Oznaczanie zawartości pięciu związków w nasieniu Rehmanniae i ustalenie jego odcisku palca metodą HPLC

Tabela 3 Wyniki testu regeneracji (n=6)

2.4 Oznaczanie próbek

Zebrane sześć partii Rehmannia przygotowano zgodnie z metodą opisaną w „2.2.2”, pobrano próbki i oznaczono zgodnie z warunkami chromatograficznymi opisanymi w „2.1”. Wyniki oznaczania zawartości przedstawiono w Tabeli 4. Wyniki pokazują, że spośród pięciu składników zawartość glikozydu rehmanniowego D jest najwyższa i waha się od 0,460% do {{1 0}}.730%; Na drugim miejscu znajduje się zawartość glikozydu leonuri, która waha się od 0,100% do 0,270%, a zawartość obu składników w próbkach z różnych obszarów produkcyjnych nie różni się znacząco. W próbce SX1, z wyjątkiem echinakozydu, zawartość pozostałych czterech składników jest znacznie wyższa niż w innych partiach próbek; zawartość echinakozydu, cistanchezydu A i werbaskozydu w Rehmannia glutinosa z różnych obszarów produkcji jest zupełnie inna i nieregularna.

ZIOŁO CISTANCHE ZDOBRA JAKOŚĆ KONSYSTENCJI

2.5 Ustalenie i ocena podobieństwa odcisku palca HPLC Rehmannia glutinosa

Chromatogramy i dane dotyczące oznaczania zawartości wieloskładnikowej w Rehmannia glutinosa zaimportowano do oprogramowania „Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Likeluation System (2012 Edition)” i wybrano chromatogram próbki testowej SX1 jako widmo referencyjne. Szerokość okna czasowego ustawiono na 0,10 min, a do wygenerowania widm nałożonych i widm referencyjnych zastosowano metodę mediany. W sumie zidentyfikowano 23 wspólne piki (patrz Rysunek 3). Podobieństwo między odciskami palców próbki Rehmannia glutinosa i próbką odniesienia wynosiło 0,904–0,950, co wskazuje, że próbki Rehmannia glutinosa z różnych obszarów produkcyjnych oraz próbki surowej Rehmannia glutinosa i gotowanej Rehmannia glutinosa były podobne i miały dobrą jakość konsystencji.

Tabela 4 Wyniki oznaczania zawartości 5 składników w nasieniu Rehmanniae/%

13. rehmannozyd D; 17. leonuride; 19. echinakozyd; 20. kastanozyd A; 21. akteozyd

Rycina 3 Nakładające się chromatogramy HPLC 6 partii Semen Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) i odnośnik (R)

3 Dyskusja

3.1 Dobór warunków chromatograficznych

W tym badaniu zbadano cztery układy fazy ruchomej: acetonitryl-woda, acetonitryl-0,1% roztwór kwasu mrówkowego, metanol-woda i metanol-0,1% roztwór kwasu mrówkowego. Wyniki wykazały, że pięć składników dobrze oddzielało się w układzie acetonitrylowym; w porównaniu z układem fazy ruchomej acetonitryl-woda, piki rehmannia glutinosa i glikozydów serdecznika w fazie ruchomej acetonitrylu-0.1% roztworu kwasu mrówkowego były węższe i miały dobrą symetrię pików. Jednocześnie, ze względu na różną absorpcję ultrafioletu przez pięć składników, zawartość tych składników jest bardzo zróżnicowana. W celu dokładniejszego określenia zawartości każdego składnika i zapewnienia równomiernego rozłożenia intensywności absorpcji pięciu składników na tym samym chromatogramie, absorpcję w ultrafiolecieglikozyd rehmanniowy Danalizowano glikozyd serdeczny, echinakozyd, cistanchezyd A i werbaskozyd i wybrano oznaczanie przy zmiennej długości fali, tj. 0-24 min, pierwszy wydzielony glikozyd rehmanniowy oznaczono przy 203 nm i 24-40 min, oddzielony echinakozyd, cistanchezyd A i werbaskozyd oznaczono przy 330 nm. Ponadto w tym badaniu zbadano także wpływ ekstrakcji metanolu, 70% roztworu metanolu, 50% roztworu metanolu i 50% roztworu acetonitrylu jako rozpuszczalników do ekstrakcji. Wyniki wykazały, że 70% roztwór metanolu jako rozpuszczalnik ekstrakcyjny pozwala lepiej rozpuścić badane składniki, a wyekstrahowana próbka zawiera mniej zanieczyszczeń. Dlatego w tym badaniu jako rozpuszczalnik do ekstrakcji wybrano 70% metanol, a jako układ fazy ruchomej acetonitryl-0,1% roztwór kwasu mrówkowego i wykorzystano zmienną długość fali do określenia zawartości pięciu składników Rehmanni.

3.2 Analiza wyników oznaczania próbek

Z wyników oznaczeń wynika, że ​​po gotowaniu na parze, poza nieznacznym wzrostem zawartości echinakozydu, znacząco obniżyła się zawartość pozostałych czterech składników, zwłaszcza leonuryzydu i cistanchezydu A; zawartość glikozydu rehmannia D i cistanchezydu A w Rehmannia glutinosa z tego samego obszaru produkcyjnego różniła się nieznacznie, a zawartość leonuryzydu, echinakozydu i werbaskozydu była istotnie różna; zawartość echinakozydu w Rehmannia glutinosa z obszaru produkcyjnego Henan była istotnie wyższa niż w próbkach z obszaru produkcyjnego Shanxi, a zawartość pozostałych czterech składników była nieco inna. Jednocześnie, zgodnie z odciskiem palca HPLC ustalonym w tym badaniu, podobieństwo między 6 partiami próbek Rehmannia a kontrolnym odciskiem palca wynosiło 0,904 ~ 0,950, co wskazuje, że główna substancja chemiczna składniki 6 partii próbek Rehmannia przed i po obróbce były wysoce spójne.

Podsumowując, metoda oznaczania zawartości i odcisk palca HPLC ustalone w tym badaniu są dokładne, niezawodne i mają dobrą specyficzność. Można je wykorzystać do scharakteryzowania zmian w składnikach i stopniu przetworzenia Rehmannia glutinosa przed i po przetworzeniu, a także zapewnić wsparcie techniczne przy kontroli jakości Rehmannia glutinosa. Jednakże wadą tego badania są małe partie próbek i niepełne pokrycie obszarów produkcyjnych, co wymaga dalszej analizy i weryfikacji.

Referencje

[1] Komitet Farmakopei Chińskiej. Farmakopea Chińskiej Republiki Ludowej: Tom 1 [S]. Pekin: China Medical Science and Technology Press, 2020: 129-130.

[2] Xu Jun, Fu Zhetong. Badania nad historyczną ewolucją nazw przetworzonej Rehmannia glutinosa i badanie jej skuteczności [J]. Chińska medycyna patentowa, 2017, 39 (9): 1913-1916.

[3] Zhu Jue, Zhu Xiangmei, Shi Yuhe i in. Postęp badań nad Rehmannia glutinosa i analiza predykcyjna jej markerów jakości [J]. Chińska medycyna patentowa, 2022, 45 (2): 1273-1281.

[4] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi i in. Postęp badań nad składem chemicznym i działaniem farmakologicznym Rehmannia glutinosa [J]. Chińska medycyna ziołowa, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Li Hongwei, Meng Xiangle. Postęp badań nad składnikami chemicznymi i działaniem farmakologicznym Rehmannia glutinosa［J］.

Badania nad oceną leków, 2015, 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong, Jiang Zhenzuo, Wang Yuefei i in. Analiza składników chemicznych świeżej Rehmannia glutinosa, surowej Rehmannia glutinosa i gotowanej Rehmannia glutinosa metodą UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Chińska medycyna patentowa, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian, Wei Yue, Li Feifei i in. Rozpoznawanie wzoru linii papilarnych i oznaczanie zawartości wieloskładnikowej w różnych przetworzonych produktach Rehmannia glutinosa［J］. Hubei Agricultural Sciences, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Chen Jinpeng, Zhang Kexia, Liu Yi i in. Postęp badań nad składnikami chemicznymi i działaniem farmakologicznym Rehmannia glutinosa［J］. Chińska medycyna ziołowa, 2021, 52(6): 1772-1784.

[9] Tao Yi, Jiang Yanhui, Tang Kejian i in. Badanie porównawcze składników chemicznych Rehmannia glutinosa przed i po obróbce metodą UHPLC-Q-TOF/MS［J］. Nowe leki chińskie i farmakologia kliniczna, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Xu Zhuo, Dai Xinxin, Su Shulan i in. Dynamiczna akumulacja składników nukleozydowych i aminokwasowych w Rehmannia glutinosa w oparciu o UPLC-TQ-MS［J］. Chińska medycyna ziołowa, 2021, 52(23): 7323-7330.

［11］ Li Yujiao. Badanie technologii przetwarzania i mechanizmu „dziewięciu parowania i dziewięciu ekspozycji” Rehmannia glutinosa［D］. Jinan: Uniwersytet w Shandong, 2023.

［12］ Wang Yue, Zhou Qiao, Zhang Xuelan i in. HPLC Jednoczesne oznaczanie zawartości ośmiu składników Rehmannia glutinosa i jej różnych produktów przetworzonych za pomocą analizy odcisków palców UPLC i wieloindeksowego oznaczania zawartości składników [J]. Chińskie materiały lecznicze, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai, Xue Shujuan, Chen Suiqing. Ocena jakości Rehmannia glutinosa na podstawie odcisku palca UPLC i wieloindeksowego oznaczania zawartości składników [J]. Chińskie materiały lecznicze, 2021, 44 (4): 917-923.