Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Yu Lixin Chen Xueqiang Wu Qunfeng Dong Weiqin Guo Songhua Yu Jian Feng Wei Yang Lei Fu Yifeng Li Junjie Luo Cheng

1 98. Szpital Chińskiej Armii Ludowo-Wyzwoleńczej, Huzhou, Zhejiang 313000

2 Uniwersytet Tradycyjnej Medycyny Chińskiej Zhejiang, Hangzhou, Zhejiang 310053

3 Szpital ortopedyczny Fuyang Traditional Chinese Medicine, Hangzhou City, prowincja Zhejiang, Hangzhou 311400, Zhejiang, Chiny

Abstrakcyjny

Cel: Obserwacja efektuCistancheekstrakt wodnyw sprawie uzdrowieniaosteoporotycznyzłamań u szczurów i zbadanie ich mechanizmu. Metody: Samice szczurów SD klasy SPF podzielono losowo na grupę kontrolną, grupę modelową i grupę leczoną i modelowano zgodnie z powiązanymi metodami. 24 godziny po modelowaniu złamań, grupie kontrolnej i grupie modelowej podano normalny zgłębnik soli fizjologicznej, a grupie leczonej zgłębnik zCistancheekstrakt wodny raz dziennie. Po 2 tygodniach i 6 tygodniach interwencji pobrano krew z aorty brzusznej w celu wykrycia interleukin. Poziomy TP (IL-1 B) i transformującego czynnika wzrostu-B l (TGF-8 1), pobrać próbki złamań w tym samym czasie, po utrwaleniu wykonać skan Micro-CT, zmierzyć R0 Frakcja objętościowa kalusa (BV/TV) i inne powiązane parametry Po odwapnieniu, odwodnieniu i zatopieniu został przerobiony na bloki woskowe do użytku. Wyniki: 6 tygodni po ustaleniu modelu osteoporozy gęstość mineralna kości szczurów w grupie modelowej i grupie leczonej była niższa niż w grupie kontrolnej (P<0.05), but="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" treatment="" group="" and="" the="" model="" group.="" although="" the="" bone="" density="" of="" the="" treatment="" group="" is="" still="" lower="" than="" that="" of="" the="" control="" group="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" it="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" the="" model="" group=""><0.05). micro-ct="" scan="" shows="" the="" treatment="" group="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" tb.="" n,="" tb.="" th,="" smi="" was="" better="" than="" the="" model="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks="" after="" the="" intervention,="" and="" the="" bv/tv,="" tb.="" sp,="" smi="" parameters="" of="" the="" control="" group="" and="" the="" treatment="" group="" were="" not="" different="" from="" those="" of="" the="" treatment="" group.="" obviously,="" the="" micro-ct="" parameters="" of="" the="" model="" group="" at="" 2-time="" points="" were="" inferior="" to="" the="" control="" group.="" after="" 2="" weeks="" and="" 6="" weeks="" of="" intervention,="" comparing="" the="" serum="" ilt="" b="" and="" tgf-p="" 1="" levels="" of="" the="" 3="" groups,="" it="" was="" found="" that="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" lower="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups="" at="" 2="" weeks.="" at="" 6="" weeks,="" the="" il-1="" p="" levels="" of="" the="" treatment="" group="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" other="" two="" groups.="" the="" control="" group,="" but="" still="" significantly="" lower="" than="" the="" model="" group=""><0.05); in="" terms="" of="" tgf-b="" 1="" level,="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistical="" difference="" between="" the="" control="" group="" and="" the="" control="" group.="" significance.="" conclusion:="" according="" to="" the="" analysis="" of="" bone="" mineral="" density,="" micro-ct="" scan="" parameters,="" and="" serum="" il-1="" b="" and="" tgf-b="" 1="" levels,="" it="" is="" found="" that="" the="" aqueous="" extract="" of="">Cistanchemoże promować gojenieosteoporotycznyzłamań, a jego mechanizm może być związany z hamowaniemosteoporotycznyzłamania. Po szczurzej surowicy IL-1 B i pobudzać wydzielanie TGF-8 1, co może poprawić osteoporozę i przyspieszyć gojenie się złamań.

Słowa kluczowe: złamanie osteoporotyczne, Cistanche, gojenie złamań, szczur

Osteoporoza to choroba, w której gęstość kości jest zmniejszona, drobna struktura tkanki kostnej ulega zniszczeniu, a kruchość kości jest zwiększona. Pacjenci mogą w codziennym życiu powodować złamania pod wpływem niewielkiej siły zewnętrznej. Jest to powszechna choroba kliniczna i często występująca choroba. Co więcej, ten typ złamań dotyczy głównie pacjentów w podeszłym wieku, często związanych z innymi chorobami, a większość złamań jest rozdrobniona, ze słabą stabilnością, a czasami dochodzi do powolnego lub braku zrostu gojenia złamań, a także występuje wysoki wskaźnik niepełnosprawności i śmiertelności. Obecnie jej leczenie odbywa się głównie poprzez chirurgię, odbudowę manualną oraz leczenie przeciwosteoporozy. Brakuje leków celowanych dla pacjentów z:osteoporotycznyzłamania. Tradycyjna medycyna chińska ma długą historię leczenia osteoporozy i ma pozytywny wpływ. Udowodniono, że wiele tradycyjnych chińskich leków poprawia kości. Biedność może również sprzyjać gojeniu się złamań. Rongrong jest powszechnie stosowany jako reprezentatywny lek do odżywiania yang nerek i ma działanie odżywiające wątrobę i nerki. Tradycyjna medycyna chińska uważa, że ​​nerki rządzą kością, a leczenie złamań jest również nieodłączne od nerki i esencji. Współczesna farmakologia odkryła, że ​​popiół mięsny ma również pewne działanie estrogenne. Niniejsze badanie ma na celu wykorzystanie pomiaru gęstości kości, mikrotomografii i interleukiny surowicy-13 (IL-10), obserwacji poziomu transformującego czynnika wzrostu-P KTGF-P 1) oraz ekstraktu wodnego z pasty przepukliny mięsnej na uzdrowienieosteoporotycznyzłamania u szczurów

Cistanche

1Materiały i metody

1.1 Zwierzęta doświadczalne i wyposażenie odczynników: 52 samice szczurów SD SPF ważące 210~250g są hodowane w Animal Experiment Center of Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine. Jod złożony, Hangzhou Lonzo Medical Disinfectant Co., Ltd., numer serii 20160720; Penicylina, North China Pharmaceutical Co., Ltd., numer serii F3117217; zestaw IL-18 (numer serii: 20160715), zestaw TGF-8 1 (numer serii: 20160722); Dwuenergetyczny rentgenowski skaner gęstości kości, 0STE0C0RE2; Micro-CT, Skyscan1176O

1.2 EkstrakcjaCistancheekstrakt wodny: moczyć ziemięcistanche(Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutical Factory) 10 razy ultraczysta woda przez 0,5 godziny, wywar z patelni przez 1,5 godziny, powtórz ekstrakcję 2 razy i mieszany płyn leczniczy z obrotowym parowcem Koncentrat do stężenia 1,5 g /ml i przechowywać w lodówce w 4 stopniach do późniejszego użycia.

1.3 Przygotowanie modelowania: Punkty są następujące.

1.3. 1 Model osteoporozy: Szczury hodowano adaptacyjnie przez 1 tydzień przed modelowaniem i losowo podzielono na grupę kontrolną, grupę modelową i grupę leczoną, odpowiednio z 16 szczurami, 18 szczurami i 18 szczurami, a każda grupa opierała się na punkcie czasowym 2 tygodnie i 6 tygodni. Każda została podzielona na dwie grupy. Zarówno grupa leczona, jak i grupa modelowa zostały znieczulone 1% pentobarbitalem sodu (0.4ml/100g), skórę znieczulono, zdezynfekowano, obłożono i rozcięto. Usunięto obustronne jajniki szczura. Grupa kontrolna miała tylko nacięcie. Nie rób

Usunięcie jajników

1.3. 2 Model złamania: 6 tygodni po przygotowaniu modelu osteoporozy zostanie przygotowany model złamania. Po znieczuleniu szczurów w każdej grupie mierzy się gęstość mineralną kości środkowej kości udowej. , Nacięcie, wykonać model złamania poprzecznego kości udowej środkowej, umocować drutem Kirschnera 1mm, wysterylizować i zszyć skórę nacięcia

1.4 Interwencja lekowa: po modelowaniu przeprowadzono detekcję kości udowej za pomocą promieni rentgenowskich, szczury, którym nie udało się przygotować modelu, wyeliminowano i po modelowaniu wstrzyknięto domięśniowo 80 000 jednostek penicyliny, aby zapobiec infekcji. 24 godziny po operacji grupie leczonej podawano wodny ekstrakt pasty z przepukliny mięsnej (stężenie 1,5 g/ml, 1 g/kg, raz dziennie). Grupie kontrolnej i grupie modelowej podano tę samą objętość soli fizjologicznej.

1.5 Pobieranie próbek: Próbki od szczurów pobrano 2 i 6 tygodni po interwencji. Po znieczuleniu 1% pentobarbitalem sodu z aorty brzusznej pobrano 5-10ml krwi w celu przygotowania surowicy i przechowywano w lodówce -20B. zapasowy. Następnie szczury uśmiercono, pobrano próbki złamania kości udowej i umieszczono w 10% obojętnym formaldehydzie na 72 godziny.

1.6 Wskaźniki testowe: Punkty są następujące.

1.6. 1 Gęstość mineralna kości: Wszystkie szczury po modelu osteoporozy znieczulono przed modelem złamania, a następnie zmierzono gęstość mineralną kości środkowej kości udowej. Trzy grupy szczurów otrzymały próbki po 2 i 6 tygodniach interwencji i próbki były utrwalane przez 72 godziny, a następnie ponownie zmierzono gęstość kości.

1.6. 2 Mikro-TK: Skan mikro-TK jest wykonywany po utrwaleniu próbki przez 72 godziny, z 200 obrazami powyżej i poniżej końca złamania jako obszarem zainteresowania (R01), kąt skanowania 360 stopni, prąd 555uA, napięcie 42kV, filtr Al 0,2mm, rozdzielczość 8,73um, po zakończeniu trójwymiarowej rekonstrukcji obrazu i analizy kalusa. Parametry wykrywania są następujące: frakcja objętości kości BV/TV, czynnik modelu beleczkowania kości (Tb.Pf); wskaźnik modelu strukturalnego (SMI) itp."

1.6.3 Oznaczanie IL-1P i TGF-P1 w surowicy: Rozmrozić szczurzą surowicę z lodówki w stopniu -20 i przeprowadzić detekcję krok po kroku zgodnie z IL-13 i TGF"1 instrukcje zestawu.

1.7 Metody statystyczne: do przetwarzania użyj oprogramowania do analizy statystycznej SPSS.19. Dane doświadczalne wyrażono jako średnią ± odchylenie standardowe (G±s) i gęstość mineralną kości trzech grup szczurów. Parametry Micro-CT JL-1 P Poziomy JGF-P 1 są uśredniane za pomocą jednokierunkowej analizy wariancji i stosuje się porównania parami między grupami Kontrola, poziom kontroli to P<0.>

2 wyniki

2.1 Gęstość kości trzech grup: patrz Tabela 1.

Tabela 1 Wyniki gęstości mineralnej kości w środkowej kości udowej każdej grupy szczurów (x±s, g/cm²)

Uwaga: W porównaniu z grupą modeli, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group.△=""><>

2.2 Dwuwymiarowy przekrój poprzeczny Micro-CT: strzałkowy dwuwymiarowy przekrój wybiera obrazy podłużnej osi kości udowej w każdym punkcie czasowym w każdej grupie (patrz Rysunek 1), a poziomy dwuwymiarowy przekrój poprzeczny sekcja wybiera dla porównania setne zdjęcie poniżej linii złamania (Rysunek 2) ), na rysunku widać, że kalus w każdej grupie stopniowo powiększał się w czasie, ale był plastyczny w różnym stopniu 6 tygodni po złamaniu; jednocześnie można zauważyć, że kalus w grupie kontrolnej był duży, a kora kalusa była gruba i pełzała przez linię złamania po 6 tygodniach, podczas gdy kalus w grupie modelowej w kalusie było mniej kości 2 tygodnie, a kora kalusa była luźna po 6 tygodniach. Chociaż objętość kalusa w grupie leczonej nie była duża po 2 tygodniach, masa kości w kalusie była większa niż w grupie modelowej. Kalus był lepiej ukształtowany po 6 tygodniach. A linia złamania nie jest oczywista.

Grupa kontrolna Grupa modelowa Grupa leczona

Rycina 1 Przekrój strzałkowy środkowej kości udowej każdej grupy

Rycina 2 Poziomy przekrój środkowej kości udowej każdej grupy

2.3 Trójwymiarowa rekonstrukcja Micro-CT: trójwymiarowa rekonstrukcja kostniny na złamanym końcu kości udowej jest pokazana na rycinie 3. Na rycinie 3 widać, że kalus utworzył się wzdłuż okostnej na obu końcach złamania linia 2 tygodnie po złamaniu w każdej grupie, nici złamań w każdej grupie były nadal wyraźne, szczególnie w grupie modelowej i grupie leczonej, podczas gdy kalus w grupie kontrolnej był gruby i gruby, głównie z płytkami 6 tygodni po złamaniu . Dominowały kości gąbczaste i linia złamania zniknęła, podczas gdy grupa modelowa była luźnymi kośćmi, a linia złamania była niewyraźna, ale grupa leczona miała więcej kalusa, regularną i grubą kość beleczkowatą, a linia złamania nie była widoczna.

Rysunek 3 Trójwymiarowa rekonstrukcja kalusa R0I na złamanym końcu

2.4 Parametry Micro-CT: Użyj oprogramowania do analizy kalusa na złamanym końcu. Patrz Tabela 2 dla powiązanych parametrów.

Tabela 2 Porównanie parametrów Micro-CT każdej grupy (x±s)

Grupa kontrolna Grupa modelowa Grupa leczona

Uwaga: W porównaniu z grupą modeli, *P<0. 05;="" compared="" with="" the="" control="" group.=""><0.>

2.5 Poziom IL-1 P.TGF-P1 w surowicy: patrz Tabela 3.

Tabela 3 Porównanie poziomów IL-1 P JGF-0 1 w każdej grupie G±s, n=8)

Uwaga: W porównaniu z grupą modeli, *P<0.05; compared="" with="" the="" control="" group,=""><0.05 0="" 3="">

W ostatnich latach udowodniono w praktyce klinicznej, że tradycyjne chińskie leki Yinyangdian, fortuna Drynaria i ich związki (pigułki Qinga, tabletki Liuwei Dihuang itp.) znacznie poprawiają osteoporozę. Ten rodzaj medycyny chińskiej i związków chemicznych stosuje się głównie do odżywiania wątroby i nerek. Jest to zgodne z zasadą odżywiania nerek i odnowy mięśni w środkowym i późnym stadium złamania. „Dziesięć dni. Mięsista pasta do kończyn została po raz pierwszy opublikowana w „Shen Nong's Materia Medica”. Ciepła z natury ma funkcje odżywiania nerek i wzmacniania yang, uzupełniania esencji i szpiku, odżywiania krwi i nawilżania suchości oraz przyjemnego koloru i przedłużenie życia.

W tym badaniu gęstość mineralna kości w grupie leczonej była wyższa niż w grupie modelowej po 2 i 6 tygodniach interwencji (P<0.05). micro-ct="" scan="" bv/tv="" parameters="" showed="" the="" results="" and="" bone="" mineral="" density="" of="" the="" treatment="" group="" at="" two="" time="" points="" after="" the="" intervention="" the="" measurement="" results="" are="" consistent,="" and="" bv/tv="" is="" an="" important="" indicator="" for="" the="" evaluation="" of="">osteoporotycznygojenie złamań. Bezpośrednio odzwierciedla zawartość kości w kalusie. To pokazuje, że Rouganrong może mieć wpływ na promowanie osteogenezy. Analiza może być skuteczna w przypadku pasty z przepukliny mięsnej. Składniki mają działanie regulujące w górę BMP2, a BMP2 jest jednym z członków rodziny TGF-8. Wynik ten potwierdzają również inne parametry skanu Micro-CT (Tb. Spjb. N, Tb. Th. SMI). Tb. Sp i SMI odzwierciedlają właściwości biomechaniczne kalusa, a wartości w grupie leczonej są znacznie lepsze niż w grupie modelowej, co dodatkowo sugeruje, że Roudongrong ma wpływ na poprawę utraty kości, promowanie osteogenezy i przyspieszenie gojenia złamań.

Jeśli chodzi o poziomy IL-1B i JGF-P 1 w surowicy, po 2 tygodniach i 6 tygodniach interwencji stwierdzono, że poziom IL-1P w grupie leczonej był niższy niż w pozostałych dwóch grupy po 2 tygodniach i po 6 tygodniach. Chociaż poziom IL-1 B w grupie leczonej był wyższy niż w grupie kontrolnej, wciąż znacznie niższy niż w grupie modelowej (『<0.05); while="" the="" tgf-p="" 1="" level="" of="" the="" treatment="" group="" was="" higher="" than="" the="" model="" group="" and="" the="" control="" group="" at="" 2="" and="" 6="" weeks,="" and="" there="" was="" no="" statistically="" significant="" difference="" from="" the="" control="" group="" the="" level="" of="" il-1="" p="" directly="" affects="" the="" differentiation="" and="" activity="" of="" osteoclasts.="" an="" increase="" in="" its="" level="" will="" promote="" bone="" resorption="" and="" inhibit="" the="" proliferation="" and="" differentiation="" of="" osteoblasts.="" jhtgf-p="" 1="" is="" closely="" related="" to="" the="" proliferation,="" differentiation,="" and="" migration="" of="" osteoclasts.="" it="" has="" the="" effect="" of="" promoting="" cartilage="" and="" bone="" callus="" formation="" ⑵="" and="" accelerating="" the="" shaping="" of="" bone="" callus.="" this="" suggests="" that="">CistancheMócpoprawić utratę kości, promują osteogenezę i przyspieszają gojenie złamań. Może obniżyć poziom IL-13 wosteoporotycznyzłamania szczurów i zahamowanie złamań. Osiąga się aktywność komórek kostnych; dodatkowo może to być również związane z faktem, żeCistanchemoże zwiększać poziom TGF-B1 u złamanych szczurów, promować różnicowanie osteogenne oraz dojrzewanie i kształtowanie kalusa.

Podsumowując, na podstawie analizy gęstości mineralnej kości, parametrów skanu Micro-CT oraz poziomów IL-1P, TGF"1 w surowicy stwierdzono, że wodny ekstrakt zCistancheMócpoprawić utratę kościorazwspomagają gojenie złamań osteoporotycznych. Mechanizm może być z tym związany. Może hamować wydzielanie ILT 8 w surowicy i promować wydzielanie TGF-B 1 u szczurów poosteoporotycznyzłamań, poprawiając w ten sposób osteoporozę i przyspieszając gojenie złamań.

4 Referencje

[1] Ma Yuanzheng, Wang Yipeng, Liu Qiang i in. Wytyczne dotyczące diagnozowania i leczenia osteoporozy u osób starszych w Chinach (2018) [J], Chinese Journal of Osteoporosis, 2018, 24(12): 1541-1567.

[2] Gang Zhu, Sun Haibin, Gang Xu i in. Działanie terapeutyczne i mechanizm działania ekstraktu alkoholowego z przepukliny mięsnej u szczurów po usunięciu jajników z osteoporozą [J]. Journal of Jilin University (wydanie medyczne), 2018, 44(1): 68-72.

[3] Karvande A, Khedgikar V, Kushwaha P, et al. Ekstrakt z twardzieli z Dalbergia sissoo wspomaga gojenie złamań i jego zastosowanie u szczurów z osteoporozą wywołaną wycięciem jajników [J]. Journal of Pharmacy and Pharmacology, 2017, 69(10): 1381-1397.

[4] Kevin 0'Neill, Christopher MS, Nicholas AM i in. Ocena zaawansowania gojenia złamań u myszy za pomocą tomografii mikrokomputerowej[j]. Kość, 2012, (6): 1357-1367.

[5] Yao Xinmiao, Shi Xiaolin, Wang Jian i in. Konsensus ekspertów w sprawie stopniowej diagnozy i leczenia pierwotnej osteoporozy tradycyjną medycyną chińską w prowincji Zhejiang (2017) [J], Zhejiang Journal of Traditional Chinese Medicine, 2018, 53(4): 237- 241.

[6] Ma Meng, Zhang Zhiguo, Ma Xiaohui. Postęp badań w zapobieganiu i leczeniu osteoporozy za pomocą pojedynczych i złożonych leków chińskich [J]. China Medical Guide, 2018, 20(8) =477-481.

[7] Zhang Yuequan, Zheng Danhong, Xu Jianfeng i in. Wpływ puree z rodziny mięs pustynnych na ekspresję białka BMP-2 u szybko starzejących się myszy z osteoporozą [J]. Dziennik medyczny Ningxia, 2014, 36(12): 1114-1116