Oznaczanie Acteoside i Echinacoside Cistanche Tubulosa

[Abstrakcyjny]Cel: Opracowanie metody oznaczania (składnika skuteczności po stronie państwa i jeżówki－) w Cistanche Tubulosa metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej. Porównanie zawartości głównego składnika w dwóch siedliskach, czterech żywicielach i czterech partiach Cistanche tubulosa. Dostarczenie naukowych dowodów na wykorzystanie rodzajów Cistanche tubulosa. Metody: przy użyciu kolumny chromatograficznej Kromasil C18 (4,6 mm x 25{11}} mm, 5 μm); Faza ruchoma: metanol, acetonitryl -1% kwas octowy (14∶9∶77); Natężenie przepływu: 1,0 ml·min-1; Długość fali detekcji 334 nm; Temperatura kolumny wynosiła 30 stopni. Wyniki: Dwa składniki miały w teście dobry liniowy zakres krzywej wzorcowej (r=0,999,9). Średnia stopa odzysku wynosi 96,89 procent i 100,7 procent, a procent RSD to 0,91 procent i 1,96 procent. Wyniki analizy wykazały, że istniała znacząca różnica między zawartością głównego składnika skutecznego (stanowego i echinakozydu) w różnych regionach, partiach i żywicielach w Cistanche tubulosa. Wniosek: Metoda jest prosta, dokładna i powtarzalna. Stanowi eksperymentalną podstawę wartości leczniczej Cistanche tubulosa.

[Słowa kluczowe] Cistanche tubulosa; akteozyd; echinakozyd; określenie zawartości

Eksperyment Cistanche deserticola

Kliknij tutaj, aby zobaczyć produkty Cistanche

【Zapytaj o więcej】 E-mail: cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Cistanche deserticola została po raz pierwszy odnotowana w „Shennong Materia Medica Classic” i jest jednym z najczęściej stosowanych leków w receptach tonizujących nerki i wzmacniających yang. W ostatnich latach prowadzone na dużą skalę wykopaliska Cistanche deserticola doprowadziły do ​​szybkiego zmniejszenia dzikich zasobów. Jako substytut Cistanche deserticola, rurkowaty kwiat Cistanche deserticola produkowany w Xinjiangu stanowił 60 procent dostaw w kraju.

Cistanche w proszku

Glikozydy fenyloetanolu, takie jak glikozydy echinakozydu i ergosterolu, są jednym z głównych składników farmakologicznych Cistanche tubulosa. Echinozyd ma działanie neuroprotekcyjne [3], działanie osteoprotekcyjne [4] i działanie przeciwstarzeniowe [5]. Ergosterozyd poprawia upośledzenie pamięci, leczy chorobę Alzheimera i ma działanie podobne do androgenów. Tubular Cistanche: znany również jako Hongliu Dayun, goszczony przez różne rośliny Tamarix L. [8-9]. Autor wykorzystał metodę HPLC do określenia zawartości dwóch powyższych składników w Cistanche deserticola. Metoda oznaczania i wyniki stanowią podstawę naukową kontroli jakości i wartości leczniczej tego leku.

Głównym aktywnym składnikiem Cistanche deserticola jest glikozyd fenyloetanolu

1 Instrument i testowany lek

Odczynnik i badany lek: echinacetyna (numer serii 111670-200401), ergosterol (numer serii 111530-200505), substancja referencyjna dostarczona przez Chiński Instytut Kontroli Produktów Farmaceutycznych i Biologicznych. Acetonitryl i metanol są chromatograficznie czyste, podczas gdy woda jest wodą ultraczystą; Wszystkie pozostałe odczynniki są czyste analitycznie. Wszystkie materiały lecznicze Cistanche deserticola zostały zebrane i zidentyfikowane przez profesora Ju Aihua z Uniwersytetu Medycznego Mongolii Wewnętrznej. Instrument: wysokosprawna chromatografia cieczowa American Agilent 1100.

2 Metody i wyniki

2.1 Warunki chromatograficzne i test adaptacyjności układu

Kolumna chromatograficzna: Kolumna chromatograficzna Kromasil C18 (4,6 mm × 250 mm,5 μm); Faza ruchoma: acetonitrylo-metanol 1% roztwór kwasu octowego (9:14:77); Długość fali wykrywania wynosi 334 nm; Przepływ szybkość: 1,0 ml · min{12}} Temperatura kolumny 30 stopni Objętość nastrzyku 20 μl Teoretyczna liczba płytek nie powinna być mniejsza niż 5000 w oparciu o obliczenie glikozydów echinacei. Stopień rozdzielenia dwóch składników farmakologicznych jest dobry, ze stopniem separacji większym niż 1,5 od sąsiednich pików (patrz rysunek 1-3)

Rysunek 1 Chromatogram substancji odniesienia echinacetyny

Rysunek 2 Chromatogram substancji odniesienia ergosterolu

Rysunek 3 Chromatogram Cistanche deserticola

2.2 Przygotowanie roztworu próbki

Dokładnie odważ około 0,5 g proszku Cistanche deserticola (przesianego przez sito o oczkach 60) i umieść w brązowej kolbie stożkowej o pojemności 100 ml. Dokładnie dodać 50 ml fazy ruchomej, zważyć masę, sonikować przez 40 minut i umieścić w temperaturze pokojowej; Ponownie zważyć masę, użyć fazy ruchomej do wyrównania ubytku masy, dobrze wstrząsnąć, przesączyć, ponownie wziąć filtrat i odstawić.

2.3 Przygotowanie roztworu wzorcowego

Dokładnie odważ odpowiednią ilość materiałów odniesienia echinacetyny i ergosterolu i dodaj fazę ruchomą, aby przygotować roztwór zawierający odpowiednio około {{0}},14 mg echinacetyny i 0,10 mg ergosterolu na 1 ml.

2.4 Kontrola zależności liniowej

Dokładnie odważyć odpowiednio 6,4 mg substancji odniesienia echinacea i 3,0 mg substancji odniesienia ergosterolu, umieścić je w kolbie miarowej o pojemności 10 ml, rozcieńczyć fazą ruchomą i równomiernie wstrząsnąć; Dokładnie wyssij 0.1, 0.25, 0.5, 1.{14}}, 2.0 i 3.0 ml odpowiednio do kolby miarowej o pojemności 5 ml, rozcieńczyć do kreski fazą ruchomą i wstrząsnąć; Odpowiednio absorbuj 20 μ próbki L wstrzykniętej i zmierz zgodnie z powyższymi warunkami chromatograficznymi. Oś Y przedstawia obszar piku, a oś X przedstawia objętość wstrzyknięcia. Narysuj krzywą standardową. Zmierzone dane pokazują, że ilość echinacetyny wynosi 0,26 µg-7,75 µm. Istnieje dobra liniowa zależność między powierzchnią piku a objętością wstrzyknięcia między g, a równanie regresji to Y=831,41X21. 88, R2=0,9999; Ilość glikozydu ergosterolu wynosi 0,30 μg-7,50 μ. Istnieje dobra liniowa zależność między powierzchnią piku a objętością wstrzyknięcia między g, a równanie regresji to Y=671,53X plus 158,71, R{ {39}}.9999.

Echinozyd, główny składnik chemiczny Cistanche deserticola

2.5 Test dokładności

Dokładnie odważyć 0,5 g powyższego proszku leczniczego, przygotować roztwór testowy zgodnie z metodą opisaną w „2.2”, wstrzyknąć 6 kolejnych razy i zapisać powierzchnie pików 2 składników. Procent RSD powierzchni piku jego echinakozydu wynosi 1,46 procent; Zawartość glikozydu ergosterolu wynosi 1,62 proc.

2.6 Próba stabilności

Weź {{0}},5 g próbki proszku i przygotuj roztwór testowy zgodnie z metodą opisaną w „2.2”. Wstrzyknąć próbkę 0, 1, 2, 4, 8 i 12 godzin po przygotowaniu. Wyniki pokazały, że procent RSD powierzchni piku echinacetyny wynosił 1,5 procenta; Zawartość glikozydu ergosterolu wynosi 2,0 proc.

2.7 Test powtarzalności

Dokładnie zważ 6 próbek proszku z tej samej partii wyprodukowanej w Minfeng, Hotan, Xinjiang, każda o wadze około 0,5 g. Przygotuj i zmierz powierzchnię piku zgodnie z metodą podaną w punkcie „2.2”. Oblicz RSD procent powierzchni piku echinakozydu w 6 próbkach jako 1,85 procent i ergosterolu jako 1,93 procent.

2.8 Próbka Test dodawania i odzyskiwania

Dokładnie zważ 6 próbek proszku leczniczego z tej samej partii wyprodukowanej w Minfeng, Hotan, Xinjiang, przy czym każda próbka waży około 0,1 g. Dodaj pewną ilość echinacetyny i ergosterolu i przygotuj roztwór testowy zgodnie z metodą opisaną w „2.2”. Średnie wskaźniki odzysku wyniosły odpowiednio 96,89 procent i 100,7 procent, przy czym procent RSD wyniósł odpowiednio 0,91 procent i 1,96 procent. (Patrz tabele 1-2)

Tabela 1 Wyniki testu odzyskiwania glukozy z soku ananasowego

Tabela 2 Wyniki testu odzysku glikozydu ergosterolu

2.9 Oznaczanie próbki

Weź proszek leczniczy Cistanche deserticola z każdej tuby i postępuj zgodnie z metodą opisaną w punkcie „2.2”. Zmierzone wyniki przedstawiono w tabeli 3.

Tabela 3 Oznaczanie echinacetyny i ergosterozydu w Cistanche deserticola

3 Dyskusja

3.1 Wybór fazy ruchomej

Porównano dwa zestawy faz ruchomych: 1) metanol-acetonitryl 1% roztwór kwasu octowego (14:9:77); (2) Metanol: 1% kwas mrówkowy (21,5:78,5). Wyniki pokazały, że elucja fazą ruchomą (1) skutkowała umiarkowanym względnym czasem retencji, mniejszą liczbą pików zanieczyszczeń i dobrym rozdziałem dwóch składników.

3.2 Dobór warunków ekstrakcji

Porównano wpływ różnych metod ekstrakcji (ogrzewanie zwrotne, ultradźwięki) i czasów ekstrakcji (40 min, 50 min) na zawartość składników aktywnych, stosując fazę ruchomą jako rozpuszczalnik ekstrakcyjny. Ostatecznie stwierdzono, że chociaż najwyższą zawartość zmierzono po ogrzewaniu i utrzymywaniu temperatury wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 50 minut, nie było wyboru ze względu na zły kształt piku. Zawartość mierzona ultradźwiękami przez 40 minut i ultradźwiękami przez 50 minut jest podobna, dlatego jako warunki ekstrakcji wybrano ultradźwięki przez 40 minut.

3.3 Badania wykazały

Cistanche z chińskich ziół

Różne żywiciele i siedliska wykazują znaczne różnice w zawartości echinakozydu i ergosterolu w Cistanche deserticola, co wskazuje, że lokalizacja i żywiciel istotnie wpływają na jakość materiału leczniczego. Dlatego systematyczne badanie korelacji między pochodzeniem, żywicielem i jakością materiału leczniczego Cistanche tubulosa ma ogromne znaczenie dla wyboru optymalnych roślin żywicielskich i oceny jakości Cistanche tubulosa.

odniesienie

[1] Chen Fei, Chen Zhuo, Xing Xuefei i in. Postęp badań nad Cistanche deserticola [J]. Drug Evaluation Research, 2013, 36 (6): 469-475

[2] Piosenka Hailong, Jia Xiaoguang, Xie Haihui. Postęp badań nad składnikami chemicznymi Cistanche tubulosa [J]. Tradycyjna medycyna chińska Xinjiang, 2010, 28 (01): 76-78

[3] ZHU M,LUC,LIW. Przejściowa ekspozycja na echinakozyd jest wystarczająca do aktywacji sygnalizacji Trk i ochrony komórek neuronalnych przed rotenonem [J].J Neurochem, 2013, 124(4): 571-580. [4] LIF YANG X, YANG Y, etal. Antyosteoporotyczna aktywność echinakozydu u szczurów z wyciętymi jajnikami [J]. Phytomedicine, 2013,20(6):549-557.

[5] XIE H, ZHU H, CHENG C i in. Echinakozyd opóźnia starzenie komórkowe ludzkich komórek fibroblastycznych MRC-5[J]. Pharmazie,2009,64(11):752-754.

[6] Park Jinghua, Pu Xiaoping, Ma Jian i in. Poprawa zaburzeń akwizycji pamięci wywołanych przez skopolaminę przez celiaozyd [J]. Chiński Biuletyn Farmakologiczny, 2001, 17 (6): 625-626

[7] Lai Qinghai, Wang Linlin, Ding Hui i in. Postęp badań nad leczeniem osteoporozy Cistanche deserticola [J]. Journal of Liaoning University of Tradycyjna Medycyna Chińska, 2016, 18 (3): 102-104

[8] Wang Changlin, Guo Yuhai, Tu Pengfei i in. Analiza RAPD pasożytniczego Cistanche deserticola na różnych gatunkach Tamarix [J]. Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2009, 34 (3): 264-268

[9] Huang Xiaofang, Xu Rong, Chen Jun i in. Stan badań i perspektywy dotyczące charakterystyki siedlisk, mechanizmów pasożytniczych i transportu składników odżywczych u Cistanche deserticola [J] Chinese Journal of Traditional Chinese Medicine, 2012, 37 (19): 2831-2835