Wpływ echinakozydu na szczury z niedokrwieniem mózgu

Abstrakcyjny: Cel Badanie wpływuEchinozyd(ECH) nad neuroprzekaźnikami monoaminowymi w płynie zewnątrzkomórkowym prążkowia u szczurów z ogniskowym niedokrwieniem mózgu oraz w celu zbadania możliwego mechanizmu neuroprotekcyjnego działania ECH na mózg. Metody Szczury SD losowo podzielono na grupę kontrolną, grupę modelową, grupę ECH z dużą i niską dawką oraz grupę ligustrazyny (CXQ). Szczurom w każdej grupie podawano dootrzewnowo odpowiednie leki lub sól fizjologiczną raz dziennie przez 7 dni. Trzeciego dnia podawania tuleję sondy osadzono w prążkowiu mózgu. Godzinę po ostatnim podaniu wykonano szczurzy model ogniskowego niedokrwienia mózgu (MCAO). Po wykonaniu modelu niezwłocznie przystąpiono do mikrodializy. Dializat wstrzyknięto do wysokosprawnego detektora elektrochemicznego chromatografii cieczowej (HPLC-ECD) w celu oznaczenia zawartości norepinefryny (NE), dopaminy (DA), 5-hydroksytryptaminy (5-HT), 3 ,4-kwas dihydroksyfenylooctowy (DOPAC), kwas homowanilinowy (HVA), 5-kwas hydroksyindolooctowy (HIAA) w płynie zewnątrzkomórkowym prążkowia każdej grupy. Wyniki W porównaniu z grupą kontrolną, poziomy NE, DA i 5-HT w grupie modelowej wzrosły, a także wzrosły kwaśne metabolity DOPAC, HVA i HIAA. W porównaniu z grupą modelową zawartość sześciu substancji w grupach wysoko i niskodawkowych ECH (30, 15 mg · kg - 1 · d - 1) i CXQ uległa zmniejszeniu. Wnioski Neuroprotekcyjne działanie ECH może być związane ze wzrostem poziomu neuroprzekaźników monoaminowych po niedokrwieniu mózgu.

Proszek Cistanche

Słowa kluczowe: Echinozyd; Niedokrwienie mózgu; prążkowie; HPLC-ECD; Neuroprzekaźniki i metabolity monoaminowe

Echinaceozyd(ECH) jest skutecznym składnikiem glikozydów fenyloetanoidowych izolowanym i oczyszczanym zCistanche desericola, specjalny zakład w Xinjiangu. Badania wykazały, że ECH ma działanie neuroprotekcyjne, takie jak przeciwutlenianie [1-2], ochrona nerwów [3-4], działanie przeciwstarzeniowe [5] oraz poprawa uczenia się i pamięci [6-8). Wyniki Chen Honga i in. potwierdzili, że ECH ma działanie ochronne na neurony DA w chorobie Parkinsona [9]. Neuroprzekaźniki monoaminowe to rodzaj ważnych substancji regulujących czynności fizjologiczne organizmu.Zawartość tkanki może odzwierciedlać procesy biosyntezy, uwalniania, wychwytu i inaktywacji neuroprzekaźników [10-11). Obecnie nie ma odpowiedniego raportu na temat wpływu ECH na przekaźniki monoamin w mózgu szczurów z niedokrwieniem mózgu. W tym badaniu wpływ ECH na zawartość neuroprzekaźników monoaminowych w płynie pozakomórkowym prążkowia szczurów z niedokrwieniem mózgu zbadano przy użyciu technologii mikrodializy mózgu i wstępnie zbadano możliwy mechanizm ECH na neuroprotekcję mózgu.

Ekstrakt z Cistanche tubulosa w proszku

1.Materiał

1.1 Zwierzęta doświadczalne

Szczury SD, ♂, masa ciała 250 ~ 300 g (zakupione w Xinjiang Experimental Animal Center, numer licencji: 2009-0053).

1.2 Leki i odczynniki

ECH jest darem profesora Tu Pengfei, Szkoły Farmacji Uniwersytetu Pekińskiego (czystość powyżej 95%); Noradrenalina (NE), dopamina (DA), 5-hydroksytryptamina (5-HT), kwas 3,4-dihydroksyfenylooctowy (DOPAC), kwas homowanilinowy (HVA)

5-kwas hydroksyindolooctowy (HIAA) to Sigma; Chlorowodorek tetrametylopirazyny do wstrzykiwań (CXQ, Harbin Sanlian Pharmaceutical Co., Ltd.); Cement cynkowo-fosforanowy (produkt firmy Shanghai Medical Instruments Co., Ltd., składający się z płynu i proszku, zmieszanych z czasem); 1-alkilosiarczan sodu (DIKMA); Wodzian kwasu cytrynowego (Instytut Badań Chemicznych Tianjin Jinke); cytrynian trisodowy (Acros); Kwas etylenodiaminotetraoctowy disodowy (JTTakerChemicalco); Metanol (DIKMA); acetonitryl (DIKMA); Płyn perfuzyjny do mikrodializy mózgowej to złożony roztwór chlorku sodu do wstrzykiwań (Beijing Shuanghe Pharmaceutical Co., Ltd.); Cała używana woda to woda ponownie parowana.

1.3 Instrument

Amerykański aparat stereotaktyczny mózgu szczura BAS4100; Sonda CMA/12 i tuleja sondy; Urządzenie świadome dla zwierząt CMA/120; Mikropompa CMA/402; Automat do pobierania próbek niskotemperaturowych CMA/150. Pompa infuzyjna Esa 5600A; Pompa infuzyjna Esa 5600A; Automatyczne urządzenie do wstrzykiwania próbki Esa 542; Detektor elektrochemiczny CoulArray firmy ESA; Elektroda robocza z węglem szklistym i elektroda odniesienia Ag/AgCl; Kolumna C18 (DIKMA, ODS5 μm, 150 mm × 4,6 mm); Stacja chromatograficzna CoulArraywin (firma Esa); Mieszadło wirowe (typ QL-861); Pulpitowy tester kwasowości (HANNA-211); Wirówka stołowa szybkoobrotowa (typ XYJ-2).

2.metoda

Cistanche suplement blisko mnie — Imudowodnić pamięć

Kliknij tutaj, aby wyświetlić produkty Cistanche Improve Memory

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

2.1 Grupowanie zwierząt i administrowanie

Trzydzieści szczurów podzielono losowo na pięć grup: ① Grupa kontrolna: 1 ml · kg-1 · d-1 soli fizjologicznej; ② Grupa modeli: sól fizjologiczna 1 ml · kg-1 · d-1; ③ Model + ligustrazyna (CXQ) 30 mg · kg-1 · d-1; ④ - ⑤ Model+ECH grupy o wysokiej i niskiej dawce (ECHB, ECHS): 30, 15 mg · kg-1 · d-1; Wszystkim zwierzętom w każdej grupie wstrzykiwano dootrzewnowo przez 7 dni.

2.2 Metoda modelowania i mikrodializa

Każdego szczura zakopano z kaniulą trzeciego dnia podawania: szczury znieczulono 10% wodzianem chloralu (3,5 ml · kg-1), umocowano w aparacie stereotaktycznym mózgu BAS4100 i cewnik sondy wszczepiono do lewego prążkowia (współrzędne AP:+0,2 mm; ML: - 3,0 mm; DV: - 3,5 mm) w odniesieniu do „Stereotaktycznej mapy mózgu szczura” George'a Paxinosa. Po ostatnim podaniu szczury uśpiono 1 godzinę później i u szczurów wykonano model ogniskowego niedokrwienia mózgu (model MCAO) przy użyciu ulepszonej metody szwów Longa Yanga Zanzhanga [12]. Żyłkę w grupie kontrolnej włożono tylko na 10 mm, a pozostałe kroki były takie same jak w grupie operacyjnej. Po wymodelowaniu wprowadzić sondę do mikrodializy w stanie świadomego i swobodnego ruchu i zastosować roztwór Ringera do μ Mikrodializat mózgowy zebrano w temperaturze 4 stopni, a probówkę z dializatem po 20 minutach. Po pobraniu każdej probówki z dializatem należy ją natychmiast przechowywać w lodówce o temperaturze - 20 stopni, a po dializie przenieść do lodówki o temperaturze - 70 stopni. Przed użyciem mierzono stopień odzysku sondy, co posłużyło do przeliczenia stężenia neuroprzekaźników monoaminowych w dializacie.

co robi cistanche tubulosa — poprawia pamięć

2.3 Analiza HPLC-ECD

Konfiguracja fazy ruchomej: faza ruchoma zawiera 829 ml buforu 0,15mol · L-1 kwas cytrynowy-cytrynian sodu na litr; 0,1mol · L-1 EDTA disodowy 1 ml; Metanol 150ml; {{10}}siarczan sodu 0}}alkilowy 0.283g. Ustaw natężenie przepływu fazy ruchomej na 0,7 ml · min-1, a temperaturę pieca kolumnowego na 28 stopni. Napięcie robocze detektora elektrochemicznego wynosi 200mV, 400mV i 600mV, odpowiednio z 2, 3 i 4 kanałami; Zysk wynosi 2nA. Objętość wtrysku wynosi 25 µl. Krzywą standardową rysuje się dla mieszanego roztworu wzorcowego o gradiencie 0,025, 0,05, 0,1, 0,2, 0,5 mg · L-1.

2.4 Przetwarzanie statystyczne

Dane eksperymentalne wyrażono w polu x ± s, a dane z powtarzanych pomiarów analizowano za pomocą oprogramowania statystycznego SPSS13.0.

Ryc. 1-6 przedstawia zmiany w poziomach NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA i 5-HT w płynie zewnątrzkomórkowym prążkowia szczura. Z rysunku widać, że po niedokrwieniu mózgu neuroprzekaźniki monoaminowe w płynie zewnątrzkomórkowym prążkowia mają zaburzenie metaboliczne, a zawartość każdego neuroprzekaźnika wzrosła. W pewnym zakresie wzrost jest bardziej wyraźny wraz z wydłużeniem czasu niedokrwienia. Po 90 minutach niedokrwienia stężenie DA i NE w płynie zewnątrzkomórkowym prążkowia było ponad trzykrotnie wyższe niż w grupie kontrolnej. Poziomy NE, DA, DOPAC, HIAA, HVA i 5-HT w grupie kontrolnej spadły z wysokiego do niskiego, co może mieć związek z przejściowym niedokrwieniem lewego mózgu po podwiązaniu lewej tętnicy szyjnej wspólnej oraz uszkodzeń spowodowanych wprowadzeniem sondy. Z krzywej zmiany wynika, że ​​ECH i CXQ mogą zmniejszać szczytowe stężenie DA, DOPAC, HIAA, HVA i 5-HT po niedokrwieniu mózgu, a CXQ i ECH w dużych dawkach są bardziej oczywiste. Przesunięcie w dół krzywej przebiegu w czasie każdego neuroprzekaźnika wskazuje, że ECH może hamować wzrost neuroprzekaźników i ich metabolitów w mózgu szczurów z niedokrwieniem mózgu.

                                                                           Ryc. 2 Wpływ echinozydu na poziom zewnątrzkomórkowy DA w prążkowiu szczurów

Ryc. 3 Wpływ echinozydu na zewnątrzkomórkowy poziom DOPAC w prążkowiu szczurów Ryc. 4 Wpływ echinozydu na zewnątrzkomórkowy poziom wirusa HIV w prążkowiu szczurów

Ryc. 5 Wpływ echinozydu na poziom zewnątrzkomórkowy HVA w prążkowiu szczurów Ryc. 6 Wpływ echinozydu na poziom zewnątrzkomórkowy 5-przedsionka HT szczurów

4.Dyskusja

Cistanche Supermanaziele—Impromam pamięć

【Zapytaj o więcej】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Aplikacja Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Mechanizm uszkodzenia mózgu spowodowanego niedokrwieniem mózgu jest złożony. W przypadku niedokrwienia mózgu neuroprzekaźniki monoaminowe w mózgu ulegają zaburzeniu, a zawartość NE, DA i 5-HT jest znacznie zmniejszona. Im poważniejsze jest niedokrwienie mózgu, tym niższa jest zawartość NE, DA i 5-HT w tkance mózgowej [13]. Metodą mikrodializy śródmózgowej wykazano, że zawartość neuroprzekaźników monoaminowych wzrasta w płynie zewnątrzkomórkowym podczas niedokrwienia mózgu, utrzymuje się przez cały okres niedokrwienia, a następnie wzrasta wraz z wydłużeniem czasu niedokrwienia. Wyniki eksperymentów były zgodne z raportem [14].Echinozydjest skutecznym składnikiem glikozydów fenyloetanoidowych wyizolowanych i oczyszczonych z Cistanche Deserticola, specjalnej rośliny w Xinjiangu. Ma wiele efektów neuroprotekcyjnych, takich jak działanie przeciwstarzeniowe, poprawiające uczenie się i pamięć oraz przeciwdziałające apoptozie neuronów. W tym badaniu zastosowano zaawansowaną domową mikrodializę mózgu w połączeniu z technologią wykrywania HPLC-ECD, aby wstępnie zbadać wpływEchinozydna neuroprzekaźniki monoaminowe i ich metabolity w płynie zewnątrzkomórkowym prążkowia szczurów doświadczalnych z niedokrwieniem mózgu. Wyniki wykazały, że ECH może zmniejszać wzrost neuroprzekaźników monoaminowych w płynie zewnątrzkomórkowym prążkowia spowodowany niedokrwieniem mózgu i ma lepszy wpływ na poprawę uszkodzeń tkanki niedokrwiennej mózgu.