Dietetyczny Cistanche złagodził ostre uszkodzenie jelita krętego kaczek Ⅱ

3.1. Morfologia jelit

W tym badaniu górne badanie patologiczne (H&E) i instrukcje dotyczące mikrostruktury ocenianej przez ultrastrukturalne badanie jelita krętego przedstawiono na rycinie 1. W porównaniu z badaniem T0 grupa, jelito kręte w T0plus grupa AFB1 wykazuje zmniejszenie grubości nabłonka, uszkodzenie struktury kosmków izapalnyagregacja komórek i zniszczenie mikrostruktury, takie jak duża liczba poważnie uszkodzonych mikrokosmków i dobrze wykształconych i skurczonych mitochondriów. Uszkodzenia w jelicie krętym kaczek zawierających strukturalny zniszczenie kosmków i mikrokosmków po podaniu AFB1 wywołało pojawienie się stan zapalnystres oksydacyjny. Zgodnie z oczekiwaniami,dieta dietetycznamiał zdolnośćchronią jelito kręte przed ostrym uszkodzeniem wywołanym przez AFB1administracja, w tym kilka złamanych kosmków jelita krętego,komórka zapalnazebrane i niewielkie uszkodzenie jelita krętego ocenione strukturalnie przez H&E oraz zmniejszenie liczby uszkodzonych mikrokosmków, zmniejszenie mitochondriów pęcznienie i eliminacja kurczenia się mitochondriów, wiek oceniany na podstawie przedstawionej struktury pierścieniowej różnica w strukturze między T500plus AFB1group i T0plus grupa AFB1.

Grupa; T500 plus AFB1: cistanche plus grupa AFB1

Kliknij tutaj, aby uzyskać suplementy przeciwutleniające Cistanche

Zapytaj o więcej:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com Whatsapp plus 86 15292862950

3.2. Poziomy adduktów AFB{2}}DNA w osoczu

Addukty AFB{0}}DNA w osoczu kaczek mierzono za pomocą pośredniego konkurencyjnego testu ELISA i pokazano na rycinie2. W porównaniu do t0 grupie, podawanie AFB1 znacząco zwiększyło zawartość adduktów AFB1-DNA (p < 0.001) in the plasma. As expected, dieta dietetycznazmniejszona zawartość AFB{0}}adduktów DNA (p = 0.001) w osoczu kaczek w grupie T500 plus AFB1 w stosunku do grupy T0 plus grupa AFB1.

plus AFB1: cistanche plusgrupa AFB1. Wartości są wyrażone jako średnia± SEM (n= 15), ** oznacza < 0.01.

3.3. Pojemność przeciwutleniająca w osoczu i jelicie krętym

Zdolność przeciwutleniającą osocza pokazano na rycinie3. Ekspozycja AFB1 doprowadziła do stresu oksydacyjnego, co objawia się tym, że T-SOD (p = 0.073), GSH-PX (p = 0.034) i GSH-ST (p = 0.003) aktywność w osoczu zmniejszyła się w T0 plus grupa AFB1 niż te w grupie T0 Grupa. Jednak T-SOD (p = 0.039), GSH-PX (p = 0.009) i GSH-ST (p = 0.003) zostały znacznie ulepszone w T500 plus grupa AFB1 niż te w grupie T0 plus grupa AFB1. Stężenie MDA (p = 0.028) w osoczu zwiększyło się w T0 plus grupa AFB1 niż w grupie T0 grupa, a stężenie MDA (p < 0.001) in the plasma was decreased in the T500 plus grupa AFB1 niż te w grupie T0 dodatkowo AFB1. 

3.4. Ekspresja genów związanych ze szlakiem sygnałowym Nrf{2}}ARE w jelicie krętymPodawanie AFB1 wywołało stres oksydacyjny w komórkach, a następnie spowodowało zmiany w ekspresji genów, w tym Keap1, Nrf2, CAT, SOD1, GPX, GST, NQO-1, HO-1, GCLC i GCLM w jelicie krętym kaczki. Jak pokazano na rysunku4, podawanie AFB1 znacząco zwiększyło mRNA (p = 0.001) poziom genu Keap1 i zahamowane poziomy mRNA genów, w tym Nrf2 (p = 0.171), KOT (p = 0.166), SOD1 (p = 0.121), GPX (p = 0.065), GST (p = 0.008), NQO{2}} (p = 0.061), HO{2}} (p = 0.068), GCLC (p = 0.800) i GCLM (p = 0.090) i zawartość białka Nrf2 (p = 0.001) w jelicie krętym kaczek w T0 plus grupa AFB1 w stosunku do tych w T0 Grupa. Zgodnie z oczekiwaniami dodanie cistanche do kaczek karmionych dietą przez 70 dni znacząco obniżyło mRNA (p = 0.012) ekspresja genu Keap1 w jelicie krętym, istotnie zwiększony poziom mRNA genów, w tym Nrf2 (p = 0.042), SOD1 (p = 0.038), HO{2}} (p = 0.041), NQO{2}} (p = 0.047) i GCLC (p = 0.043) oraz poprawiony poziom mRNA genów, w tym CAT (p = 0.229), GPX (p = 0.568), GST (p = 0.454) i GCLM (p = 0.860) i białko Nrf2 (p = 0.005) w jelicie krętym kaczek w T500 plus grupa AFB1 w stosunku do tych w T0 plus grupa AFB1.

* oznaczap < 0.05, ** meansp < 0.01

3.5. Ekspresja genów związanych z NF-κŚcieżka sygnalizacyjna B w jelicie krętym

Ekspresję genów stanu zapalnego przedstawiono na rycinie5. W porównaniu do t0 grupie, podanie AFB1 zwiększyło poziom mRNA niektórych genów, takich jak TLR4 (p = 0.037), NF-κB (p<0.001), TNF- (p = 0.025), IL-6 (p = 0.072), TXNIP (p = 0.007), NLRP3 (p<0.001) i IL-18 (p = 0.478) w jelicie krętym kaczek w T0 plus grupa AFB1. Zgodnie z oczekiwaniami,dieta dietetycznaznacząco tłumił nadekspresję genów, w tym TLR4 (p<0.001), NF-κB (p = 0.001), TNF- (p = 0.012), IL-6 (p = 0.007), TXNIP (p = 0.001), NLRP3 (p = 0.001) i IL-18 (p<0.001) w jelicie krętym kaczek w T500 plus grupa AFB1 w stosunku do tych w T0 plus grupa AFB1. Ponadto zawartość PP 65 (p = 0.004) w jelicie krętym wzrosła w T0 plus grupa AFB1 w stosunku do tej w T0 Grupa. Zgodnie z oczekiwaniami,dieta dietetycznaznacząco stłumiony PP 65 (p = 0.015) zawartość białka.

intensywność białka docelowego do wewnętrznego odniesienia (GAPDH). Wartości wyrażono jako średnie± SEM (n = 15) i* oznaczap < 0.05, ** means p < 0.01

4. Dyskusja

Morfologia jelit jest jednym z behawioralnych markerów do oceny stanu zapalnego i stresu oksydacyjnego jelita wywołanego podaniem AFB1. Literatura dotycząca wpływu podawania AFB1 na morfologię jelita krętego kaczek jest skąpa. Yan i in. (2020) donieśli, że podanie AFB1 doprowadziło do patologicznego uszkodzenia serca szczurów Sprague-Dawley, nacieku komórek zapalnych i zwyrodnienia kardiomiocytów większych [29]. Nieżytowe zapalenie jelit z naciekami komórek zapalnych w jelicie kurcząt brojlerów wywołane przez AFB1 zniszczyło strukturę jelita [12]. Luzi i in. (2002) opisali ostre skurcze jelita krętego wywołane podaniem AFB1 [30]. Wyniki tego badania wykazały, że cistanche w diecie jest silnym środkiem ochronnym jelita krętego przed hamowaniem stanu zapalnego, co może oznaczać, że cistanche miał zdolność hamowania działania przeciwzapalnego w wielu zaburzeniach zapalnych u myszy.31–33]. Uszkodzenia DNA spowodowane stresem oksydacyjnym niszczą stabilność DNA, co może sprzyjać tworzeniu różnych adduktów DNA [34]. Addukt AFB{0}}DNA jest biomarkerem do oceny stopnia urazu ciała wywołanego przez AFB1. Syntetyzowanie i wzbogacanie adduktów AFB{2}}DNA niszczyło strukturę tkanek, a następnie powodowało rozwój nowotworów [35]. AFB1 byłby metabolizowany przez izoenzymy cytochromu P450 do AFB1-8,9-epoksydu (AFBO) i wytwarzał powiązane addukty [36] i zwiększają uszkodzenia tkanek, stres oksydacyjny i uszkodzenia DNA przez ROS [37]. Addukty AFB{0}}DNA mogą wiązać się z nukleoproteinami i kwasami nukleinowymi, indukując w ten sposób uszkodzenie DNA i komórek oraz zmniejszając poziom enzymów antyoksydacyjnych i syntezę białek [38]. Zhang i in. (2016) donieśli, że dodatek cistanche hamuje uszkodzenie wątroby wywołane przez AFB1 poprzez zwiększenie aktywności przeciwutleniającej enzymów antyoksydacyjnych (GPx, SOD, CAT i GST) oraz hamowanie produkcji AFB1-DNA [39]. W tym badaniu podanie AFB1 zwiększyło zawartość adduktów AFB{1}}DNA w osoczu. Dietetyczny cistanche znacznie zmniejszył to zjawisko, wyniki wykazały, że dietetyczny cistanche miał potencjał do ochrony jelita krętego w tym modelu ostrego podania AFB1, co można wytłumaczyć antyoksydacyjnym działaniem cistanche, które poprawiało zdolność antyoksydacyjną organizmu [40,41]. Stres oksydacyjny występuje, gdy brak równowagi utleniania i antyoksydacji w organizmie jest wywołany spadkiem aktywności enzymów antyoksydacyjnych i wzrostem poziomu peroksydacji lipidów. Układ enzymów antyoksydacyjnych obejmujący CAT, GSH-Px i SOD stanowi pierwszą linię obrony komórek przed wolnymi rodnikami i reaktywnymi formami tlenu (ROS) i jest niezbędny w całej strategii obronnej przeciwutleniaczy w organizmie [42]. 

GST jest kluczowym enzymem regulującym w dół reaktywne formy tlenu (ROS) i stres oksydacyjny w celu osiągnięcia detoksykacji organizmu [43]. Jak pokazano na rysunku3, stres oksydacyjny w osoczu i jelicie krętym kaczek wystąpił podczas ostrego uszkodzenia jelita krętego wywołanego podaniem AFB1. Zgodnie z oczekiwaniami, cistanche dietetyczne złagodziło stres oksydacyjny ciał poprzez zwiększenie aktywności T-SOD, GSH-PX i GSH-ST w osoczu i jelicie krętym po podaniu AFB1. Wyniki tego badania wykazały, że cistanche jest silnym środkiem przeciwutleniającym dla kaczek karmionych AFB1, co można wytłumaczyć zdolnością przeciwutleniającą poprzez hamowanie utleniania lipidów i zwiększanie aktywności enzymu przeciwutleniającego przez suplementowaną cistanche [8,44,45]. Wyniki te są zgodne z poprzednim raportem, w którym wykazano, że cistanche łagodzi AFB1-indukowane zmiany aktywności glutationu, SOD, CAT i MDA [8]. Może to wynikać ze zdolności cistanche do wychwytywania wolnych rodników poprzez przywracanie aktywności enzymów antyoksydacyjnych i łagodzenie stresu oksydacyjnego [15,46]. Równowaga między utlenianiem a antyutlenianiem in vivo była regulowana przez T-SOD i GSH-Px [47]. Nrf2 został przeniesiony do jądra komórkowego i połączony z elementem odpowiedzi antyoksydacyjnej (ARE) i zwiększył transkrypcję genów enzymów antyoksydacyjnych, w tym SOD, CAT, GSH-Px, HO-1, NQO{3}}, GCLC i GCLM [47,48]. Ponadto GST jest regulowany w górę poprzez aktywację szlaku sygnałowego Nrf2 i jako rodzaj enzymu detoksykującego fazy II zaangażowanego w różne detoksykacje in vivo w celu złagodzenia stresu oksydacyjnego [49,50]. Stres oksydacyjny i peroksydacja lipidów były biomarkerami dla szczurów wywołanymi podaniem AFB1 [51,52]. Stres oksydacyjny został zmniejszony przez ekspresję genów aktywacji w szlakach sygnałowych Nrf2-ARE, takich jak NQO-1, HO-1 i GCLC [40]. Liczne badania donieśli, że ekspresja genów indukowana dodatkiem cistanche, w tym HO -1, NQO -1, -GCLC, -GCLM, CAT i GPX poprzez aktywację Nrf2 u brojlerów i szczurów [40,41] i wyeliminował uszkodzenie wątroby wywołane podaniem AFB1 [39,53]. 

Wyniki tego badania wskazują, że podawanie AFB1 może indukować uszkodzenie jelita krętego spowodowane stresem oksydacyjnym poprzez hamowanie szlaku sygnałowego Nrf2. Cistanche dietetyczne promowało ekspresję genów Nrf2 w dół, takich jak geny antyoksydacyjne (CAT, SOD1, GPX1, GST) i geny enzymów detoksykujących fazy II (NQO1, HO{6}}, GCLC, GCLM), co wykazało, że dodanie cistanche do diety dla kaczki hamowały ostre uszkodzenie oksydacyjne jelita krętego wywołane podaniem AFB1 poprzez aktywację szlaku sygnałowego Nrf{8}}ARE. NF- aktywowany stresem oksydacyjnymκSzlak sygnalizacyjny B następnie dalej oceniał wytwarzanie cytokin zapalnych [54]. W tym badaniu uszkodzenie jelita krętego wywołane podaniem AFB1 może być spowodowane stanem zapalnym. Podawanie AFB1 może bezpośrednio indukować uszkodzenie jelita krętego poprzez zwiększenie ekspresji czynników zapalnych i bezpośrednią aktywację zapalnego szlaku sygnałowego. Istnieje pozytywna zależność między stresem oksydacyjnym a stanem zapalnym w tkankach [55]. Ko i in. (2020) podali, że NF-κSzlak sygnałowy B, regulowany w górę cytokin prozapalnych i powodował stan zapalny w płucach szczura [56]. NF-κSygnalizacja B może być aktywowana przez AFB1 w linii komórkowej 3D4/21 [57], powodując serię reakcji zapalnych [58]. Kumara i in. (2020) stwierdzili, że podawanie AFB1 wywołało stan zapalny poprzez podniesienie poziomu cytokin czynników prozapalnych, TNF- , IL-12 i IL-6 w surowicy myszy albinosów [59]. Ekspozycja na AFB1 w diecie spowodowała nadekspresję genu TNF- , IL-1 i IL-6 w wątrobie świń oraz poziomy mRNA czynników zapalnych (TNF- , IL{0}}, IL-6) w wątrobie świń karmionych dietą zawierającą 8% śruty z pestek winogron i AFB1 powrócił do poziomów kontrolnych [60]. Poziomy TNF- , IL-6 i IL-1 w wątrobie szczurów z wewnątrzmacicznym opóźnieniem wzrostu były podwyższone, co w wątrobie szczurów z IUGR karmionych cistanche 400 mg kg−1 dieta powróciła do poziomu kontrolnego szczurów o normalnej masie urodzeniowej [38]. Aktywacja NF-κSzlak sygnałowy B zwiększył ekspresję genów (NLRP3 i kaspaza-1), co promowało IL-1 i IL-18 dojrzewanie i wydzielanie oraz wywołały odpowiedź zapalną [61]. Wyniki tego badania wykazały, że podawanie AFB1 istotnie oceniało ekspresję genów czynników zapalnych w jelicie krętym kaczek, a cistanche w diecie hamowało ekspresję tego genu, zgodnie z badaniem, w którym aktywacja szlaku sygnałowego NLRP3 przez AFB1 u szczurów [40]. Poprzednie wyniki wykazały, że cistanche ma zdolność hamowania ekspresji białka NLRP3 poprzez hamowanie kaspazy-1 i IL-1 [29]. Zatem wyniki tego badania ujawniły, że cistanche może być jednym z obiecujących dodatków paszowych do łagodzenia stanu zapalnego w jelicie krętym i uszkodzenia jelita krętego wywołanego przez podanie AFB1 poprzez hamowanie NF-κSzlak sygnałowy B

5. Wnioski

Podsumowując, podawanie AFB1 wywołało uszkodzenie jelita krętego, stres oksydacyjny i stan zapalny poprzez hamowanie ekspresji genów w dół szlaku sygnałowego Nrf{1}}ARE i aktywację ekspresji genów w dół szlaku sygnałowego NF-κSzlak sygnałowy B. Jednak cistanche w diecie znacznie złagodziło uszkodzenie jelita krętego, stres oksydacyjny i stan zapalny kaczek wywołany podaniem AFB1, prawdopodobnie z powodu aktywacji Nrf2-ARE i hamowania NF-κSzlak sygnałowy B (ryc6). Wyniki tego badania dostarczyły mocnych dowodów na to, że cistanche dietetyczne jest skutecznym dodatkiem do paszy chroniącym jelito kręte przed ostrym uszkodzeniem wywołanym podaniem AFB1 poprzez aktywację Nrf2-ARE i hamowanie NF-κSzlak sygnałowy B.