Wpływ polisacharydu Cistanche Deserticola na proliferację limfocytów

Wang Xiangyan, Qi Yun, Cai Runlan, Li Xiaohong, Yang Meihua, Shi Yue

(Instytut Roślin Leczniczych, Peking Union Medical College, Chińska Akademia Nauk Medycznych, Pekin 100193)

CelTo zbadaj wpływPolisacharyd Cistanche deserticola(CDPS) na proliferację limfocytów u myszy. 

MetodyTest MTT zastosowano do wykrywania proliferacji limfocytów śledziony u myszy. Cyklofosfamid (Cy) zastosowano do replikacji modeli zwierzęcych zwierząt z obniżoną odpornością i zmierzono wskaźniki śledziony i grasicy zwierząt normalnych i zwierząt z obniżoną odpornością. Aktywność interleukiny -2 (IL-2) mierzono za pomocą testu proliferacji tymocytów. WynikiPolisacharyd Cistanche deserticolaznacznie promował proliferację aktywowanych mitogenem (ConA i LPS) limfocytów i nieaktywowanych normalnych komórek oraz promował wydzielanie IL-2 w limfocytach. Wykazało to podanie dootrzewnowePolisacharyd Cistanche deserticolaznacząco zwiększał wskaźnik śledziony u myszy normalnych i myszy z obniżoną odpornością, a także miał znaczący efekt antagonistyczny na zmniejszenie wskaźnika grasicy spowodowane przez Cy. WniosekPolisacharyd Cistanche deserticolamoże znacząco promować proliferację limfocytów śledziony u myszy, co może być związane z promowaniem wydzielania IL-2.

Cistanche życia na pustyni

[Słowa kluczowe]Polisacharyd Cistanche deserticola; indeks śledziony; Indeks grasicy; proliferacja limfocytów; interleukina-2

Polisacharydy roślinne przyciągnęły powszechną uwagę ze względu na ich szerokie działanie immunomodulujące i stosunkowo niską toksyczność [1].Cistanche deserticola ma, znana jako „Desert Ginseng”, to łuskowata, sucha, mięsista łodyga Cistanche deserticola, roślina z rodziny Orobaceae, która ma rozległe działanie farmakologiczne.Jego wodny wywar może znacznie zwiększyć odsetek fagocytarny i indeks fagocytarny makrofagów.Dalsze badania wykazały, że jego bazą surowcową jest polisacharyd całkowity Cistanche deserticola[3]. Zeng Qunli i in. [4] stwierdzili, że pojedynczy składnikPolisacharyd Cistanche deserticolama znaczący wpływ proliferacyjny na mysie limfocyty grasicy in vitro. EfektPolisacharyd Cistanche deserticolana proliferację limfocytów obserwowano in vivo i in vitro.

Formuła molekularna Cistanche deserticola

1. Materiał i metody

1.1 Leki i odczynniki

Polisacharyd z Cistanche deserticola jest dostarczany przez Zakład Roślin i Chemii Instytutu Medycyny i Sadzenia Akademii Medycznej. Jest wydobywany zEkstrakt Cistanche w proszku, a zawartość polisacharydów wynosi 87 proc.

Ekstrakt Cistanche w proszku

Przed użyciem w doświadczeniach in vivo rozpuścić i rozcieńczyć solą fizjologiczną do wymaganego stężenia i gotować w celu sterylizacji. Przed zastosowaniem eksperymentów in vitro pożywkę hodowlaną RPMI-1640 rozpuszczono i rozcieńczono, a następnie przeprowadzono sterylizację wysokociśnieniową. Lipopolisacharyd (LPS), konkanawalina (ConA), deksametazon (DEX) i MTT są produktami firmy Sigma Corporation. Cyklofosfamid, chińsko-amerykańska spółka joint venture Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd. Bydlęca surowica płodowa, pożywka hodowlana RPMI1640 i trypsyna to produkty firmy Gibco. Inne odczynniki to domowe odczynniki analityczne.

1.2 Zwierzęta

Młode myszy BALB c (poziom SPF) są dostarczane przez Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Pekin) 2002-2003]. Zwierzęta klasy SPF są hodowane w pokoju i swobodnie jedzą i piją.

1.3 Aparatura

Marker enzymatyczny Multikan Ascent, produkt firmy Thermo Electron Company, USA. Precyzyjny miernik pH Leici PHS{0}}B, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd. Inkubator z dwutlenkiem węgla Napco 5410, NAPCO, USA. BCN{2}} Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. Mikroskop odwrócony XDS-1B, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.

1.4 Metoda

1.4.1 Wpływ na proliferację limfocytów [5]:

Rutynowe przygotowanie limfocytów śledziony od myszy BALL c, przy użyciu RPMI -1640 w celu dostosowania stężenia komórek do 1 × 107 ml, zaszczepionych na 96-dołkowej płytce hodowlanej, dodając 100 zawiesin komórek do każdego dołka μ 50. -hodowane z różnymi stężeniamiPolisacharyd Cistanche deserticola(końcowe stężenie okPolisacharyd Cistanche deserticoladla proliferacji nieaktywowanych limfocytów wynosiła kolejno 6,25, 12,5, 25, 50 i 100 mg/l; ostateczne stężeniePolisacharyd Cistanche deserticoladla proliferacji limfocytów T aktywowanych ConA wynosiła kolejno 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 i 62,5 mg/l; i końcowe stężeniePolisacharyd Cistanche deserticoladla proliferacji limfocytów B aktywowanych LPS wynosiła kolejno 1,56, 3,13, 6,25, 12,5 i 25 mg/l), a jako kontrolę zastosowano pożywkę ConA lub LPS, RPMI-1640. Całkowita objętość każdego otworu wynosi 200 μl, po dodaniu mitogenu ConA i LPS (kontrola to RPMI{11}} zawierająca odpowiednie stężenia ConA lub LPS), końcowe stężenia obu wynoszą 2,5 mg l i 10 mg l, odpowiednio. Wykonano trzy równoległe otwory do różnych zabiegów. Umieścić płytkę hodowlaną w inkubatorze o temperaturze 37 stopni i wilgotności nasyconej 5% CO2 na 68 godzin, dodać MTT i kontynuować hodowlę przez 4 godziny. Zmierzyć wartość A540 nm za pomocą markera enzymatycznego, stosując metodę MTT w celu wykrycia proliferacji. Porównując każdą grupę, przelicz wartość A540nm na współczynnik proliferacji limfocytów zgodnie z następującym wzorem:wskaźnik proliferacji limfocytów=Próbka A kontrola × 100 procent .

Efekty Cistanche — Poprawa odporności

1.4.2 Wpływ na masę narządów odpornościowych u normalnych myszy [6,7]:

Młode myszy BALB c (samce, 4-tygodniowe, o masie ciała 10-15 g) losowo podzielono na ślepą grupę kontrolną (sól fizjologiczna) i różne grupy dawkowania (125 mg (kg mc.) i 250 mg (kg mc.)), po 11 szczurów w każdej grupie. Lek podawano dootrzewnowo raz dziennie przez 7 kolejnych dni. Myszy uśmiercono po zwichnięciu szyjki macicy. Pobrano śledzionę i grasicę, usunięto tkankę tłuszczową i powięziową, a ciecz powierzchniową osuszono bibułą filtracyjną. Po zważeniu wskaźnik śledziony =100 × Masa śledziony (mg) Masa ciała (mg); Indeks grasicy =100 × Masa grasicy (mg) Masa ciała (mg) Oblicz odpowiednio indeks śledziony i grasicy dla każdych 100 mg masy ciała.

1.4.3 Wpływ na masę narządów odpornościowych u myszy z obniżoną odpornością [7,8]:

Młode szczury BALB c (samce, 6 tygodni, masa ciała 15-20} g) podzielono losowo na 12 grup w zależności od masy ciała. Z wyjątkiem normalnej grupy kontrolnej (wstrzyknięcie dootrzewnowe równoważnej objętości soli fizjologicznej), pozostałym grupom wstrzykiwano codziennie dootrzewnowo Cy 50 mg (kg mc.), a roztwór badanego leku podawano dootrzewnowo [125 i 250 Mg (kg mc. bw)], normalnej grupie kontrolnej i grupie modelowej podawano taką samą objętość soli fizjologicznej przez 13 kolejnych dni, raz dziennie. Podczas doświadczenia obserwowano zmiany masy ciała zwierząt. 24 godziny po ostatnim podaniu zmierzono i obliczono wskaźniki śledziony i grasicy stosując tę ​​samą metodę jak w 1.4.2.

1.4.4 Wpływ na aktywność IL-2:

① Indukcja IL-2 [9]: Dodaj 50 do każdego dołka w 96-dołkowej płytce z komórkami μ L Różne stężeniaPolisacharyd Cistanche deserticola(stężenia końcowe w kolejności: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 62,5, 125 mg/L, dodać 50 mg/L do kontrolnej pożywki hodowlanej μ L) i 50 μ L ConA (stężenie końcowe 5 mg/L), dodać 1 więcej na studzienkę × 106 komórek śledziony. Inkubować w inkubatorze z wilgotnością nasyconą 5% CO2 o temperaturze 37 stopni przez 24 godziny, wirować przez 20 minut przy 2500 obr./min, a następnie pobrać supernatant komórek i przechowywać go w - 20 stopniach gotowości. ② Wykrywanie aktywności IL-2 [9,10]: Podstawowa metoda oparta jest na literaturze [9], a odpowiednie poprawki są dokonywane zgodnie z literaturą [10]. Konwencjonalne przygotowanie zawiesiny tymocytów myszy BALB c, 96-dołkowa płytka do hodowli komórkowej, 1 inokulacja na dołek × 106 tymocytów, dodając jednocześnie 50 komórek na dołek μl ConA (końcowe stężenie 2,5 mg/l), a następnie dodać przygotowaną IL{{34 }} supernatant 50 μl (dodać 50 do ślepej próby kontrolnej μl roztworu hodowlanego), inkubować razem przez 54 godziny, dodać MTT, kontynuować inkubację przez 4 godziny, wirować przez 10 do 15 minut przy 1000 obr./min, odrzucić supernatant, i dodać DMSO 100 μl na studzienkę, wstrząsać mikrooscylatorem przez 8 min i zmierzyć wartość A540 nm markerem enzymatycznym.

1.5 Analiza statystyczna

Dane wyrażono jako średnią i odchylenie standardowe (x ± s). Do zestawienia danych użyto oprogramowania Microsoft Excel i przeprowadzono test t. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2.Wyniki

2.1 Wpływ na proliferację limfocytów

Jak widać z tabeli 1, dodaniePolisacharyd Cistanche deserticolado pożywki hodowlanej mysich limfocytów śledziony hodowanych in vitro w stężeniu powyżej 25 mg/l może znacząco stymulować proliferację limfocytów, co wskazuje, żePolisacharyd Cistanche deserticolasam ma efekt mitotyczny. W tym samym czasie,z Tabeli 2 i Tabeli 3 widać, że CDPS ma znaczący wpływ promujący na proliferację limfocytów T indukowanych przez ConA lub limfocytów B indukowanych przez LPS.

Tab.1 WpływPolisacharyd Cistanche deserticolana proliferację nieaktywowanych limfocytów (x ±s, n =3)

Uwaga: w porównaniu z grupą kontrolną,＊P <0.05. 

Tab.2 WpływPolisacharyd Cistanche deserticolana proliferację limfocytów T indukowaną przez ConA (x ±s, n =3)

Uwaga: w porównaniu z grupą ConA,＊P <0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 WpływPolisacharyd Cistanche deserticolana proliferację limfocytów indukowaną przez LPS (x ±s, n =3)

Uwaga: w porównaniu z grupą LPS,＊P <0.05 , ＊＊P <0.01. 

2.2 Wpływ na masę narządów odpornościowych u normalnych myszy

Jak widać z tabeli 4,Polisacharyd Cistanche deserticolamoże znacznie zwiększyć wskaźnik śledziony normalnych młodych szczurów BALB c, ale nie ma wpływu na grasicę.

2.3 Wpływ na masę narządów odpornościowych u myszy z obniżoną odpornością

z Tabeli 5,można zauważyć, że wskaźniki organów śledziony i grasicy myszy w grupie immunosupresyjnej Cy są niższe niż w grupie kontrolnej, orazPolisacharyd Cistanche deserticola(125, 250 mg/kg) może znacznie poprawić wskaźniki śledziony i grasicy.

2.4 Wpływ na aktywność IL{2}}

Jak widać z tabeli 6,kiedy dawkaPolisacharyd Cistanche deserticolaosiąga 7,82 mg/L, może znacząco zwiększyć uwalnianie IL-2 z mysich komórek śledziony.

Tab.4 EfektPolisacharyd Cistanche deserticolana masę narządów odpornościowych u normalnych myszy (x ±s, n =11)

Uwaga: w porównaniu z grupą kontrolną,＊＊P <0.01.

Tab.5 EfektPolisacharyd Cistanche deserticolana masę narządów odpornościowych u myszy z obniżoną odpornością ( x ±s, n =12)

Uwaga: w porównaniu z grupą kontrolną,## P <0.01;compared with the model group , ＊＊P <0.01.

Tab.6 WpływPolisacharyd Cistanche deserticolana produkcję IL-2 przez limfocyty śledziony u myszy (x ±s, n =3)

Uwaga: w porównaniu z grupą kontrolną,＊＊P <0.01. 

3. Dyskusja

Proliferacja limfocytów śledziony indukowana przez ConA i LPS u myszy jest eksperymentem in vitro mającym na celu wykrycie funkcji limfocytów T i B i jest ważnym wskaźnikiem swoistej zdolności immunologicznej. Badania wykazały, że gdy stężenie końcowePolisacharyd Cistanche deserticolajest powyżej 25 mg/l, może znacząco promować proliferację limfocytów, co wskazuje, że ma pewien efekt mitotyczny. W obecności mitogenu (ConA lub LPS) mniejsza dawkaPolisacharyd Cistanche deserticolamoże poprawiać odporność organizmu, wykazywać znaczną aktywność proliferacyjną. Wiemy, że ConA i LPS indukują głównie proliferację odpowiednio limfocytów T lub limfocytów B. Badania wykazałyCistanche w proszku korzyści zdrowotne: Polisacharyd Cistanche deserticolamoże promować zarówno proliferację limfocytów T, jak i limfocytów B, ale jej wpływ na proliferację limfocytów B jest znacznie silniejszy niż na limfocyty T.

Korzyści zdrowotne w proszku Cistanche — Immprovimmunitet

Kliknij tutaj, aby zobaczyć produkty Cistanche Immprove Immunity

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Grasica i śledziona to główne narządy odpornościowe zwierząt. Komórki odpornościowe w śledzionie to głównie dojrzałe limfocyty B, podczas gdy grasica to głównie niedojrzałe limfocyty T. Wskaźniki grasicy i śledziony mogą odzwierciedlać rozwój narządów odpornościowych i stan funkcjonalny komórek odpornościowych. Dootrzewnowe wstrzyknięcie polisacharydu Cistanche deserticola może znacznie zwiększyć wskaźnik śledziony myszy normalnych i myszy z obniżoną odpornością i ma znaczący efekt antagonistyczny na atrofię grasicy wywołaną przez Cy u myszy.Polisacharyd Cistanche deserticolanie ma istotnego wpływu na indeks grasicy u normalnych zwierząt, co jest zgodne z wynikami eksperymentów in vitro, w którychPolisacharyd Cistanche deserticolasprzyja proliferacji limfocytów B, a nie limfocytów T.

Cuzupełnienie istanche w pobliżu — poprawaodporność

IL-2 jest cytokiną wytwarzaną przez limfocyty T z fazy G1 cyklu komórkowego do fazy S. Jest to główny czynnik wzrostu limfocytów T, który działa jako autokrynny czynnik wzrostu. Ponadto IL{2}} może promować proliferację limfocytów B i syntezę przeciwciał [11,12].Polisacharyd Cistanche deserticolapromuje uwalnianie IL-2 z limfocytów, co jest oczywiście z tym związanePolisacharyd Cistanche deserticolapromowanie proliferacji limfocytów śledziony.

Badania medyczne wykazały, że Cistanche zawiera polisacharydy,Echinakozydy i Acteoside, które mogą aktywować limfocyty i immudowodnić odporność body; Funkcjonalne składniki glikozydów fenyloetanoidowych cistanche mają znaczący wpływ na regenerację komórek po uszkodzeniu promieniami gamma 60 Co, a także mogą poprawić funkcje odpornościowe przed uszkodzeniem przez promieniowanie.Codzienne przyjmowanie suplementu Cistanche deserticola pozwala osiągnąć efekt poprawy odporności.

Csuplement istanche w pobliżu — Poprawa odporności

odniesienie

[1] Schepetkin IA, Quinn MT. Polisacharydy botaniczne: immunomodulacja makrofagów i potencjał terapeutyczny [J]. Int Immunopharmacol, 2006, 6(3): 317-333.

[2] He Wei, Shu Xiaofen, Zong Guizhen i in. Badanie wpływu Cistanche deserticola na tonizację nerek i promowanie yang przed i po obróbce [J]. Chinese Journal of Pharmacy, 1996, 21 (9): 534-537

[3] Wang Xiangyan, Qi Yun, Cai Runlan i in. Aktywacja makrofagów polisacharydów Cistanche deserticola [J]. Chiński Biuletyn Farmakologiczny, 2009, 25 (6): 421-424

[4] Zeng Qunli, Zheng Yifan, Lv Zhiliang. Aktywność immunologiczna i mechanizm działania polisacharydu Cistanche deserticola [J]. Journal of Zhejiang University (edycja medyczna), 2002, 31 (4): 284-287

[5] Xu Shuyun, Bian Rulian, Chen Xiu. Farmakologiczna metodologia eksperymentalna [M]. Wydanie 3, Pekin: Wydawnictwo People's Health, 2002, 1427-1428

[6] Zhang Xu, Zhang Guorong, Che Wei i in. Wpływ chelatu chromu (Ⅲ) polipeptydu kolagenu na odporność myszy z cukrzycą [J]. Chinese Journal of Experimental Animals, 2008, 16 (1): 10-14

[7] Chen Qi. Metodologia badań farmakologicznych tradycyjnej medycyny chińskiej [M]. Pierwsza edycja. Pekin: Wydawnictwo Zdrowia Ludu, 1993:779

[8] Guo Jing, Xu Jianning, Wang Quankai i in. Wpływ ekstraktu z nasion soi (CKBN) na funkcje odpornościowe u myszy z obniżoną odpornością [J]. Chinese Journal of Comparative Medicine, 2008, 18 (12): 45-49

[9] Xu Shuyun, Bian Rulian, Chen Xiu. Farmakologiczna metodologia eksperymentalna [M]. Wydanie 3, Pekin: Wydawnictwo People's Health, 2002: 1440-1441

[10] Zhou Daohong, Shen Yuanshan, Zhao Manrui. Nowa metoda oznaczania transformacji limfocytów i aktywności mysiej interleukiny 2 - analiza kolorymetryczna MTT [J]. Chinese Journal of Immunology, 1986, 2 (1): 39-43

[11] Wang MQ, Guilbert LJ, Li J i wsp. Zastrzeżony ekstrakt z żeń-szenia północnoamerykańskiego (Panax quiquefolium) zwiększa produkcję IL{1}} i IFN- w mysich komórkach śledziony indukowanych przez Con-A [J]. Int Immunopharmacol, 2002, 4(2): 311-315.

[12] Tingjun H, Rongliang Z. Promocja polisacharydu subprosratu sophora na wytwarzanie tlenku azotu i interleukiny-2 w mysich limfocytach T: implikowany Ca 2 plus i kinaza białkowa C [J].Int Immunopharmacol, 2004, 4(1):109-118.