Odcisk palca natury — analiza przenikania przez skórę formuły roślinnych kryształów pokrzywy

Abstrakcyjny:

Wstęp: Kryształy roślinne to nowa koncepcja wytwarzania preparatów roślinnych. Ich zasada opiera się na zmniejszaniu części lub całych roślin. W tym badaniu zbadano wpływ środka powierzchniowo czynnego na liść pokrzywy PlantCrystals. W drugiej kolejności porównano zawartość materiału sypkiego i preparatu PlantCrystals. Ponadto po raz pierwszy zbadano penetrację skóry przez PlantCrystals.

Metody: Liście pokrzywy zmielono metodą homogenizacji wysokociśnieniowej. Rozmiary analizowano za pomocą mikroskopii świetlnej i statycznego rozpraszania światła. Aby zbadać wpływ mielenia, określono zawartość flawonoidów i karotenoidów ogółem oraz zmierzono zdolność przeciwutleniającą preparatu za pomocą całkowitej zawartości polifenoli i testu DPPH (1,1-difenylo-2-pikrylhydrazylu) .

Na koniec zbadano wpływ na penetrację skóry. Wyniki: Analiza wielkościowa wykazała stabilizujący wpływ środka powierzchniowo czynnego, a analiza chemiczna wykazała wyższą zawartość flawonoidów i polifenoli dla PlantCrystals. Wykazano, że penetracja preparatu do warstwy rogowej naskórka jest obiecująca; PlantCrystals wykazywały wizualnie wyższą fluorescencję i jednorodność w porównaniu z materiałem masowym. Wniosek: Koncepcja PlantCrystals poprawiła dostępność cennych składników i skuteczność penetracji. Wykorzystanie naturalnej fluorescencji chlorofilu do analizy penetracji preparatów roślinnych przez skórę okazało się wysoce skuteczne.

Skóra jest jednym z największych organów ludzkiego ciała, a oznaki jej starzenia ujawniają się stopniowo wraz z wiekiem. Starzenie się skóry charakteryzuje się suchością skóry, zwiększonymi zmarszczkami i zmniejszoną elastycznością. Cistanche zawiera dużą liczbę flawonoidów i polisacharydów, składniki te mają działanie przeciwutleniające, przeciwzapalne, przeciwutleniające i inne oraz mogą zapobiegać i odwracać starzenie się skóry.

Flawonoidy w Cistanche mogą hamować wytwarzanie i wychwytywanie wolnych rodników, zmniejszać uszkodzenia komórek skóry spowodowane stresem oksydacyjnym, chronić komórki skóry i opóźniać proces starzenia się skóry. Badania wykazały, że polisacharydy zawarte w Cistanche mogą stymulować wzrost i podział komórek skóry oraz poprawiać elastyczność i blask skóry.

Kliknij Cistanche Deserticola produkt uzupełniający

Słowa kluczowe:

przeciwutleniacze; przeciw starzeniu; Roślinne Kryształy; urtica dioica; penetracja skóry.

1. Wstęp

Wieczna młodość i piękno były od zawsze pożądane przez ludzkość, a próby ich osiągnięcia miały miejsce już w starożytności. Dziś idea ta została przełożona na strategie przeciwstarzeniowe. Celem nie jest już zachowanie ogólnego stanu zdrowia na zawsze, ale raczej kompleksowe wsparcie zdrowego organizmu i opóźnienie mechanizmów metabolicznych związanych z wiekiem [1,2]. Z kosmetycznego punktu widzenia działanie przeciwstarzeniowe jest związane głównie z wizualną percepcją ludzkiej skóry, ponieważ starzenie się można łatwo rozpoznać, np. zmarszczki lub zwiotczenie skóry [1,3].
Niemniej jednak skóry nie należy rozpatrywać wyłącznie z kosmetycznego punktu widzenia; jest największym narządem i barierą między ciałem a światem zewnętrznym [4]. Nienaruszona i zdrowa skóra jest zatem ważna również z medycznego punktu widzenia. Fotostarzenie (ekspozycja na promieniowanie UV) jest najczęściej określane jako egzogenny czynnik odpowiedzialny za starzenie się skóry wraz z innymi czynnikami, np. paleniem tytoniu czy zanieczyszczeniem powietrza [5]. Czynniki te często same są utleniaczami lub indukują procesy często związane z wytwarzaniem odpowiednio reaktywnych form tlenu (ROS) [1,6].

Co więcej, uszkodzona warstwa rogowa naskórka (SC) z utraconą funkcją barierową może powodować wytwarzanie RFT, uszkadzając w ten sposób leżące poniżej warstwy komórek, co skutkuje np. rozległym starzeniem, stanem zapalnym lub rakiem skóry. Dlatego dostarczanie antyoksydantów do skóry może opóźnić lub zapobiec niszczącemu działaniu ROS, wzmocnić SC i zwiększyć jego funkcję ochronną [7,8]. Obecnie przeciwstarzeniowe działanie przeciwutleniaczy zyskało na popularności, a wymagania konsumentów koncentrują się nie tylko na skuteczności i cenie produktu, ale także na trwałości [9]. Ostatnie badania wykazały, że materiały roślinne można w sposób zrównoważony uszlachetniać przez anodowanie, co może stymulować nieodkryty potencjał [10–12].

Opierając się na tych wynikach, PlantCrystals to nowa koncepcja przetwarzania roślin poprzez zmniejszenie rozmiaru całego materiału do niższego zakresu mikro- lub nawet nanowymiarowego bez potrzeby stosowania rozpuszczalników organicznych lub produkcji odpadów organicznych. Kolejną zaletą PlantCrystals w porównaniu ze zwykłymi ekstraktami jest rozbijanie komórek materiału organicznego. Prowadzi to do uwolnienia wszystkich substancji aktywnych z użytego materiału i ich zatrzymania w preparacie. Wręcz przeciwnie, ekstrakt jest ograniczony do pojedynczego lub części składników o podobnych właściwościach chemicznych (np. rozpuszczalnych w wodzie lub etanolu). W związku z tym w tym badaniu liście pokrzywy zwyczajnej (Urtica dioica), zwanej także „królową ziół”, zostały użyte do produkcji PlantCrystals i nałożone na skórę [13].

Zwykle SN jest znany jako środek moczopędny, ale działanie farmaceutyczne nie ogranicza się do tego. SN można przypisać liczne korzyści zdrowotne i nadal jest on badany pod kątem wielu efektów farmakologicznych, np. przeciwutleniaczy, przeciwdrobnoustrojowych, przeciwmitotycznych, przeciwbólowych, przeciwzapalnych i przeciwnowotworowych [14,15]. Biorąc pod uwagę skórę jako cel, SN ma wiele różnych składników o korzystnym działaniu, np. chlorofil, karotenoidy i polifenole [15,16]. Literatura podaje kilka korzystnych właściwości farmakologicznych po naniesieniu na skórę ekstraktów SN, np. działanie przeciwzapalne i przeciwutleniające [17].

Do tej pory PlantCrystals nigdy nie był stosowany i analizowany na skórze. Ponieważ PlantCrystals można wyprodukować z niezliczonej liczby roślin, korzystna byłaby analiza bez potrzeby stosowania zindywidualizowanej metody dla każdej próbki. Podejście do przezwyciężenia tego problemu polegało na wykorzystaniu jednej wspólnej cechy większości roślin: chlorofilu (aib) (Rysunek 1). Fluorescencja chlorofilu jest dobrze znana i badana [18]. Jeśli skrawki histologiczne wykażą penetrację chlorofilu w wystarczającej ilości, którą można rozpoznać za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej, można łatwo przeanalizować penetrację skóry przez preparaty roślinne.

Głównym celem tego badania było opracowanie preparatu SN PlantCrystals do stosowania na skórę i oszacowanie penetracji SC. SN nie był w przeszłości przetwarzany na PlantCrystals; w związku z tym pierwszym celem było ustanowienie procesu, który może zmniejszyć gruboziarnisty materiał do mniejszego mikrometra lub nawet mniejszego zakresu rozmiarów. Ponadto oceniono wpływ dodatkowego środka powierzchniowo czynnego na otrzymane rozmiary i aglomerację preparatu. Po drugie, zbadano zawiesinę masową i SN PlantCrystals za pomocą różnych testów w celu porównania zawartości polifenoli, flawonoidów i karotenoidów oraz zdolności przeciwutleniających. Abrahama i in. wykazali już, że wpływ zmniejszenia na aktywność zależy od wybranego zakładu i procesu produkcyjnego [11]. Dlatego nieuniknione jest porównanie materiału przetworzonego i materiału sypkiego, aby udowodnić, że zastosowany proces jest korzystny dla formułowanej rośliny. Po spełnieniu tych warunków wstępnych aplikacja na skórę została sprawdzona przy użyciu nowej koncepcji „odcisku palca natury” poprzez wykrycie naturalnej fluorescencji chlorofilu w celu oszacowania penetracji SC. Doprowadziłoby to do opracowania metody, która umożliwia szybką, łatwą i opłacalną możliwość oszacowania penetracji preparatów roślinnych w głąb skóry.

2. Materiały i metody

2.1. Produkcja PlantCrystal

Suszone liście SN o jakości ekologicznej zostały dostarczone dzięki uprzejmości firmy Blank's GmbH and Co. KG (Uplengen, Niemcy) (ryc. 2A). Gruboziarnisty materiał został zmniejszony za pomocą młynka do kawy (CM) (CG9100, AICOK, Guangdong, Chiny) w celu uzyskania sproszkowanej próbki do dalszej obróbki. Następnie sproszkowaną próbkę (ryc. 2B) zdyspergowano w wodzie w stężeniu 3 procent (wag./wag.). Dodatkowo wytworzono próbkę zawierającą 3 procent (wag.) zatwierdzonego przez FDA środka powierzchniowo czynnego TPGS (bursztynian glikolu polietylenowego tokoferolu, Gustav Parmentier GmbH, Frankfurt a. M., Niemcy). Obie próbki mieszano przez noc w temperaturze pokojowej, aby umożliwić pęcznienie cząstek dla lepszej przetwarzalności i aby upewnić się, że później nie nastąpi zmiana wielkości (CM plus S).

W kolejnym kroku próbki poddawano deaglomeracji za pomocą Ultra-Turrax (T 25 digital, IKA-Werke GmbH & Co. KG, Staufen, Niemcy) przez jedną minutę ze wzrostem prędkości obrotowej od 3000 do 25,{ {11}}. Następny etap wstępnego mielenia przeprowadzono za pomocą Miccra D27 (MICCRA GmbH, Heitersheim, Niemcy) w celu dalszego zmniejszenia rozmiaru większych cząstek. Próbki przetwarzano czterokrotnie ze wzrastającą prędkością obrotową przez 5 min przy 7{13}}, 12, 000, 18 000 i 24 000 obr./min.

Ostateczne rozdrobnienie cząstek przeprowadzono za pomocą homogenizacji wysokociśnieniowej (HPH) za pomocą LAB 40 (APV Gaulin, Lubeka, Niemcy) przy 500, 750, 1000 i 1500 barach po pięć razy (Rysunek 2C). Do analizy zawartości analizowano próbki bez TPGS, aby wykluczyć wpływ TPGS podczas pomiarów lub ewentualną dodatkową ekstrakcję lub ochronę składników aktywnych dzięki formulacji miceli TPGS [19]. Do badań penetracji skóry użyto próbek zawierających TPGS w celu zagwarantowania dobrej zwilżalności i rozprowadzalności preparatu PlantCrystals. Jako kontrolę, aby pokazać efekt zmniejszenia, zastosowano masową zawiesinę spęcznionych przez noc liści SN (ryc. 2A) o tym samym stężeniu.

2.2. Analiza wielkości cząstek

Do wizualnego badania próbek zastosowano mikroskopię świetlną (Olympus BX53, Olympus Cooperation, Tokio, Japonia). Dalszą analizę wielkości cząstek przeprowadzono metodą statycznego rozpraszania światła (SLS, Mastersizer 3000, Malvern Instruments, Kassel, Niemcy), przy współczynniku załamania światła 1,47 i współczynniku absorpcji 0,01. Wyniki obliczono jako rozkład objętościowy (D(v)) i numeryczny (D(n)). Dystrybucja wielkości oparta na objętości to D(v)0,x, co oznacza, że ​​x procent całkowitej objętości (podsumowanej objętości wszystkich cząstek) jest reprezentowane przez cząstki o wielkości równej podanej liczbie lub mniejszej.

Dlatego wartość D(v) podkreśla cząstki o większych rozmiarach do potęgi trzeciej i jest ważna przy sprawdzaniu dużych aglomeratów i cząstek. Liczbowy rozkład wielkości D(n){2}},x oznacza, że ​​x procent cząstek jest równy lub mniejszy od podanej wartości. Wartość D(n) ma ogromne znaczenie w badaniu skóry, ponieważ podkreśla główną frakcję wielkości cząstek obecnych w próbce, które są głównie zaangażowane w proces penetracji. Połączenie wyników wolumetrycznych i liczbowych powinno dać dalszy wgląd w przetwarzanie próbki i wpływ środka powierzchniowo czynnego na frakcje cząstek o dużych rozmiarach (D(v)) i frakcję cząstek głównych (D(n)).

2.3. Całkowita zawartość polifenoli

Test kolorymetryczny Folina-Ciocalteu wykorzystano do oceny całkowitej zawartości polifenoli, a następnie zdolności antyoksydacyjnej próbek [20]. Najpierw 100 µl zawiesiny SN zmieszano z 200 µl odczynnika Folina-Ciocalteu (Merck KGaA, Darmstadt, Niemcy) i 2 ml oczyszczonej wody, a następnie inkubowano w temperaturze pokojowej przez 5 minut. Następnie dodano 1 ml 20% (wag./obj.) Na2CO3 i inkubowano w ciemności przez 1 godzinę. Na koniec otrzymaną mieszaninę reakcyjną zmierzono spektroskopowo przy 765 nm (Multiskan GO, Thermo Scientific, Dreieich, Niemcy). Obliczenia zawartości przeprowadzono dla kwasu galusowego jako wzorca, a wyniki wyrażono jako równoważnik kwasu galusowego (mg GAE).

2.4. Zawartość flawonoidów

Do oznaczenia zawartości flawonoidów wykorzystano reakcję tworzenia kompleksu glinu, która jest szeroko stosowaną metodą spektrofotometryczną do oznaczania różnych związków flawonoidowych w próbkach żywności i roślin [21]. Następnie 100 µl każdej rozcieńczonej zawiesiny dodano do 100 µl 2% (wag./obj.) roztworu AlCl3 w etanolu w 96-studzienkowej płytce i inkubowano w ciemności przez 1 godzinę. Następnie zmierzono absorbancję próbek przy 420 nm. Obliczenia zawartości przeprowadzono w odniesieniu do kwercetyny (Biomol GmbH, Hamburg, Niemcy) jako wzorca, a wyniki wyrażono jako ekwiwalent kwercetyny (µg QE).

2.5. Całkowita zawartość karotenoidów

Zawartość karotenoidów w próbkach oznaczono mierząc widmową absorpcję karotenoidów przy określonej długości fali, stosując metodę według Rodrigueza-Amayi [22]. Absorbancję każdej próbki mierzono przy 450 nm. Obliczenia wykonano na podstawie krzywej wzorcowej karotenu (TCI Deutschland GmbH, Eschborn, Niemcy), a wyniki wyrażono jako ekwiwalent µg karotenu (µg CE).

2.6. Zdolność przeciwutleniająca

Zdolność antyoksydacyjną oceniano za pomocą testu DPPH, w którym jako wskaźnik wykorzystuje się wolne rodniki 1,1-difenylo{2}}pikrylhydrazylu (DPPH) [23]. Pokrótce, przygotowano 0,2 mM metanolowy roztwór DPPH (Sigma-Aldrich Corporation, St. Louis, MO, USA) i 100 µl rozcieńczonych próbek dodano do 96- płytki studzienkowej i zmieszać z 100 µl roztworu DPPH. Płytkę inkubowano w ciemności przez 30 min i mierzono absorbancję przy 517 nm [23]. Aktywność wychwytywania wolnych rodników obliczono według następującego równania:

gdzie procent RSA to aktywność wychwytywania rodników w procentach, ADPPH to absorbancja DPPH, a próbka to absorbancja próbki. Stężenia próbek i odpowiadające im procenty RSA wykreślono na wykresie w celu obliczenia wartości IC50.

2.7. Analiza statystyczna

Analizę statystyczną danych przeprowadzono za pomocą oprogramowania GraphPad Prism® (wersja 8.3, GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA, USA), a do porównania zastosowano sparowany test t, gdzie wartości p < {{4 }} 0,05 uznano za istotne statystycznie.

2.8. Oznaczanie penetracji przez skórę

Badania penetracji skóry przeprowadzono na świeżych uszach wieprzowych, pozyskanych z lokalnej rzeźni jako produkt uboczny produkcji mięsa. Świńskie uszy są wykorzystywane jako model skóry ex vivo ze względu na podobieństwo skóry świni i skóry człowieka [24–26]. Po oczyszczeniu wodą oczyszczoną i dokładnym wysuszeniu ręcznikami papierowymi, 50 mg każdej próbki nanoszono na badany obszar o wymiarach 2 × 2 cm. Następnie preparaty wmasowywano w skórę przez 1 min za pomocą nasączonej rękawicy [27]. Wszystkie próbki inkubowano w temperaturze 32°C przez 6 godzin, a następnie powierzchnię skóry ostrożnie wytarto mokrymi ręcznikami papierowymi w celu usunięcia wszelkich pozostałości próbek.

Następnie pobrano biopsje stemplowe o średnicy 15 mm, zatopiono w Tissue-Tek® (Sakura Finetek Europe BV, Alphen aan den Rijn, Holandia) i natychmiast zamrożono w temperaturze -80°C. Kriosekracje na pionowe nacięcia o grubości 20 µm przeprowadzono za pomocą kriomikrotomu (Mod. 2700, Reichert-Jung, Nußloch, Niemcy). Obrazowanie fluorescencyjne wszystkich cięć wykonano za pomocą aparatu Olympus CKX53 (Olympus, Japonia), wyposażonego w źródło światła Olympus U-HGLGPS i 200- krotne powiększenie. Intensywność fluorescencyjnego źródła światła ustawiono na 50 procent . Czas ekspozycji utrzymywano na stałym poziomie 50 ms dla wszystkich obrazów. Filtrem wybranym do analizy był układ blokowy filtrów DAPI HC (filtr wzbudzenia: 540–560 nm, lustro dichroiczne: 570 nm, filtr emisji: począwszy od 580 nm (LP)).

3. Wyniki i dyskusja

3.1. Produkcja PlantCrystals i analiza wielkości cząstek

Produkcja PlantCrystals z grubego materiału sypkiego z liści SN zakończyła się sukcesem. HPH skutkowało bardzo małymi cząstkami i nie zaobserwowano żadnych nienaruszonych komórek pod mikroskopem świetlnym. Wyraźnego zróżnicowania próbek przetworzonych bez dodatkowej stabilizacji (ryc. 3A) i TPGS (ryc. 3B) jako środka powierzchniowo czynnego nie można było zaobserwować wizualnie po badaniu mikroskopem świetlnym. Tylko nieznacznie mniejszą skłonność do aglomeracji można było zauważyć dla próbki z TPGS jako środkiem powierzchniowo czynnym.

Objętościowa analiza wielkości cząstek za pomocą SLS wykazała, że ​​proces mielenia był w stanie zmniejszyć rozmiary z kilku 100 µm do niższego dwucyfrowego zakresu wielkości µm (D(v){{8 }}.50). Porównanie próbek wykazało, że środek powierzchniowo czynny miał rozpoznawalny wpływ na zmieloną i spęcznioną próbkę (CM plus S). Można było rozpoznać, że próbka bez środka powierzchniowo czynnego miała taką samą wartość D(v)0.10- jak próbka stabilizowana za pomocą TPGS (Rysunek 4), ale dla wyższych wartości D(v) rozmiary były mniej więcej podwojone . Ponieważ obie próbki były skomponowane i traktowane identycznie, z wyjątkiem dodatku środka powierzchniowo czynnego, pokazuje to, że TPGS był w stanie zapobiec większym aglomeracjom próbek podczas pęcznienia. Próbki poddane obróbce dały podobne wyniki dla wszystkich wartości D(v) z wyjątkiem D(v)0,99, co można zinterpretować jako oznakę wyraźnej aglomeracji dla próbki stabilizowanej TPGS (ryc. 4). Niemniej jednak należy wziąć pod uwagę, że D(v)0,99 jest znacznie zmienny i nie zawsze jest najbardziej wiarygodnym parametrem, ponieważ jedna lub kilka cząstek o większych rozmiarach może mieć duży wpływ, np. z powodu przygotowania próbki [28].

Uzyskane rozmiary są bardzo obiecujące w porównaniu z wynikami uzyskanymi dla materiału liściastego przez Abrahama i in. [11]. Pomiary SLS dały prawie takie same rozmiary i rozkłady wielkości dla ostatecznej formuły PlantCrystals. Możliwą wadą tego badania w porównaniu z Abrahamem i in. jest to, że wstępne mielenie nie było tak skuteczne w niniejszym badaniu i że użyto Miccra D27, która wprowadziła dużo ciepła i powietrza do próbki. Z drugiej strony, końcowe rozdrabnianie cząstek przez HPH było w tym badaniu łagodniejsze, ponieważ liczba cykli HPH została zmniejszona z 18 do 15 cykli przy ciśnieniach mniejszych lub równych 1000 bar oraz z 10 do 5 cykli przy ciśnieniu 1500 barów [11]. Podobne rozmiary uzyskane dla PlantCrystals w obu badaniach prowadzą w konsekwencji do interesującej teorii: Zastosowano dwa niezwykle różne procesy, a ponadto zastosowano dwa różne środki powierzchniowo czynne (lub nie użyto ich wcale), ale ostatecznie uzyskano podobne rozmiary. Prowadzi to do przypuszczenia, że ​​ubytek materiału roślinnego przez HPH jest do pewnego stopnia ograniczony. Przynajmniej dla liści SN (to badanie) i liści szałwii/laury (Abraham i in.), wskazania wydają się być bardzo silne i powinny być zbadane w przyszłych badaniach [11].

Ogólnie rzecz biorąc, oba badania pokazują, że HPH jest bardzo wydajny w produkcji PlantCrystals, ale wstępne mielenie jest nieuniknione, aby zapobiec zablokowaniu szczeliny tłoka. Nadal istnieje potencjał optymalizacji procesu produkcyjnego, który z jednej strony powinien być jak najbardziej efektywny, ale także wprowadzać do próbki jak najmniej ciepła i powietrza, aby zachować jak najwięcej składników, z drugiej .

Analiza numerycznego rozkładu wielkości cząstek ponownie wykazała, że ​​spęczniała próbka zawierała nieco większe rozmiary dla próbek bez środka powierzchniowo czynnego w porównaniu z próbkami zawierającymi TPGS (Rysunek 5). Przetworzona próbka miała podobne rozmiary dla niższych wartości D (D(n)0,10 i D(n)0,50), a duże różnice można było rozpoznać dla wyższych wartości D ( D(n)0,99.

Aby uzyskać lepszy obraz procesu, wpływu środka powierzchniowo czynnego i otrzymanych przetworzonych próbek, należy wziąć pod uwagę i połączyć wszystkie analizy wielkości (D(v), D(n), mikroskopia świetlna). Ogólnie rzecz biorąc, konfiguracja pomiarowa dla SLS nie pozwala na rozróżnienie między jedną cząstką o dużych rozmiarach a aglomeracją cząstek. Możliwe jest wykonanie dodatkowego rysunku 5. Numeryczny rozkład wielkości nieprzetworzonych i przetworzonych próbek SN. Lewy górny róg: bez środka powierzchniowo czynnego. Na dole, po lewej: ze środkiem powierzchniowo czynnym. Po prawej: Przeskalowane wyniki dla odpowiednich próbek PlantCrystals dla lepszej wizualizacji i porównania. Aby uzyskać lepszy obraz procesu, wpływu środka powierzchniowo czynnego i otrzymanych przetworzonych próbek, należy wziąć pod uwagę i połączyć wszystkie analizy wielkości (D(v), D(n), mikroskopia świetlna). Ogólnie rzecz biorąc, konfiguracja pomiarowa dla SLS nie pozwala na rozróżnienie między jedną cząstką o dużych rozmiarach a aglomeracją cząstek. Istnieje możliwość wykonania dodatkowych pomiarów w celu wykrycia aglomeracji, jeśli aglomeracja nie jest zbyt silna i można ją rozłożyć np. zmieniając prędkość mieszania lub sonikację [29,30].

Niemniej jednak procedury te nie są powszechnie stosowane i możliwe, że nie przyniosą pożądanego efektu. Szybkim i łatwym rozwiązaniem jest zastosowanie mikroskopii świetlnej, która umożliwia szybkie założenie, nawet w przypadku ciasnych aglomeracji. Jeśli chodzi o analizę mikroskopową, można było stwierdzić, że dla próbki bez TPGS skupiska były ciemniejsze, a ogólnie próbka wydawała się bardziej mętna. Z drugiej strony pojedyncze cząstki obu próbek wydawały się mieć ten sam zakres wielkości (ryc. 3). Oznacza to, że różnice w wielkości pomiarów SLS są najprawdopodobniej związane z aglomeracją, a nie z „rzeczywistymi” rozmiarami cząstek.

Dla interpretacji danych SLS ważne jest, aby wiedzieć, że wartości D(v) reprezentują i podkreślają cząstki o większych rozmiarach wykładniczo do potęgi trzeciej, podczas gdy wartość D(n) reprezentuje ilość cząstek [ 28]. Aby porównać wyniki, wykonano stosunek wartości D, dzieląc wartość D(v) lub D(n) próbki bez środka powierzchniowo czynnego przez odpowiednią wartość D z dodatkowym środkiem powierzchniowo czynnym (Tabela 1). Stosunek większy niż 1.{{10}} oznaczałby, że środek powierzchniowo czynny miał wpływ stabilizujący, podczas gdy stosunek niższy niż 1,0 wskazywałby na efekt destabilizujący, a stosunek 1,0 dokładnie oznacza brak efektu.

Dla próbki zmielonej na sucho i spęcznionej (CM plus S) silny wzrost stosunku wartości D(v)- pokazuje, że preferencyjnie dużym aglomeratom można zapobiegać przez TPGS, podczas gdy stały stosunek D(n)- wartość pokazuje, że stabilizacja za pomocą TPGS miała tylko niewielki wpływ na mniejsze aglomeraty lub pojedyncze cząstki. W przypadku przetworzonych próbek można zaobserwować coś przeciwnego; stosunek wartości D(v) jest prawie stały, ale stosunek wartości D(n) wzrasta wraz ze wzrostem wartości D(n). Oznacza to, że w przypadku próbek przetworzonych występują większe aglomeraty zi bez TPGS (D(v)). Z drugiej strony środek powierzchniowo czynny hamował aglomerację pojedynczych cząstek, a także można było przynajmniej do pewnego stopnia zredukować duże skupiska (D(n)).

Podsumowując, można podsumować, że TPGS jako środek powierzchniowo czynny nie miał większego wpływu na wielkość lub rozkład wielkości, ale efekt można rozpoznać. Nie zaobserwowano samostabilizującego działania preparatu PlantCrystals. Przeciwnie, preparat PlantCrystals skorzystał na dodaniu środka powierzchniowo czynnego. HPH po raz kolejny sprawdziła się jako wysoce skuteczna technika wytwarzania preparatów PlantCrystals i była w stanie zredukować rozmiar głównych cząstek do pożądanego zakresu około 1 µm lub poniżej. Wymaga to jednak wielu etapów wstępnego frezowania, aby zapobiec zablokowaniu maszyny i nie może być stosowana jako samodzielna technika [11].

3.2. Analiza treści i badania pojemności przeciwutleniającej (AOC).

W tej sekcji analizę przeprowadzono na początkowej nieprzetworzonej próbce (zawiesina w masie) i PlantCrystals w celu zbadania wpływu mielenia na bioaktywne substancje SN, zwłaszcza przeciwutleniacze. SN jest dobrze znany z zawartości polifenoli, flawonoidów i karotenoidów, które wykazują ogromne korzyści zdrowotne. Mają działanie przeciwutleniające, przeciwzapalne i przeciwnowotworowe, a także wiele innych działań [23,31,32].

Ponadto zawiera duże ilości chlorofilu, który wykazuje wyraźne działanie przeciwutleniające i antymutagenne; ponadto może być stosowany jako środek przeciwtrądzikowy i stymulujący tkankę [33,34]. Wszystkie te substancje bioaktywne mogą służyć jako doskonałe naturalne wsparcie dla wzmocnienia funkcji barierowej SC. Przeprowadzono kilka badań spektrofotometrycznych w celu zbadania wpływu technik mielenia na zawartość SN i przeciwutleniaczy. Zmierzono zawartość flawonoidów i karotenoidów przed i po przemiale. Ponadto do oszacowania zdolności przeciwutleniającej wykorzystano całkowitą zawartość polifenoli i oznaczenie DPPH. Wszystkie wyniki analizy zawartości i testów przedstawiono w tabeli 2.

Oczekiwano, że rozdrobnienie poprawi dostępność składników roślinnych poprzez zniszczenie komórek roślinnych, co powinno skutkować dalszym uwalnianiem związków aktywnych, poprawiając w ten sposób potencjał farmakologiczny preparatu. W związku z tym zaobserwowano znaczną poprawę zawartości flawonoidów (wartość p=0,0165). Dla materiału sypkiego wartość ta wynosiła 107 ± 2 µg QE i mogła zostać poprawiona do 288 ± 38 µg QE dla zawiesiny PlantCrystals.

Dlatego można stwierdzić, że HPH prowadzi do podwojonej dostępności flawonoidów w SN PlantCrystals w porównaniu z luzem. Ta poprawa jest szczególnie ważna dla podkreślenia skuteczności techniki PlantCrystals, ponieważ flawonoidy SN, takie jak kwas ursolowy i kwercetyna, są uważane za najważniejsze substancje aktywne odpowiedzialne za działanie przeciwstarzeniowe SN na skórę. Działanie to opiera się na zdolności składników do hamowania elastazy i kolagenazy [17]. Ponadto poprawa zawartości flawonoidów była wspierana przez zastosowanie pożywek hydrofilowych w preparacie PlantCrystals, jak Bourgeois et al. wykazali wyższość ekstraktu hydrofilowego pod względem działania przeciwutleniającego i przeciwstarzeniowego [17].

Uzyskane wyniki dla zawartości karotenoidów ogółem nie wykazały istotnej poprawy po procesie homogenizacji. Możliwą przyczyną tego jest ekspozycja na ciepło, powietrze i światło podczas produkcji, oprócz hydrofilowego charakteru preparatu, który może nie wspierać swobodnej dostępności lipofilowych substancji czynnych, takich jak karotenoidy [22].

Polifenole są dobrze znane ze swojego rozszerzonego zakresu korzyści zdrowotnych, takich jak przeciwutleniacze, środki przeciwdrobnoustrojowe, przeciwzapalne, przeciwwrzodowe, przeciwnowotworowe i wiele innych efektów [35-37]. SN jest uważany za bogate źródło różnego rodzaju polifenoli, takich jak kwas galusowy, kwas kawowy, kwas ferulowy, kwercetyna i rutyna [36,38]. Przeprowadzono analizę zawartości polifenoli, aby zapewnić lepsze zrozumienie preparatu. Ten test jest również uważany za test zdolności przeciwutleniającej i może mierzyć jednocześnie hydrofilowe i lipofilowe polifenole [39]. Porównywalnie z wynikami zawartości flawonoidów, całkowita zawartość polifenoli mogła ulec znacznej poprawie (wartość p=0,0013). Próbka PlantCrystals wykazała o 65 procent wyższą zawartość w porównaniu z materiałem masowym. Tak silnego wzrostu nie oczekiwano, ponieważ wcześniejsze badania Abrahama i in. wykazało wzrost o 1,1 procent po homogenizacji tylko dla nasion arganu [11]. Wyjaśnieniem tego mogą być różne przeciwutleniacze roślin: np. SN jest bogaty w przeciwutleniacze hydrofilowe i chlorofil, podczas gdy nasiona arganu zawierają głównie przeciwutleniacze lipofilowe.

Wyniki testu DPPH wykazały, że wartości IC50 preparatu nie można poprawić za pomocą technologii PlantCrystals. Test DPPH jest skutecznym testem przeciwutleniającym, który jest powszechnie stosowany w literaturze, ale ma główną wadę dotyczącą preparatów bogatych w karotenoidy i chlorofil. Obecność tych składników fotometrycznie pokrywa się z pomiarem DPPH, co prowadzi do fałszywie dodatniego odczytu. To nakładanie się może wyjaśniać nieoczekiwanie wysoką wartość IC50 dla preparatu PlantCrystals. Nie spodziewano się tego, ponieważ poprzednie preparaty PlantCrystals zawsze osiągały poprawę AOC analizowanego za pomocą testu DPPH [10,11,40].

Podsumowując, HPH był w stanie zwiększyć zawartość flawonoidów i AOC poprzez pomiary polifenoli, ale nie zawartość karotenoidów i pomiar AOC za pomocą testu DPPH. Z jednej strony możliwe ulepszenia można przypisać zmniejszeniu wielkości cząstek, co prowadziłoby do większej powierzchni, aw konsekwencji do lepszej dyfuzji i dostępności substancji czynnych. Niszczenie komórek roślinnych za pomocą HPH prowadzi również do lepszego uwalniania składników aktywnych.

Z drugiej strony technika rozdrabniania ma wpływ na stabilność fizykochemiczną składników. Procesy stosowane w tym badaniu wprowadzały do ​​preparatu w pewnym stopniu ciepło i powietrze, co mogło prowadzić do utraty wrażliwych składników, np. z powodu utleniania. Ochrona przed światłem, odpowiednie chłodzenie i sterylizacja próbki mogą być dalszymi ulepszeniami w produkcji PlantCrystals w przyszłych badaniach i zagwarantować lepszą ochronę cennych składników.

3.3. Oznaczanie penetracji przez skórę

W ostatniej części tego badania zbadano porównanie zachowania się penetracji zawiesin SN bulk i PlantCrystals. Mikroskopia fluorescencyjna umożliwiła wizualizację próbki liści SN na skórze poprzez śledzenie penetracji chlorofilu typu aib. SN słynie z dużych ilości tych naturalnych barwników, które odpowiadają za zielony kolor rośliny. Obie substancje mogą absorbować światło niebieskie (400–420 nm) i czerwone (640–680 nm), co skutkuje fluorescencją chlorofilu przy długości fali około 690 i 740 nm [41]. To czerwone światło fluoryzujące przez chlorofil można śledzić za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.

Wyniki badania penetracji skóry próbek liści SN przedstawiono na rycinie 6. Początkowo autofluorescencja skóry została dostosowana do minimum (ryc. 6A). Należy wspomnieć, że nawet chlorofil pochodzący z nieprzetworzonego materiału sypkiego wykazywał wizualnie wykrywalną fluorescencję w SC. Jednak penetracja skóry jest niespójna i niejednorodna (ryc. 6B). Preparat PlantCrystals wskazywał na bardziej spójną i postrzeganą wizualnie wyższą fluorescencję w SC (ryc. 6C).

Należy podkreślić, że stężenie materiału roślinnego jest takie samo, a główną różnicą jest wielkość cząstek i liczba zniszczonych komórek roślinnych. Oznacza to, że różnice w penetracji można wytłumaczyć dwoma efektami. Po pierwsze, rozerwanie komórek doprowadzi do większej zawartości wolnych chloroplastów, co skutkuje wyższym stężeniem, aw konsekwencji większym gradientem stężeń i lepszą penetracją [42,43]. Po drugie, nierozpuszczalny materiał i składniki są znacznie mniejsze w przypadku preparatu PlantCrystals, co byłoby porównywalne z efektami znanymi z nanokryształów, np. lepszą przyczepnością i skutecznością penetracji. Ponadto jednorodność byłaby poprawiona ze względu na mniejszy rozmiar cząstek i większą całkowitą powierzchnię kontaktu cząstek.

Niemniej jednak celem tego badania była penetracja SC i można zauważyć, że wyraźnego wpływu na głębokość penetracji nie można było zaobserwować wizualnie w PlantCrystals w porównaniu z materiałem sypkim. Fakt, że chlorofil wykazywał transdermalną penetrację do żywej skóry, nawet po HPH, można wyjaśnić, stosując regułę pięciu Lipińskiego do cząsteczki. Ta zasada jest pierwotnie stosowana do przewidywania wchłaniania lub przepuszczalności leków po podaniu doustnym. Stosowanie tej zasady w przewidywaniu penetracji leku przez skórę jest obecnie przedmiotem dyskusji (46).

Stwierdza, że ​​słabą przepuszczalność leku można przewidzieć, jeśli dla cząsteczki ma zastosowanie więcej niż jedno kryterium: więcej niż pięć grup donorowych wiązań wodorowych, grup akceptorowych wiązań wodorowych, masa cząsteczkowa większa niż 500 Da lub oktanol-woda współczynnik podziału (log wartość P) większy niż 5 (47. Chlorofil a i b oba spełniają wszystkie wymienione kryteria poza grupami donorowymi wiązań wodorowych (Rysunek 1). Wskazuje to na słabe właściwości penetracyjne jako takie dla cząsteczek. Zatem PlantCrystals może tylko w ograniczonym stopniu poprawiają konsystencję i głębokość penetracji chlorofilu przez skórę.Niemniej jednak produkcja PlantCrystals poprzez HPH zwiększyła ilość chlorofilu aib w SC.Można założyć, że jeśli chlorofil przenika bardziej jednorodnie i jest wyrażony w SC, inne aktywne substancje roślinne o wyższej przepuszczalności zostaną w dużej mierze dostarczone do skóry.

Biorąc pod uwagę, że SC był zamierzonym celem tego badania, technologia PlantCrystals jest bardzo obiecującym i wszechstronnym podejściem do formułowania, aby wykorzystać korzyści płynące z wielu naturalnych ziół na właściwości skóry. I tak na przykład wiele roślin ma działanie nawilżające zgodne z zasadami korneoterapii w celu uzyskania zdrowszej skóry [48,49]. Ponadto składniki, takie jak niezbędne nienasycone kwasy tłuszczowe, mają również pozytywne działanie, np. wzmacniają i naprawiają barierę skórną, a nawet mogą być stosowane jako środki zwiększające penetrację [50,51]. Wszystkie te pozytywne efekty substancji czynnych i substancji pomocniczych pochodzenia roślinnego są naturalnie włączane do preparatu PlantCrystals bez wytwarzania jakichkolwiek odpadów.

Ogólnie można wykazać, że mikroskopia fluorescencyjna może wykrywać przenikanie przez skórę preparatów roślinnych. Jest to interesujące nie tylko z naukowego punktu widzenia, ale także ze względów marketingowych i satysfakcji klienta, ponieważ działanie preparatu roślinnego (np. środka domowego lub maseczki do skóry) można łatwo udowodnić, np. za pomocą specjalnej lampy UV po zabiegach w gabinetach kosmetycznych. Z naukowego punktu widzenia metoda ta jest bardzo szybką i opłacalną metodą oceny skuteczności preparatu bez dodawania jakichkolwiek markerów fluorescencyjnych. Poza wadą polegającą na tym, że można analizować tylko aktywne składniki fluorescencyjne (głównie chlorofil, ale innych nie można wykluczyć), można przyjąć ogólne założenie dotyczące jednorodności i ilości. Ponadto w przypadku badań skóry z użyciem PlantCrystals lub materiałów pochodzenia roślinnego koncepcja „odcisku palca natury” umożliwia analizę działania preparatu (np. użytej bazy (żeli, kremów itp.) lub środków zwiększających penetrację) bez zmiany oryginalny preparat lub dodatek chemikaliów.

4. Konkluzje

Koncepcja „odcisku palca natury” sprawdziła się w tym badaniu. Wykrywanie naturalnie występującego chlorofilu fluorescencyjnego w warstwie rogowej naskórka zostało osiągnięte w przypadku PlantCrystals, jak również w przypadku materiału masowego. Główny cel opracowania preparatu PlantCrystals SN o ulepszonej penetracji SC został osiągnięty, a penetracja SC preparatu PlantCrystals była jednorodna w porównaniu z niejednorodną penetracją materiału sypkiego. Koncepcja „odcisku palca natury” powinna być korzystna dla innych preparatów roślinnych bogatych w chlorofil jako łatwa i szybka technika szacowania ich penetracji.

Podczas przygotowania SN PlantCrystals, opisanego tutaj po raz pierwszy, główny rozmiar cząstek gruboziarnistego materiału mógł zostać zredukowany do niższego zakresu mikrorozmiarów. TPGS jako dodatkowy środek powierzchniowo czynny zapobiegał w pewnym stopniu aglomeracji. Kluczem do aktywacji pełnego potencjału PlantCrystals jest rozerwanie komórek roślinnych, co zostało osiągnięte zgodnie z analizą wielkości. Teoria ta została podkreślona przez ulepszone uwalnianie substancji czynnych i wyraźną aktywność przeciwutleniającą. Wyższe wartości zawartości flawonoidów i lepsze AOC mierzone z wykorzystaniem całkowitej zawartości fenolu sprawiają, że SN PlantCrystals jest obiecującym preparatem do przeciwutleniającej terapii skóry.

Przyszłe badania muszą udowodnić, że wyniki te są osiągalne nie tylko dzięki „królowej ziół”. Należy również przetestować dodatkowe metody pomiaru AOC pod kątem ich przydatności do kryształów roślin bogatych w chlorofil. Powszechnie stosowany test DDPH, również wykorzystany w tym badaniu, niestety nie mógł być zastosowany w tym badaniu, ze względu na spektrofotometryczne nakładanie się użytych odczynników oraz karotenoidu i chlorofilu próbki.

Autorskie Wkłady:

Konceptualizacja, DK i CMK; metodologia, DK, RMA i SW; analiza formalna, DK, RMA i SW; dochodzenie, DK, RMA i SW; zasoby, CMK; przechowywanie danych, DK, RMA i SW; pisanie — przygotowanie pierwotnego projektu, DK, RMA i SW; pisanie — recenzja i redagowanie, DK, RMA i JB; wizualizacja, DK, RMA i SW; nadzór, JB; administracja projektami, CMK; pozyskanie finansowania, CMK Wszyscy autorzy przeczytali i zaakceptowali opublikowaną wersję manuskryptu.

Finansowanie:

Praca została częściowo sfinansowana z projektu ZIM: KF ZF4114903AJ8.

Oświadczenie Instytucjonalnej Komisji Rewizyjnej:

Nie dotyczy.

Oświadczenie o świadomej zgodzie:

Nie dotyczy.

Oświadczenie o dostępności danych:

Wszystkie dane zawarte w rękopisie.

Podziękowanie:

Autorzy serdecznie dziękują firmie Blank's GmbH & Co.KG za przekazanie próbek pokrzywy użytej w tym badaniu. Dziękujemy również Udo Bakowsky'emu, który udostępnił bezpłatnie mikroskop fluorescencyjny. Autorzy dziękują również Somie Sengupcie za pomoc w recenzowaniu wersji roboczej. Reem M. Alnemari pragnie podziękować Uniwersytetowi Taif w Arabii Saudyjskiej za wsparcie finansowe.

Konflikt interesów:

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Bibliografia

1. Kohl, E.; Steinbauer, J.; Landthaler, M.; Szeimies, R.-M. Starzenie się skóry. J. Eur. Acad. Dermatol. Wenerol. 2011, 25, 873–884. [Odnośnik]

2. Mohiuddin, AK Starzenie się skóry i nowoczesne strategie przeciwstarzeniowe. Int. J. Dermatol. Pielęgnacja skóry 2019, 1, 8–62. [Odnośnik]

3. Trojahn, C.; Dobos, G.; Lichterfeld, A.; Blume-Peytavi, U.; Kottner, J. Charakterystyka starzenia się skóry twarzy u ludzi: rozplątywanie zewnętrznych i wewnętrznych zjawisk biologicznych. BioMed Res. Int. 2015, 2015, 318586. [Odsyłacz]

4. Grice, EA; Segre, JA Mikrobiom skóry. Nat. Wielebny Microbiol. 2011, 9, 244–253. [Odnośnik]

5. Cannarozzo, G.; Fazia, G.; Bennardo, L.; Tamburi, F.; Amoruso, GF; Del Duca, E.; Nisticò, SP Nowe urządzenie laserowe 675 nm w leczeniu starzenia się twarzy: prospektywne badanie obserwacyjne. Fotobiomoduł. Fotomed. Laserowa operacja. 2021, 39, 118–122. [CrossRef] [PubMed]

6. Farage, MA; Miller, KW; Elsner, P.; Maibach, HI Wewnętrzne i zewnętrzne czynniki starzenia się skóry: przegląd. Int. J. Kosmet. nauka 2008, 30, 87–95. [CrossRef] [PubMed]

7. Trouba, KJ; Hamadeh, Hongkong; Amin, RP; Germolec, DR Stres oksydacyjny i jego rola w chorobach skóry. przeciwutleniacz. Sygnał redoks. 2002, 4, 665–673. [CrossRef] [PubMed]

8. Lademann, J.; Vergou, T.; Darvin, ja; Patzelt, A.; Meinke, MC; Wojt, C.; Papakostas, D.; Zastrow L.; Sterry W.; Doucet, O. Wpływ miejscowego, ogólnoustrojowego i łącznego stosowania przeciwutleniaczy na właściwości barierowe skóry ludzkiej. Farmakologia skóry. Fizyol. 2016, 29, 41–46. [Odnośnik]

9. Amberg, N.; Fogarassy, ​​C. Zachowania zielonych konsumentów na rynku kosmetyków. Zasoby 2019, 8, 137. [Odsyłacz]

10. Griffin, S.; Sarfraz, M.; Farida, V.; Nasim, MJ; Ebokaiwe, AP; Keck, CM; Jacob, C. Nie ma czasu na marnowanie odpadów organicznych: nanotechnologia przekształca resztki przetwarzania żywności w rafinowane materiały. J. Środowisko. Manag. 2018, 210, 114–121. [Odnośnik]

11. Abraham AM; Alnemari, RM; Jakub, C.; Keck, CM PlantCrystals — nanowymiarowy materiał roślinny dla lepszej bioskuteczności roślin medycznych. Materiały 2020, 13, 4368. [Odsyłacz]

12. Abraham AM; Alnemari, RM; Brüßler, J.; Keck, CM Poprawiona zdolność przeciwutleniająca odpadów czarnej herbaty z wykorzystaniem PlantCrystals. Molecules 2021, 26, 592. [CrossRef] 13. Mehegan, MA Stinging Nettles — Queen of Herbs. Alchemiczne ziołowe leczenie, wyd. 1; Bookbaby: Pennsauken Township, NJ, USA, 2011.

14. Upton, R. Liść pokrzywy (Urtica dioica L.): Nadzwyczajna medycyna roślinna. J. Herb. Med. 2013, 3, 9–38. [Odnośnik]

15. Semalty, M.; Adhikari, L.; Semwal, D.; Chauhan, A.; Mishra, A.; Kotiyal, R.; Semalty, A. Kompleksowy przegląd fitochemii i farmakologicznych skutków pokrzywy (Urtica dioica). bież. Tradycja. Med. 2017, 3, 156–167. [Odnośnik]

16. Kregiel, D.; Pawlikowska E.; Antolak, H. Urtica spp.: Zwyczajne rośliny o niezwykłych właściwościach. Cząsteczki 2018, 23, 1664. [CrossRef] [PubMed]

17. Bourgeois, C.; Leclerc, É.A.; Corbin, C.; Doussot, J.; Serrano, V.; Vanier, J.-R.; Seigneuret, J.-M.; Auguin, D.; Pichon, C.; Laine, É.; i in. Pokrzywa (Urtica dioica L.) jest źródłem przeciwutleniaczy i przeciwstarzeniowych fitochemikaliów do zastosowań kosmetycznych. Comptes Rendus Chim. 2016, 19, 1090–1100. [Odnośnik]

18. Maxwell, K.; Johnson, GN Fluorescencja chlorofilu — praktyczny przewodnik. J. Exp. Nerw. 2000, 51, 659–668. [CrossRef] [PubMed]

19. Hosseinzadeh, R.; Khorsandi, K.; Hemmaty, S. Badanie wpływu środków powierzchniowo czynnych na ekstrakcję i oznaczanie związków polifenolowych i zdolności przeciwutleniających ekstraktów z owoców. PLoS ONE 2013, 8, e57353. [Odnośnik]

20. Gao, X.; Ohlander, M.; Jeppsson, N.; Bjork, L.; Trajkovski, V. Zmiany w działaniu przeciwutleniającym i ich związek z fitoskładnikami w owocach rokitnika zwyczajnego (Hippophae rhamnoides L.) podczas dojrzewania. J. Agric. Chemia spożywcza. 2000, 48, 1485–1490. [Odnośnik]

21. Ordonez, A.; Gomez, J.; Vattuone, M.; Isla, MI Działanie przeciwutleniające ekstraktów Sechium edule (Jacq.) Swartz. Chemia spożywcza. 2006, 97, 452–458. [Odnośnik]

22. Rodriguez-Amaya, DB Przewodnik po analizie karotenoidów w żywności; ILSI Press: Waszyngton, DC, USA, 2001.

23. Katsube, T.; Tabata, H.; Ohta, Y.; Yamasaki, Y.; Anuurad, E.; Shiwaku, K.; Yamane, Y. Badania przesiewowe pod kątem aktywności przeciwutleniającej w jadalnych produktach roślinnych: porównanie testu utleniania lipoprotein o niskiej gęstości, testu wychwytywania rodników DPPH i testu Folin-Ciocalteu. J. Agric. Chemia spożywcza. 2004, 52, 2391–2396. [Odnośnik]

24. Summerfield, A.; Meurens, F.; Ricklin, ME Immunologia skóry świńskiej i jej wartość jako modelu skóry ludzkiej. Mol. immunol. 2015, 66, 14–21. [CrossRef] [PubMed]

25. Ranamukhaarachchi, SA; Lehnert S.; Ranamukhaarachchi, SL; Sprenger L.; Schneider, T.; Mansoor, I.; Rai, K.; Häfeli, UO; Stoeber, B. Mikromechaniczne porównanie skóry ludzkiej i świńskiej przed i po zakonserwowaniu przez zamrożenie w celu opracowania urządzenia medycznego. nauka Rep. 2016, 6, 32074. [Odsyłacz]

26. Jacobi, U.; Kaiser, M.; Toll, R.; Mangelsdorf S.; Audring, H.; Otberg, N.; Sterry W.; Lademann, J. Skóra ucha świni: Model in vitro ludzkiej skóry. Skóra Techno. 2007, 13, 19–24. [CrossRef] [PubMed]

27. Nagelreiter, C.; Mahrhauser, D.; Wiatschka K.; Skipioł, S.; Valenta, C. Znaczenie odpowiedniego protokołu roboczego do eksperymentów z usuwaniem taśmy na skórze ucha świni: wpływ preparatów lipofilowych i upośledzenie przyczepności paska. Int. J. Pharm. 2015, 491, 162–169. [CrossRef] [PubMed]

28. Stetefeld, J.; McKenna, SA; Patel, TR Dynamiczne rozpraszanie światła: praktyczny przewodnik i zastosowania w naukach biomedycznych. Biofiza. Obj. 2016, 8, 409–427. [CrossRef] [PubMed]

29. Brar, SK; Verma, M. Pomiar nanocząstek technikami rozpraszania światła. trendy analne. chemia 2011, 30, 4–17. [Odnośnik]

30. Kubart, SA; Keck, CM Dyfraktometria laserowa nanocząstek: Częste pułapki i przeoczone możliwości. J. Pharm. Techno. Lek Res. 2013, 2, 17. [Odsyłacz]

31. Kukric, Z.; Topalic-Trivunovic, L.; Kukavica, B.; Matos, S.; Pavicic S.; Boroja, M.; Savic, A. Charakterystyka działania przeciwutleniającego i przeciwbakteryjnego liści pokrzywy (Urtica dioica L.). Okres Acta. Techno. 2012, 2012, 257–272. [Odnośnik]

32. Pereira, L. Wodorosty jako źródło substancji bioaktywnych i terapia pielęgnacyjna – kosmeceutyki, algoterapia i talasoterapia. Kosmetyki 2018, 5, 68. [CrossRef]

33. Hayes, M.; Ferruzzi, MG Aktualizacja dotycząca biodostępności i mechanizmów chemoprewencyjnych dietetycznych pochodnych chlorofilu. Nutr. Rez. 2020, 81, 19–37. [CrossRef] [PubMed]

34. Piosenka, BH; Lee, DH; Kim, pne; Ku, SH; Park, EJ; Kwon, IH; Kim, KH; Kim, KJ Terapia fotodynamiczna z użyciem chlorofilu-a w leczeniu trądziku pospolitego: randomizowane badanie z pojedynczą ślepą próbą i podzieloną twarzą. J. Am. Acad. Dermatol. 2014, 71, 764–771. [CrossRef] [PubMed]

35. Gülçin, I.; Kufrevioglu, OI; Oktay, M.; Büyükokuroglu, ME Działanie przeciwutleniające, przeciwdrobnoustrojowe, przeciwwrzodowe i przeciwbólowe pokrzywy (Urtica dioica L.). J. Etnofarmakol. 2004, 90, 205–215. [CrossRef] [PubMed]

36. Ðurovic, S.; Pawlic, B.; Šorgic, S.; Popow S.; Savić, S.; Petronijevic, M.; Radojković, M.; Cvetanović, A.; Zeković, Z. Skład chemiczny liści pokrzywy uzyskany różnymi metodami analitycznymi. J. Funkcja. Żywność 2017, 32, 18–26. [Odnośnik]

37. Ghaima, K.; Hashim, Nowy Meksyk; Ali, SA Antybakteryjne i przeciwutleniające działanie ekstraktu octanu etylu z pokrzywy (Urtica dioica) i mniszka lekarskiego (Taraxacum officinale). J. Appl. Farmacja. nauka 2013, 3, 96–99. [Odnośnik]

38. Orci´c, D.; Francišković, M.; Bekvalac, K.; Svircev, E.; Beara, I.; Lesjak, M.; Mimica-Duki´c, N. Ilościowe oznaczanie fenoli roślinnych w ekstraktach Urtica dioica za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej połączonej z detekcją tandemową spektrometrią mas. Chemia spożywcza. 2014, 143, 48–53. [Odnośnik]

39. Everette, JD; Bryant, QM; zielony, rano; Opactwo, Japonia; Wangila, GW; Walker, RB Dokładne badanie reaktywności różnych klas związków w stosunku do odczynnika Folin-Ciocalteu. J. Agric. Chemia spożywcza. 2010, 58, 8139–8144. [Odnośnik]

40. Griffin, S.; Tittikpina, NK; Al-Marby, A.; Alkhayer, R.; Denezhkin, P.; Witek K.; Gbogbo, KA; Batawila, K.; Duval, RE; Nasim, MJ; i in. Przekształcanie odpadów w wartość: nanowymiarowe naturalne materiały roślinne Solanum incanum L. i Pterocarpus erinaceus Poir o obiecujących właściwościach przeciwdrobnoustrojowych. Farmaceutyki 2016, 8, 11. [CrossRef]

41. Guidi, L.; Tattini, M.; Landi, M. Jak chloroplast chroni chlorofil przed nadmiernym światłem? w chlorofilu; Jacob-Lopes, E., Zepka, LQ, Queiroz, MI, wyd.; InTech: Londyn, Wielka Brytania, 2017.

42. Scheuplein, RJ; Puste, IH Przepuszczalność skóry. Fizyol. Obj. 1971, 51, 702–747. [CrossRef] [PubMed]

43. Godin, B.; Touitou, E. Przezskórne dostarczanie skóry: Prognozy dla ludzi na podstawie modeli in vivo, ex vivo i zwierzęcych. adw. Dostawa narkotyków. Obj. 2007, 59, 1152–1161. [CrossRef] 44. Pyo, S.; Meinke, MC; Keck, CM; Müller, RH Rutin — Zwiększona aktywność przeciwutleniająca i penetracja skóry dzięki technologii nanokrystalicznej (smartCrystals). Kosmetyki 2016, 3, 9. [CrossRef]

45. Vidláˇrová, L.; Romero, Wielka Brytania; Hanuš, J.; Štˇepánek, F.; Müller, RH Nanokryształy do ​​poprawy penetracji skóry — wpływ koncentracji i leżących u jej podstaw mechanizmów z wykorzystaniem kurkuminy jako modelu. Eur. J. Pharm. Biofarm. 2016, 104, 216–225. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Chaulagain, B.; Jain, A.; Tiwari, A.; Verma, A.; Jain, SK Bierne dostarczanie leków białkowych drogą przezskórną. Artif. Komórki Nanomed. Biotechnologia. 2018, 46, 472–487. [CrossRef] [PubMed]

47. Lipiński, CA; Lombardo, F.; Dominy, BW; Feeney, PJ Eksperymentalne i obliczeniowe podejścia do szacowania rozpuszczalności i przepuszczalności w ustawieniach odkrywania i opracowywania leków. adw. Dostawa narkotyków. Obj. 1997, 23, 3–25. [Odnośnik]

48. Gediya, S.; Mistry, R.; Patel, U.; Błogosławiony, M.; Jain, H. Rośliny ziołowe: używane jako kosmetyki. J. Nat. Szturchać. Zasób roślinny. 2011, 1, 24–32.

49. Kapoor, S.; Saraf, S. Formułowanie i ocena ekstraktów ziołowych zawierających środek nawilżający do leczenia suchej skóry. farmacja. J. 2010, 2, 409–417. [Odnośnik]

50. Dorni, AC; Amalraj, A.; Gopi, S.; Varma, K.; Anjana, S. Nowe kosmeceutyki z roślin — przegląd branżowy. J. Appl. Rez. Med. Aromat. Rośliny 2017, 7, 1–26. [Odnośnik]

51. Herman, A.; Herman, AP Olejki eteryczne i ich składniki jako środek wzmacniający penetrację skóry do przezskórnego dostarczania leków: przegląd. J. Pharm. Farmakol. 2014, 67, 473–485. [Odnośnik]

For more information:1950477648nn@gmail.com