Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Abstrakcyjny:Trzciny winogronowe to biomasa odpadowa z uprawy winorośli zawierająca bioaktywne polifenole cenne środki owadobójcze. Podczas gdy kilka badań donosiło o kosmetycznym działaniu E-resweratrolu, tylko kilka opisało potencjał E-ε-vinifera, drugiego głównego składnika ekstraktów z trzciny winogronowej (GCE), i żadne z nich nie badało GCE jako naturalnej mieszanki polifenoli do zastosowań kosmetycznych . W tym badaniu rozważyliśmy potencjał GCE z odmian winogron bogatych w polifenole jako wielofunkcyjnych składników kosmetycznych. Przeprowadzono analizę HPLC w celu ilościowego oznaczenia głównych polifenoli w GCE, tj. katechiny, epikatechiny, E-resweratrolu, E-piceatannolu, ampelopsyny A, E-ε-vinifera, hopeafenolu, izohopefenolu, E-mijabenolu C i E-witaminy B z wybranych odmian . Skórabieleniepotencjał przeztyrozynazaTest hamowania i zdolność aktywacji białka długowieczności komórek (SIRT1) GCE porównano z czystym E-resweratrolem i E-ε-vinifera. Obliczono podobieństwo polifenoli GCE do leków, co pozwoliło na przewidywanie przepuszczalności i biodostępności skóry. Wreszcie, obecne dane umożliwiły rozważenie GCE z odmian bogatych w polifenole jako wielofunkcyjnych składników kosmetycznych zgodnie z praktykami zielonej chemii.

Słowa kluczowe:ekstrakty z trzciny winogronowej; naturalne składniki; polifenole; E-resweratrol; E-ε-vinifera; sirtuinaktywacja;tyrozynazazahamowanie; podobieństwo do narkotyków

cistanche jest inhibitorem tyrozynazy

1. Wstęp

Świadome projektowanie nowych receptur pielęgnacyjnych opartych na naturalnych składnikach stało się kluczową kwestią w branży kosmetycznej, w zgodzie z odpowiedzialnością za środowisko. Ekstrakty botaniczne dobiera się pod kątem ich składu, aktywności biologicznej, stabilności i przepuszczalności skóry. Czynniki te decydują o ogólnej skuteczności składnika i jego potencjale kosmetycznym. W dzisiejszych czasach rośnie zapotrzebowanie na nowe zasoby naturalne ze skutecznymi składnikami pielęgnacyjnymi skóry, które chronią przed źródłami stresu, w tym zanieczyszczeniem środowiska, szkodliwym promieniowaniem, a także niewłaściwą dietą i stresującym stylem życia [1]. Ponadto klienci poszukują ekologicznych kosmetyków naturalnych, a biomolekuły pochodzące z recyklingu pozostałości roślinnych oferują nowe perspektywy zrównoważonego pozyskiwania.

Uprawa winorośli (i sektor wina) jest jedną z najstarszych i najbardziej rozwiniętych gałęzi przemysłu na świecie, w której do produkcji wina wykorzystuje się około 80 procent grejpfrutów [2]. Powszechnie wiadomo, że winogrona są bogatym źródłem cennych związków o działaniu prozdrowotnym, takich jak antocyjany, kwasy fenolowe, flawanole, flawonole, proantocyjanidyny, stilbenoidy, melanina, kwasy tłuszczowe, minerały, a także witaminy [2]. Produkcja wina generuje różne produkty uboczne bogate w biomolekuły, w tym wytłoki (skóra i nasiona), osad, a także inne odpady stałe, takie jak trzciny winogron [3]. Wśród nich biomasa drzewna winogron, która jest odrzucana po zimowym przycinaniu, ma duży potencjał do rozwoju nowych naturalnych składników kosmetycznych ze względu na dużą obfitość i obecność polifenoli, w tym stilbenoidów [2,4]. Wcześniejsze badania wykazały, że wybór odmian winogron jest decydujący przy opracowywaniu GCE bogatych w polifenole [4–6].

E-resweratrol, dobrze znany związek obronny winogron, wykazuje kilka właściwości biologicznych, w tym przeciwutleniające [7], przeciwnowotworowe [8,9], przeciwgrzybicze [10] i przeciwzapalne [11]. proces starzenia poprzeztyrozynazahamowanie [12,13], które jest kluczowym mechanizmem hamowania przebarwień skóry. Proces pigmentacji skóry związany jest z obecnością melaniny i lipofuscyny, których nadmiar i nieprawidłowa dystrybucja w skórze powoduje ciemne plamy. Nierówny koloryt skóry jest jednym z głównych objawów tego procesu starzenia. Melanina powstaje pod wpływemtyrozynazaw trakcie melanogenezy reguluje biosyntezę witaminy D3 oraz zwiększa odporność skóry na oparzenia słoneczne i nowotwory [13,14]. Pojawienie się miejscowych przebarwień, oprócz problemów estetycznych, może również zwiększać ryzyko wystąpienia czerniaka. Dlatego inhibitory tyrozynazy, takie jak E-resweratrol, mogą być atrakcyjne w przemyśle kosmetycznym i medycznym jako środki depigmentacyjne [15].

Dodatkowo spowolnienie procesów starzenia się skóry może również nastąpić poprzez aktywację naturalnych mechanizmów naprawy komórek. Można to osiągnąć poprzez zastosowanie związków aktywujących sirtuinę [1]. Stymulacja aktywności SIRT1, która utrzymuje długowieczność komórek, czynniki transkrypcyjne i inne białka naprawcze DNA [16], ma kluczowe znaczenie w kontroli stresu oksydacyjnego i regulacja procesu starzenia [17]. Sirtuiny są normalnie regulowane na poziomie transkrypcji, translacji, stabilności białka i utleniania przez naturalne inhibitory, takie jak nikotynamid. Sirtuiny ssaków, takie jak SIRT1, działają jako regulatory transkrypcji dla wybranych receptorów i białek naprawy DNA. Kontrolują również metabolizm energetyczny, przeżycie komórek, naprawę DNA, regenerację tkanek, mechanizmy zapalne, a także sygnalizację neuronalną [1].

Obecność E-resweratrolu i jego pochodnych w pędach winogron stwarza doskonałą okazję do wykorzystania tego naturalnego składnika kosmetycznego w przemyśle kosmetycznym jako skutecznych środków przeciwstarzeniowych, aktywujących i aktywujących viasirtuinę.tyrozynaza-działania hamujące [1,16].

Wymagania stawiane nowoczesnym składnikom kosmetyków obejmują ich wielofunkcyjność, bezpieczeństwo i skuteczność. Potwierdzone działanie biologiczne aktywnej cząsteczki zwykle nie wystarcza do uzyskania innowacyjnego preparatu kosmetycznego. Liczne właściwości fizykochemiczne związku biologicznie czynnego decydują o zapewnieniu ogólnej użyteczności po zastosowaniu miejscowym [18]. Biodostępność i przepuszczalność przez skórę są czynnikami ograniczającymi kosmetyczne wykorzystanie wielu potencjalnych substancji aktywnych [19]. Zastosowanie naturalnych związków jako składników kosmetyków nabiera nowego znaczenia w przypadku naturalnych ekstraktów, które zawierają mieszaninę cząsteczek o różnych właściwościach fizykochemicznych. W związku z tym pozostaje pytanie o porównanie wchłaniania przez skórę czystych związków, takich jak E-resweratrol czy E-ε-vinifera, z mieszaninami bogatymi w stilbenoidy (np. GCE). Kluczowy jest fizykochemiczny charakter czystej substancji parametr, który może ograniczać jego przepuszczalność. Z innego punktu widzenia zastosowanie takich mieszanek zapewniłoby szeroki zakres aktywności biologicznych od powierzchni warstwy rogowej naskórka, poprzez naskórek, do głębokich warstw skóry właściwej.

W tym badaniu ocenialiśmy kosmetyczny potencjał GCE z wcześniej wybranych odmian bogatych w polifenole [20] jako wielofunkcyjnych środków odmładzających poprzez dwa różne mechanizmy; (1) skórabielenieprzeztyrozynazahamowanie za pomocą testów enzymatycznych i danych dotyczących dokowania, (2) opóźnianie starzenia się komórek za pomocą testów aktywacji sirtuiny. Aktywność czystych składników GCE, takich jak E-resweratrol i E-ε-vinifera, porównano z GCE, naturalną mieszanką stylbenoidów pochodzenia biologicznego. Na koniec oceniliśmy dostępność głównych składników GCE i ich zdolność do przenikania przez barierę skórną.

2. Wyniki i dyskusja

2.1. Stężenie polifenoli w GCE

Stężenie głównych polifenoli obecnych w GCE z pięciu wcześniej wybranych odmian oznaczono ilościowo za pomocą analiz HPLC (tab. 1) [20]. Zidentyfikowano dziesięć głównych związków: dwa flawonoidy (katechina, epikatechina) oraz osiem stylbenoidów (ampelopsyna A, E-resweratrol, E-piceatannol, nadziejofenol, izohopefenol, E-ε-vinifera, E-miabenol C i E-witamina B ). Struktury chemiczne związków przedstawiono na rysunku 1.

Osiem polifenoli zidentyfikowano porównując je z czystymi wzorcami tj. E-resweratrol, E-piceatannol, katechina, epikatechina, E-ε-vinifera, hopeafenol, ampelopsin A i E-vitisin B. Dwa związki (izohopefenol i E-miabenol C) zostały przypisane zgodnie z kolejnością elucji, widmami UV i danymi MS z literatury [21]. Analizy HPLC wykazały bardzo wysokie stężenia polifenoli ogółem w GCE z pięciu wybranych odmian, od 16,8 procent ± 7,4 procent dla Sauvignon do 39,4 procent ± 3 procent dla Villard Noir. Savagnin blanc GCE zawierał najwyższe stężenie w E-resweratrolu (12,0 procent ± 4,4%), podczas gdy Villard Noir GCE charakteryzował się najwyższym stężeniem w E-ε-vinifera (3,6% ± 0 0,2 proc.) i E-vitisin B (17,2 proc. ± 1 proc.). Te specyficzne dla odmiany kompozycje polifenolowe mogą napędzać różne poziomy aktywności kosmetycznej.

2.2. Aktywacja Sirtuiny

W pierwszym kroku oceniliśmy działanie przeciwstarzeniowe GCE z pięciu odmian (Villard Noir, Sauvignon, Savagnin, Riesling i Magdeleine Noire des Charentes). Rycina 2A przedstawia wyniki aktywacji sirtuiny przez dwa czyste stilbenoidy (E-resweratrol i E-ε-winiferyna) w zakresie stężeń 1–100 µM w porównaniu z nikotynamidem jako kontrolą ujemną.

Jak pokazano na Rysunku 2A, w porównaniu z próbką kontrolną, skuteczne stężenie obu sirtuinaktywatorów (E-resweratrolu i E-ε-winiferyny) wynosiło co najmniej 5 µM i osiągnęło 3-krotny wzrost przy 100 µM.E- resweratrol spowodował nieznaczną wyższą aktywację SIRT1 (od 130 procent ± 13 procent dla 5 µM do 307 procent ± 30 procent dla 100 µM) w porównaniu z E-ε-winiferyną (odpowiednio 95 procent ± 15 procent i 280 procent ± 24 procent).

Wiadomo już, że E-resweratrol wykazuje dobroczynne działanie na organizm człowieka poprzez aktywację SIRT1. Horwitz i wsp., 2003 [16] donieśli, że E-resweratrol obniża stałą MichaelisMenten SIRT1 i zwiększa przeżywalność komórek poprzez stymulowanie zależnej od SIRT1-deacetylacji p53. U drożdży E-resweratrol naśladuje ograniczenie kalorii poprzez stymulację SIR2, zwiększając stabilność DNA i wydłużając żywotność o 70 procent. Stacchiotti i in. (2016) [22] potwierdzili, że pierwszą funkcją E-resweratrolu jest zmniejszenie stanu zapalnego i ograniczenie uszkodzeń oksydacyjnych w tkankach. Właściwości przeciwstarzeniowe E-resweratrolu poprzez aktywację SIRT1 są również związane z poprawą metabolizmu oksydacyjnego w kluczowych narządach, takich jak serce, naczynia, mięśnie i nerki [22]. W innych badaniach, w obecności inhibitora SIRT1, takiego jak nikotynamid, E-resweratrol stymulował SIRT1 [16]. Ponadto zaobserwowano efekty zależne od stężenia dla jego aktywności. Co więcej, poprzez stymulację zależnej od SIRT1-deacetylacji p53, cząsteczka E-resweratrolu zwiększa przeżywalność komórek w niekorzystnych warunkach [16]. Wykazano również, że E-resweratrol ma zdolność ochrony komórek ludzkich przed uszkodzeniem lipidów, co może mieć znaczenie dla zapobiegania degradacji lipofilowych struktur bariery skórnej. Chociaż pełny mechanizm działania E-resweratrolu wciąż pozostaje do wyjaśnienia w dalszych badaniach, aktywacja sirtuiny jest głównym działaniem E-resweratrolu w ustalaniu jego różnych korzyści zdrowotnych [23]. Pomimo dobrze opisanej aktywacji sirtuiny przez E-resweratrol [1,16], nadal niewiele wiadomo na temat działania E-ε-winiferyny. Ochronną rolę E-ε-winiferyny opisali Fu i in. (2012) [24] w modelach komórek choroby Huntingtona. Wykazano, że E-ε-winiferyna obniża poziom reaktywnych gatunków tlenu (ROS) i zapobiega utracie potencjału błony mitochondrialnej w komórkach wyrażających zmutowane białko Huntingtona. Ekspresja tego białka skutkuje obniżoną aktywnością deacetylazy SIRT3, a w efekcie prowadzi do obniżenia poziomu komórkowego NAD(plus) i biogenezy mitochondrialnej w komórkach.Z badań wynika, że ​​E-ε-winiferyna aktywuje kinazę aktywowaną przez AMP i wzmaga biogenezę mitochondrialną [24]. W naszych badaniach wykazaliśmy, że E-ε-winiferyna była aktywatorem sirtuiny równoważnym E-resweratrolowi. Następnie przetestowaliśmy potencjał naturalnego ekstraktu bogatego w polifenole GCE do aktywacji SIRT1. Większość GCE (Riesling, Magdeleine Noire, Villard Noir i Savagnin) wykazała stosunkowo wysoką aktywację SIRT1 w porównaniu z próbką kontrolną. Riesling była najbardziej obiecującą odmianą, z 171% aktywacją SIRT1, a następnie Magdeleine Noire (165%), Villard Noir (162%) i Savagnin (142 procent). Tylko GCE z Sauvignon nie wykazał efektu indukcyjnego dla SIRT1. Aktywacja SIRT1 przez GCE z Magdeleine Noire, Villard Noir i Savagnin była co najmniej równoważna aktywacji przez 5 µME-resweratrol. Pierwsze aktywatory sirtuiny odkryto dla SIRT1 w 2003 roku, a najsilniejszym był E-resweratrol [1]. W kilku badaniach opisano również aktywację SIRT1 przez ekstrakty roślinne. Corbi i wsp. (2018) odnotowali obiecujące wyniki dla ekstraktów z cytryny (Lippia citriodora), rzodkwi (Raphanus sativus) i pomidora (Solanum Lycopersicum) [25]. Wang i in. donosili również o działaniu indukującym sirtuinę w tradycyjnych chińskich lekach. Donoszono, że Milkvetch (Astragalus membranaceus), chiński żeń-szeń (Panax ginseng) i trzy-siedem korzeń (Panax notoginseng) wywierają działanie ochronne przed stresem oksydacyjnym w mitochondriach. Wyniki wykazały, że ekstrakty te wzmacniały deacetylowaną aktywność SIRT1 i hamowały tworzenie wewnątrzkomórkowych reaktywnych form tlenu [26]. Następnie GCE reprezentuje obiecujące naturalne składniki odmładzające skórę, szczególnie w porównaniu z silnymi aktywatorami SIRT1, takimi jak E-resweratrol i E-ε-winiferyna. Wykazano, że regulacja sirtuiny przez E-resweratrol i jego pochodne działają poprzez złożone bezpośrednie interakcje w sposób specyficzny dla izoformy [27]. Resweratrol hamuje ludzki SIRT3 i stymuluje SIRT5 i SIRT1 w zależności od złożonych wiązań z kieszenią katalityczną.

2.3. Hamowanie tyrozynazy

2.3.1. Test enzymatyczny

Rysunek 3A przedstawiatyrozynazahamowanie przez dwa czyste stilbenoidy (E-ε-winiferynę i E-resweratrol) i Rysunek 3B przedstawia hamowanie tyrozynazy przez GCE z wybranych odmian w porównaniu z kwasem kojowym, E-resweratrolem i E-ε-winiferyną jako pozytywnymi związkami odniesienia.

Jak pokazano na Figurze 3B, wszystkie testowane GCE, jak również E-resweratrol, E-ε-winiferyna są stosunkowo aktywnymi inhibitorami tyrozynazy. Największy potencjał wykazano dla E-ε-winiferyny (76% ±2 procent) i E-resweratrolu (75% ± 4 procent). GCE przedstawił różne możliwości hamowaniatyrozynaza. Riesling i Villard Noir GCE były najbardziej aktywne z poziomami inhibicji odpowiednio 62,5% i 58,5%.tyrozynazaaktywność hamowania, podczas gdy Sauvignon GCE był mniej skuteczny, jednak z dość skutecznym poziomem hamowania (30,4 procent). Ekstrakty z liści Vitis vinifera L. były już wymieniane w literaturze jako naturalne źródła inhibitorów tyrozynazy [28]. Wykazano, że pochodna E-resweratrolu, oksyresweratrol, hamuje brązowienie w mętnych sokach jabłkowych w stężeniu tak niskim jak 00,01 procent. Stwierdzono, że ten stilbenoid był o około 0,2 procent silniejszy niż kwas kojowy [29].

Chociaż trzciny winogron akumulowały znacznie więcej stylbenoidów niż liście winogron, testy hamowania tyrozynazy na pędach winogron są bezprecedensowe. Hamowanie tyrozynazy GCE w porównaniu ze związkami odniesienia o znanymbielenieaktywność, taka jak E-resweratrol i E-ε-winiferyna, potwierdziła potencjał GCE jako nowych kosmetycznych składników aktywnych. Niniejsze badanie wykazało, że wszystkie testowane GCE były bardzo silnymi inhibitorami tyrozynazy, co ma kluczowe znaczenie dla rozważenia ich potencjału jako środków wybielających skórę.

2.3.2. Wyznaczanie IC50

Zachowanie kinetyczne grzybatyrozynazapodczas hamowania przez E-resweratrol i E-ε-viniferin. Parametry kinetyczne dla tyrozynazy grzybowej uzyskane z Lineweaver-Burkplot dla hamowania przez E-resweratrol (Rysunek 4A, wiersz 1) pokazują, że Km było równe 1.02 (0 µM, kontrola) do 3,43 (100 µM) mM i Vmax było równe 74,63 µM/min (0 µM, kontrola) w porównaniu ze średnią równą 66,38 ± 6,44 µM/min dla różnych testowanych E-resweratrolu stężenia. Wykres Lineweavera-Burka dla hamowania przez E-ε-winiferynę (Rysunek 4B, linia 2) pokazuje, że Km było równe 1,02 (0 µM, kontrola) do 7,63 (100 µM) mM, a Vmax było równe 74,63 µM/min (0 µM, kontrola) względem średniej równej 73,01 ± 1,14 µM/min dla różnych badanych stężeń E-resweratrolu. Wyniki przedstawione na Figurze 4 wykazały, że zarówno E-resweratrol, jak i E-ε-winiferyna są kompetycyjnymi inhibitorami, ponieważ zwiększenie stężenia związków skutkowało powstaniem linii ze wspólnym punktem przecięcia na osi 1/v, ale o różnych nachyleniach. Stałe hamowania każdego inhibitora, KI dla wiązania się z wolnym enzymem (w celu utworzenia kompleksu EI) i KIS dla wiązania z kompleksem enzym-substrat (w celu utworzenia kompleksu ESI) określono za pomocą wykresu wtórnego i powtórnego wykresu wtórnego (ryc. 4), odpowiednio. Wtórne wykresy przedstawiające nachylenia (Km/Vmax) podwójnych odwrotności wykresów w funkcji stężeń inhibitora pozwoliły nam obliczyć stałą dysocjacji EI (KI) odpowiednio 46,25 i 24,22 µM dla E-Resweratrolandu E-ε-winiferyny. Ponowne wykresy wtórne, reprezentujące punkty przecięcia podwójnej wzajemności względem stężeń inhibitora, pozwoliły nam obliczyć stałą dysocjacji ESI (KIS) wynoszącą odpowiednio 364.86 i 2355,73 µM dla E-resweratrolu i E-ε-winiferyny. Dlatego też, jeśli te obliczenia proponowały przypuszczalne wiązanie, które mogłoby wystąpić albo z wolnym enzymem tyrozynazy, albo z enzymem tyrozynazy związanym z jego substratem (obecne wyniki z 7,9- i 97.3-razami wyższymi wartościami KIS dla E -resweratrol i E-ε-winiferyna), wyniki te silnie sugerowały znacznie słabsze powinowactwo wiązania do kompleksu enzym-substrat tyrozynazy, a nie do wolnego enzymu tyrozynazy, co wskazuje, że dominujący mechanizm hamowania każdego inhibitora jest konkurencyjny.

Obliczyliśmy wartości IC50 wynoszące 52,93 µM dla E-ε-winiferyny i 60,75 µM dla E-resweratrolu. Te wartości IC50 mieściły się w zakresach do podanych w literaturze [13].

Niniejsze badanie wykazało, że E-resweratrol i E-ε-winiferyna bardzo skutecznie hamują enzym. GCE również wystawionetyrozynazazahamowanie na stosunkowo wysokim poziomie. Poprzednie doniesienia wykazały, że E-ε-winiferyna jest najbardziej aktywnym inhibitorem tyrozynazy, o IC50=40,1 µM. Jest czterokrotnie silniejszy niż kwas kojowy (IC50=16.9 µM) i 62-razem bardziej aktywny niż kwas askorbinowy (IC50=255 µM) w hamowaniu tyrozynazy. E-resweratrol ma umiarkowaną aktywność hamującą (IC50=52,8 µM), dość zbliżoną do toarbutyny (IC50=55,1 µM) [12].

2.4. Dokowanie molekularne w celu wiązania E-resweratrolu i E-ε-winiferyny z tyrozynazą2.4. Dokowanie molekularne do wiązania E-resweratrolu i E-ε-winiferyny z tyrozynazą

Rysunek 5 przedstawia dane dotyczące dokowania wykonane dla E-resweratrolu i E-ε-winiferyny. Wyniki danych z dokowania wyraźnie wskazują, że E-resweratrol i E-ε-winiferyna wykazują potencjał hamowania tyrozynazy. Jednak powinowactwo do E-ε-winiferyny jest nieco wyższe z obliczonym powinowactwem -7,73 w porównaniu z -5,95 kcal/mol w konsekwencji interakcji z His85 i His244 poprzez wiązania wodorowe i układanie π-π w porównaniu z tylko jedną interakcją związaną z wodorem z Met280 odpowiednio dla E-ε-viniferinversus E-resweratrol. Oba powinowactwa były silniejsze dla tych dwóch stilbenoidów niż zaobserwowane dla kwasu kojowego (-5,7 kcal/mol [30]) oraz dla glabrydyny (-7,15 kcal/mol [31]) przy zastosowaniu podobnego podejścia dokowania. W porównaniu z l-DOPA te dwa stilbenoidy wiążą się ztyrozynazaw tym samym miejscu, potwierdzając w ten sposób ich konkurencyjny mechanizm hamowania [31]. Powinowactwo do tych dwóch stilbenoidów mieściło się w zakresie obserwowanym dla l-DOPA (tj. -6,98 kcal/mol [31]).

Wyniki potwierdziły poprzednie wyniki testów enzymatycznych, w których E-ε-winiferyna była silniejszym inhibitorem tyrozynazy niż E-resweratrol.

Tyrozynazadysfunkcje postępują wraz z wiekiem i mogą prowadzić do czerniaka złośliwego, a także zaburzeń pigmentacyjnych, takich jak piegi czy melizma [17]. E-resweratrol i GCE bogate w E-ε-viniferin są dobrą alternatywą jako naturalne źródło tych stylbenoidów w zapobieganiu niektórym chorobom pigmentacyjnym.

2.5. Biodostępność i potencjał przepuszczalności skóry

Rysunek 6 przedstawia kluczowe właściwości fizykochemiczne głównych składników GCE, które decydują o ich ogólnej biodostępności i przepuszczalności skóry.

Ocena przepuszczalności ocenia na pierwszy rzut oka zdolność penetracji cząsteczki przez skórę. Różowe strefy środkowe na wykresach radarowych na rysunku 6 reprezentują optymalny zasięg dla każdej właściwości. Logarytm współczynnika podziału logP (lipofilowość) powinien przybierać wartości między −0,7 a plus 5.0, masa cząsteczkowa (wielkość cząsteczki) powinna wynosić między 150 a 500 g/M , polarność (topologiczna powierzchnia polarna, TPSA) powinna mieścić się w zakresie od 20 do 130 Å2, rozpuszczalność (log S) nie powinna być wyższa niż 6, nasycenie (ułamek węgla w hybrydyzacji sp3) nie powinno być mniejsze niż 0,25, a elastyczność nie większa niż 9 wiązania obrotowe [32]. Na podstawie tych obliczeń oceniono, że cząsteczkami GCE, które z największym prawdopodobieństwem będą wchłaniane przez organizm, są katechina i epikatechina (o tych samych właściwościach fizykochemicznych), E-resweratrol, E-piceatannol oraz ampelopsyna A. Cząsteczki te charakteryzowały się odpowiednią wielkością cząsteczkową , rozkład elektronów, polarność i charakter cząsteczki. Cząsteczki charakteryzujące się wyższą masą cząsteczkową, takie jak E-miyabenol C, E-vitisin B, a także hopeafenol i izohopefenol (o tych samych właściwościach fizykochemicznych), z fizykochemicznego punktu widzenia są godne uwagi, ponieważ prawie nie pokonują barier fizycznych, takich jak błony, a także skórę właściwą. E-ε-vinifera spełnia większość zasad wymaganych dla dobrej przepuszczalności skóry. Polarność, lipofilność, nierozpuszczalność, elastyczność i wielkość cząsteczek oszacowano za pomocą równań matematycznych. Warto zwrócić uwagę na fakt, że obliczenia są jedynie metodami szacunkowymi dotyczącymi przepuszczalności kombinezonu, a testy penetracji skórnej będą wymagane w celu potwierdzenia przewidywań.

W ciągu ostatnich dziesięcioleci opracowano różne zestawy reguł, które pomogły określić odpowiednie prognozy wchłaniania leków. Najpopularniejsze kryteria to reguła pięciu Lipińskiego [33], ale dostępnych jest również kilka innych podejść [34–37]. W tabeli 2 przedstawiono informacje o zgodności GCEpolifenoli z powszechnie znanymi regułami biodostępności: Lipiński (MW < 500,="" logp="">< 4,15,="" liczba="" atomów="" nor="" o="">< 10,="" liczba="" grup="" n="" lub="" oh="">< 5)="" [="" 33],="" ghose="" (160=""><480, −0,4=""><5,6,40><130, 20=""><70) [34],="" veber="" (liczba="" wiązań="" obrotowych=""><10,>< 140)="" [35],="" egan="" (logp="" <="" 5.88,="" tpsa="" <="" 131.6)="" [36]="" and="" muegge="" (200="" <="" mw="" <="" 600,="" −2="" <="" logp="" <="" 5,="" tpsa="">< 150,="" numbers="" of="" rings="" <="" 7,="" number="" of="" carbons="" >="" 4,="" number="" of="" heteroatoms="" >="" 1,="" number="" of="" rotatable="" bonds="" <="" 15,="" nha="" <="" 10,="" nhd="" <="" 5)="">

Na podstawie tych obliczeń można ze stosunkowo dużym prawdopodobieństwem wskazać, które struktury mają największe prawdopodobieństwo penetracji bariery skórnej. Polifenole GCE charakteryzujące się MW powyżej 500 g/mol (hopefenol, izohopefenol, E-mijabenol C i E-wityzyna B) są jednocześnie zbyt lipofilowe (logP > 5) i charakteryzują się nieprawidłowym rozkładem elektronów (TPSA > 140) oraz właściwościami wiązania wodorowego (NHD > 5 lub NHA > 10). Ponadto objętości cząsteczkowe tych cząsteczek mogą ograniczać ich wchłanianie przez skórę, a z przestrzennego punktu widzenia naruszenia wiązań molekularnych dodatkowo ograniczałyby ich zdolność do aktywności w strukturach skóry. Związki takie po aplikacji miejscowej pozostają na powierzchni lub, w zależności od stanu skóry, penetrują tylko zewnętrzne warstwy hydrofobowej warstwy rogowej naskórka. Właściwości bariery skórnej opierają się na dwuwarstwach lipidowych. Skuteczne leki transdermalne zostały ograniczone progami parametrów jeszcze bardziej restrykcyjnymi niż zasada pięciu [19]. Dlatego nowo dostępne obliczenia statystyczne wyjaśniają bardzo dokładne zasady dotyczące transdermalnych dróg podawania substancji czynnych. Podstawą są głównie ich parametry fizykochemiczne. Nowe wartości progowe dla obecnie stosowanych leków przezskórnych to: MW < 335,="" nhd="" mniejsze="" lub="" równe="" 2,="" nha="" mniejsze="" lub="" równe="" 5="" oraz="" logp="">< 5="">

Pomimo niezdolności do pokonania bariery warstwy rogowej naskórka, wysokocząsteczkowe stilbenoidy (trimery i tetramery resweratrolu) nadal cieszą się dużym zainteresowaniem ze względu na ich korzystne działanie na skórę. Jak już wykazano w wielu badaniach, metabolity te wykazują silne właściwości antyoksydacyjne [38], a jednocześnie ze względu na swój charakter wyróżniają się wysokim przedziałem na składniki międzykomórkowe oraz lipofilową barierą ochronną skóry. W przypadku stanów szkodliwych i przesuszonej skóry polifenole te mogą odgrywać ważną rolę jako aktywne emolienty o zdolnościach regeneracyjnych i antyoksydacyjnych na powierzchni skóry [39].

Biorąc pod uwagę powyższe zasady penetracji skóry, najsilniejszymi kandydatami na aktywne składniki kosmetyczne są wówczas katechina, epikatechina, E-piceatannol, E-resweratrol i E-ε-vinifera. Nasze obliczenia przewidują, że te polifenole mogą pokonywać bariery skórne i działać w obrębie struktury skóry właściwej, co jest szczególnie ważne ze względu na ich aktywność dla funkcji enzymatycznych skóry. Potwierdzona zdolność do modulacjityrozynazaoraz aktywność sirtuiny i ich dobre przewidywanie penetracji skóry pozwala niskocząsteczkowym stilbenoidom (monomerom i dimerom resweratrolu), takim jak E-resweratrol i E-ε-vinifera, działać jako odmładzający ibielenieagentów. Ponadto ich wysoka aktywność antyoksydacyjna zapewnia wielopoziomowe działanie na komórki skóry. GCE to mieszanki polifenoli, które wykazują różne aktywności biologiczne i charakteryzują się różnymi właściwościami fizykochemicznymi. Dzięki temu ekstrakty zapewniają wielokierunkowe działanie terapeutyczne oraz skuteczną ochronę ludzkiej skóry.

Dlatego można stwierdzić, że bogate w polifenole GCE byłyby bardziej korzystne w zabiegach pielęgnacyjnych niż kapsułkowane czyste stilbenoidy [22]. Wciąż potrzebne są dalsze eksperymenty na modelach skóry, aby potwierdzić potencjał GCE jako naturalnego wielofunkcyjnego składnika przyjaznych dla środowiska dermokosmetyków.

3. Materiały i metody

3.1. Chemikalia i odczynniki

E-resweratrol i inne standardy zakupiono z Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). E-ε-vinifera oczyszczono z pędów winogron, jak opisano wcześniej [40]. Grzybtyrozynazaroztwór i L-DOPA otrzymano z Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). Ultraczystą wodę otrzymano z systemu oczyszczania wody Millipore Milli-Q (Merck Millipore, miasto, Niemcy).

3.2. Materiał roślinny

Trzciny winogron z pięciu wybranych odmian (Villard Noir, Sauvignon, Savagnin, Riesling i Magdeleine Noire des Charentes) zostały zebrane w styczniu 2016 r. w repozytorium winogron INRA w „Domaine de Vassal” (34340 Marseillan-Plage, Francja: http://www .1.montpellier.inra.fr/vassal). Dla każdej odmiany zebrano dwadzieścia pięć szypułek winogron po przycięciu pięciu szypułek z pięciu różnych winorośli. Łodygi winogron pocięto na odcinki o długości 10 cm i przechowywano przez 10 tygodni w temperaturze 20°C w ciemności, umożliwiając akumulację E-resweratrolu i E-piceatannolu po zbiorach. Następnie łodygi winogron zmielono najpierw za pomocą chłodzonego młynka analitycznego (Ika-Werke, Staufen, Niemcy) i dodatkowo młynka tnącego (Polymic PX-MFC 90 D, Kinematica AG, Lucerna, Szwajcaria) w celu uzyskania cząstek o wielkości 1 mm. Proszek liofilizowano i przechowywano w -20◦C do czasu ekstrakcji [41]. W sumie 20 g suchego proszku wyekstrahowano 500 ml mieszaniny etanol/woda (60/40; v/v). Próbki ekstrahowano przez 45 min w temperaturze wrzenia w 83◦C i przesączono. Następnie supernatanty odparowano przy użyciu wyparki obrotowej Heidolph 94200 (Bio block, Schwabach, Niemcy) sprzężonej z pompą próżniową (seria Vacuubrand PC500, Wertheim, Niemcy). Otrzymane ekstrakty liofilizowano, dając wysuszony GCE dostępny do dalszych testów in vitro.

3.3. Analizy HPLC

Układ HPLC składał się z urządzenia Waters 717 plus Autosampler, fotodiodowego detektora diodowego Waters 996 i pompy Waters 600 (Waters, Milford, MA, USA) i był kontrolowany przez oprogramowanie Empower 2 (Waters). , Milford, MA, USA). Separację analitu uzyskaliśmy poprzez nastrzyk 20 µL ekstraktów na kolumnę wypełnioną cząstkami 3 µm (250 × 4 mm, Multospher 120 RP18HP;CS-Service, Langerwehe, Niemcy) w 24◦C. Faza ruchoma składała się z 0,1% kwasu fosforowego (rozpuszczalnik A) i acetonitrylu (rozpuszczalnik B) pompowanego z szybkością 0,5 mL min-1. Zastosowaliśmy gradient liniowy, który zaczynał się od 5 procent B i wzrósł do 72,5% w ciągu 60 minut. Oznaczenie ilościowe przeprowadzono przy użyciu czystych standardów przy użyciu pięciopunktowej krzywej kalibracji (0–100 ppm) w trybie detekcji Maxplot. Izohopefenol oznaczono ilościowo stosując krzywą kalibracyjną hopeafenolu.

3.4. Aktywacja Sirtuiny

Ocenę aktywacji sirtuiny (SIRT1) przeprowadzono przy użyciu GCE przy 50 µg/ml w porównaniu z 10 µM czystego E-resweratrolu i E-ε-winiferyny (jako aktywatorów) oraz nikotynamidu (jako inhibitora). Aktywność SIRT1 określono przy użyciu SIRT1 Assay Kit (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) zgodnie z instrukcjami producenta i przy użyciu spektrometru fluorescencyjnego (Biorad VersaFluor, Marnes-la-Coquette, Francja) ustawionego ze wzbudzeniem 340 nm i emisją 430 nm. Względną aktywność SIRT1 ujawniono jako względny procent w stosunku do odpowiedniej kontroli (dodając taką samą objętość rozpuszczalnika ekstrakcyjnego) dla każdego ekstraktu.

3.5. Hamowanie tyrozynazy

3.5.1. Test enzymatyczny

Test hamowania tyrozynazy mierzono w sposób opisany przez Neely et al. (2009) [42]. Każdy 1 ml test zawierał końcowe stężenie 100 mM fosforanu sodu (pH 6,5) i 2 mM L-DOPA. Na koniec do mieszaniny dodano 0,2 mg/ml roztworu tyrozynazy grzybowej (Sigma-Aldrich). rozpuszczalnika ekstrakcyjnego zastępującego ekstrakt, rutynowo. Procesy reakcji śledzono stosując czytnik mikropłytek (BioTek ELX800; BioTek Instruments Inc., Winooski, VT, USA) przy długości fali 475 nm. Thetyrozynazadziałanie hamujące wyrażono jako procent hamowania w stosunku do odpowiedniej kontroli dla każdego ekstraktu. Stosowane w badaniu stężenia związków wzorcowych wynosiły 100 µM, a stężenie testowanych ekstraktów 50 µg/ml. Eksperymenty powtórzono trzykrotnie, a średnie wyniki z wartościami odchylenia standardowego podano na rycinie 3B.

Cistanche hamuje ekspresję tyrozynazy

3.5.2. Wyznaczanie IC50

Aby przyjąć zakres ilości inhibitora potrzebnego do obliczenia wartości IC50, zastosowano różne stężenia E-resweratrolu i E-ε-winiferyny. Testy użyte do obliczeń przygotowano w zakresie inhibitorów od 1 do 100 µM. W przypadku istotnej zmiany kształtu krzywej aktywność-czas współczynniki obliczono w oparciu o regiony wskaźników stanu stacjonarnego. Stężenie inhibitora powodującego 50% inhibicję aktywności tyrozynazy zostało ekstrapolowane z procentowych krzywych aktywności-inhibitor [42]. Eksperymenty powtórzono trzykrotnie, a średnią z wartości IC50 podano na Figurach 4A i 4B.

3.6. Dane dokujące dla wiązania E-resweratrolu i E-ε-winiferyny z tyrozynazą

Symulację dokowania molekularnego E-resweratrolu i E-ε-winiferyny przeprowadzono za pomocą oprogramowania Ligplot plus (European Bioinformatics Institute, Cambridge, UK), autodock Vina (The Scripps ResearchInstitute, La Jolla, CA, USA) i Pymol v2.1.1 ( Schrodinger, New York, NY, USA) w celu przewidzenia konformacji tych ligandów cząsteczek w odpowiednim miejscu wiązania celutyrozynaza(WPB: 2Y9X).

3.7. Biodostępność i potencjał przepuszczalności skóry

Potencjał podobieństwa do leków, a także przepuszczalność skóry, jako kluczowe czynniki skuteczności aktywnej cząsteczki, można zdefiniować jako złożoną równowagę różnych właściwości fizykochemicznych i cech strukturalnych, które decydują o tym, czy cząsteczka jest podobna do znanych leków. Właściwości te, głównie hydrofobowość, rozkład elektronów, charakterystyka wiązań wodorowych, wielkość cząsteczek, elastyczność oraz obecność różnych właściwości farmakoforycznych, wpływają na zachowanie cząsteczek w żywym organizmie, w tym biodostępność, właściwości transportowe, powinowactwo do białek, reaktywność, toksyczność, metabolizm stabilność i wiele innych [43]. Proste kryteria zliczania (takie jak limity masy cząsteczkowej, logP lub liczba donorów lub akceptorów wiązań wodorowych) również mają stosunkowo ograniczone zastosowanie i są przydatne jedynie do odrzucenia niektórych potencjalnych aktywnych cząsteczek z dalszych badań [19]. Wartości Molecular PolarSurface Area (TPSA) dla wszystkich struktur obliczono w oparciu o metodologię opublikowaną przez Ertl et al. [44] jako sumę udziałów fragmentów w całej cząsteczce. Uwzględniono również fragmenty polarne wyśrodkowane na O- i N. Metoda obliczania objętości cząsteczek oraz wartości logarytmów współczynnika podziału (log) została opracowana przy użyciu SwissADME [32]. Geometrie molekularne 3D dla zestawu treningowego zostały w pełni zoptymalizowane metodą półempiryczną AM1 [45,46]. „Zasada pięciu” Lipińskiego stwierdza, że ​​większość „lekopodobnych” cząsteczek ma logP mniejszy lub równy 5, masę cząsteczkową mniejszą lub równą 500, liczbę akceptorów wiązań wodorowych mniejszą lub równą 10 i liczbę donorów wiązań wodorowych mniej równy lub równy 5. Cząsteczki naruszające więcej niż jedną z tych zasad mogą mieć bardzo niską biodostępność lub w ogóle jej brak [33]. Obliczenia predykcji aktywności biologicznej opierają się na statystyce bayesowskiej w celu porównania struktur reprezentatywnych ligandów aktywnych na danym celu ze strukturami nieaktywnych cząsteczek oraz identyfikacji cech podstruktury (które z kolei decydują o właściwościach fizykochemicznych) typowych dla cząsteczek aktywnych [47].

4. Wnioski

GCE wzbogacony w polifenole był w stanie aktywować SIRT1 na poziomie podobnym do 5 µM E-resweratrolu lub E-ε-winiferyny. Skórabieleniepotencjał przeztyrozynazaTest hamowania wykazał, że zdolności GCE były porównywalne z czystym E-resweratrolem i E-ε-winiferyną. Szczególnie Villard Noir i Riesling GCE mogą być przydatne jako środki rozjaśniające skórę i mogą być stosowane na ciemne plamy w dermokosmetykach. Ponadto lekopodobność składników GCE wykazywała różne możliwości przenikania przez skórę, zapewniając wystarczającą skuteczność w różnych strukturach skóry właściwej. Wspomagane przez te związki aktywne procesy fizjologiczne skóry zapewniają prawidłowe funkcjonowanie bariery skórnej oraz sprawną regenerację tkanek skóry. Podsumowując, potencjalne zastosowanie GCE cieszy się ogromnym zainteresowaniem nie tylko przemysłu, ale także konsumentów, którzy coraz częściej domagają się naturalnych składników, wymaganych w tzw. „kosmetykach ekologicznych”.

Bibliografia

1. Bonkowski, MS; Sinclair, DA Spowolnienie starzenia się z założenia: wzrost NAD plus i związków aktywujących sirtuinę. Nat. Ks. Mol. Biol. 2016, 17, 679–690. [Odn.]

2. Nunes, MA; Rodrigues, F.; Oliveira, MBPP Produkty uboczne przetwarzania winogron jako aktywne składniki dla CosmeticProposes. W Podręczniku produktów ubocznych przetwarzania winogron: Zrównoważone rozwiązania; Elsevier Inc.: Wiedeń, Austria, 2017; s. 267–292. ISBN 9780128098714.

3. Pineiro, Z.; Guerrero, RF; Fernández-Marin, MI; Cantos-Villar, E.; Palma, M. Wspomagana ultradźwiękami ekstrakcja stylbenoidów z łodyg winogron. J. Rolnictwo. Chemia Spożywcza 2013, 61, 12549–12556. [Odn.]

4. Houille, B.; Besseau, S.; Delanoue, G.; Oudin, A.; Papon, N.; Clastre, M.; Simkin, AJ; Guérin, L.; Courdavault, V.; Giglioli-Guivarc'H, N.; i in. Na skład i rozkład tkankowy pędów winogronowych stylbenoidów ma wpływ ciśnienie mączniaka rzekomego w winnicy. J. Rolnictwo. Chemia Spożywcza 2015, 63.[Odn.]

5. Lambert, C.; Ryszard T.; Renouf, E.; Bisson, J.; Waffo-Téguo, P.; Bordenave, L.; Ollat, N.; Mérillon, J.-M.; Cluzet, S. Analizy porównawcze stylbenoidów w pędach głównych odmian Vitis vinifera L.. J. Rolnictwo. Food Chem.2013, 61, 11392–11399. [Odsyłacz] [PubMed]

6. Cetin, ES; Altinoz, D.; Tarçan, E.; Göktürk Baydar, N. Skład chemiczny pędów winogronowych. Ind. Uprawy Prod.2011, 34, 994-998. [Odn.]

7. Torres, P.; Avivila, JG; De Vivar, AR; Garcia, AM; Marína, JC; Aranda, E.; Céspedes, CL Przeciwutleniacz i regulujące wzrost owadów działanie stylbenów i ekstraktów z Yucca periculosa. Fitochemia 2003,64, 463-473. [Odn.]

8. Xue, YQ; Di, JM; Luo, Y.; Cheng, KJ; Wei, X.; Shi, Z. Oligomery resweratrolu do profilaktyki i leczenia nowotworów. Tlenek. Med. Komórka. Longew. 2014, 2014. [Odsyłacz]

9. Jang, M.; Cai, L.; Udeani, GO; Spowolnienie, KV; Tomasza CF; Bukowiec, CWW; Fong, HHS; Farnsworth, NR; Kinghorn, AD; Mehta, RG; i in. Przeciwnowotworowe działanie resweratrolu, naturalnego produktu pochodzącego z winogron. Nauka 1997, 275, 218–220. [Odn.]

10. Adrian, M.; Jeandet, P.; Veneau, J.; Weston, LA; Bessis, R. Biologiczna aktywność resweratrolu, związku stylbenowego z winorośli, przeciwko Botrytis cinerea, czynnikowi powodującemu szarą pleśń. J.Chem. Ek. 1997,23, 1689-1702. [Odn.]

11. Liu, F.; Tsai, Y.; Tsai, H.; Yu, H. Przeciwzapalne i chroniące narządy działanie resweratrolu w urazie krwotocznym urazu. Zapalenie mediatorów 2015, 2015, 38–42. [Odn.]

12. Morel-Salmi, C.; Julia A.; Wigor, C.; Vercauteren, J. Ogromna różnica w adsorpcji PVDF między resweratrolem a ε-viniferą pozwala na ich ilościowe oczyszczenie i ocenę ich właściwości antytyrozynazowych.Chromatographia 2014, 77, 957–961. [Odsyłacz] [PubMed]

13. Honisch, C.; Otto, A.; de Matos, AD; Vincenzi S.; Ruzza, P. Izolacja inhibitora tyrozynazy z soku z niedojrzałych winogron: badanie spektrofotometryczne. Chemia Spożywcza 2019, 305, 125506. [Odsyłacz] [PubMed]

14. Skoczy´nska, A.; Budzisz E.; Trznadel-Grodzka E.; Rotsztejn, H. Melanina i lipofuscyna jako oznaki starzenia się skóry. Postęp. Dermatologii i Alergolu. 2017, 34, 97–103. [Odsyłacz] [PubMed]

15. Zolghadri, S.; Bahrami, A.; Hassan Khana, MT; Munoz-Munoz, J.; Garcia-Molina, F.; Garcia-Canovas, F.; Saboury, AAA kompleksowy przegląd inhibitorów tyrozynazy. J. Enzym Inhibit. Med. Chem. 2019, 34, 279–309. [Odn.]

16. Howitz, KT; Bitterman, KJ; Cohena, HY; Laming, DW; Lavu, S.; drewno, JG; Zipkin, RE; Chung P.; Kisielewski A.; Zhang, LL; i in. Aktywatory drobnocząsteczkowe sirtuin wydłużają żywotność Saccharomyces cerevisiae. Natura 2003, 425, 191-196. [Odn.]

17. Abbasi, BH; Siddiquah, A.; Tungmunnitum, D.; Bose, S.; Younas, M.; Garros L.; Drouet, S.; Giglioli-Guivarc'h, N.; Hano, C. Isodon rugosus (Wall. ex Benth.) Kultury dorsza in vitro: Założenie, charakterystyka fitochemiczna i działanie przeciwutleniające i przeciwstarzeniowe in vitro. wewn. J. Mol. Nauka. 2019, 20.[Odsyłacz]

18. Malinowska, M.; Mirosław B.; Sikora E.; Ogonowski J.; Wojtkiewicz AM; Szaleniec M.; Pasikowska-Piwko M.; Eris, I. Nowe estry lupeolu jako substancje czynne w leczeniu uszkodzeń skóry.PLoS ONE 2019, 14, 1-15. [Odn.]

19. Choy, YB; Prausnitz, MR Zasada pięciu dla nie-doustnych dróg podawania leku: oftalmiczna, wziewna i przezskórna. Farmacja Res. 2011, 28, 943-948. [Odn.]

20. Kęs, K.; Dugé de Bernonville, T.; Oudin, A.; Courdavault, V.; Brousseau, S.; Giglioli-Guivarc'h, N.; Lanoue, A.Obróbka pozbiorowa biomasy drzewnej z dużego zbioru europejskich odmian winogron: Wpływ na selekcję produktów ubocznych bogatych w polifenole. Utrzymanie ACS. Chem. Inż.. złożony.

21. Kęs, K.; Houille, B.; Dugé de Bernonville, T.; Besseau, S.; Oudin, A.; Courdavault, V.; Delanoue, G.; Guérin, L.; Clastre, M.; Giglioli-Guivarc'h, N.; i in. Metabolomika terenowa Vitis vinifera L. stems dostarcza nowych informacji na temat rozróżniania genotypów i struktury metabolizmu polifenoli. Przód. Plant Sci.2018, 9, 1-15. [Odn.]

22. Stacchiotti A.; Favero, G.; Rezzani, R. Resweratrol i aktywatory SIRT1 do leczenia chorób związanych ze starzeniem się i wiekiem. W resweratrolu — dodawanie życia do lat, a nie dodawanie lat do życia; IntechOpen: Londyn, Wielka Brytania, 2019. [CrossRef]

23. Malik, S.; Mohar, D. System Sirtuin: Święty Graal Resweratrolu? J. Clin. Do potęgi. Kardiologia. 2012, 3, 216–219. [Odn.]

24. Fu, J.; Jin, J.; Cichewicz RH; Hageman SA; Ellisa, TK; Xiang, L.; Peng, Q.; Jiang, M.; Arbes, N.; Hotaling, K.; et al. Trans-(-)-ε-vinifera zwiększa mitochondrialną sirtuinę 3 (SIRT3), aktywuje kinazę białkową aktywowaną przez AMP (AMPK) i chroni komórki w modelach choroby Huntingtona. J. Biol. Chem. 2012, 287, 24460-24472. [Odsyłacz] [PubMed]

25. Corbi, G.; Conti, V.; Komici, K.; Manzo, V.; Filippelli, A.; Palazzo, M.; Vizzari, F.; Davinelli, S.; Di Costanzo, A.; Scapagnini, G.; i in. Fenolowe ekstrakty roślinne indukują aktywność sirt1 i zwiększają poziom antyoksydantów w sercu i wątrobie królika. Tlenek. Med. Komórka. Longew. 2018, 2018. [Odsyłacz] [PubMed]

26. Wang, Y.; Liang, X.; Chen, Y.; Zhao, X. Badania przesiewowe aktywatorów SIRT1 z roślin leczniczych jako bioaktywnych związków przeciwko uszkodzeniom oksydacyjnym w funkcji mitochondriów. Tlenek. Med. Komórka. Longew. 2016, 2016, 1–10.[Odsyłacz]

27. Gertz, M.; Nguyen, GTT; Fischer, F.; Suenkel B.; Schlicker, C.; Fränzel B.; Tomaszchewski J.; Aladini, F.; Becker, C.; Wolters, D.; i in. Molekularny mechanizm bezpośredniej aktywacji sirtuiny przez resweratrol. PLoS ONE2012, 7, 1–12. [Odn.]

28. Lin, YS; Chen, HJ; Huang, JP; Lee, PC; Tsai, CR; Hsu, TF; Huang, WY Kinetyka aktywności hamującej tyrozynazę przy użyciu ekstraktów z liści Viti's vinifera. Biomed Res. wewn. 2017, 2017. [Odsyłacz]

29. Likhitwitayawuid, K. Stilbenes o działaniu hamującym tyrozynazę. Aktualn. Nauka. 2008, 94, 44–52.

30. Ullah, S.; Park, Y.; Ikram, M.; Lee, S.; Park, C.; Kang, D.; Yang, J.; Akter, J.; Yoon, S.; Chun, P.; i in. Projektowanie, synteza i działanie antymelanogenne pochodnych cynamonianu. Bioorganiczna Med. Chem. 2018, 26, 5672–5681. [Odsyłacz]

31. Chen, J.; Yu, X.; Huang, Y. Mechanizmy hamujące glabrydyny na tyrozynazie. Spectrochim. Acta-Część A Mol.Biomol. Widmo. 2016, 168, 111–117. [Odn.]

32. Daina, A.; Michalin, O.; Zoete, V. SwissADME: bezpłatne narzędzie internetowe do oceny farmakokinetyki, podobieństwa leków i przyjazności dla chemii medycznej małych cząsteczek. Nauka. Rep. 2017, 7, 1–13. [Odn.]

33. Lipiński, CA; Lombardo, F.; Dominy, BW; Feeney, PJ Podejścia eksperymentalne i obliczeniowe do szacowania rozpuszczalności i przepuszczalności w warunkach odkrywania i opracowywania leków. Przysł. Dostawa narkotyków. Rev.2012, 64, 4-17. [Odn.]

34. Ghose, AK; Viswanathan, VN; Wendoloski, JJ Podejście oparte na wiedzy w projektowaniu kombinatorycznych lub medycznych bibliotek chemii do odkrywania leków. 1. Jakościowa i ilościowa charakterystyka baz znanych leków. J. Grzebień. Chem. 1999, 1, 55–68. [Odsyłacz] [PubMed]

35. Veber, DF; Johnsona, SR; Cheng, HY; Smith, BR; Oddział, KW; Kopple, KD Właściwości molekularne wpływające na biodostępność po podaniu doustnym kandydatów na leki. J. Med. Chem. 2002, 45, 2615–2623. [Odsyłacz] [PubMed]

36. Egan, WJ; Merz, KM; Baldwin, JJ Przewidywanie wchłaniania leku za pomocą statystyki wielowymiarowej. J. Med. Chem.2000, 43, 3867-3877. [Odn.]

37. Muegge, I.; Hej, SL; Brittelli, D. Proste kryteria wyboru substancji chemicznej podobnej do leku. J. Med. Chem.2001, 44, 1841-1846. [Odn.]

38. Soural, I.; Vrchotová, N.; Tˇríska, J.; Balik, J.; Horník, Š.; Cuˇrínová, P.; Sýkora, J. Różne metody ekstrakcji do otrzymywania stylbenów z trzciny winogronowej Vitis vinifera L. Molecules 2015, 20, 6093–6112. [Odn.]

39. Chen, CP; Chen, CC; Huang, CW; Chang, YC Ocena właściwości molekularnych zaangażowanych w transport małych cząsteczek w warstwie rogowej naskórka: Ilościowa zależność struktura-aktywność dla przepuszczalności skóry. Molekuły 2018, 23. [CrossRef]

40. Houille B.; Papon, N.; Boudesocque, L.; Bourdeaud, E.; Besseau, S.; Courdavault, V.; Enguehard-Gueiffier, C.; Delanoue, G.; Guérin, L.; Bouchara, J.-P.; i in. Działanie przeciwgrzybicze pochodnych resweratrolu przeciwko gatunkom Candida. J. Nat. Szturchać. 2014, 77, 1658-1662. [Odn.]

41. Kęs, K.; Houille, B.; Brousseau, S.; Melin, C.; Oudin, A.; Papon, N.; Courdavault, V.; Castro, M.; Giglioli-Guivarc'h, N.; Lanoue, A. Stres mechaniczny szybko wywołuje E-resweratrol i E-piceatannolbiosyntezę w pędach winogron przechowywanych jako świeżo przycięty produkt uboczny. Chemia Spożywcza 2018, 240, 1022–1027.[Odsyłacz]

42. Neeley, E.; Fritch, G.; Fuller, A.; Wolfe, J.; Wright, J.; Flurkey, W. Różnice w wartościach IC50 z czystością tyrozynazy grzybowej. wewn. J. Mol. Nauka. 2009, 10, 3811–3823. [Odn.]

43. Mignani S.; Rodrigues, J.; Tłuc.; Jalal R.; Singh, PP; Majoral, JP; Vishwakarma, RA Prezentowane filtry podobieństwa leków w chemii medycznej podczas procesu optymalizacji trafień i ołowiu: jak dalece można je uprościć? Lek Discov. Dzisiaj 2018, 23, 605–615. [Odsyłacz] [PubMed]

44. Ertl, P.; Rohde, B.; Selzer, P. Szybkie obliczanie pola powierzchni polarnej molekularnej jako sumy udziałów opartych na fragmentach i ich zastosowanie do przewidywania właściwości transportu leków. J. Med. Chem. 2000, 43, 3714-3717. [Odsyłacz][PubMed]

45. Dewara, MJS; Zoebisch, EG; Healy, EF; Stewart, JJP AM1: Nowy kwantowy mechaniczny model molekularny ogólnego przeznaczenia1. J. Am. Chem. Soc. 1985, 107, 3902–3909. [Odn.]

46. ​​Rocha, GB; Freire, RO; Simasa, AM; Stewart, JJP RM1: Ponowna parametryzacja AM1 dla H, C, N, O, P, S, F, Cl, Br i IJ Comput. Chem. 2006, 27, 1101-1111. [Odn.]

47. Rocchetti, G.; Gatti, M.; Bavaresco, L.; Lucini, L. Metabolomika nieukierunkowana w celu zbadania składu fenolowego win Chardonnay o różnym pochodzeniu. J. Kompozy spożywcze. Analny. 2018, 71, 87-93. [Odn.]