Glikozydy Cistanche poprawiają uczenie się i pamięć w szczurzym modelu demencji naczyniowej

więcej informacji:ali.ma@wecistanche.com

J. CHEN1,2, S.-N. ZHOU1, J.-M. ZHANG2, Y.-L. FENG2, S. WANG2

1 Klinika Neurologii Szpitala Qilu Uniwersytetu Shandong, Jinan, Chiny. & Brain Science Research Institute, Shandong University, Shandong, PR China

2 Klinika Neurologii Szpitala Ludowego Autonomicznego Regionu Mongolii Wewnętrznej, PR Chiny

Jin Chen i Yan-Mei Zhang w równym stopniu przyczynili się do tego badania

Abstrakcyjny.- CEL:Glikozydy cistanche(GC) są pobierane z Xin JiangCistanche, który jest szeroko stosowany jako chińskie zioło. Niniejsze badanie ma na celu ocenę wpływu GC na otępienie naczyniowe (VD).

MATERIAŁY I METODY: Model VD ustalono przez podwiązanie obustronnej tętnicy szyjnej wspólnej u dorosłych szczurów rasy Wistar, którym codziennie dootrzewnowo podawano sól fizjologiczną, GC (10 mg/kg masy ciała/d, ip) lub oksyracetam (450 mg/kg masy ciała/dzień, ip) przez 14 dni. W teście Morris Water Maze oceniano zdolności poznawcze szczurów. Hipokamp został wycięty i poddany analizie proteomicznej i immunohistochemicznej. WYNIKI: Grupa GC wykazała znacznie mniejsze opóźnienie ucieczki niż grupa VD po czterech i pięciu dniach po operacji. Nie wykazali znaczącej różnicy w porównaniu z grupą pozornie operowaną i grupą kontrolną oksyracetamu. W hipokampie 21 plamek białkowych w grupie GC wykazywało różne poziomy ekspresji w porównaniu z grupą VD. Obejmowały one cztery białka, które wykazywały znaczącą różnicę: trzy białka o podwyższonej aktywności tioredoksynopodobnej 1, kinaza białkowa aktywowana mitogenami o podwójnej swoistości 1 i białko związane z dihydropirydynazą 2 (CRMP-2) i jedno regulowana w dół syntetaza białkowa glutationu. Analiza immunohistochemiczna wykazała, że ​​poziom białka P-tau był istotnie wyższy w grupie z modelem VD niż w grupie operowanej pozornie (p < 0,05).="" po="" traktowaniu="" gc="" poziom="" białka="" p-tau="" u="" szczurów="" z="" modelem="" vd="" wykazał="" znaczący="" spadek="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" vd="" traktowaną="" solą="" fizjologiczną="" (p="">< 0,05).="" wnioski:="" gc="" odgrywa="" kluczową="" rolę="" w="" ochronie="" neuronów="" hipokampa="" w="" vd,="" zmniejszając="" fosforylację="" p-tau="" i="" zwiększając="" poziom="" ekspresji="" crmp-2.="" farmako-ekologiczna="" manipulacja="" gc="" oferuje="" nową="" możliwość="" leczenia="">

Słowa kluczowe:

Demencja naczyniowa, glikozydy cistanche, proteomika, P-tau, białko związane z dihydropirymidynazą 2.

Kliknij na Cistanche i cistanche deserticola ma, aby poprawić pamięć

Wstęp

Demencja naczyniowa (VD) jest drugą najczęstszą postacią demencji starczej i jest spowodowana głównie chorobą niedokrwienną naczyń mózgowych. VD prowadzi do heterogenicznego upośledzenia funkcji poznawczych i potrzebne są nowe skuteczne leki terapeutyczne, które leczą lub zapobiegają progresji VD1. Jednak nadal nie ma skutecznego chińskiego zioła, które poprawiałoby upośledzenie funkcji poznawczych wywołane niedokrwieniem mózgu.

Glikozydy cistanche (GC) są szeroko stosowane jako zioło o działaniu neuroprotekcyjnym. Wyciąg z Herba Cistanches wzmacnianauka i pamięćmyszy poprzez promowanie różnicowania komórek neuronalnych, wzrostu neurytów i tworzenia synaps2. Glikozydy cistanche mogą zapobiegać apoptozie w neuronach ziarnistych móżdżku i wywierać działanie przeciwapoptotyczne poprzez hamowanie aktywacji kaspazy-3 i kaspazy-83. Echinakozyd, główny aktywny składnik Herba Cistanches, wystarcza do ochrony komórek neuronalnych przed uszkodzeniem rotenonem poprzez aktywację sygnalizacji Trk4. Jednak mechanizmy, dzięki którym GC poprawia upośledzenie funkcji poznawczych w VD, są nadal w dużej mierze nieznane.

Białko Tau jest białkiem związanym z mikrotubulami neuronalnymi, które stabilizuje mikrotubule neuronalne. Fosforylacja białka tau (P-tau) wpływa na jego zdolność do interakcji z mikrotubulami oraz wpływa na przekaźnictwo synaptyczne. Nagromadzenie splątków neurofibrylarnych (NFT) składa się z białka P-tau i jest jedną z głównych cech charakterystycznych choroby Alzheimera (AD)5. Powszechnie wiadomo, że VD i AD to dwie najczęstsze choroby otępienne. Mają wspólną korelację z naczyniowymi czynnikami ryzyka, takimi jak nadciśnienie, cukrzyca i hipercholesterolemia. Dlatego P-tau może być również zamieszany w VD.

Oceniliśmy wpływ GC nafunkcja uczenia się-pamięciw szczurzym modelu VD i przeprowadził analizę proteomiczną i immunohistochemiczną hipokampa szczurów VD, aby zapewnić wgląd w neuroprotekcyjne działanie GC. Nasze wyniki wykazały, że GCpoprawa uczenia się i pamięciu szczurów VD i zmienił poziomy białek, takich jak P-tau u szczurów VD.

Materiały i metody

Zwierząt

Sześciomiesięczne samce szczurów Wistar (masa ciała 230- 270 g) zostały dostarczone przez ośrodek dla zwierząt doświadczalnych w prowincji Hubei w Chinach. Wszystkie procedury doświadczalne na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z wytycznymi dotyczącymi opieki nad zwierzętami i lokalnymi przepisami etycznymi szpitala nr 1 w Wuhan w Chinach. Numer zatwierdzenia etyki to 00014834. Zwierzęta trzymano oddzielnie w grupach po 4 na klatkę w temperaturze 25 stopni z cyklem 12-godziny światła/12-godziny ciemności i swobodnym dostępem do pożywienia i wody. Zwierzęta (n=45) zostały losowo przydzielone do czterech grup: grupa modelowa (n=12), grupa pozornie operowana (n=11), grupa leczona GC (n{{14} }) oraz grupa kontrolna leczona oksyracetamem (n=10).

Obustronne podwiązanie tętnicy szyjnej wspólnej (2-VO)

W głębokim znieczuleniu 10% wodzianem chloralu (odczynnik Tianjin Damao Chemical Reagent Factory, Tianjin, Chiny) (350 mg/kg masy ciała,

ip), obustronne tętnice szyjne wspólne (CCA) starannie oddzielono od otaczających tkanek, a następnie szczelnie podwiązano szwem. Skórę następnie zrekonstruowano, a następnie szczury utrzymywano w temperaturze pokojowej i ponownie umieszczano w klatce do resuscytacji. Szczury kontrolne operowane pozornie poddano tej samej procedurze chirurgicznej bez podwiązania CCA. Szczury VD leczono GC (10 mg/kg masy ciała/dzień, ip) lub oksyracetam (450 mg/kg masy ciała/dzień, ip) bezpośrednio po zabiegu przez 14 kolejnych dni. Grupie modelowej wstrzyknięto tę samą objętość soli fizjologicznej.

Test labiryntu wodnego Morrisa

Test MWM przeprowadzono zgodnie z wcześniej opisaną metodą7. Obszar testowy składał się z okrągłego basenu wypełnionego wodą (25 ± 1 stopień), zmętniałego mlekiem tak, że szczury nie były w stanie zobaczyć podwodnej platformy 1 cm poniżej powierzchni wody. Basen podzielono na cztery ćwiartki (oznaczone jako strefy I, II, III i IV), a platformę zanurzono w strefie II. Na ścianie pomieszczenia testowego umieszczono wizualne wskazówki. Zwierzęta umieszczono w wodzie w jednym z czterech początkowych punktów kwadrantu, które zmieniano losowo podczas prób. Szczurom dano 2 minuty na znalezienie platformy i usiąść na niej przez 15 sekund. Szczury, które nie znalazły miejsca w określonym czasie, były delikatnie kierowane na platformę i mogły pozostać na niej przez 15 sekund. Zastosowano automatyczny system śledzenia do rejestrowania ścieżki pływania, opóźnienia, dystansu i czasu pływania w każdej strefie. Wszystkie szczury uśmiercono dwa tygodnie po teście MWM do dalszej analizy.

Ekstrakcja białka

W głębokim znieczuleniu 10% wodzianem chloralu wszystkie szczury poddane testowi MWM zostały pozbawione głowy. Tkanki hipokampa szybko zebrano na lodzie, a następnie natychmiast zamrożono w ciekłym azocie. Wszystkie tkanki homogenizowano w ciekłym azocie przy użyciu moździerza i tłuczka i zebrano w buforze do lizy (7 M mocznik, 2 M tiomocznik, 2% CHAPS, 20 mM Tris). Nierozpuszczalne cząstki usunięto przez odwirowanie przy 12 000 obr./min przez 20 min w 4 stopniach. Zanieczyszczone kwasy nukleinowe w próbkach zostały zakłócone przez przerywane oscylacje dźwiękowe przez 5 min. Supernatanty zebrano po odwirowaniu w tych samych warunkach jak opisano powyżej. Stężenie białka w supernatantach mierzono testem Bradforda, a supernatanty przechowywano w temperaturze 80°C.

Dwuwymiarowa elektroforeza żelowa

Porcje białka (120 µg) dostosowano buforem do nawadniania (7 M mocznika, 2 M tiomocznika, 4% CHAPS, 1% wag./obj. DTT, 0 0,5% buforu IPG i ślad błękitu bromofenolowego) w objętości 350 µL. Ogniskowanie izoelektryczne (IEF) wykonano w paskach IPG (pH 4-7, rozmiar 22 cm) przy 300 V przez 12 min, 700 V przez 18 min, 1500 V przez 1,5 h, 9900 V przez 3 godz., 9990 V przez 6,5 godz., a następnie 600 V przez 20 godz. w systemie Ettan IPGphor II (GE ETTAN IPGPHOR3). Po programie IEF paski równoważono w buforze równoważącym IPG I (6 M mocznik, 2% SDS, 30% glicerol, 0,375 M Tris, pH 8,8, 20 mg/ml DTT i ślad błękitu bromofenolowego) oraz następnie alkilowano (25 mg/ml jodoacetamidu zamiast DTT w buforze równoważącym) przez 15 min. 2-DE przeprowadzono na 12,5% żelach poliakrylamidowych SDS (24 cm × 19,5 cm × 1,0 mm) z 0,5% agarozowym klejem uszczelniającym, przy użyciu systemu do elektroforezy Ettan DALT Six (GE ETTAN DALTsix, PA, USA). Elektroforezę prowadzono przy 2 W przez 45 minut, a następnie rozdzielano przy 17 W przez cztery godziny, aż błękit bromofenolowy prawie osiągnął dno żeli. Plamy białkowe uwidoczniono poprzez barwienie srebrem (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) w żelach analitycznych. 2-Płuczka DE utworzona w trzech powtórzeniach iz trzech niezależnych ekstrakcji białka dla każdej grupy.

Preparatywna elektroforeza żelowa

Próbki białka (600 µg) z czterech grup szczurów poddano 2-DE zgodnie z metodą opisaną powyżej. Plamy białkowe uwidoczniono przez barwienie brylantowym błękitem Coomassie (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) w preparatach żelowych.

Pozyskiwanie i analiza obrazu

Obrazy żelu rejestrowano w systemie {{0}}DE Image Scanning (UMAX Powerlook1100, VT, USA) i analizowano za pomocą oprogramowania Image Master 2D Platinum 5.0 (GE, PA, USA). Plamy białkowe zostały wykryte automatycznie, a następnie edytowane ręcznie w celu usunięcia smug, plamek i artefaktów.

Wspomagana matrycą spektrometria mas z jonizacją laserową z desorpcją czasu przelotu (MALDI-TOF-MS)

W celu odcisku palca masy peptydów i późniejszej analizy, żele pocięto na plasterki, a plamy zabarwione Coomassie odbarwiono i przemyto 100 mM wodorowęglanem amonu i acetonitrylem, zredukowano DTT w 60 stopniach przez 40 min, a następnie alkilowano za pomocą IAA przez 30 min w ciemności. Żel włączono do 50 µl roztworu modyfikowanej trypsyny o stężeniu 12 ng/µl w 50 mM wodorowęglanie amonu (pH 8,6) w temperaturze 37 stopni przez noc. Peptydy wyekstrahowano z zatyczki żelowej 1% kwasem mrówkowym/2% acetonitrylem i zatężono za pomocą końcówek C-18 Zip-Tips. Trawienia nakrapiano (cztery powtórzenia) na cel MALDI stosując jako matrycę kwas a-cyjano 4-hydroksycynamonowy (2 mg/ml w 50% acetonitrylu, 0,1% TFA zawierający dziesięć mM fosforanu amonu). Widma rejestrowano na spektrometrze masowym 4700 MALDI TOF/TOF (Applied Biosystems, NY, USA) i analizowano za pomocą oprogramowania GPS Explorer TM (Applied Biosystems).

Immunohistochemia

Koronowe skrawki hipokampa utrwalono w 4% paraformaldehydzie przed zatopieniem w parafinie, a następnie pocięto na skrawki o grubości 4-µm. Oddzielone skrawki hipokampa wieńcowego poddano obróbce w celu wygaszenia aktywności endogennej peroksydazy przy użyciu 3% H2O2 w soli fizjologicznej buforowanej fosforanami. Niespecyficzne reakcje immunologiczne blokowano w temperaturze pokojowej przez 15 min. Skrawki następnie inkubowano z przeciwciałem P-tau i przeciwciałem drugorzędowym w temperaturze pokojowej przez 30 min i wizualizowano po reakcji tetrachlorowodorku 3,3'-diaminobenzydyny (Dako, Tokio, Japonia). Obrazy rejestrowano przy użyciu mikroskopu świetlnego (Olympus, Tokio, Japonia) i przetwarzano przy użyciu oprogramowania Photoshop (wersja 7.0, Adobe, San Jose, CA, USA).

Analiza statystyczna

Dane ilościowe wyrażono jako średnie ± SD. Dwukierunkową analizę wariancji (ANOVA) przeprowadzono przy użyciu oprogramowania do analizy SPSS 10.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). p < 0,05="" uznano="" za="">

Wyniki

GC promuje uczenie się i pamięć u szczurów VD

Aby ocenić wpływ GC na funkcje poznawcze szczurzego modelu VD, przeprowadziliśmy test MWM. W teście MWM grupa GC wykazała znacznie mniejsze opóźnienie ucieczki niż grupa VD w 4 i 5 dniu po operacji, ale nie wykazała znaczącej różnicy w porównaniu z grupą pozornie operowaną i grupą kontrolną oksyracetamu (Tabela I). Dane te sugerują, że GC promuje uczenie się i pamięć u szczurów VD. GC zmienia profile proteomiczne hipokampa szczurów VD.

Dzięki analizie proteomicznej hipokampa szczura odkryliśmy, że 21 plamek białkowych w grupie GC wykazywało różne poziomy ekspresji w porównaniu z grupą VD. Wśród nich cztery białka wykazały istotną różnicę w hipokampie szczurów GC (Tabela II): w tym trzy białka o podwyższonej aktywności tioredoksynopodobnej 1 (TXNL 1), kinaza białkowa aktywowana mitogenami 1 o podwójnej specyficzności (MAPKK 1) oraz białko 2 związane z dihydropirymidynazą (DPYSL2); i jedną obniżoną syntetazę białkową glutationu (GCL). Typowe profile dwuwymiarowej elektroforezy żelowej (2-DE) DPYSL2 pokazano na Ryc. 1.

GC moduluje poziom P-tau w hipokampie szczurów VD

Na podstawie analizy immunohistochemicznej stwierdziliśmy, że poziom białka P-tau był znacznie wyższy w grupie z modelem VD niż w grupie operowanej pozornie (p < 0.05).="" po="" traktowaniu="" gc,="" poziom="" białka="" p-tau="" u="" szczurów="" z="" modelem="" vd="" wykazał="" znaczący="" spadek="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" vd="" traktowaną="" solą="" fizjologiczną="" (p="">< 0,05),="" ale="" nie="" wykazał="" znaczącej="" różnicy="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" kontrolną="" oksyracetamu="" (figura="">

Dyskusja

VD jest spowodowane upośledzeniem pamięci i funkcji poznawczych spowodowanym głównie chorobami naczyń mózgowych8,9,10,11. Dwunaczyniowy model okluzji (2VO) jest prosty i stabilny oraz uznany za standardowy model niedokrwienia mózgu. W tym badaniu wykorzystaliśmy model 2VO do stworzenia modelu zwierzęcego VD. W teście MWM odkryliśmy, że grupa VD wykazała zmniejszoną zdolność poznawczą w porównaniu z grupą operowaną pozornie, potwierdzając, że z powodzeniem ustanowiliśmy model VD. W oparciu o ten model stwierdziliśmy, że leczenie GC poprawiło przestrzenną zdolność poznawczą szczurów VD w podobnym stopniu z oksyracetamem, kontrolą pozytywną. Dane te wskazują, że GC może promować uczenie się przestrzenne i upośledzenie pamięci w VD.

Aby zbadać mechanizm, dzięki któremu GC wywiera neuroprotekcyjne działanie na VD, zastosowaliśmy podejście proteomiczne do badania przesiewowego białek o zróżnicowanej ekspresji w hipokampie szczurów VD. Odkryliśmy, że kilka białek związanych z metabolizmem energetycznym, fałdowaniem białek, szlakiem sygnałowym i cytoszkieletem wykazywało różne ekspresje w hipokampie szczurów VD leczonych GC w porównaniu z tymi, którym podawano sól fizjologiczną jako kontrolę.

Jednym z białek o zróżnicowanej ekspresji jest DPYSL2, znane również jako białko mediatora odpowiedzi na kolapsynę-2 (CRMP-2), które jest wzbogacone w dystalnej części rosnących aksonów w pierwotnych neuronach hipokampa i ma kluczowe znaczenie dla różnicowania aksonów i wzrost neuronalny12,13. Ponadto CRMP-2 promuje składanie mikrotubul i pośredniczy w sygnalizacji Ras w celu wzmocnienia tworzenia wielu aksonów i polaryzacji neuronów14,15. W tym badaniu poziom ekspresji białka CRMP-2 był zwiększony 2,28 razy w grupie GC w porównaniu z grupą VD, co sugeruje ważną rolę CRMP-2 w potencjalnych mechanizmach naprawy tworzenia sieci neuronowych i utrzymanie polaryzacji neuronalnej w VD.

Ponadto w niniejszym badaniu stwierdziliśmy wyższe P-tau w grupie z modelem VD, ale niższą ekspresję P-tau po leczeniu GC. Białko Tau odgrywa kluczową rolę w morfogenezie neuronów. W pewnych sytuacjach patologicznych białko P-tau może generować nieprawidłowe agregaty, które są toksyczne dla neuronów, wpływając na funkcję mitochondriów15. Wcześniejsze badania sugerują, że GC może poprawić metabolizm energii mitochondriów z funkcją antyoksydacyjną16,17,18. Co ciekawe, fosforylacja CRMP-2 została również scharakteryzowana jako składnik splątków neurofibrylarnych w AD.

Wnioski

CRMP2 jest powszechnie fosforylowany przez kinazę białkową zależną od cyklin-5 (Cdk5) i kinazę syntazy glikogenu-3 (GSK3) w mózgu pacjentów z AD, te same kinazy, które fosforylują białko tau w celu wytworzenia NFT19,20. Potrzebne są dalsze badania, aby sprawdzić, czy GC reguluje poziom ekspresji P-tau i CRMP2 w VD poprzez regulację aktywności Cdk5 i GSK321,22,23. Podsumowując, nasze dane sugerują, że GC odgrywa kluczową rolę w ochronie neuronów hipokampa VD, zmniejszając fosforylację P-tau i zwiększając poziom ekspresji CRMP-2. Manipulacja farmakologiczna GC daje nową szansę na rozwój terapii przeciwko VD.

Podziękowanie

Badanie to było wspierane przez Specjalną Fundację dla Uczonych Taishan i Narodowy Fundusz Nauk Przyrodniczych (30960520).

Konflikt interesów

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Bibliografia

1)GORELICK PB, PANTONI L. Postępy w naczyniowych zaburzeniach poznawczych. Udar 2013; 44: 307-308.

2) CHOI JG, MOON M, JEONG HU, KIM MC, KIM SY, OH MS. Cistanches Herba poprawia uczenie się i pamięć poprzez indukowanie czynników wzrostu nerwów. Zachowaj Res mózgu 2011; 216: 652-658.

3) TIAN XF, PU XP. Glikozydy fenyloetanoidowe z Cistanches salsa hamują apoptozę indukowaną przez jon 1- metylo-4-fenylopirydyniowy w neuronach. J Etnopharmacol 2005; 97: 59-63.

4)ZHU M, LU C, LI W. Przejściowa ekspozycja na echinakozyd wystarcza do aktywacji sygnalizacji Trk i ochrony komórek neuronalnych przed rotenonem. J Neurochem 2013; 124: 571-580.

5)MEDINA M, AVILA J. Nowe spojrzenie na rolę tau w chorobie Alzheimera. Implikacje dla terapii. Biochem Pharmacol 2014; 88: 540-547.

6)NING M, ZHANG Z, CHEN Z, ZHAO T, ZHANG D, ZHOU D, LI W, LIU Y, YANG Y, LI S, HE L. Genetyczne dowody na to, że demencja naczyniowa jest związana z chorobą Alzheimera: polimorfizm tween tau i otępienie naczyniowe w populacji chińskiej. Starzenie się wieku 2011; 40: 125-128.

7)CAIN DP, BOON F. Szczegółowa analiza behawioralna ujawnia zarówno strategie zadaniowe, jak i zaburzenia pamięci przestrzennej u szczurów po obustronnym udarze tętnicy środkowej mózgu. Mózg Res 2003; 972: 64-74.

8)ZHONG G, WANG Y, ZHANG Y, GUO JJ, ZHAO Y. Palenie wiąże się ze zwiększonym ryzykiem demencji: metaanaliza prospektywnych badań kohortowych z badaniem potencjalnych modyfikatorów efektu. PLoS One 2015; 10: e0118333.

9) Cechy spektralne NETO E, ALLEN EA, AURLIEN H, NORDBY H, EICHELE T. EEG rozróżniają chorobę Alzheimera i otępienie naczyniowe. Neurol przedni 2015; 6:25.

10)CALABRÒ RS, DE LUCA R, LEO A, BALLETTA T, MARRA A, BRAMANTI P. Lokomat trening w otępieniu naczyniowym: poprawa motoryczna i nie tylko! Starzenie się Clin Exp Res 2015 Mar 12.

11)UTKAN T, YAZIR Y, KARSON A, BAYRAMGÜRLER D. Etanercept poprawia sprawność poznawczą oraz zwiększa ekspresję eNOS i BDNF podczas eksperymentalnego otępienia naczyniowego w cukrzycy wywołanej streptozotocyną. Curr Neurovasc Res 2015 Mar 11

12) ZHOU LS, ZHAO GL, LIU Q, JIANG SC, WANG Y, ZHANG DM. Wyciszanie białka mediatora odpowiedzi na kolapsynę-2 przeprogramowuje fenotyp makrofagów i poprawia gojenie zawału w eksperymentalnym modelu zawału mięśnia sercowego. J Inflamm (Londyn) 2015; 12:11.

13)WILSON SM, KI YEON S, YANG XF, PARK KD, KHANNA R. Różnicowa regulacja fosforylacji białka pośredniczącego odpowiedzi na kolapsynę (CRMP2) przez GSK3ß i CDK5 po urazowym uszkodzeniu mózgu. Front Cell Neurosci 2014; 8:135.

14)LIM NK, HUNG LW, PANG TY, MCLEAN CA, LIDDELL JR, HILTON JB, LI QX, WHITE AR, HANNAN AJ, CROUCH PJ. Zlokalizowane zmiany kinazy syntazy glikogenu-3 i białka mediatora odpowiedzi na kolapsynę-2 w mózgu dotkniętym chorobą Huntingtona. Hum Mol Genet 2014; 23: 4051-4063.

15)BRUSTOVETSKY T, PELLMAN JJ, YANG XF, KHANNA R, BRUSTOVETSKY N. Białko mediatora odpowiedzi na kolapsynę 2 (CRMP2) wchodzi w interakcję z receptorem N-metylo-D-asparaginianu (NMDA) i Na plus /Ca2 plus były zmieniacz i reguluje ich aktywność funkcjonalna. J Biol Chem 2014; 289: 7470-7482.

16) DONG B, YUAN X, ZHAO Q, FENG Q, LIU B, GUO Y, ZHAO B. Wspomagana ultradźwiękami wodna dwufazowa ekstrakcja glikozydów fenyloetanoidowych z łodyg Cistanche deserticola YC Ma. J Wrzesień Sci 2015 21 stycznia. [Epub przed drukiem].

17) HU GS, JIA JM, KIM DH. Wpływ podawania tyrozyny i fenyloalaniny na akumulację glikozydów fenyloetanoidowych w hodowli zawiesinowej komórek Cistanche deserticola. Chin J Nat Med 2014; 12: 367-372.

18)DONG S, GAO R, YANG Y, GUO M, NI J, ZHAO L. Jednoczesne oznaczanie glikozydów fenyloetanoidowych i aglikonów metodą elektroforezy stref kapilarnych z modyfikatorem buforowym. Anal Biochem 2014; 449: 158-163.

19) XIONG WT, GU L, WANG C, SUN HX, LIU X. Działanie przeciwhiperglikemiczne i hipolipidemiczne Cistanche tubulosa u myszy db/db z cukrzycą typu 2. J Etnofarmakol 2013; 150: 935-945.

20) LIU B, OUYANG J, YUAN X, WANG L, ZHAO B. Właściwości adsorpcyjne i preparatywne oddzielanie glikozydów fenyloetanoidowych z Cistanche deserticola przy użyciu żywic makroporowatych. J Chronomotor B Analyt Technol Biomed Life Sci 2013; 937: 84-90.

21)CALDERÓN-RIVERA A, SANDOVAL A, GONZÁLEZ-RAMÍREZ R, GONZÁLEZ-BILLAULT C, FELIX R. Regulacja kanałów neuronowych cav3.1 przez kinazę zależną od cyklin 5 (cdk5). PLoS One 2015; 10: e0119134.

22) CASTRO-ALVAREZ JF, URIBE-ARIAS A, CARDONA-GÓMEZ GP. Celowanie w kinazę zależną od cykliny 5 zapobiega agregacji b-amyloidu obejmującej kinazę syntazy glikogenu 3b i fosfatazy. J Neurosci Res 2015 24 lutego. [Epub przed drukiem].

23) ROUGET R, SHARMA G, LEBLANC AC. Zależna od cykliny kinaza 5 Fosforylacja rodzinnych mutantów białek prionowych zaostrza konwersję do struktury amyloidu. J Biol Chem 2015; 290: 5759- 5771.