe niż 0,92, co wskazuje, że odciski palców kawałków wywaru Sha Rong są specyficzne i mogą zapewnić pewien poziom kontroli jakości kawałków wywaru Sha Rong. odniesienie. Xiong Yuanjun i in. zastosował chromatografię HPLC i użył 6 glikozydów fenyloetanoidowych jako odniesienia do ustalenia odcisków palców i metod analizy Cistanche z 9 różnych źródeł w regionie autonomicznym Xinjiang-Uygur. Wyniki wykazały, że metoda jest stabilna, niezawodna i powtarzalna. Ma dobre właściwości i może być stosowany do oceny jakości Cistanche.

Xie Jieina i wsp. [użyli kolumny chromatograficznej Agilent Zorbax Extend-C8 (150mmx4,6 mm, 5μm), stosując 0.095% wodny roztwór kwasu fosforowego-0.095% fosforu kwaśny roztwór acetonitrylu jako elucja z liniowym gradientem fazy ruchomej, gradient elucji wynosił 0~18 min, 96% A-4% B; 18~40 min, 88%A-12%B; 40~65 min, 85% A-15% B; 65 ~ 75 min, 85% A-15% B; 75 ~ 90 min, 80%A-20%B; 90 ~ 100 min, 80%A-20%B; 100 min, 96%A-4%B, długość fali detekcji 330nm; przepływ objętościowy: 1 ml/min; temperatura wynosi 30 stopni. Ustalono odciski palców HPLC 16 partii pustynnych cistanche różnego pochodzenia. Wyniki pokazały, że wewnętrzna jakość materiałów leczniczych pustynnych cistanche pochodzących z różnych źródeł znacznie się różniła. Metodę tę można zastosować do oceny jakości materiałów leczniczych pustynnych cistanche. Tu Pengfei i in. (użył wysokosprawnej chromatografii cieczowej z odwróconymi fazami do badania glikozydów fenyloetanoidowych zawartych w 4 materiałach leczniczych produkowanych w kraju oraz 1 wariancie i 25 komercyjnych materiałach leczniczych Cistanche, a także przeanalizował ich widma HPLC. Wyniki wykazały, że wszystkie te surowce lecznicze zawierają Są wiele rodzajów glikozydów fenyloetanoidowych, wśród których glikozydy fenyloetanoidowe zawarte w Cistanche, Cistanche halophylla, Cistanches alba i Cistanches tubulosa mają podobne glikozydy fenyloetanoidowe, podczas gdy Cistanche różni się znacznie od innych gatunków. Zawartość echinakozydu i werbaskozydu jest najwyższa w Cistanche Yang Hanchun i wsp. wykorzystali werbaskozyd jako substancję odniesienia i kolumnę chromatograficzną Shim-pack VP-ODS (150 mm x 4,6 mm, 5 µm) w celu ustalenia metody analizy odcisków palców metodą HPLC dla 22 partii pustynnego Cistanche. W sumie 27 odcisków palców skalibrowano piki materiałów leczniczych Cistanche. Wyniki wykazały, że odciski palców różnych partii materiałów leczniczych Cistanche znacznie się różniły, co wykazano w oczywistych różnicach w liczbie pików chromatograficznych i obszarach pików chromatograficznych różnych partii materiałów leczniczych Cistanche. Wyniki oceny podobieństwa wykazały, że podobieństwo małej liczby próbek nie jest duże. Yang Jianhua i in. 8 wybrało RP-HPLC do ustalenia odcisków palców glikozydów fenyloetanolowych w Cistanche i porównało odciski palców produktów uprawnych z produktami dzikimi, na różnych etapach wzrostu i różnymi częściami leczniczymi. W badaniu skalibrowano 19 wspólnych pików chromatograficznych i stwierdzono, że odciski palców halo Cistanche uprawianego i dzikiego są bardzo podobne.

Rodzaje i względna zawartość składników chemicznych są stabilne. Odciski palców na różnych etapach wzrostu lub w różnych częściach również mają dobrą konsystencję, ale istnieją wyraźne różnice w zawartości charakterystycznych pików. Metoda ta charakteryzuje się dobrą powtarzalnością i może lepiej odzwierciedlać rzeczywistą jakość charakterystycznych składników Cistanche salina. Shi i in. 9 porównali odciski palców HPLC i odciski palców genów ISSR (powtórzenie między prostymi sekwencjami) Cistanche, Cistanche tubulosa, solone Cistanche i Cistanches i odkryli, że oba odciski palców były dobre dla materiałów leczniczych Cistanche. Należy przeprowadzić różnicowanie i kontrolę jakości, a autor uważa, że ​​ze względu na niską zawartość echinacei w Cistanche, Cistanche nie może zastąpić w farmakopei Cistanche ani Cistanche tubulosa. Jiang i in. (101 opracowałem metodę HPLC-DAD-MS w celu przeprowadzenia analizy odcisków palców 36 odcisków palców materiałów leczniczych w formie pasty mięsnej różnego pochodzenia (w tym 14 pasty z mięsa pustynnego, 14 rurkowatych Cistanche, 2 solonych Cistanche i 6 Amaranthus). Analiza i identyfikacja 18 związków glikozydowych fenyloetanolu Wyniki wykazały, że największe podobieństwo wykazują Cistanches tubularis, Cistanche halophylla i Cistanche, natomiast mniejsze podobieństwo Cistanche wynosi tylko 0,053.

2. Spektrofotometria absorpcji atomowej

Dzięki wszechstronnemu zrozumieniu przez ludzi aktywnych składników tradycyjnej medycyny chińskiej, elementy nieorganiczne przyciągają coraz większą uwagę. Zwłaszcza w ostatnich latach niektóre skutki tradycyjnej medycyny chińskiej, których nie można wytłumaczyć teorią tradycyjnej medycyny chińskiej, można wyjaśnić fizjologicznym działaniem pierwiastków śladowych. Dlatego badanie pierwiastków śladowych i makroelementów w Cistanche oraz odpowiadająca im kalibracja pierwiastków i znormalizowane metody wykrywania mają ogromne znaczenie dla ustanowienia i udoskonalenia systemu kontroli jakości i oceny bezpieczeństwa Cistanche. Spektrofotometria absorpcji atomowej stopniowo stała się główną metodą wykrywania pierwiastków nieorganicznych ze względu na jej wysoką czułość, wysoką precyzję, szeroki zakres zastosowań, małą objętość próbki i łatwą obsługę instrumentu. Chen Weijun i in. (zastosował metodę mokrą do bezpośredniego roztworzenia proszku Cistanche i zastosował płomieniową spektrometrię absorpcji atomowej (FAAS) do bezpośredniego pomiaru w nim Pb, Cd i Cu. Wyniki wykazały, że Cistanche z trzech głównych obszarów produkcyjnych w Xinjiangu nie przekroczył limitu i był bezpieczny do stosowania klinicznego. Cheng Qilai i wsp. (121) wykorzystali płomieniową spektrofotometrię absorpcyjną atomową i metodę pieca grafitowego, aby określić, że pustynny Cistanche zawiera różnorodne pierwiastki śladowe niezbędne dla organizmu ludzkiego. Zawartość tych pierwiastków śladowych pochodzi z wysokiej zbyt niska jest Ca, Fe, Mg, Cu, Zn, Pb i Sn, a mają wysoką zawartość Mg, Ca, Fe i Zn, które mają ważne funkcje fizjologiczne, działanie odżywcze oraz znaczenie w diagnostyce klinicznej i leczeniu Qi Yu i wsp. (3) wykorzystali płomieniowy spektrofotometr absorpcji atomowej do oznaczenia pierwiastków śladowych manganu i pierwiastków śladowych w Xinjiang Cistanche. Porównano zawartość miedzi oraz dwie metody przetwarzania próbek: rozkład na sucho i rozkład na mokro. Wyniki wykazały, że ani mineralizacja na sucho, ani na mokro nie miała wpływu na wyniki pomiarów. Xu Fang i in. 4) Za pomocą spektrometru emisyjnego w plazmie sprzężonej indukcyjnie (ICP-AES) zmierzono zawartość dziesięciu pierwiastków śladowych w dzikim Cistanche, w tym Li, Mn, Fe, Cu, Zn, Se, Sr, Mo [i Ca].

3. Wysokosprawna chromatografia cieczowa

Wysokosprawna chromatografia cieczowa jest szeroko stosowana do oznaczaniaglikozydy fenyloetanolowew mięsie mielonym ze względu na zalety w postaci dużej czułości i szerokiego zakresu liniowego. Dong i wsp.15 opracowali wysokowydajną metodę fazy ciekłej, która wykorzystuje współczynnik absorpcji zamiast wysokości piku lub powierzchni piku i w sposób ciągły oznaczali 7 glikozydów fenyloetanolu w Cistanche tubulosa i Cistanche poprzez stosunek współczynników absorbancji echinaceazydu i innych związki. Zawartość obejmuje stronę echinacei, sarkobazynę A, werbaskozyd, werbaskozyd, 2'acetylwerbaskozyd, 6'-acetylwerbaskozyd i cistancheozyd C. Wyniki tej metody są zgodne z metodą standardu zewnętrznego i wyniki pokazują, że jest ona dokładna i niezawodny. Song Qingqing i wsp.16 opracowali system online: mikroekstrakcja rozpuszczalnikiem pod ciśnieniem, turbulentna chromatografia przepływowa, wysokosprawna chromatografia cieczowa i tandem (onlinePLME-TFC-HPLC). Proszek próbki śladowej umieszczono w zbiorniku ekstrakcyjnym, a następnie załadowano do tulei przedkolumnowej. Rurociąg eteroketonowy (PEEK) jest podłączony do końca tulei przedkolumny, a faza wodna przepływa przez rurociąg PEEK z dużym natężeniem przepływu, aby wytworzyć wysokie ciśnienie w celu uzyskania mikroekstrakcji Cistanche rozpuszczalnikiem pod ciśnieniem w trybie online. Jednocześnie wprowadzane są dwa elektroniczne zawory sześciodrogowe, które uzupełniają całą analizę. Proces dzieli się na etap ekstrakcji i etap elucji, aby osiągnąć jednoczesne oznaczenie zawartości trzech glikozydów fenyloetanoidowych w Cistanche tubulosa: echinakozydu, werbaskozydu i izomuurabastozydu. Guo Xiongfei i in.!! 7 wykorzystali metodę HPLC-UV do porównania zawartości całkowitych glikozydów echinaceazydu, werbaskozydu i fenyloetanolu w różnych częściach Cistanche z różnych źródeł w Hotan w Xinjiang. Wyniki wykazały, że maksymalne różnice w zawartości echinaceazydu, werbaskozydu i całkowitych glikozydów fenyloetanolu w korzeniach i wierzchołkach tej samej rośliny Cistanche wynosiły odpowiednio 22,4 razy, 16,7 razy i 8,7 razy. Aktywne składniki Cistanche rozprowadzane są głównie w korzeniach. Ma Zhiguo i in. 118 zastosowali wysokowydajną metodę fazy ciekłej z odwróconą fazą do jednoczesnego oznaczenia trzech glikozydów fenyloetanoidowych (werbaskozydu, chryzofitu i 2'-acetylochryzofitu) w Amaranthus aurantiacus. Wyniki wykazały, że zawartość chryzofitu w odmianie A była najwyższa. , zawartość werbaskozydu jest najniższa, a jakość Amarantusa pospolitego kupowanego w różnych aptekach jest bardzo zróżnicowana. Zhao Kuijun i wsp.119 zastosowali metodę HPLC-ELSD do analizy galaktitolu w 20 seriach Cistanche i Cistanches tubulosa.

4. LC-MS

Chromatografia cieczowa ze spektrometrią mas (LC-MS) ma zalety dużej szybkości, dużej selektywności, niskiej granicy wykrywalności oraz dużych możliwości jakościowych i ilościowych. Jest idealnym narzędziem do analizy składników chemicznych tradycyjnej medycyny chińskiej i służy głównie do jakościowego oznaczania składników chemicznych mięsa mielonego. i badania ilościowe.

Song i in. 20] wykorzystali technologię HPLC-Qtrap-MS do ustalenia metody ilościowego rozróżniania grup związków Cistanches tubularis (CT) i Cistanche (CD). Cały proces pracy jest podzielony na trzy części: pierwsza obejmuje ulepszony pełny skan (EMS), skan strat neutralnych (NL), skan jonów prekursorowych (Prec) i ulepszony skan jonów produktu (EPI), w połączeniu ze standardową kontrolą materiału, wtórną spektrometrią mas informacje i powiązane informacje zgłoszone w istniejących bazach danych wykorzystano do kompleksowego zbadania związków w mięsie mielonym; po drugie, do przeprowadzenia względnej oceny ilościowej 513 przebadanych związków wykorzystano metodę HPLC-SMRM; na koniec zastosowano wielowymiarową metodę analizy statystycznej w połączeniu z danymi ilościowymi w celu rozróżnienia grup składu chemicznego CT i CD. Wyniki wykazały, że betaina, półprodukty cyklu trikwasowego, glikozydy fenyloetanoidowe i irydoidy były markerami umożliwiającymi rozróżnienie związków CT i CD. Lu i in. 1 zastosował wysokosprawną chromatografię cieczową z detektorem diodowym i spektrometrię mas o wysokiej rozdzielczości (HPLC-DAD-HRMS) w celu zidentyfikowania 4 gatunków i łącznie 36 partii Cistanche (w tym 14 partii Cistanche pustynnego, 10 partii Cistanche rurowego i 12 partie Cistanche). ) i zmierzyłem zawartość tych 10 związków. Aby wyraźnie rozróżnić cztery typy Cistanche, zastosowano dwie metody chemometryczne, hierarchiczną analizę skupień i analizę głównych składowych. Zhou Ye i in.! 221 wykorzystali HPLC-ESI-MS do wykrycia zawartości siedmiu aktywnych składników tradycyjnej medycyny chińskiej Cistanche pochodzących z pięciu różnych źródeł, w tym pustynnego sarkozydu A, echinaceazydu, werbaskozydu, izolubaskozydu, 2'-acetylerbaskozydu, cistanche nozydu C i tubuliny B. Jednocześnie wykorzystano spektroskopię w podczerwieni z transformacją Fouriera w celu ustalenia odcisków palców pięciu rodzajów Cistanche i obliczono ich wspólną częstotliwość szczytową i częstotliwość szczytową zmienności. Wyniki wykazały, że wyniki oceny materiałów leczniczych obiema metodami są spójne. Song i wsp. 123] ustalili metodę online: ekstrakcja rozpuszczalnikiem pod ciśnieniem, chromatografia z przepływem turbulentnym i wysokosprawna chromatografia cieczowa (online PLE-TFC-HPLC). Na przykładzie cistanche pustynnego udało im się oznaczyć zawartość ośmiu glikozydów fenyloetanolowych w cistanche pustynnym. Mierzone jednocześnie. Jednocześnie metodą HPLC-DAD-IT-TOF-MS zidentyfikowano 91 związków w ekstrakcie pustynnym Cistanche online oraz porównano wykresy pików bazowych ekstraktu online i ekstrakcji ultradźwiękowej, wskazując, że efektywność ekstrakcji była zgodna z metodą ekstrakcji ultradźwiękowej. Wang Yiming i wsp. 124) zastosowali metodę LC/ESI-MS/MS do badania 7 glikozydów fenyloetanolowych w pustynnym Cistanche, solnym Cistanche i rurkowym Cistanche. W rezultacie zidentyfikowano 7 gatunków w pustynnym Cistanche i solnym surowym Cistanche. Znaleziono 6 gatunków, a gatunek Cistanche zawierał tylko 5 gatunków. Cao Zhenjie i in. (25) zastosowali metodę LC-MS do zbadania zawartości glikozydów fenyloetanolowych w pustynnym Cistanche w różnych sezonach zbiorów. Wyniki pokazały, że zawartość echinakozydu, Cistanches A i 2-acetylwerbaskozydu zmieniała się w zależności od pory roku zbiorów. duża różnica.

5. Spektroskopia w podczerwieni

Spektroskopia w podczerwieni to metoda spektroskopowa, która wykorzystuje ciągłe widmo fal elektromagnetycznych w obszarze podczerwieni jako źródło promieniowania do napromieniania próbki i rejestrowania krzywej absorpcji próbki. Jest to metoda szeroko stosowana w analizie związków organicznych. Jego zastosowanie w mięsie mielonym polega głównie na rozróżnieniu poszczególnych części mięsa mielonego. Xu Rong i in. (261 wykorzystało technologię FT-IR do zbadania różnic w składzie różnych części nasion Cistanche po obróbce stratyfikacji. Wyniki wykazały, że w nasionach Cistanche znajdują się węglowodany, białka, lipidy, pektyny i substancje aromatyczne. Laminowanie Po zabiegu szczyt wchłaniania lipidów w ziarnie nasion uległo znacznemu osłabieniu, a zawartość rozpuszczalnych białek i cukrów wzrosła, zapewniając bardziej bezpośrednią podstawę materiałową do kiełkowania nasion. Zhang Shengjun i in. 27 zastosowali technologię F-TIR w połączeniu z technologią trójpoziomowej identyfikacji drugiego rzędu widma pochodnego i technologii 2D-IR do badania ekstraktów etanolowych o różnych stężeniach (10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%) pustynnego Cistanche i odpowiadające pozostałości lecznicze. Wyniki pokazują, że substancje czynne, takie jak glikozydy fenyloetanoidowe, zawarte w mięsie mielonym ekstrahowanym etanolem, odbijają się w widmie w podczerwieni i stwierdzono, że 70% ekstrakt etanolowy ma najwyższą zawartość glikozydów fenyloetanoidowych. Metodę tę można zastosować do analizy składników płynów leczniczych i pozostałości leczniczych oraz do rozróżnienia subtelnych różnic w składnikach ekstraktów i pozostałości leczniczych o różnych stężeniach. Może również łączyć składniki ekstraktów i pozostałości leczniczych o różnych stężeniach, aby zapewnić ogólną informację na temat składników leczniczych pasty mięsnej. Chen Jun i in. ( 28 ) wykorzystał technologię FT-IR w połączeniu z technologią 2D-IR do identyfikacji pustynnego Cistanche i jego pomieszanego produktu Cynomorium cynomolgus. Stwierdzono, że widma IR tych trzech wykazały pewne różnice, a różnica w widmach pochodnych drugiego rzędu była jeszcze bardziej oczywiste 2D – Widma IR są nie tylko różne, ale także intuicyjne. Ta metoda pozwala na szybką i dokładną identyfikację Cistanche i jego zakłócających produktów. Wang Xia i in. 129) wykorzystali do badania technologię FTIR w połączeniu z metodą analizy skupień makroskopowe różnice pasty mięsnej pustynnej w różnych metodach przetwarzania, poddano analizie i 180 próbek pustynnego Cistanche przetworzonych w 3 procesach całych zakładów i 5 różnych metodach przetwarzania plasterków, a następnie przeprowadzono analizę skupień przy użyciu oprogramowania Assure ID. Wyniki wykazały, że próbki poddane różnym sposobom przetwarzania różniły się istotnie. Dzięki tej metodzie można szybko i skutecznie zidentyfikować różne metody przetwarzania. Próbki Cistanche. Xu Rong i in. [30] wykorzystali techniki FT-IR i 2D-IR do analizy i oceny skórki, środkowej i rdzeniowej części pustynnego Cistanche, a także jej ekstraktów alkoholowych i wodnych. Metoda ta pozwala szybko i kompleksowo zidentyfikować subtelne różnice w różnych częściach tego samego materiału leczniczego. Xu Rong i wsp.31 zastosowali metodę FT-IR do badania różnych części nasion pustynnego Cistanche oraz ich charakterystyki widmowej i różnic w składzie po obróbce mączniakiem lub wysoką temperaturą. W badaniach stwierdzono, że skład okrywy nasiennej i jądra nasiennego różnił się istotnie. Stwierdzono również, że zawartość białka i niektórych cukrów w nasionach, które są ściśle związane z witalnością, uległa znacznemu zmniejszeniu po obróbce przez pleśń lub wysoką temperaturę. Xu Rong i in. 32 przeprowadzili także analizę widma pustynnego Cistanche, rurowego Cistanche i solnego Cistanche. Wyniki pokazały, że wzory IR pustynnego Cistanche i rurowego Cistanche były znacząco różne, a widma pochodnych drugiego rzędu pustynnego Cistanche i solnego Cistanche były oczywiste. Różnice, widmo 2D-IR w bardziej intuicyjny sposób odzwierciedla różnice między nimi. Liu Yougang i in. 133 wykorzystali technologię FT-IR do analizy zawartości glikozydów fenyloetanolowych w pustynnych Cistanche, Cistanche tubulosa i ich 95% ekstraktach etanolowych. Wyniki wykazały, że zawartość glikozydów fenyloetanolowych w Cistanche tubuliflora była znacznie wyższa niż w Cistanche pustynnym. Stwierdzono, że w ekstrakcie alkoholowym skutecznie wzbogacono glikozydy fenyloetanolowe.

6. GC-MS

Chromatografia gazowa-spektrometria mas (GC-MS) wykorzystuje bombardowanie elektronami lub jonizację chemiczną jako interfejs w połączeniu ze stosunkowo obszerną komercyjną bazą danych spektrometrii mas, co znacznie poprawia możliwości analityczne spektrometrii mas i ma zalety wysokiej czułości i dobrej powtarzalności. Stosowany głównie do badań substancji trudno lotnych i substancji niestabilnych termicznie. Zhou Yubi i wsp.141 za pomocą chromatografii kolumnowej podzielili rozpuszczalne w tłuszczach składniki pustynnego Cistanche na trzy części: niepolarną, słabo polarną i polarną. Przeanalizowali te trzy części za pomocą metody GC-MS i zidentyfikowali łącznie 73 związki. Przeprowadzono kompleksową analizę składników rozpuszczalnych w tłuszczach pasty mięsnej pustynnej. Qiao Haili i in. [35] wykorzystali metodę dynamicznej adsorpcji w workach nad roztworem w połączeniu z technologią GC-MS do badania lotnych składników kwiatostanów pustynnych Cistanche od fazy pączkowania do fazy pełnego kwitnienia. W rezultacie w kwiatostanach Cistanche zidentyfikowano 40 lotnych związków. Głównymi substancjami występującymi w fazie pączkowania były węglowodory i substancje lotne z zielonych liści, których rodzaje i względna zawartość zmieniają się wraz z otwieraniem się kwiatów na kwiatostanie. Lotnymi składnikami we wczesnych i pełnych fazach kwitnienia są głównie estry aromatyczne i związki pierścienia benzenowego, a ich względna zawartość jest znacznie wyższa niż w fazie pączkowania. Zwiększyć.

7. Inne

Ponieważ grupa fenolowa glikozydów fenyloetanolowych może zabarwić się pod wpływem azotanu glinu i soli diazoniowych. Du Niansheng i in. 136] zastosowali metodę kolorymetryczną azotanu glinu do określenia zawartości całkowitych glikozydów fenyloetanoidowych w pustynnym Cistanche. Wyniki pokazują, że metoda ta jest prosta w obsłudze, czuła i dokładna, ze średnim współczynnikiem odzysku wynoszącym 100,7% (n=5) i współczynnikiem zmienności (cv) wynoszącym 1,09%. Li i wsp. 1371 analizowali zawartość glikozydów fenyloetanoidowych w pustynnym Cistanche metodą kolorymetryczną z solą diazoniową. Wyniki wykazały, że zawartość glikozydu fenyloetanolowego w próbce wyniosła 1,275%, średni stopień odzysku 101,3%, a RSD 3,7% (n =4). Gong Lidong i in. 38) wykorzystali system elektroforezy kapilarnej-detekcji elektrochemicznej (CE-ED) do zbadania składu monosacharydów polisacharydów Cistanche (pustynnego Cistanche produkowanego w Mongolii Wewnętrznej, Cistanche z kwiatem rurkowym Xinjiang i sztucznie uprawianego kwiatu rurkowego Cistanche) i określenia zawartości monosacharydów. Li Yuxia i in.! 39 użył analizatora aminokwasów do analizy składu różnych aminokwasów w Cistanche na pustyni Xinjiang. Badanie wykazało, że próbka Cistanche zawierała ogółem 17 rodzajów aminokwasów po hydrolizie kwasowej, przy czym całkowity udział masowy aminokwasów wynosił 7,87%, a białka 16,38%. Wśród nich jest ludzkie ciało. Siedem niezbędnych aminokwasów występuje w rozsądnych proporcjach, E/T=38.5%, E/N=62.6%. Li Bin i in. [40] wykorzystali spektrofotometr w zakresie ultrafioletu (UV) w połączeniu z odczynnikiem Nasha do określenia maksymalnej długości fali absorpcji mannitolu wynoszącej 413 nm i zmierzyli zawartość mannitolu w 6 porcjach solonego Cistanche. Ma Xizhong [4] wykorzystał technologię ekstrakcji płynem nadkrytycznym (SFE) do ekstrakcji lotnych składników tradycyjnej medycyny chińskiej Rouhuanrong oraz połączoną kapilarną chromatografię gazową (CGC) i chromatografię gazową/spektrometrię mas (GC/MS) w celu określenia ich zawartości.

Rozdział 2 Postęp badań nad analizą składników tradycyjnej medycyny chińskiej Cistanche

Składniki zawarte w tradycyjnej medycynie chińskiej są niezwykle złożone, a ich wieloskładnikowe, wielościeżkowe, wielokierunkowe i zintegrowane działanie regulacyjne stało się konsensusem w branży. Stworzyło to ogromne wyzwania w wyjaśnieniu składników aktywnych i mechanizmu działania tradycyjnej medycyny chińskiej. Wraz z wprowadzeniem i ulepszeniem teorii chemii leczniczej surowicy stosowanej w tradycyjnej medycynie chińskiej przez krajowego uczonego profesora Wang Xijuna, uczeni stopniowo zdali sobie sprawę, że po podaniu tradycyjnej medycyny chińskiej odpowiednimi drogami ulega ona wchłanianiu, metabolizmowi i innym procesom w organizmie, a ostatecznie wchłaniane do krwi są często monomery polimerowe. Grupę substancji czynnych tworzą składniki, jej struktura może być albo składnikiem prototypowym, metabolitem monomeru składnika, albo nowym składnikiem chemicznym powstałym w wyniku interakcji pomiędzy składnikami monomerowymi w tradycyjnej medycynie chińskiej, lub może być generowany przez organizm pod wpływem leków zawierających endogenne substancje fizjologicznie czynne.

1. Analiza składu in vivo głównych składników chemicznych Cistanche

Cistanche jest dobrze znanym środkiem wzmacniającym w tradycyjnej medycynie chińskiej. Chociaż jest szeroko stosowany w zastosowaniach klinicznych, badania nad jego metabolizmem w organizmie skupiają się głównie na badaniu kilku pojedynczych składników aktywnych, takich jak echinaceazyd, werbaskozyd i chryzofilina. Obecnie w literaturze opisano skład ciała Cistanche. Głównymi metodami analitycznymi są HPLC-UV i LC-MS.

Jia i in. [{{0}}] opracował metodę HPLC-UV do badania farmakokinetyki i metabolizmu echinaceazydu in vivo oraz ekstrahował, oddzielał i badał metabolity pod kątem skuteczności. Wang i in. W projekcie I44 wykorzystano technologię LC/MS-IT-TOF w połączeniu ze skutecznymi strategiami odkrywania metabolitów w celu przeprowadzenia holograficznych badań przesiewowych i identyfikacji metabolitów echinacei in vivo. Cui i in. 145] wykorzystali technologię UPLC-ESI-Q-TOF-MS do badania składu chemicznego in vivo echinaceazydu i werbaskozydu, aktywnych składników Cistanche, i ostatecznie zidentyfikowali 29 związków z osocza, moczu, kału i żółci. metabolit. Deng i wsp.146 wykorzystali technologię HPLC/Q-TOF-MS do systematycznej analizy metabolitów i szlaków metabolicznych chryzofiliny w organizmie oraz przeszukali i zidentyfikowali 66 metabolitów w odchodach szczurów. Badanie wykazało, że chryzofilina łatwo przekształca się w izochryzozyd i łatwo ulega hydrolizie do produktów degradacji. Główne szlaki metaboliczne chlorofiliny to reakcje hydrolizy, hydroksylacji, acetylacji, sulfonowania, redukcji, odwodornienia i dimetylacji. Qi i wsp.147 wykorzystali UPLC/ESI-QTOF-MS w połączeniu z technologią MSE do analizy składników chemicznych werbaskozydu in vivo i zidentyfikowali 35 metabolitów z moczu szczurów, w tym 19 metabolitów leku macierzystego i 16 metabolitów produktów rozkładu. rzeczy. Metoda ta jest szybka i niezawodna, dostarcza wiarygodnych informacji na temat metabolizmu werbaskozydu i może być szeroko stosowana w badaniach metabolitów produktów naturalnych. Yang i wsp.48] zastosowali LC-MS/MS do badania procesu farmakokinetycznego echinacei in vivo. Wu i in. 149] wykorzystali technologię LC-MS/MS w połączeniu z prostą metodą ekstrakcji do fazy stałej (SPE) w celu określenia zawartości werbaskozydu w homogenatach osocza i tkanek oraz zbadania jego dystrybucji w mózgu i procesów farmakokinetycznych in vivo. Yang i in. (0) z powodzeniem zastosował technologię LC-MS/MS do badania farmakokinetyki in vivo gangliozydu B po podaniu dożylnym.

2. Analiza składowa ekstraktu Cistanche in vivo

Obecnie nadal brakuje systematycznych badań nad składnikami ekstraktu Cistanche. Głównymi metodami analizy są HPLC i UPLC-Q-TOF-MS.

Zhou i wsp. [51] zastosowali metodę HPLC, wykorzystując mikroemulsję jako fazę ruchomą, do oddzielenia i zidentyfikowania czterech glikozydów fenyloetanoidowych (echinakozyd, antocyjanozyd B, werbaskozyd i izorebaskozyd) w składnikach krwi szarłatu świerzbowca. Metoda ta eliminuje skomplikowane etapy wstępnej obróbki próbek biologicznych i umożliwia bezpośrednią analizę próbek biologicznych dopiero po rozcieńczeniu fazą ruchomą mikroemulsji. Li Wenlan i in. 152-53] wykorzystał technologię wysokosprawnej chromatografii cieczowej z kwadrupolową spektrometrią mas w czasie przelotu (HPLC-ESI-Q-TOF-MS/MS) do badania składu chemicznego szczurów po doustnym podaniu pustynnego Cistanche. Porównując grupę kontrolną i grupę dawkowania, w moczu i surowicy szczurów zidentyfikowano ogółem 24 związki, w tym 9 składników prototypowych i 15 metabolitów. Jednocześnie wydedukowano główne szlaki metaboliczne Cistanche w organizmie (w sumie 9 rodzajów), w tym reakcję metylacji, reakcję demetylacji, reakcję hydrolizy, reakcję hydroksylacji, reakcję acetylacji, reakcję glukuronidacji, reakcję odwodornienia, reakcje sulfonowania i reakcje estryfikacji . Li i in.! 54 wykorzystali technologię UPLC-Q-TOF-MS w połączeniu z metodą analizy ortogonalnej częściowej analizy dyskryminacji metodą najmniejszych kwadratów (OPLS-DA) do szybkiego przesiewu osocza, moczu i kału szczurów po doustnym podaniu tuberozy Cistanche i Cistanche pustynnego. prototypy i metabolity. Wyniki: Z pustyni Cistanche zidentyfikowano 71 składników chemicznych, w tym 25 prototypów i 46 metabolitów; Z Cistanche tubulosa zidentyfikowano 45 składników chemicznych, w tym 18 prototypów i 27 metabolitów. Badanie wykazało, że glikozydy fenyloetanoidowe Substancje rozkładają się głównie do związków drobnocząsteczkowych w przewodzie pokarmowym szczurów; Cistanchezyd B, Cistancheozyd C, Cistanchezyd D i Cistancheozyd E występują tylko w pustynnym Cistanche i są łatwo metabolizowane do metylowanego hydroksytyrozolu. Można wyróżnić metabolity Cistanche i Cistanche.