Wyciąg wodny Cistanches Tubulosa chroni jądra przed urazami wywołanymi przez cyklofosfamid: efekt i mechanizm

XIA Lun-bin1,2 ,JIANG Ping 1,2 ,HE Yan-fei 1,2 ,SUN Tao-tao 1 ,ZHOU Yu1 ,ZUO Ｒui-hua 1,2

1． Szkoła Inżynierii Biologicznej i Farmaceutycznej, West Anhui College, Lu ＇an, Anhui 237012, Chiny; 2． Anhui Engineering Laboratory for Conservation and Sustainable Utilization of Tradycyjna Medycyna Chińska Ｒ zasoby, Lu＇an, Anhui 237012, Chiny

【Abstrakcyjny】

Cel: zbadanie efektu ochronnegoEkstrakt wodny Cistanche Tubulosa ( CTWE) przeciwko cyklofosfamidowi (CTX) wywołanemu przez cyklofosfamid urazowi jąder (TI) u myszy i jego mechanizmowi działania．

Ekstrakt Cistanche w proszku

Kliknij tutaj, aby zobaczyć Cistanche dla produktów na choroby nerek

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Metody: Trzydzieści samców myszy równo przydzielono losowo do normalnej kontroli, kontroli modelu indukowanego CTX i grupy leczonej CTWE. Po 7 dniach karmienia adaptacyjnego myszom w grupie leczonej CTWE podano dożołądkowo CTWE w dawce 1{{2{{3{41}}}}}} g/kg/dzień, myszom w normalnej kontroli i modelu TI grupy kontrolne z tą samą objętością normalnej soli fizjologicznej qd przez 35 kolejnych dni oraz grupy kontrolne modelu TI i grupy leczone CTWE przez dootrzewnowe wstrzyknięcie cyklofosfamidu w dawce 80 mg/kg/d o 7,14,21 28 i 35 dni. Następnie wszystkie zwierzęta zważono, pobrano próbki krwi, pobrano od nich jądra i najądrza w celu oznaczenia zawartości T w surowicy, zbadania jakości nasienia, pomiaru masy jąder, obserwacji zmian histopatologicznych w jądrach oraz określenia poziomu super dysmutazy tlenkowej (SOD) i dialdehydu malonowego (MDA) w tkance jądra oraz ekspresji mＲNA genów związanych ze szlakiem sygnałowym związanym z czynnikiem jądrowym erytroidalnym{{10}}czynnikiem (Nrf2). Wyniki: Myszy w grupie kontrolnej modelu TI, w porównaniu z normalnymi kontrolami, wykazały znaczny spadek masy ciała ( ［34． 13 ± 1． 56］ vs ［47． 0 8 ± 1． 98］g ,P ＜ 0． 05) , masa jąder ( ［81． 82 ± 1{{1{111}}1}}． 61］vs ［148． 50 ± 14． 82］mg, P＜ 0． 05) , stężenie plemników ( ［32． 60 ± 5． 29］vs ［78． 90 ± 7． 95］ × 106 /ml,P＜ 0． 05) , ruchliwość plemników (［45． 20 ± 7． {{186 }}9］ procent vs［86． 70 ± 5． 64］ procent ,P＜ 0． 05) zawartość T w surowicy (［7． 49 ± 1． 03］vs［15． 93 ± 1． 36 ］ng /L,P ＜ 0． 05) i poziom SOD (［152． 22 ± 10． 66］vs［356． 10 ± 30． 95］U/mg prot,P ＜ 0． 05), ale zauważalny wzrost w odsetku morfologicznie nieprawidłowych plemników (MAS) (［39． 30 ± 7． 36］ procent vs［14． 40 ± 3． 53］ procent, P < 0． 05) i poziom MDA (［54． 91 ± 5． 12］vs［31． 71 ± 3． 57］nmol/mg prot, P＜ 0． 05)． Zwierzęta leczone CTWE, w porównaniu z kontrolnymi modelami TI, wykazywały znacznie zwiększoną masę ciała (［40． 67 ± 2． 13］vs［34． 13 ± 1． 56］g, P＜ 0． 05), masę jąder ( ［121． 21 ± 17． 38］ vs ［81． 82 ± 10． 61］mg, P ＜ 0． 05), stężenie plemników (［58． 40 ± 9． 94］ vs［32． 60 ± 5． 2 9 ］ ×106 /ml,P <0． 05), ruchliwość plemników (［72． 30 ± 7． 51］ procent vs［45． 20 ± 7． 09］ procent, P <0． 05), zawartość T w surowicy (［ 10． 89 ± 1． 07］vs［7． 49 ± 1． 03］ng /L,P＜ 0． 05) i poziom SOD ( ［217． 69 ± 24． 59］vs ［152． 22 ± 10． 66 ］U/mg prot, P ＜ 0． 05), ale obniżony odsetek MAS ( ［22． 20 ± 6． 07］ procent vs ［39． 30 ± 7． 36］ procent, P < 0． 05) i poziom MDA ( ［36． 41 ± 4． 27］ vs ［54． 91 ± 5． 12］nmol/mg prot, P＜ 0． 05) ． Ekspresje mＲNA Nrf2, HO-1 i NQO-1 w tkance jądra były znacząco obniżone w kontrolach modelu TI w porównaniu z tymi w normalnych kontrolach ( P < 0． 05) i niezwykle zwiększona w grupie leczonej CTWE w porównaniu z grupą modelową TI ( P < 0． 05), podczas gdy kaspaza3 znacznie wzrosła w kontrolach modelu TI ( P < 0． 05) i zmniejszyła się w grupie leczonej CTWE ( P ＜ 0． 05) ． Histopatologicznie tkanka jąder kontrolnych modelu TI wykazywała niewyraźne zarysy od podstawy kanalika nasiennego do powierzchni światła, z nieuporządkowanymi i zredukowanymi warstwami komórek spermatogennych i zmniejszoną liczbą plemników w kanalikach nasiennych, podczas gdy struktura kanalików nasiennych powrócił prawie do normy w grupie leczonej CTWE.

Wniosek: Ekstrakt wodny Cistanches tubulosa może skutecznie hamować uszkodzenia jąder wywołane przez cyklofosfamid, zwiększając aktywność enzymu przeciwutleniającego i regulując ekspresję genów związanych ze szlakiem sygnałowym Nrf2．

Cistanche w proszku

【Słowa kluczowe】ekstrakt wodny Cistanche tubulosa; jądro; cyklofosfamid; stres oksydacyjny; mysz

Cyklofosfamid (CTX), jako lek przeciwnowotworowy [1] i immunosupresyjny [2], znalazł szerokie zastosowanie w medycznej praktyce klinicznej. Ma jednak również znaczące działanie cytotoksyczne, a jednym ze skutków ubocznych jest uszkodzenie układu rozrodczego. Wcześniejsze badania wykazały, że CTX może powodować uszkodzenie tkanki jąder w wyniku stresu oksydacyjnego u samców lub samców zwierząt, prowadząc do dysfunkcji spermatogennych, takich jak zmniejszenie liczby i ruchliwości plemników [3-6]. Dlatego badanie metod zmniejszania lub eliminowania uszkodzeń tkanki jąder przez CTX i naprawy jej normalnej funkcji spermatogennej stało się gorącym punktem badawczym.

Cistanche deserticola została po raz pierwszy odnotowana w „Shennong Materia Medica Classic” i jest tradycyjną i cenną chińską medycyną. Ma działanie tonizujące esencję i krew, tonizujące yang nerek, odżywiające yin nerek, nawilżające jelita i łagodzące zaparcia. Według Chińskiej Farmakopei Cistanche deserticola to wieloletnia zielna roślina pasożytnicza z rodziny Orobaceae. Cistanche deserticola YCMa lub Cistanche tubulosa (Schenk) Light to sucha, łuskowata, mięsista łodyga. Według „Znaczenia leczniczego” [8] Cistanche deserticola „należy do yin yang… jest główną substancją wzmacniającą nerki i jest produktem pomagającym wzmocnić yang i esencję”. Preparat Materia Medica [9] podkreśla, że ​​kluczem do stosowania Cistanche deserticola jako leku jest „odżywianie nerek i odżywianie jelit”. Cistanche deserticola jest szeroko stosowana w przepisach tradycyjnej medycyny chińskiej i jest jednym z najczęściej stosowanych ziół leczniczych w tonizujących nerkach, wzmacniających yang i zwiększających siłę. W ostatnich latach analiza chemiczna i badania farmakologiczne wykazały, że Cistanche deserticola zawiera różne składniki aktywne, takie jak glikozydy fenyloetanoidowe, irydoidy i ich glikozydy, lignany i ich glikozydy, polisacharydy, alkaloidy, aminokwasy i pierwiastki śladowe [10]. 

Skuteczność Cistanche deserticola — Tonizująca nerka

Współczesne badania farmakologiczne wykazały, że ma nie tylko działanie farmakologiczne, takie jak działanie przeciwstarzeniowe [11-12], przeciwzmęczeniowe [13], przeciwutleniające [14], regulujące odporność [15] i chroniące nerwy [{{6 }}], ale także znacząco poprawia funkcje rozrodcze [18]. LI i in. [19] donieśli, że Cistanche deserticola może odwrócić toksyczność reprodukcyjną wywołaną glikozydem trójskrzydłowym u myszy; Wang Dejun i in. [20] udowodnili, że Cistanche deserticola może promować spermatogenezę jąder i poprawiać mikrośrodowisko najądrza; Zhao Donghai i in. [21] stwierdzili, że glikozydy fenyloetanoidowe z Cistanche deserticola mają znaczący wpływ terapeutyczny na wywołane przez CTX zaburzenia spermatogenne u myszy i zwrócili uwagę, że jego mechanizm może być związany z poprawą poziomu testosteronu w tkance jąder. Istnieje jednak niewiele doniesień na temat mechanizmu wpływu Cistanche deserticola na promowanie funkcji rozrodczych, takich jak spermatogeneza, i potrzebne są dalsze dogłębne badania. W tym badaniu eksperymentalnym wykorzystano CTX do skonstruowania mysiego modelu uszkodzenia tkanki jąder i zbadano efekt naprawczy Cistanche tubulosa Water Extract (CTWE) na uszkodzoną tkankę jąder u myszy. Badanie przeprowadzono metodami histologicznymi, fizjologicznymi i biochemicznymi Badanie wskaźników antyoksydacyjnych i ekspresji genów związanych ze szlakiem sygnałowym czynnika jądrowego E2 związanego z czynnikiem 2 (Nrf2) w tkance jąder ma na celu wzbogacenie bazy farmakologicznej Cistanche deserticola i zapewnienie naukową podstawę jego wartości leczniczej i rozwoju produktu.

1 Materiał i metody

1.1 Materiały

1.1.1 Zwierzęta doświadczalne

40 czystych białych myszy Kunming, samców, o masie ciała (18 ± 2) g, zakupionych w Experimental Animal Center of Anhui Medical University, z numerem licencji dla zwierząt SCXK (Anhui) 2017-001. Myszy hodowano w oddzielnych klatkach, karmiono i pito swobodnie w temperaturze pokojowej 20-24 stopni i wilgotności 55 procent -65 procent. Po 7 dniach karmienia adaptacyjnego wykorzystano je do eksperymentu.

1.1.2 Materiały lecznicze i odczynniki

Suszone tabletki Cistanche deserticolazostały zakupione na rynku ziół leczniczych w mieście Bozhou w prowincji Anhui. Zostały zidentyfikowane jako rurkowate Cistanche deserticola przez profesora Chen Naidong z Biura Nauczania i Badań Tradycyjnej Medycyny Chińskiej Szkoły Inżynierii Biologicznej i Farmaceutycznej Uniwersytetu Wanxi. Standardowy produkt echinacetyny (czystość większa lub równa 98 procent), Shanghai Tongtian Biotechnology Co., Ltd; barwnik barwiący hematoksyliną eozyną (HE), Zhuhai Besso Biotechnology Co., Ltd; dialdehyd malonowy (MDA), dysmutaza ponadtlenkowa (SOD) zestaw ELISA, Nanjing Jiancheng Technology Co., Ltd; CTX, Szanghaj Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd; Testosteron ELISA Kit, Shanghai Zhenke Biotechnology Co., Ltd; Kolumna UNlQ{1}} Zestaw do ekstrakcji całkowitego RNA Trizolu, Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd; EasyScript Jednoetapowe usuwanie gDNA i synteza cDNA SuperMix, Trans Start Green qPCRSuperMix, Beijing Quanshi Biotech Co., Ltd.

Suszone tabletki Cistanche deserticola

1.1.3 Instrumenty i wyposażenie

mikroskop BX53 firmy Olympus; krajalnica do parafiny YD-335, Zhejiang Jinhua Yidi Medical Equipment Co., Ltd; RE{2}} obrotowy parownik, Shanghai Yaote Instrument Equipment Co., Ltd; Spektrofotometr TU -1950 UV w świetle widzialnym, Beijing Puxi General Instrument Co., Ltd; Spektrofotometr ultramikro NanoDrop2000, Thermo Fisher Scientific; Agilent 1260 Infinity II Prime System chromatografii cieczowej, Agilent Technologies; Krok pierwszy plus przyrząd do fluorescencyjnej ilościowej reakcji PCR, Applied Biosystems.

1.2 Metoda

1.2.1 Przygotowanie CTWE

Odnosząc się do metody ekstrakcji gorącą wodą opisanej w piśmiennictwie [22], z niewielkimi ulepszeniami. Zmiażdż 5{7}}0 g Cistanche deserticola i zanurz w 5 l wody destylowanej. Gotować i ekstrahować w temperaturze 100 stopni przez 2 godziny. Przefiltrować i zebrać przesącz. Dodać 5 l wody destylowanej do pozostałości na filtrze i kontynuować ekstrakcję. Ekstrakcję powtórzyć trzykrotnie, połączyć przesącz, odparować pod próżnią w temperaturze 65°C i zatężyć do zawartości surowego leku 0,5 g/ml. Kontrola jakości CTWE opiera się na zawartości echinacetyny [23]. Zawartość echinacetyny w CTWE oznaczona metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej wynosi (7,63 ± 0,08) mg/ml.

1.2.2 Grupowanie zwierząt i administracja

3 0 myszy podzielono losowo na normalną grupę kontrolną, grupę modelową i grupę leczoną Cistanche deserticola, po 10 myszy w każdej grupie. Myszom z grupy leczonej podawano przez zgłębnik dawkę 10 g/kg masy ciała CTWE [obliczoną jako 20-krotność 0,5 g/(kg·d) u dorosłych [13]], podczas gdy myszom z grupy kontrolnej i z grupy modelowej podawano taką samą objętość soli fizjologicznej przez zgłębnik raz dziennie przez 35 kolejnych dni; W 7, 14, 21, 28 i 35 dniu podawania myszom z grupy modelowej i z grupy leczonej Cistanche deserticola podano dawkę 80 mg/kg masy ciała CTX do wstrzyknięcia dootrzewnowego, podczas gdy myszom z grupy kontrolnej podano taką samą objętość soli fizjologicznej do wstrzyknięcia dootrzewnowego.

1.2.3 Pobieranie i przetwarzanie próbek

Po ostatnim wstrzyknięciu CTX i 12-godzinnej głodówce zmierzono masę ciała i pobrano próbki krwi. Następnie myszy w każdej grupie znieczulono wodzianem chloralu ({1}},3 ml/100 g) dootrzewnowo, po czym usunięto i zważono jądra; Pobrać tkankę najądrza z obu stron do badania jakości nasienia; Pobrać lewe jądro i przechowywać w 4-procentowym roztworze paraformaldehydu do pocięcia tkanki i badania histopatologicznego; Weź prawe jądro i przechowuj je w ciekłym azocie do wskaźników biochemicznych tkanek i ilościowej detekcji fluorescencji metodą PCR.

1.2.4 Badanie jakości nasienia

Pobraną tkankę najądrza naciąć i umieścić w podgrzanej do 37 st. soli fizjologicznej. Inkubować w stałej temperaturze przez 15 minut, aby umożliwić plemnikom całkowite wypłynięcie i przygotować zawiesinę plemników. Weź zawiesinę plemników i umieść ją na desce do liczenia plemników podgrzanej do 37 stopni. Obserwuj pod mikroskopem i wybierz plemniki, które mogą poruszać się w linii prostej lub w nieukierunkowanym kierunku jako plemniki żywe. Inne plemniki, które mogą się obracać lub pozostawać nieaktywne w miejscu jako martwe plemniki. Policzyć liczbę żywych plemników w 200 plemnikach i obliczyć wskaźnik ruchliwości plemników [24]; Pobrać 10 μ Po rozcieńczeniu zawiesiny plemników 20-krotnym roztworem soli fizjologicznej obliczyć stężenie plemników metodą płytki do liczenia krwinek; Weź zawiesinę plemników i wymieszaj ją z 1% roztworem eozyny w stosunku 10:1 do barwienia, rozmazywania, suszenia na powietrzu, utrwalania w metanolu, obserwowania pod mikroskopem i obliczania stopnia deformacji plemników.

1.2.5 Patologiczna obserwacja tkanki jądra

Weź lewe jądro zakonserwowane w 4-procentowym roztworze paraformaldehydu, przytnij je ostrzem do bloku tkanki o wielkości około 0,5 cm3, zatop w parafinie, zabarwij HE i obserwuj zmiany patologiczne w jądrze tkanki pod mikroskopem.

1.2.6 Wykrywanie wskaźników biochemicznych w tkance jądra

Zgodnie z instrukcją zestawu do wykrywania SOD i MDA pobrać jądra przechowywane w ciekłym azocie i przygotować 10-procentowy homogenat. Postępuj zgodnie z instrukcjami dołączonymi do zestawu, aby wykryć zawartość SOD i MDA w tkance jądra.

1.2.7 Wykrywanie zawartości testosteronu w surowicy

Zgodnie z instrukcją obsługi zestawu do wykrywania testosteronu ELISA wykryć zawartość testosteronu w surowicy myszy.

1.2.8 Tkanka jądra myszy

Zawartość genów związanych ze szlakiem sygnałowym Nrf2 wykryto za pomocą fluorescencyjnej ilościowej reakcji PCR w celu wykrycia poziomów ekspresji mRNA genów, takich jak Nrf2, kaspaza-3, oksygenaza hemowa-1 (HO{4}}) , oksydoreduktaza chininowa NADPH-1 (NQO-1) i białko podobne do ECH związane z ECH -1 (Keap1) w mysiej tkance jąder. Metoda została opisana w piśmiennictwie [25] i nieznacznie zmodyfikowana . Całkowity RNA ekstrahowano z tkanki jądra myszy przy użyciu kolumnowego zestawu do ekstrakcji całkowitego RNA Trizol. cDNA zsyntetyzowano przez odwrotną transkrypcję przy użyciu EasyScript One Step gDNA Removal i cDNA Synthesis SuperMix i wykryto za pomocą RTFQ PCR przy użyciu zestawu Trans Start Green qPCRSuper Mix. Startery dla Nrf2, Caspase3, HO -1, NQO -1 i Keap1 zostały zaprojektowane i zsyntetyzowane przez Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd. Sekwencje starterów przedstawiono w Tabeli 1. Dane zarejestrowano używając wbudowanego oprogramowania fluorescencyjnego instrumentu do ilościowego PCR, a wartości Ct próbek były stabilnie eksprymowane u myszy. Aktyna jest endogennym wewnętrznym genem referencyjnym [26]. Wzór 2 - ΔΔ Oblicz względny poziom ekspresji mRNA za pomocą CT.

1.3 Analiza statystyczna

Wszystkie dane analizowano przy użyciu SPASS 19.{1}} dla jednokierunkowej analizy ANOVA, z danymi pomiarowymi reprezentowanymi przez x ± s i P mniejsze niż lub równe 0,05, co wskazuje na statystycznie istotne różnice.

Tabela 1. Pierwsze sekwencje Nrf2, Caspase3, HO-1, NQO-1, Keap1 i -actin stosowane w RTFQ-PCR

2 Wyniki

2.1 Wpływ CTWE na masę ciała i masę jąder u myszy z uszkodzeniem jąder spowodowanym przez CTX

W porównaniu z normalną grupą kontrolną masa ciała i masa jąder myszy z grupy modelowej były znacznie zmniejszone (P<0.05); Compared with the model group, the body mass and testicular mass of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). See Table 2.

2.2 Wpływ CTWE na jakość nasienia myszy z uszkodzeniem jądra wywołanym przez CTX

Z Tabeli 3 widać, że w porównaniu z normalną grupą kontrolną ruchliwość plemników i stężenie myszy z grupy modelowej były znacznie zmniejszone (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the sperm motility and sperm concentration in the Cistanche deserticola treatment group were significantly increased (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly reduced (P<0.05). The results showed that CTWE significantly improved the semen quality of mice with testicular injury caused by CTX.

Tabela 2. Masa ciała i masa jąder myszy w różnych grupach (x ± s)

NC: Normalna kontrola; TIMC: kontrola modelu uszkodzenia jądra; CTWE: obróbka ekstraktu wodnego Cistanche tubulosa; * : P＜ {{0}}． 05 kontra grupa NC; #: P ＜ 0． 05 kontra grupa TIMC．

Tabela 3. Ruchliwość plemników, stężenie plemników i odsetek plemników z zaburzeniami morfologicznymi (MAS) myszy w różnych grupach (x ± s)

NC: Normalna kontrola; TIMC: kontrola modelu uszkodzenia jądra; CTWE: obróbka ekstraktu wodnego Cistanche tubulosa; * : P＜ {{0}}． 05 kontra grupa NC; #: P ＜ 0． 05 kontra grupa TIMC．

Rysunek 1． Obrazy patomorfologiczne tkanek jąder myszy w różnych grupach (HE × 400)

A＇ i A: Normalna kontrola; B＇i B: kontrola modelu uszkodzenia jądra; C＇i C: Obróbka ekstraktu wodnego Cistanche tubulosa; Strzałki wskazują na zmiany w warstwach komórek spermatogennych na wszystkich poziomach kanalików nasiennych; prostokąty oznaczają nieuporządkowane i zredukowane warstwy komórek spermatogennych; a kółka wskazują na zmniejszoną liczbę plemników w kanalikach nasiennych

2.3 Wpływ CTWE na zmiany patologiczne w tkance jąder u myszy z uszkodzeniem jąder indukowanym przez CTX

Jak widać na fig. 1, w porównaniu z normalną grupą kontrolną, struktura kanalików nasiennych w tkance jądra myszy z grupy modelowej uległa znaczącej zmianie. Zarys błony podstawnej kanalików nasiennych jest niewyraźny, poziomy plemników na wszystkich poziomach w świetle są zmniejszone i ułożone w nieładzie, a liczba plemników w świetle jest znacznie zmniejszona (ryc. 1B, B'); W porównaniu z grupą modelową, po leczeniu w grupie leczonej Cistanche deserticola, zarys błony podstawnej kanalików nasiennych w jądrach myszy stał się pełny i wyraźny, warstwy plemników w świetle zwiększyły się, a ich ułożenie miało tendencję do regularności, a liczba plemników w świetle znacznie wzrosła (Figura 1C, C').

2.4 Wpływ CTWE na poziomy SOD i MDA w tkance jądra myszy z uszkodzeniem jądra wywołanym przez CTX

W porównaniu z normalną grupą kontrolną, zawartość SOD w tkance jąder myszy z grupy modelowej znacząco spadła (P<0.05) and the MDA content significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the SOD content in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05) and the MDA content significantly decreased (P<0.05). The results showed that CTWE had a significant improvement effect on SOD and MDA indicators in the testicular tissue of mice with CTX-induced testicular injury. See Table 4.

Tabela 4． Poziomy SOD i MDA w tkance jąder myszy w różnych grupach (x ± s)

SOD: dysmutaza ponadtlenkowa; MDA: dialdehyd malonowy; NC: Normalna kontrola; TIMC: kontrola modelu uszkodzenia jądra; CTWE: obróbka ekstraktu wodnego Cistanche tubulosa; * : P＜ {{0}}． 05 kontra grupa NC; #: P ＜ 0． 05 kontra grupa TIMC．

2． 5 Wpływ CTWE na zawartość testosteronu w surowicy u myszy z urazem jądra wywołanym przez CTX

Zgodnie z Tabelą 5, w porównaniu z normalną grupą kontrolną, zawartość testosteronu w surowicy myszy z grupy modelowej była znacznie zmniejszona (P<0.05); Compared with the model group, the serum testosterone content of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). This indicates that CTWE not only has a good anti-injury and repair effect on CTX-induced testicular injury in mice but also significantly increases the serum testosterone content in testicular injury mice.

Tabela 5． Zawartość surowicy T w różnych grupach myszy ( x ± s)

NC: Normalna kontrola; TIMC: kontrola modelu uszkodzenia jądra; CTWE: obróbka ekstraktu wodnego Cistanche tubulosa; * : P＜ {{0}}． 05 kontra grupa NC; #: P ＜ 0． 05 kontra grupa TIMC．

2． 6 Wpływ CTWE na ekspresję genów szlaku Nrf2 w jądrach myszy z uszkodzeniem jąder wywołanym przez CTX

Jak pokazano na rycinie 2, w porównaniu z normalną grupą kontrolną, poziomy ekspresji mRNA NQO-1, HO{2}} i Nrf2 w tkance jąder myszy z grupy modelowej były znacząco obniżone (P<0.05), while the mRNA expression level of the apoptotic gene Caspase3 was significantly upregulated (P<0.05); Compared with the model group, the expression levels of NQO-1, HO-1, and Nrf2 mRNA in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola were significantly upregulated (P<0.05), while the expression levels of Caspase3 mRNA were significantly downregulated (P<0.05); The mRNA expression level of Keap1 gene showed no significant difference between the normal control group, model group, and Cistanche deserticola treatment group (P>0.05). W ten sposób CTWE może naprawić uszkodzenia oksydacyjne CTX w mysich histiocytach jądra poprzez zwiększenie ekspresji NQO -1, HO -1 i innych czynników przeciwutleniających regulowanych przez Nrf2 i hamowanie ekspresji genu apoptozy Caspase3 .

Rysunek 2. Ｒelatywna ekspresja genów związanych ze szlakiem sygnałowym Nrf2 w różnych grupach myszy

NC: Normalna kontrola; TIMC: kontrola modelu uszkodzenia jądra; CTWE: obróbka ekstraktu wodnego Cistanche tubulosa; * : P＜ {{0}}． 05 kontra grupa NC; #: P ＜ 0． 05 kontra grupa TIMC

3 Dyskusja

Jako lek przeciwnowotworowy i immunosupresyjny, CTX wykazuje silną toksyczność reprodukcyjną i duże uszkodzenia płodności [27]. Wyniki tego badania wykazały, że tkanka jąder myszy modelowych CTX została znacznie uszkodzona, zarys błony podstawnej kanalików nasiennych był niejasny, średnica światła była zmniejszona, a poziom plemników na wszystkich poziomach był zmniejszony, oraz nieuporządkowanych, zwiększyła się częstość deformacji plemników, a żywotność i koncentracja plemników uległa zmniejszeniu, co było zgodne z wynikami badań Jiang Pinga [24], co dodatkowo wskazuje, że CTX ma silną toksyczność reprodukcyjną. Cistanche deserticola jest dobrym lekarstwem na wzmocnienie yang i tonizację nerek. Wyniki tego badania pokazują, że CTWE może skutecznie naprawić reprodukcyjną toksyczność CTX u myszy. Masa i jakość jąder myszy w grupie leczonej Cistanche deserticola znacznie wzrosły, znacznie wzrosła koncentracja i żywotność plemników, znacznie zmniejszył się wskaźnik deformacji plemników, a zawartość testosteronu w surowicy znacznie wzrosła; Pod względem histopatologicznym obserwacja wybarwienia skrawków tkanek wykazała znaczną poprawę uszkodzenia tkanki jąder, pełny i wyraźny kontur błony podstawnej kanalików nasiennych, wyraźny i regularny poziom plemników w świetle, a morfologia tkanki była zwykle normalna, co było zgodne z raportem badawczym Wang Dejun i in. [20], wskazując, że CTWE miał wpływ na naprawę uszkodzenia tkanki jądra myszy spowodowanego przez CTX.

Desert Living Cistanche — Tonizująca nerka

W normalnych warunkach fizjologicznych tkanki organizmu w sposób ciągły eliminują wolne rodniki tlenowe i ich nadtlenki wytwarzane w wyniku działań metabolicznych poprzez układ antyoksydacyjny, utrzymując w ten sposób dynamiczną równowagę układu redoks organizmu i unikając uszkodzeń tkanek spowodowanych stresem oksydacyjnym [28]. SOD i MDA są ważnymi wskaźnikami aktywności antyoksydacyjnej tkanek, odzwierciedlającymi odpowiednio zdolność antyoksydacyjną tkanek i stopień uszkodzeń wywołanych stresem oksydacyjnym [29]. Ma Xiaoqing i in. [30] stwierdzili, że Cistanche deserticola może znacznie zwiększać poziom SOD i zmniejszać poziom MDA w tkance nerki szczura, wywierając w ten sposób pewien ochronny wpływ na uszkodzenia tkanki nerki szczura wywołane przez gentamycynę. Wyniki tego badania pokazują, że CTWE może skutecznie zwiększać poziom aktywności SOD i zmniejszać zawartość MDA w uszkodzonej tkance jąder myszy, podobnie jak powyższe wyniki badań, wskazując, że CTWE może przeciwdziałać uszkodzeniom spowodowanym stresem oksydacyjnym poprzez zwiększanie zdolności antyoksydacyjnych tkanki jądra.

Zioła Supermana cistanche — tonizujące nerki

Nrf2 jest członkiem rodziny czynników transkrypcyjnych Cap'n'collar i odgrywa ważną rolę w różnych procesach chorobowych, takich jak nowotwory i stany zapalne [31]. Nrf2 jest kluczowym czynnikiem transkrypcyjnym, który reguluje komórkowy stres antyoksydacyjny. Gdy organizm doświadcza stresu oksydacyjnego, wchodzi do jądra i wiąże się z elementami odpowiedzi antyoksydacyjnej (ARE), regulując aktywność transkrypcyjną różnych endogennych czynników przeciwutleniających, w tym SOD, HO-1 i NQO{4}}, oraz hamowanie reakcji oksydacyjnych [32]. W warunkach patologicznych funkcja regulacji Nrf2 jest nieprawidłowa, a histiocyty są uszkadzane przez stres oksydacyjny. Le i in. [33] donieśli, że CTX odgrywa rolę w uszkodzeniach toksyczności reprodukcyjnej poprzez obniżenie ekspresji Nrf2, hamując w ten sposób ekspresję czynników przeciwutleniających, takich jak HO-1 i NQO-1. W tym badaniu ekspresja genów Nrf2, HO{12}} i NQO-1 w tkance jądra myszy z grupy modelowej była znacząco obniżona, a ekspresja genu apoptozy kaspazy3 była zwiększona, co wskazuje, że CTX może promować apoptozę mysiego histiocytu jądra poprzez szlak sygnałowy Nrf2, powodując uszkodzenie tkanki jądra, co jest zgodne z powyższymi wynikami badań; Ekspresja Nrf2, NQO-1 i HO-1 w tkance jąder myszy leczonych Cistanche deserticola była znacząco podwyższona, podczas gdy ekspresja kaspazy3 była znacząco obniżona, co wskazuje, że Cistanche deserticola może promować wejście do jądra Nrf2 i integrację ARE, regulować w górę ekspresję NQO-1, HO-1 i innych czynników antyoksydacyjnych regulowanych przez Nrf2, naprawiać uszkodzenia oksydacyjne CTX histiocytów jąder myszy i przywracać spermatogenność jąder funkcjonować.

Podsumowując, CTWE może łagodzić uszkodzenia tkanki jąder wywołane przez CTX u myszy, naprawiać uszkodzoną strukturę tkanki jąder i przywracać funkcje spermatogenne jąder. Mechanizm może być związany ze zdolnością CTWE do zwiększania aktywności enzymów antyoksydacyjnych, regulowania ekspresji genów czynników stresu antyoksydacyjnego związanych ze szlakiem sygnałowym Nrf2 i obniżania ekspresji genu apoptotycznego kaspazy3. W tym artykule omówiono głównie wpływ CTWE na uszkodzenie tkanki jąder w wyniku stresu oksydacyjnego i potrzebne są dalsze badania nad mechanizmem jego działania.

odniesienie

［1］ Smolej L, Brychtová Y, Cmunt E, et al. Niskie dawki fludarabiny i cyklofosfamidu w skojarzeniu z rytuksymabem w leczeniu pierwszego rzutu pacjentów w podeszłym wieku/chorych współistniejących na przewlekłą białaczkę limfocytową/chłoniaka z małych limfocytów (PBL/SLL): długoterminowe wyniki projektu Q-lite prowadzonego przez czeską grupę badawczą CLL． Br J Haematol,2021,193(4) : 769-778．

［2］ Li Ruijun, Qin Yong, Zhou Yalin i in. Wpływ peptydu z ciecierzycy na funkcje odpornościowe myszy z obniżoną odpornością. nauka o żywności, 2020, 41 (21): 133-139

［3］Liu Bo, Li Ye, Wu Qi i in. Wpływ Erxian Tang na funkcje rozrodcze modelu myszy z oligospermią indukowaną cyklofosfamidem. Chinese Journal of Andrology, 2018, 24 (6): 547-552

［4］Lai Yongwei, Xi Yanli, Shao Minghai i in. Ochronny wpływ flawonoidów Myrica rubra na toksyczność reprodukcyjną wywołaną przez cyklofosfamid u samców myszy. Badania zdrowotne, 2020, 49 (5): 790 - 794

［5］Liu Jianguo, Zhao Hongle, Li Jiaojiao i in. Wpływ receptury Bushen Huoxue na apoptozę mysich jąder plemników indukowaną przez cyklofosfamid. Chinese Journal of Andrology, 2020, 26 (9): 826-831

［6］Mi Zhaoyan, Zhang Yanan, Hua Rui i in. Ochronny wpływ resweratrolu na uszkodzenia oksydacyjne wywołane przez cyklofosfamid w plemnikach ludzkich. Journal of Modern Urology, 2021, 26 (4): 340-344

［7］Krajowa Komisja Farmakopei. Farmakopea Chińskiej Republiki Ludowej: część 1. Pekin: China Medical Science and Technology Press, lipiec 2022 r.

［ 8 ］ Jia Suo Xue. Chemia Farmaceutyczna. Pekin: China Traditional Chinese Medicine Press, lipiec 2015

［9］Wang Ang. Przygotowanie Materia Medica. Pekin: China Traditional Chinese Medicine Press, 2009.121

［10］Zhi Yajing, Zhen Yaqin, Tian Wei i in. Postęp badań nad składem chemicznym i działaniem farmakologicznym Cistanche deserticola oraz analiza predykcyjna markerów jakości (Q-Markers). Chińska medycyna ziołowa, 2021, 52 (9): 2758-2767

［11］Wu Yan, Zhang Hong, Bu Ren i in. Badanie ochronnego wpływu polisacharydu Cistanche deserticola na model ostrego starzenia indukowanego galaktozą D-neneneba. Chiński Biuletyn Farmakologiczny, 2017, 33 (7): 927-933

［12］ Wang NQ, Ji SZ, Zhang H i in. Herba Cistanches: Anti-Aging． Starzenie się, 2017,8(6) : 740-759．

［13］Wang Xiaoming. Badania nad efektywnymi składnikami i mechanizmem działania Desert Cistanche w łagodzeniu zmęczenia fizycznego (praca doktorska). Pekin: Peking Union Medical College, 2019.139-145

［14］Guo Qiaoli, Wu Zhibo, Zhou Yubi i in. Analiza składu i aktywność przeciwutleniająca polisacharydów z Lanzhou Cistanche deserticola. Technologia przemysłu spożywczego, 2021, 42 (15): 96-103

［15］Yang Xiumei, Yang Yu, Wang Danyang i in. Ekstrakt etanolowy z Cistanche deserticola w Xinjiangu reguluje efekt wzmocnienia układu odpornościowego dojrzewania DC na Th1 / Th2 u myszy. Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine, 2021, 52 (3): 820-830

［16］Wang Jingkang, Wang Lichao, Jiang Yong i in. Badanie działania ochronnego i mechanizmu działania ekstraktu alkoholowego z Cistanche deserticola na uszkodzenia neuronów spowodowane reperfuzją niedotlenienia/hipoglikemii. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2019, 44 (13): 2686-2690

［17］Cai Kerui, Liu Zhixin, Sun Xiaodong i in. Ochronny efekt i mechanizm polisacharydu Cistanche deserticola na neurony mózgu u starzejących się myszy indukowanych przez galaktozę D-neneneba. Chinese Journal of Gerontology, 2018, 38 (19): 4732-4734

［18］Wang Qixin, Chen Zehua, Luo Hujie i in. Wpływ różnych ekstraktów Cistanche deserticola na poprawę zdolności seksualnych u szczurów z niedoborem yang nerki. Chinese Journal of Experimental Rescriptions, 2018, 24 (22): 95-101

［19］ Li J, Huang D, He LQ． Wpływ Ｒoucongrong( Herba Cistanch es Deserticolae) na toksyczność reprodukcyjną u myszy wywołaną przez glikozyd Leigongteng ( Ｒadix et Ｒhizoma Tripterygii) ． J Tradit Chin Med,2014,34(3): 324-328．

［20］Wang Dejun, Sheng Shuqing, Liang Hong. Wpływ Cistanche deserticola na morfologię i histochemię jąder i najądrzy myszy. Badania anatomiczne, 2000, 22 (2): 101-103158

［21］Zhao Donghai, Zhang Lei, Zhang Yan i in. Efekt terapeutyczny i mechanizm glikozydów fenyloetanolu z Cistanche deserticola na wywołane cyklofosfamidem zaburzenia spermatogenne u myszy. Journal of Jilin University (edycja medyczna), 2014, 40 (3): 612-615

［22］Li Y, Peng Y, Wang MY i in. Ludzki metabolizm żołądkowo-jelitowy ekstraktu wodnego cistanches herba in vitro: wyjaśnienie profilu metabolicznego w oparciu o kompleksową identyfikację metabolitów w soku żołądkowym, soku jelitowym, ludzkich bakteriach jelitowych i mikrosomach jelitowych． J Rolniczy chemik spożywczy, 2017, 65( 34): 7447-7456．

［23］Xu Shanshan, Wu Kangyu, Tu Xingming. Oznaczanie echinacetyny w ekstrakcie wodnym Cistanche deserticola metodą HPLC. Nowa medycyna chińska i farmakologia kliniczna, 2019, 30 (5): 598-601

［24］Jiang Ping, Xu Qinghong, Chen Cunwu i in. Wpływ Jingui Shenqi Wan na ekspresję genów szlaku sygnałowego Nrf2 w tkance jądra myszy z uszkodzeniem jądra wywołanym cyklofosfamidem. Chinese Journal of Andrology, 2020, 26 (2): 160-166

［25］Ma Chaoyang, Zhu Lijuan, Luo Chenxi i in. Ochronny wpływ kwasu betulinowego na uszkodzenie wątroby wywołane przez cyklofosfamid u myszy. nauka o żywności, 2020, 41 (21): 147-153

［26］Hai Zhuo, Xiong Xianrong, Ma Hongcheng i in. Przeszukiwanie wewnętrznych genów referencyjnych pod kątem fluorescencyjnej ilościowej analizy PCR mysich jąder. Journal of Southwest University for Nationalities (wydanie Natural Science), 2020, 46 (5): 448-456

［27］ Guo XB, Zhai JW, Xia H i in. Ochronne działanie egzosomów pochodzących z mezenchymalnych komórek macierzystych szpiku kostnego przed szkodliwym wpływem cyklofosfamidu na reprodukcję jest związane ze szlakami sygnałowymi p38MAPK/EＲK i AKT. Azjata J Androl, 2021, 23(4): 386-391．

［28］ Liu M, Li H, Zhang L i in. Olej z nasion bawełny łagodzi stres oksydacyjny wywołany udarem niedokrwiennym poprzez aktywację szlaku sygnałowego Nrf2． Mol Neurobiol,2021,58(6): 2494-2507．

［29］ Yang Y, Wu ZZ, Cheng YL i in. Ｒesweratrol chroni przed oksydacyjnym uszkodzeniem komórek nabłonka barwnikowego siatkówki poprzez modulację aktywności SOD/MDA i aktywację ekspresji Bcl-2． EurＲev Med Pharmacol Sci,2019,23(1) : 378-388．

［30］Ma Xiaoqing, Wang Jie, Hu Junping i in. Badanie farmakodynamiczne całkowitych glikozydów fenyloetanolu z Cistanche deserticola na gentamycynie wywołało ostre uszkodzenie nerek u szczurów. Journal of Xinjiang Medical University, 2020, 43 (7): 942-946950

［31］ Huang Y, Yang Y, Xu Y i in. Oś Nrf2 /HO{2}} reguluje angiogenezę raka żołądka poprzez ukierunkowanie na VEGF． Cancer ManagerＲes,2021,13(1) : 3155-3169．

［32］ Zhao Y, Wang Y, Zhang M i in. Ochronne działanie ginsenozydów (20Ｒ) -Ｒg3 na wywołane przez H2O 2- uszkodzenie komórek mięśnia sercowego poprzez aktywację szlaku sygnałowego Keap-1 /Nrf2 /HO{8}}． Chemik Biodiver, 2021, 18(4): e2001007．

［33］ Le X, Ping L, Gu Y i in. Polisacharyd atramentu kałamarnicy zmniejsza wywołane przez cyklofosfamid uszkodzenie jąder poprzez szlak aktywacji Nrf2 / AＲE u myszy． Irański J Basic Med Sci, 2015, 18( 8): 827-831．