Odpowiedzi immunologiczne gospodarza na powierzchniowe białka warstwy S (SLP) Clostridioides difficile

Abstrakcyjny:

Clostridioides difficile, patogen szpitalny, jest nowym patobiontem jelitowym powodującym biegunkę związaną z antybiotykami. Zakażenie C. difficile obejmuje kolonizację jelit i uszkodzenie bariery nabłonkowej jelit, co prowadzi do indukcji reakcji zapalnych/immunologicznych. Ekspresja dwóch głównych egzotoksyn, TcdA i TcdB, jest główną przyczyną patogenności C. difficile. Przyłączenie białek ściany komórkowej bakterii lub białek powierzchniowej warstwy S (SLP), takich jak SlpA, do komórek nabłonka gospodarza ma kluczowe znaczenie dla zjadliwości. Wykazano, że te składniki powierzchniowe są nie tylko toksynami, ale także wysoce immunogenne. Ostatnie badania wskazują, że SLP C. difficile odgrywają ważną rolę w adhezji bakterii do komórek nabłonka jelit, zakłócaniu połączeń ścisłych i modulowaniu odpowiedzi immunologicznej komórek gospodarza. Białka te mogą służyć jako nowe cele dla szczepionek i nowych środków terapeutycznych. W tym przeglądzie podsumowano naszą obecną wiedzę na temat immunologicznej roli SLP w wywoływaniu odporności gospodarza oraz ich zastosowanie w opracowywaniu szczepionek i nowych leków do zwalczania infekcji C. difficile.

cistanche tubulosa – poprawiają układ odpornościowy

Kliknij tutaj, aby wyświetlić produkty Cistanche Enhance Immunity

【Zapytaj o więcej】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Aplikacja Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Słowa kluczowe:

biegunka związana z antybiotykami; białka ściany komórkowej; lecznictwo; białka warstwy S; szczepionka

1. Wstęp

Clostridioides difficile, bakteria beztlenowa wytwarzająca toksyny, jest ważnym oportunistycznym i szpitalnym patobiontem w jelitach, który powoduje objawy chorobowe w wyniku zaburzeń w zdrowym mikrobiomie z powodu wielu czynników, w tym stosowania antybiotyków, czynników genetycznych, ekssomalnych, drobnoustrojowych, i inne czynniki gospodarza [1]. Selekcja i proliferacja C. difficile wywołuje zagrażający życiu stan rzekomobłoniastego zapalenia jelita grubego [2,3]. Według najnowszych szacunków zawartych w raporcie Centers for Disease Control and Prevention za rok 2019, w samych Stanach Zjednoczonych C. difficile spowodowała 223 900 infekcji i 12 800 zgonów w 2017 roku, powodując straty rzędu 1 miliarda dolarów [4]. Leczenie pierwszego epizodu zakażenia C. difficile (CDI) odbywa się za pomocą antybiotyków. Częstość nawrotów choroby jest jednak wysoka – 20–30% po pierwszym leczeniu początkowego CDI i ponad 50% po pierwszym nawrocie [5]. Dlatego konieczna jest pilna interwencja terapeutyczna w celu zwalczania CDI na całym świecie. Jednym z głównych czynników molekularnych patogenezy C. difficile jest ekspresja i wydzielanie dwóch głównych toksyn, TcdA i TcdB, kodowanych przez geny zlokalizowane w locus patogeniczności o wielkości 19,6- kb (PaLoc) w C. difficile genom [6]. Regulacja produkcji toksyn i różne czynniki transkrypcyjne zaangażowane w produkcję toksyn zostały szczegółowo omówione przez Chandrę i in. gdzie indziej [6].

Patogeneza CDI rozpoczyna się od spożycia zarodników C. difficile/kiełkowania do komórek wegetatywnych, które kiełkują w jelitach, gdzie proliferują i kolonizują błonę śluzową jelit [1,6]. Bariera śluzówkowa jelit (IMB) stanowi pierwszą linię wrodzonej obrony przed patobiontami. IMB gospodarza składa się z różnych typów komórek nabłonkowych, które są trwale połączone ze sobą za pomocą połączeń ścisłych i pokryte grubą ochronną warstwą śluzu wydzielanego przez komórki kubkowe [1]. Rozerwanie IMB umożliwia C. difficile przyczepienie się do powierzchni komórek nabłonkowych, gdzie opracowanie czynników zjadliwości prowadzi do uszkodzenia i ujawnienia się patogeniczności C. difficile [1,6]. Ściana komórkowa bakterii u wielu gatunków Gram-dodatnich i ujemnych, w tym C. difficile, jest powiązana z obficie eksponowaną na powierzchni warstwą cząsteczek białka, zwaną białkami warstwy powierzchniowej (białka warstwy S lub SLP), zbudowaną głównie z obfitej białko SlpA składające się z domen o niskiej i wysokiej masie cząsteczkowej, które są ułożone jako parakrystaliczny regularny dwuwymiarowy układ, jak widać pod mikroskopem elektronowym [7]. Inne składniki białka ściany komórkowej (Cwp) warstwy SLP są mniej liczne i słabo scharakteryzowane, ale również odgrywają ważną rolę w patogeniczności CD. W ostatnich latach coraz większą uwagę poświęca się badaniom nad SLP, ponieważ wykazano, że białka te odgrywają kluczową rolę w adhezji powierzchniowej, aktywacji receptorów Toll-podobnych, indukcji wytwarzania cytokin i aktywacji inflamasomów jako część odpowiedzi immunologicznej gospodarza, poza ich działaniem rolę we wzroście i przeżyciu bakterii [7–9].

W tym przeglądzie omawiamy odpowiedź immunologiczną gospodarza na główne składniki SlpA i inne mniej występujące Cwps w świetle najnowszej wiedzy na temat SLP C. difficile i podkreślamy ich potencjał do zastosowania jako nowej szczepionki i celu terapeutycznego wysoce istotnego w patogenezie CDI.

cistanche tubulosa – poprawiają układ odpornościowy

2. Wrodzona odpowiedź immunologiczna gospodarza przeciwko CDI

Wykazano, że nietoksyczne szczepy C. difficile (NTCD) po kolonizacji w modelach zwierzęcych zapewniają ochronę przed patogennymi szczepami C. difficile. We wczesnych latach 80. Wilson i Sheagren donieśli, że chomiki skolonizowane przez szczep NTCD po sterylizacji antybiotykiem cefoksytyną były chronione po prowokacji toksycznym szczepem C. difficile (TCD) [10]. Jednakże leczenie innymi gatunkami, takimi jak C. perfringens, C. bifermentans, C. beijerincki, C. sporogenes i zabity termicznie, nietoksyczny szczep C. difficile NTCD, nie zapewnił ochrony przed CDI. Co więcej, ochrona została utracona, gdy kolonizujący NTCD został wysterylizowany przy użyciu wankomycyny przed prowokacją [11]. Zachęcone tymi odkryciami, zarodniki szczepu NTCD-M1 zostały zastosowane u ograniczonej liczby pacjentów klinicznych cierpiących na nawracające CDI (rCDI) ze znacznym sukcesem (około 50%) [12]. Obecnie możliwości leczenia CDI są ograniczone i w dużym stopniu opierają się na stosowaniu antybiotyków, takich jak wankomycyna, fidaksomycyna i metronidazol [13,14]. Nadmierne stosowanie antybiotyków prowadzi do dysbiozy zdrowego mikrobiomu i dodatkowo pomaga w selekcji patobiontów, takich jak C. difficile, które mogą później nawrócić [1,15]. Aby skutecznie obejść te wyzwania, należy natychmiast zwrócić uwagę na alternatywne metody leczenia. Niektóre z tych opcji leczenia obejmują neutralizację toksyn C. difficile przy użyciu przeciwciał monoklonalnych przeciwko TcdB, takich jak wlew bezlotoksumabu, który zapobiega uszkodzeniu nabłonka jelita za pośrednictwem toksyn [16]. Inną fascynującą metodą jest przywrócenie zdrowego mikrobiomu za pomocą przeszczepu mikroflory kałowej (FMT) od zdrowego dawcy wśród członków najbliższej rodziny. FMT wykazało obiecujące wyniki w leczeniu nawrotów CDI, osiągając wskaźnik powodzenia do 90% [17,18]. Niestety, badania te nie dotyczyły roli odpowiedzi immunologicznej gospodarza w ochronie tych pacjentów. Można zatem argumentować, że żywe NTCD wydziela pewne antygeny/składniki ściany komórkowej, które indukują silną odpowiedź immunologiczną przeciwko toksynotwórczemu TCD. Podobnie ochrona FMT jest słabo zdefiniowana. Dlatego zrozumienie, w jaki sposób wprowadzenie FMT indukuje odpowiedź gospodarza, może pomóc w identyfikacji kluczowych antygenów, co z kolei może pomóc w lepszym zrozumieniu odpowiedzi immunologicznej i opracowaniu nowych szczepionek przeciwko CDI.

W jelitach wrodzony układ odpornościowy gospodarza stanowi pierwszą linię obrony przed atakującym patogenem, który odgrywa kluczową rolę w kształtowaniu i wywoływaniu silnej nabytej odpowiedzi immunologicznej gospodarza [1]. Odpowiedź wrodzona składa się głównie z trzech części: (i) nabłonka jelitowego i warstwy błony śluzowej (bariera fizyczna), (ii) peptydów przeciwdrobnoustrojowych, które są produktem wydalniczym komórek nabłonka, komórek Panetha i niektórych członków mikroflory jelitowej (chemiczna barierę) oraz (iii) odpowiedzi komórkowe poprzez rekrutację wrodzonych komórek odpornościowych, takich jak neutrofile, eozynofile, makrofagi, wrodzone komórki limfoidalne (ILC) i komórki dendrytyczne (DC), które są kierowane przez wiele wrodzonych szlaków sygnałowych w celu zwalczania atakującego patogenu [ 1]. Komórki gospodarza mają na swojej powierzchni receptory rozpoznawania wzorców (PRR), takie jak TLR, które rozpoznają pewne konserwatywne sygnatury bakteryjne na drobnoustrojach, zwane wzorcami molekularnymi związanymi z patogenami (PAMP). Te PRR są również znane jako receptory Toll-podobne (TLR). Po rozpoznaniu tych sygnałów zagrożenia (PAMP) przez receptory TLR komórka gospodarza wyzwala odpowiedź immunologiczną. W tym względzie wykazano, że receptor Toll-podobny 4 (TLR4) rozpoznaje sygnały zagrożenia wywołane przez C. difficile, co uczestniczy w inicjacji odpowiedzi zapalnej gospodarza. W tym kontekście wykazano, że SLP C. difficile oddziałują z TLR-4 żywiciela, podczas gdy wici C. difficile oddziałują poprzez TLR5 [19,20].

Cistanche korzyści dla mężczyzn-wzmocnienie układu odpornościowego

3. Białka warstwy S (SLP) u C. difficile

W ostatniej dekadzie dużą uwagę poświęcono białkom warstwy powierzchniowej (warstwy S) C. difficile. SLP zostały po raz pierwszy zidentyfikowane przez Kawatę i in. w 1984 r. i stanowią około 15% całkowitej masy komórek [21,22]. SLP występują u wielu różnych gatunków prokariotycznych. Większość SLP jest rozmieszczona na najbardziej zewnętrznej powierzchni komórek jako pojedyncze białko w dwuwymiarowym układzie parakrystalicznym [7]. U C. difficile warstwa S składa się głównie z heterodimerycznych białek SlpA. SlpA jest heterodimerem składającym się z białka o wysokiej masie cząsteczkowej (HMW) i białka o niskiej masie cząsteczkowej (LMW), kodowanego przez pojedynczy gen slpA; LMW SLP tworzy odsłoniętą warstwę górną, podczas gdy HMW SLP tworzy dolną warstwę. LMW SLP jest unikalny w przypadku C. difficile. W szczepie C. difficile 630 locus slpA to region o wielkości 36,6 kb, który zawiera 11 paralogów slpA. Ponadto istnieje dodatkowych 17 paralogów rozproszonych po całym genomie [23,24]. Te geny paralogiczne są obecnie nazywane białkami ściany komórkowej Clostridium (CwpX), gdzie X oznacza zidentyfikowany numer paralogu (X=1–29) i są opisane w Tabeli 1. Jednakże cztery wcześniej scharakteryzowane Cwps, znane jako SlpA, Cwp66, Nazwy Cwp84 i CwpV nadano przed przyjęciem nowej konwencji nazewnictwa [23]. Wszystkie Cwps są typowymi białkami, które zawierają N-końcowy peptyd sygnałowy i trzy domniemane domeny wiążące ścianę komórkową, wykazujące znaczne podobieństwo do HMW SLP [25,26]. Różne szczepy C. difficile wykazały różnice w locus slpA i udokumentowano około 12 różnych typów kaset warstwy S. Pozostałe 28 Cwps pełnią rolę składników pomocniczych, które są zakotwiczone w spolimeryzowanej warstwie parakrystalicznej, która stanowi ~5–20% warstwy S [7].

Tabela 1. Domniemane funkcje 29 genów kubkowych występujących w genomach Clostridium difficile 630.

Tabela 1. cd.

4. Ekspresja i zmienność napięcia białek ściany komórkowej

Doniesiono, że w szczepie C. difficile 630 ulega ekspresji około dziewięć genów kodujących Cwps [25]. Podczas gdy geny cwp2, cwp84, cwp6, cwp12, cwpV, cwp24 i cwp25 ulegają ekspresji na powierzchni komórki w normalnych warunkach wzrostu [44], geny cwp66 i cwp5 ulegały ekspresji, ale nie znaleziono ich w ekstraktach z powierzchni komórek. W oddzielnym badaniu Biazzo i in. analizowanych kubków rozproszonych po całym genomie C. difficile. Zaobserwowali, że geny cwp13, cwpV, cwp16, cwp18, cwp19, cwp20, cwp22, cwp24 i cwp25 ulegają ekspresji i mają dobrze konserwatywne sekwencje, podczas gdy geny cwp17, cwp26, cwp27, cwp28 i cwp29 wykazywały znaczące różnice w poziomach ekspresji pomiędzy rybotypy i były mniej konserwatywne [45]. Wiele genów locus slpA wykazuje znaczące różnice pomiędzy szczepami, szczególnie w regionach eksponowanych na powierzchni. Na przykład wykazano, że slpA, cwp66, secA2 i cwp2 wykazują dużą zmienność w obrębie locus slpA (które tworzy kasetę 10- kb); dotychczas odnaleziono 12 rozbieżnych wariantów tej kasety powstałych w wyniku rekombinacji homologicznej pomiędzy różnymi genotypami [46]. Według Karjalainena i wsp. cwp66 wykazuje jedynie 33% identyczności pomiędzy szczepami [26]. Wariant cwp2 został zastąpiony klastrem genów glikozylacji warstwy S o przewidywanej wielkości 23,8 kb w locus slpA [46]. SlpA jest SLP występującym najczęściej w ekstraktach z powierzchni komórek C. difficile i jest głównym składnikiem SLP C. difficile. Dojrzałe białko jest rozszczepiane po wydzieleniu do postaci białka HMW i LMW przez działanie proteazy Cwp84, tworząc kompleks heterodimeryczny kompleks H/L, który polimeryzuje, tworząc warstwę S [47] (ryc. 1). Inaktywacja genu cwp84 w C. difficile 630∆erm spowodowała powstanie warstwy S składającej się jedynie z niedojrzałego jednołańcuchowego SlpA o zmienionej morfologii kolonii, co sugeruje ważną rolę Cwp84 w tworzeniu dojrzałej warstwy S [32]. Obecność genu secA2 w locus slpA jest istotna dla transportu SlpA i innych Cwps przez błonę cytoplazmatyczną [48].

Rycina 1. SLP C. difficile pośredniczą w adhezji i aktywacji komórek odpornościowych. Powstający peptyd SlpA jest rozcinany przez proteazę Cwp84 na podjednostkę LMW i HMW, która tworzy dojrzały kompleks SlpA warstwy SLP ściany komórkowej [31–33]. SLP pośredniczą w adhezji za pośrednictwem TLR4, zakłócając ścisłe połączenie komórek nabłonka jelit i dodatkowo aktywują komórki dendrytyczne/makrofagi, które z kolei wytwarzają różne cytokiny i chemokiny, prowadząc do indukcji Th1/Th2 i odpowiedzi humoralnej [9,27]. Interleukina (IL), Komórki dendrytyczne (DC), Niska masa cząsteczkowa (LMW), Wysoka masa cząsteczkowa (HMW), Receptor Toll-podobny 4 (TLR4).

5. Funkcje białek warstwy S

SLP biorą udział w różnych funkcjach biologii C. difficile (patrz tabela 1), takich jak integralność komórek, transport, tworzenie porów i kotwic, degradacja, adhezja/inwazja komórek gospodarza, unikanie układu odpornościowego i ochrona przed konkurującymi mikroorganizmami [22] . Pechineet al. wykryli przeciwciała przeciwko domenom N-końcowym i C-końcowym antygenu Cwp66 w surowicy pacjentów z chorobą związaną z Clostridium difficile (CDAD) [49]. W innym badaniu Wright i in. rozdzielili Cwps za pomocą 2D-PAGE i zidentyfikowali kilka Cwps (SlpA, Cwp2, Cwp5, Cwp84, Cwp18, Cwp19), które reagowały z surowicami pacjentów zakażonymi szczepem rybotypu 017 C. difficile, co sugeruje indukcję silnej odpowiedzi immunologicznej przeciwko SLP [50]. Ostatnio Kirk i in. zidentyfikowali dwa szczepy C. difficile, którym brakowało warstwy S i które nie były wrażliwe na bakteriocynę tworzącą pory i depolaryzującą konkurencyjne komórki bakteryjne. Jednakże te szczepy C. difficile wykazywały znacznie zwiększoną wrażliwość na lizozym i peptyd przeciwdrobnoustrojowy LL-37 i nie powodowały żadnych objawów chorobowych CDI w chomiczym modelu zakażenia [51]. W niedawnym badaniu zbadano wpływ SlpA wyizolowanego z trzech toksykogennych szczepów (RT126, RT001, RT084) na ekspresję białek połączeń ścisłych (TJ) i indukcję cytokin prozapalnych w linii komórkowej ludzkiego raka okrężnicy HT-29 . Leczenie SlpA znacząco zmniejszyło poziom ekspresji rodziny klaudyn i białek ścisłych połączeń JAM-A (ryc. 1) [9]. Ponadto białko SlpA zwiększało poziom ekspresji TLR-4 i indukowało wydzielanie TNF-, IL-1 i IL-8. Wyniki te pokazują, że patogeneza za pośrednictwem białka SlpA indukuje reakcje zapalne w jelitach [9]. Dlatego rozsądne jest twierdzenie, że SLP są niezbędne dla patogeniczności C. difficile i odpowiedzi immunologicznych.

cistanche tubulosa – poprawiają układ odpornościowy

6. Odpowiedź immunologiczna na SLP

Ostatnie badania wykazały ważną rolę SlpA nie tylko w przeżyciu i wzroście bakterii, ale także w kształtowaniu odpowiedzi immunologicznej gospodarza. Metody immunoproteomiczne wykazały obecność przeciwciał anty-SLP w surowicy sześciu pacjentów zakażonych rybotypem 017 C. difficile, co sugeruje, że białka SLP mają charakter immunodominujący i ulegają ekspresji podczas infekcji [50]. Badanie prowadzone przez Bruxelles i in. wykazali podwyższony poziom przeciwciał anty-SlpA u chorych na CDI w porównaniu z pacjentami zdrowymi [52]. W innym badaniu Negm i in. wykrył przeciwciała IgG w surowicy od łącznie 327 osób z CDI przeciwko ekstraktom SLP z różnych szczepów C. difficile [53]. Oprócz SlpA, odsłonięta domena C-końcowa drugiego najliczniejszego białka Cwp66 jest wysoce zmienna, podczas gdy domena N-końcowa jest dobrze konserwatywna. Wykazano, że zmienne domeny C-końcowe Cwp66 i Cwp84 są immunogenne u ludzi [49,54]. Ponadto u pacjentów z CDI średnie całkowite poziomy anty-Cwp66 i anty-Cwp84 były niższe niż w zdrowej grupie kontrolnej, co sugeruje ochronny charakter przeciwciał. Dlatego SLP, w szczególności SlpA, i inne składniki odgrywają ważną rolę w obronie immunologicznej i są potencjalnymi celami w opracowywaniu środków immunoterapeutycznych i szczepionek, jak opisano w poniższych sekcjach.

7. SLP pośredniczą w adhezji C. difficile

C. difficile inicjuje infekcję poprzez przyleganie do komórek nabłonka jelit, co prowadzi do kolonizacji. Pod tym względem bakteryjne SLP, takie jak SlpA i Cwp66, odgrywają kluczową rolę w adhezji. Donoszono, że różnice w SLP, szczególnie w SlpA, w izolowanych szczepach C. difficile wykazały zmiany w przyleganiu [55]. Wykazano, że SLP wiążą różne linie komórkowe, takie jak ludzkie linie komórkowe przewodu pokarmowego Hep-2 i Vero oraz wiele białek macierzy zewnątrzkomórkowej. Ponadto leczenie przeciwciałami anty-HMW-SLP hamowało przyleganie C. difficile. Ponadto wstępne traktowanie komórek gospodarza oczyszczonymi podjednostkami SlpA lub przeciwciałami anty-SlpA również zapobiegało przyleganiu C. difficile [55]. Największym homologiem należącym do rodziny białek SlpA jest białko CwpV, które ulega ekspresji w sposób zmienny fazowo. W oddzielnym badaniu wykazano, że C-końcowa powtarzalna domena białka CwpV pośredniczy w agregacji C. difficile. Co więcej, domena ta różni się w zależności od szczepu i zidentyfikowano pięć odrębnych antygenowo typów powtórzeń [40].

Wykazano, że inne immunogenne białko o nazwie Cwp66 ma właściwości adhezyjne. Oczyszczone Cwp66 i przeciwciała przeciwko domenom N-końcowym i C-końcowym hamowały przyleganie C. difficile do hodowanych komórek Vero, co sugeruje właściwości adhezyjne Cwp66 [29].

8. Indukcja reakcji zapalnych

Bianco i in. wykazali rolę SLP w procesie zapalnym. W badaniu tym oczyszczono SLP ze szczepów C. difficile o dużej zjadliwości i epidemii (H/E) lub innych niż H/EC, a następnie zbadano je w ludzkich monocytach i komórkach dendrytycznych pochodzących z monocytów (MDDC) pod kątem indukcji cytokin immunomodulujących [interleukiny (IL)-1, IL-6 i IL- 10] [56]. Badanie wykazało, że SLP nie tylko indukują dojrzewanie MDDC ze zwiększoną aktywnością prezentującą antygen, ale także indukują wydzielanie wysokich poziomów IL-10. Nie stwierdzono jednak istotnych różnic w aktywacji monocytów i MDDC przez preparaty SLP ze szczepów H/E i innych niż H/E, co sugeruje, że SLP nie przyczyniają się do nasilenia choroby [56]. W innym badaniu Ausiello i in. wyodrębnili SLP z izolatu klinicznego C253 i wykazali, że SLP indukują wydzielanie zwiększonych poziomów cytokin prozapalnych IL-1 i IL-6 w spoczynkowych monocytach oraz indukują dojrzewanie ludzkich MDDC i zwiększoną proliferację T komórki [57]. Co więcej, te traktowane MDDC uwalniały również zwiększone ilości IL-10 i IL-12p70 i indukowały mieszaną odpowiedź immunologiczną Th1/Th2. TLR-4 odegrał ważną rolę w aktywacji DC za pośrednictwem SLP. Wykazano, że SLP nie mogą aktywować DC izolowanych od myszy C3H/HeJ z mutacją TLR4-i nie indukują późniejszej odpowiedzi immunologicznej Th, co sugeruje, że SLP aktywują odporność wrodzoną i nabytą, w której pośredniczy receptor TLR4 [19]. W innym badaniu wykazano na makrofagach, że SLP z C. difficile indukują odpowiedź klirensu w postaci wydzielania cytokin i chemokin prozapalnych ze zwiększoną migracją makrofagów i aktywnością fagocytotyczną [58]. Leczenie inhibitorem p38 odwróciło te odpowiedzi, co sugeruje rolę cząsteczek sygnalizacyjnych w odpowiedziach, w których pośredniczy SLP [58]. W bardzo niedawnym badaniu wykazano aktywację inflamasomu przez SLP C. difficile w sposób zależny od dawki. Ponadto wykazano, że mikrodomeny bogate w cholesterol (tratwy lipidowe) na błonach komórkowych pomagają w wiązaniu SLP z błoną komórkową. Opierało się to na mikroskopii fluorescencyjnej, gdzie wykazano, że leczenie metylo- -cyklodekstryną (M CD), która wyczerpuje cholesterol błonowy, zmniejsza wiązanie SLP, co sugeruje, że SLP rekrutują tratwy lipidowe, krytyczne dla kolonizacji C. difficile i aktywacji inflamasomów [59 ] Badania te dowodzą, że SLP C. difficile mogą aktywować wrodzoną i nabytą odpowiedź immunologiczną, w której częściowo pośredniczy TLR4, co sugeruje ważną rolę SLP w indukowaniu odpowiedzi odpornościowej. Dlatego wyniki te sugerują również potencjał SLP jako kandydatów na szczepionkę przeciwko CDI.

9. Odpowiedzi przeciwciał przeciwko CDI

Kilka badań immunologicznych wskazuje, że zakażenie C. difficile i jego przebieg zależą od intensywności odpowiedzi immunologicznej gospodarza, kluczowego czynnika patogenności CDI. Zatem niezdolność do wytworzenia silnej odpowiedzi przeciwciał może stanowić rokowanie dotyczące ciężkości i nawrotu choroby [60]. Pod tym względem poziomy przeciwciał przeciwko głównym toksynom zostały skorelowane z nawrotem i ciężkością choroby [61,62]. We wcześniejszych badaniach donoszono również o występowaniu przeciwciał przeciwko składnikom powierzchniowym C. difficile w surowicy pacjentów z CDI [63]. Drudy i in. oceniali humoralną odpowiedź immunologiczną na ekstrakty SLP C. difficile w kohorcie 146 pacjentów, w tym 55 pacjentów z biegunką związaną z C. difficile (CDAD), 34 pacjentów z bezobjawowymi nosicielami i 57 osób z grupy kontrolnej [64]. W badaniu wyizolowano ekstrakcję SLP frakcjami o wysokiej i niskiej masie cząsteczkowej, które zawierały głównie białko SlpA występujące w dużych ilościach. W tej kohorcie zmierzyli przeciwciała w surowicy za pomocą enzymatycznego testu immunoenzymatycznego (ELISA) i nie stwierdzili znaczących różnic w poziomach przeciwciał IgM, IgA lub IgG w surowicy. Co ciekawe, pacjenci z nawracającymi epizodami CDAD mieli znacząco niższe poziomy IgM-anty-SLP niż pacjenci z pojedynczymi epizodami. W badaniu stwierdzono, że należy przeprowadzić dalsze badania w celu określenia swoistych odpowiedzi przeciwciał anty-SLP i badania ochrony przy użyciu SLP C. difficile [64].

Bierna i czynna immunizacja przy użyciu izolowanych ekstraktów SLP HMW i LMW dała zachęcające wyniki w postaci zwiększonego wskaźnika przeżycia w modelach prowokacji ze śmiertelnym chomikiem. O'Brien i in. wykazali ochronną odpowiedź przeciwciał anty-SLP na infekcję C. difficile u chomików, gdzie przeżycie było istotnie wydłużone w grupach leczonych anty-SLP w porównaniu z grupami kontrolnymi [65]. Wykazano, że działanie ochronne surowicy odpornościowej polega na wzmożeniu fagocytozy C. difficile [65]. Eidhin i wsp., stosując aktywną immunizację, testowali surowy ekstrakt SLP zawierający równomolowe ilości składowych peptydów LMW i HMW SlpA jako szczepionkę z różnymi adiuwantami ogólnoustrojowymi i śluzówkowymi w modelach myszy rasy Golden Syryjskiej i myszy BALB/c. W badaniu wykazano, że stymulacja przeciwciałami w ramach różnych schematów leczenia jest umiarkowana lub słaba, a modele myszy wykazywały silniejszą odpowiedź przeciwciał na SLP w porównaniu z chomikami [66]. W innym badaniu Brunet al. zbadali aktywność adiuwantową in vivo dwóch peptydów składających się z domeny wiążącej receptor toksyny A (TxA (C314)) i fragmentu SLP-36 kDa ze szczepu C. difficile C253 przeciwko białku A wiążącemu fibronektynę (FnbpA ), ochronny antygen szczepionkowy przeciwko Staphylococcus aureus [67]. Ocenili odpowiedź, stosując podanie donosowe i podskórne, i odkryli, że oba fragmenty wzmagają wytwarzanie krążących IgG i IgA anty-FnbpA. Doszli do wniosku, że fragmenty te stosowane jako adiuwanty w różny sposób wpływają i polaryzują układ odpornościowy [67]. W innym badaniu Shirvan i in. wygenerowało i eksprymowało specyficzne rekombinowane przeciwciała przeciwko SLP, takim jak Cwp66 i SlpA z białek C. difficile 630, przy użyciu prezentacji fagowej i wykazało, że te rekombinowane przeciwciała reagowały na SLP i ich składniki w sposób specyficzny dla szczepu z wysoką swoistością [68].

Odpowiedź immunologiczną i ochronę w modelu chomika wykorzystującego proteazę Cwp84 jako antygen oceniano kilkoma drogami immunizacji [69]. W badaniu wykazano zróżnicowanie mian przeciwciał w zależności od drogi immunizacji. Najlepszą ochronę zaobserwowano po podaniu doodbytniczym szczepionki. Co więcej, grupy immunizowanych chomików powodowały o 26% słabszą i wolniejszą kolonizację jelit C. difficile po prowokacji C. difficile ze znacznie wyższym współczynnikiem przeżycia (33% większym) niż grupy nieimmunizowane [69].

cistanche roślina zwiększająca układ odpornościowy

10. Anty-C na bazie SLP. trudne terapie

Skuteczną strategią mogą być specyficzne leki na bazie przeciwciał, neutralizujące C. difficile. Kandalaft i in. zastosowali przeciwciała jednodomenowe do celowania w SLP [70]. Grupa przygotowała panel przeciwciał jednodomenowych (VHH) specyficznych dla SLP z hiperwirulentnego szczepu C. difficile QCD-32g58 (rybotyp 027). Ich wyniki wykazały szereg VHH związanych z epitopami QCD-32g58 zlokalizowanymi na podjednostce LMW SLP z wysokim powinowactwem. Ponadto podali, że te VHH mają specyficzność wiązania z rybotypami 001 i 027, a podzbiór tych przeciwciał przeciwko VHH wykazywał szeroko reaktywność krzyżową z rybotypami 012, 017, 023 i 078. Wykazano także, że te VHH hamują ruchliwość QCD-32g58 C. difficile in vitro [70].

Opracowanie kolejnego precyzyjnego środka przeciwbakteryjnego Av-CD291.2 przez Kirka i in. donoszono, że specyficznie zabija C. difficile i zapobiega kolonizacji u myszy [51]. Wykazano, że Av-CD291.2 zabija różne izolaty C. difficile na podstawie obecności sekwencji SLP w szczepach C. difficile. Autorzy twierdzą, że zidentyfikowali mutanty zerowe SLP zawierające mutację punktową w genie slpA, które są oporne na czynniki Av-CD291.2. Mutanty te również wykazywały defekty sporulacji, ale były w stanie kolonizować przewód pokarmowy pomimo osłabienia zjadliwości w modelu chomika [51]. Co więcej, skonstruowali panel Awidocyny-CD, który zabija różne szczepy C. difficile w sposób zależny od sekwencji SLP, co sugeruje ważną rolę tych środków przeciwbakteryjnych opartych na SLP w zapobieganiu CDI [51].

11. Uwagi końcowe i krytyczne pytania bez odpowiedzi

Gospodarz rozwija silną, specyficzną odpowiedź immunologiczną przeciwko toksynom C. difficile i składnikom powierzchniowym. Wykazano, że SLP odgrywają rolę w adhezji komórek, indukcji różnych cytokin poprzez aktywację TLR4 i aktywacji zarówno wrodzonej, jak i humoralnej odpowiedzi immunologicznej. Jednakże potrzebne są badania nad aktywacją odpowiedzi komórek T przez SLP, aby dokładniej poznać rolę komórek CD4 i CD8. Opierając się na aktywacji odpowiedzi humoralnej, te neutralizujące przeciwciała przeciwko toksynom i składnikom powierzchniowym mogą zapobiegać klinicznym objawom CDI. Badania z zastosowaniem aktywnej lub pasywnej immunizacji przeciwko SLP dały obiecujące wyniki, wskazując, że strategię można dalej rozwijać w kierunku nowych środków terapeutycznych przeciwko patogenności CDI. Wiele uwagi poświęcono SlpA jako kandydatowi na szczepionkę; jednakże ze względu na dużą zmienność sekwencji SlpA pomiędzy szczepami szczepionka może nie być skuteczna przeciwko wszystkim rybotypom. Dlatego w celu obejścia tego problemu mogą być potrzebne szczepionki oparte na epitopach. Pod tym względem przeciwciała jednodomenowe (VHH) przeciwko SLP są realnymi opcjami, które wiążą się z podjednostką LMW-SLP C. difficile i wykazano, że hamują ruchliwość szczepów C. difficile. Obecnie zrozumienie mechanistycznej roli SLP i ich paralogów w patogenezie CDI, adhezji i odpowiedzi komórek T jest wciąż na początkowym etapie i w dużej mierze pozostaje niezbadane. Konieczne są dalsze badania w celu przeanalizowania funkcji molekularnych i specyficznych odpowiedzi immunologicznych SLP, aby pomóc w szybkim opracowaniu nowych celów szczepionek/leków i środków terapeutycznych do zwalczania infekcji C. difficile.

Bibliografia

1. Chandra, H.; Sharma, KK; Tuovinen, Ohio; Słońce, X.; Shukla, P. Pathobionts: Mechanizmy przetrwania, ekspansji i interakcji z żywicielem, ze szczególnym uwzględnieniem Clostridioides difficile. Mikroby jelitowe 2021, 13, 1979882. [CrossRef] [PubMed]

2. Lawson, Pensylwania; Citron, DM; Tyrrell, Kalifornia; Finegold, SM Reklasyfikacja Clostridium difficile na Clostridioides difficile (Hall i O'Toole 1935) Prévot 1938. Anaerobe 2016, 40, 95–99. [CrossRef] [PubMed]

3. Oren, A.; Garrity, GM Powiadomienie o zmianach w opinii taksonomicznej opublikowanej wcześniej poza IJSEM. Wewnętrzne J. System. Ewolucja Mikrobiol. 2018, 68, 2137–2138. [Odniesienie]

4. Centra Kontroli i Zapobiegania Chorobom. Zagrożenia związane z opornością na antybiotyki w Stanach Zjednoczonych, 2019. 2019. Dostępne online: https://www.cdc.gov/drugresistance/pdf/threats-report/2019-ar-threats-report-508.pdf (dostęp: 8 września 2022 r.).

5. Tarcze, K.; Araujo-Castillo, RV; Theethira, TG; Alonso, CD; Kelly, CP Nawracające zakażenie Clostridium difficile: od kolonizacji do wyleczenia. Beztlenowy 2015, 34, 59–73. [CrossRef] [PubMed]

6. Chandra, H.; Sorg, JA; Hassett, DJ; Sun, X. Regulacyjne czynniki transkrypcyjne patogenezy Clostridioides difficile ze szczególnym uwzględnieniem regulacji toksyn. Krytyczny. Ks. Mikrobiol. 2022. [Odniesienie krzyżowe]

7. Lanzoni-Mangutchi, P.; Banerji, O.; Wilson, J.; Barwińska-Sendra, A.; Kirk, JA; Vaz, F.; O'Beirne, S.; Basle, A.; El Omari, K.; Wagner, A.; i in. Budowa i montaż warstwy S u C. difficile. Nat. komuna. 2022, 13, 970. [Odn. Krzyżowe]

8. Mori, N.; Takahashi, T. Charakterystyka i rola immunologiczna białek warstwy powierzchniowej w Clostridium difficile. Anna. Laboratorium. Med. 2018, 38, 189–195. [Odn.] 9. Noori, M.; Azimirad, M.; Eslami, G.; Looha, MA; Yadegar, A.; Ghalavand, Z.; Zali, MR Białko warstwy powierzchniowej A z hiperwirulentnych rybotypów Clostridioides difficile indukuje znaczące zmiany w ekspresji genów połączeń ścisłych i odpowiedzi zapalnej w ludzkich komórkach nabłonka jelitowego. BMC Mikrobiol. 2022, 22, 259. [Odn. Krzyżowe]

10. Wilson, KH; Sheagren, JN Antagonizm toksycznego Clostridium difficile przez nietoksyczną C. difficile. J. Zarażać. Dis. 1983, 147, 733–736. [Odniesienie]

11. Borriello, SP; Barclay, FE Ochrona chomików przed zapaleniem jelita krętego Clostridium difficile poprzez wcześniejszą kolonizację niepatogennymi szczepami. J. Med. Mikrobiol. 1985, 19, 339–350. [Odniesienie]

12. Pieczęć, D.; Borriello, SP; Barclay, F.; Welch, A.; Piper, M.; Bonnycastle, M. Leczenie nawracającej biegunki Clostridium difficile poprzez podawanie nietoksycznego szczepu. EUR. J. Clin. Mikrobiol. 1987, 6, 51–53. [CrossRef] [PubMed]

13. Johnson, S.; Laverne, V.; Skinner, AM; Gonzales-Luna, AJ; Garey, KW; Kelly, Kalifornia; Wilcox, MH Wytyczne dotyczące praktyki klinicznej Amerykańskiego Towarzystwa Chorób Zakaźnych (IDSA) i Amerykańskiego Towarzystwa Epidemiologii Opieki Zdrowotnej (SHEA): Aktualizacja ukierunkowanych wytycznych na rok 2021 dotyczących postępowania w przypadku zakażenia Clostridioides difficile u dorosłych. Clin. Infekować. Dis. 2021, 73, e1029–e1044. [CrossRef] [PubMed]

14. van Prehn, J.; Reigadas, E.; Vogelzang, EH; Bouza, E.; Hristea, A.; Guery, B.; Krutova, M.; Noren, T.; Allerberger, F.; Coia, JE; i in. Europejskie Towarzystwo Mikrobiologii Klinicznej i Chorób Zakaźnych: Aktualizacja z 2021 r. dotycząca wytycznych dotyczących leczenia zakażenia Clostridioides difficile u dorosłych. Clin. Mikrobiol. Infekować. 2021, 27 (Suppl. 2), S1–S21. [CrossRef] [PubMed]

15. Vardakas, KZ; Polyzos, Kalifornia; Patouni, K.; Rafaililidis, PI; Samonis, G.; Falagas, ME Niepowodzenie leczenia i nawrót zakażenia Clostridium difficile po leczeniu wankomycyną lub metronidazolem: systematyczny przegląd dowodów. Wewnętrzne J. Antimicrob. Agenci 2012, 40, 1–8. [Odniesienie]

16. Navalkele, BD; Chopra, T. Bezlotoxumab: Nowa terapia przeciwciałami monoklonalnymi w zapobieganiu nawracającym zakażeniom Clostridium difficile. Biologia 2018, 12, 11–21. [Odniesienie]

17. Li, YT; Cai, HF; Wang, ZH; Xu, J.; Fang, JY Przegląd systematyczny z metaanalizą: Długoterminowe wyniki przeszczepiania mikroflory kałowej w przypadku zakażenia Clostridium difficile. Pokarm. Farmakol. Tam. 2016, 43, 445–457. [Odniesienie]

18. Quraishi, MN; Widlak, M.; Bhala, N.; Moore, D.; Cena, M.; Sharma, N.; Iqbal, TH Przegląd systematyczny z metaanalizą: Skuteczność przeszczepu mikroflory kałowej w leczeniu nawracającej i opornej infekcji Clostridium difficile. Pokarm. Farmakol. Tam. 2017, 46, 479–493. [Odniesienie]

19. Ryan, A.; Lynch, M.; Smitha, SM; Amu, S.; Nel, HJ; McCoy, CE; Dowling, JK; Draper, E.; O'Reilly, V.; McCarthy, C.; i in. Rola TLR4 w zakażeniu Clostridium difficile i rozpoznawanie białek warstwy powierzchniowej. PLoS Pathog. 2011, 7, e1002076. [Odniesienie]

20. Batah, J.; Denève-Larrazet, C.; Jolivot, Pensylwania; Kuehne, S.; Collignon, A.; Marvaud, JC; Kansau, I. Clostridium difficile wici głównie aktywują szlak NF-κB połączony z TLR5-w komórkach nabłonkowych. Beztlenowy 2016, 38, 116–124. [Odniesienie]

21. Kawata, T.; Takeoka, A.; Takumi, K.; Masuda, K. Demonstracja i wstępna charakterystyka regularnego układu w ścianie komórkowej Clostridium difficile. Mikrobiolog FEMS. Łotysz. 1984, 24, 323–328. [Odniesienie]

22. Sara, M.; Sleytr, UB Białka warstwy S. J. Bakteriol. 2000, 182, 859–868. [CrossRef] [PubMed]

23. Fagan, RP; Janoir, C.; Collignon, A.; Mastrantonio, P.; Poxton, IR; Fairweather, NF Proponowana nomenklatura białek ściany komórkowej Clostridium difficile. J. Med. Mikrobiol. 2011, 60, 1225–1228. [Odniesienie]

24. Monot, M.; Boursaux-Eude, C.; Thibonnier, M.; Vallenet, D.; Moszer, I.; Medigue, C.; Martin-Verstraete, I.; Dupuy, B. Ponowna adnotacja sekwencji genomu Clostridium difficile szczepu 630. J. Med. Mikrobiol. 2011, 60, 1193–1199. [CrossRef] [PubMed]

25. Calabi, E.; Warda, S.; Wren, B.; Paxton, T.; Panico, M.; Morris, H.; Dell, A.; Dougan, G.; Fairweather, N. Charakterystyka molekularna białek warstwy powierzchniowej z Clostridium difficile. Mol. Mikrobiol. 2001, 40, 1187–1199. [Odniesienie]

26. Karjalainen, T.; Waligora-Dupriet, AJ; Cerquetti, M.; Spigaglia, P.; Maggioni, A.; Mauri, P.; Mastrantonio, P. Analiza molekularna i genomowa genów kodujących białka zakotwiczone na powierzchni z Clostridium difficile. Infekować. Odporność 2001, 69, 3442–3446. [Odniesienie]

27. Willing, SE; Candela, T.; Shaw, Ha; Seager, Z.; Wiadomość, S.; Fagan, Republika Południowej Afryki; Białka powierzchniowe Fairweather, NF Clostridium difficile są zakotwiczone w ścianie komórkowej przy użyciu motywów CWB2, które rozpoznają anionowy polimer PSII. Mol. Mikrobiol. 2015, 96, 596–608. [Odniesienie]

28. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Świeciło, CC; Acharya, KR Cwp2 z Clostridium difficile wykazuje wydłużone trzydomenowe pochylenie i adhezję komórek in vitro. FEBS J. 2017, 284, 2886–2898. [Odniesienie]

29. Waligóra, AJ; Hennequin, C.; Mullany, P.; Bourlioux, P.; Collignon, A.; Karjalainen, T. Charakterystyka białka powierzchniowego komórki Clostridium difficile o właściwościach adhezyjnych. Infekować. Odporność 2001, 69, 2144–2153. [Odniesienie]

30. Zhou, Q.; Rao, F.; Chen, Z.; Cheng, Y.; Zhang, Q.; Zhang, J.; Guan, Z.; Hej.; Yu, W.; Cui, G.; i in. Gen cwp66 wpływa na adhezję komórek, tolerancję na stres i oporność na antybiotyki u Clostridioides difficile. Mikrobiol. widmo 2022, 10, e0270421. [CrossRef] [PubMed]

31. Dang, TH; de la Riva, L.; Fagan, Republika Południowej Afryki; Storck, EM; Uzdrowienie, WP; Janoir, C.; Fairweather, Karolina Północna; Tate, EW Chemiczne sondy biogenezy warstwy powierzchniowej u Clostridium difficile. Chem. ACS. Biol. 2010, 5, 279–285. [Odniesienie]

32. Kirby, JM; Ahern, H.; Roberts, AK; Kumar, V.; Freeman, Z.; Acharya, KR; Shone, CC Cwp84, proteaza cysteinowa związana z powierzchnią, odgrywa rolę w dojrzewaniu warstwy powierzchniowej Clostridium difficile. J. Biol. Chem. 2009, 284, 34666–34673. [CrossRef] [PubMed]

33. Janoir, C.; Péchiné, S.; Grosdidier, C.; Collignon, A. Cwp84, białko związane z powierzchnią Clostridium difficile, jest proteazą cysteinową o działaniu degradującym białka macierzy zewnątrzkomórkowej. J. Bakteriol. 2007, 189, 7174–7180. [CrossRef] [PubMed]

34. Usenik, A.; Renko, M.; Mihelic, M.; Lindiˇc, N.; Borišek, J.; Perdih, A.; Pretnar, G.; Müller, U.; Turk, D. Moduł kotwiczący ścianę komórkową CWB2 jest ujawniany przez struktury krystaliczne białek ściany komórkowej Clostridium difficile Cwp8 i Cwp6. Struktura 2017, 25, 514–521. [Odniesienie]

35. Eddy, SR Probabilistyczny model lokalnego dopasowania sekwencji, który upraszcza ocenę istotności statystycznej. Obliczenia PLoS. Biol. 2008, 4, e1000069. [CrossRef] [PubMed]

36. Luo, Y.; Frey,EA; Pfuetzner, RA; Creagh, AL; Knoechel, DG; Haynes, Kalifornia; Finlay, BB; Strynadka, Karolina Północna Struktura krystaliczna enteropatogennego kompleksu intymina-receptor Escherichia coli. Natura 2000, 405, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

37. de la Riva, L.; Chętny, SE; Tate, EW; Fairweather, NF Rola proteaz cysteinowych Cwp84 i Cwp13 w biogenezie ściany komórkowej Clostridium difficile. J. Bakteriol. 2011, 193, 3276–3285. [Odniesienie]

38. Mayer, BJ Domeny SH3: Złożoność z umiarem. J. Cell Sci. 2001, 114, 1253–1263. [Odniesienie]

39. Sipeki, S.; Koprivanacz, K.; Takács, T.; Kurilla, A.; László, L.; Vas, V.; Buday, L. Nowe role domen SH2 i SH3 w wiązaniu lipidów. Komórki 2021, 10, 1191. [CrossRef]

40. Reynolds, CB; Emersona, JE; de la Riva, L.; Fagan, Republika Południowej Afryki; Fairweather, NF Białko ściany komórkowej Clostridium difficile CwpV jest antygenowo zmienne pomiędzy szczepami, ale wykazuje konserwatywną funkcję sprzyjającą agregacji. PLoS Pathog. 2011, 7, e1002024. [Odniesienie]

41. Bradshaw, WJ; Kirby, JM; Roberts, AK; Świeciło, CC; Acharya, KR Struktura molekularna domeny hydrolazy glikozydowej Cwp19 z Clostridium difficile. FEBS J. 2017, 284, 4343–4357. [Odniesienie]

42. Zhu, D.; Bullock, J.; Hej.; Sun, X. Cwp22, nowy enzym sieciujący peptydoglikan, odgrywa plejotropową rolę w Clostridioides difficile. Otaczać. Mikrobiol. 2019, 21, 3076–3090. [CrossRef] [PubMed]

43. Finn, RD; Coggill, P.; Eberhardt, RY; Eddy, Republika Południowej Afryki; Mistry, J.; Mitchell, AL; Potter, Karolina Południowa; Punta, M.; Qureshi, M.; Sangrador-Vegas, A.; i in. Baza danych rodzin białek Pfam: w stronę bardziej zrównoważonej przyszłości. Kwasy nukleinowe Res. 2016, 44, D279–D285. [CrossRef] [PubMed]

44. Wright, A.; Czekaj, R.; Begum, S.; Crossett, B.; Nagy, J.; Brown, K.; Fairweather, N. Analiza proteomiczna białek powierzchniowych komórek z Clostridium difficile. Proteomika 2005, 5, 2443–2452. [CrossRef] [PubMed]

45. Biazzo, M.; Cioncada, R.; Fiaschi, L.; Tedde, V.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Pizza, M.; Barocchi, MA; Scarselli, M.; Galeotti, CL Różnorodność loci cwp w klinicznych izolatach Clostridium difficile. J. Med. Mikrobiol. 2013, 62, 1444–1452. [Odniesienie]

46. ​​Dingle, KE; Didelot, X.; Ansari, Massachusetts; Eyre, DW; Vaughan, A.; Griffiths, D.; Ip, CL; Batty, EM; Golubchik, T.; Bowden, R.; i in. Rekombinacyjne przełączanie warstwy S Clostridium difficile i nowy klaster genów glikozylacji ujawniony przez sekwencjonowanie całego genomu na dużą skalę. J. Zarażać. Dis. 2013, 207, 675–686. [Odniesienie]

47. Fagan, RP; Albesa-Jové, D.; Qazi, O.; Svergun, DI; Brown, Kalifornia; Fairweather, NF Strukturalny wgląd w organizację molekularną warstwy S z Clostridium difficile. Mol. Mikrobiol. 2009, 71, 1308–1322. [Odniesienie]

48. Fagan, RP; Fairweather, NF Clostridium difficile ma dwa równoległe i istotne systemy wydzielnicze Sec. J. Biol. Chem. 2011, 286, 27483–27493. [Odniesienie]

49. Péchiné, S.; Gleizes, A.; Janoir, C.; Gorges-Kergot, R.; Barc, MC; Delmée, M.; Collignon, A. Immunologiczne właściwości białek powierzchniowych Clostridium difficile. J. Med. Mikrobiol. 2005, 54, 193–196. [Odniesienie]

50. Wright, A.; Drudy, D.; Kyne, L.; Brown, K.; Fairweather, NF Immunoreaktywne białka ściany komórkowej Clostridium difficile zidentyfikowane w surowicy ludzkiej. J. Med. Mikrobiol. 2008, 57, 750–756. [Odniesienie]

51. Kirk, JA; Gebhart, D.; Buckley, AM; Lok, S.; Scholl, D.; Douce, GR; Govoni, GR; Fagan, RP Nowa klasa precyzyjnych środków przeciwdrobnoustrojowych na nowo definiuje rolę warstwy S Clostridium difficile w zjadliwości i żywotności. Nauka. Tłumacz. Med. 2017, 9, eaah6813. [Odniesienie]

52. Bruxelles, JF; Mizrahi, A.; Hoys, S.; Collignon, A.; Janoir, C.; Péchiné, S. Immunogenne właściwości prekursora warstwy powierzchniowej Clostridium difficile i testy szczepień na modelach zwierzęcych. Beztlenowy 2016, 37, 78–84. [Odniesienie]

53. Negm, Ohio; Hamed, pan; Dilnot, EM; Świeciło, CC; Marszałowska, I.; Lynch, M.; Loscher, CE; Edwardsa, LJ; Tighe, PJ; Wilcox, Massachusetts; i in. Profilowanie humoralnych odpowiedzi immunologicznych na antygeny specyficzne dla Clostridium difficile za pomocą analizy mikromacierzy białek. Clin. Szczepionka Immunol. 2015, 22, 1033–1039. [CrossRef] [PubMed]

54. Péchiné, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Zmienność białek powierzchniowych Clostridium difficile i specyficzna odpowiedź przeciwciał w surowicy u pacjentów z chorobą związaną z Clostridium difficile. J. Clin. Mikrobiol. 2005, 43, 5018–5025. [CrossRef] [PubMed]

55. Merrigan, MM; Venugopal, A.; Roxas, JL; Anwar, F.; Mallozzi, MJ; Roxas, BA; Gerding, DN; Viswanathan, VK; Vedantam, G. Białko warstwy powierzchniowej A (SlpA) jest głównym czynnikiem przyczyniającym się do przylegania Clostridium difficile do komórek gospodarza. PLoS ONE 2013, 8, e78404. [Odniesienie]

56. Bianco, M.; Fedele, G.; Quattrini, A.; Spigaglia, P.; Barbanti, F.; Mastrantonio, P.; Ausiello, CM Aktywność immunomodulacyjna białek warstwy powierzchniowej uzyskanych z epidemicznych i hiperwirulentnych szczepów Clostridium difficile. J. Med. Mikrobiol. 2011, 60, 1162–1167. [Odniesienie]

57. Ausiello, CM; Cerquetti, M.; Fedele, G.; Spensieri, F.; Palazzo, R.; Nasso, M.; Frezza, S.; Mastrantonio, P. Białka warstwy powierzchniowej z Clostridium difficile indukują cytokiny zapalne i regulatorowe w ludzkich monocytach i komórkach dendrytycznych. Zarażają mikroby. 2006, 8, 2640–2646. [Odniesienie]

58. Collins, LE; Lynch, M.; Marszałowska, I.; Kristek, M.; Rochfort, K.; O'Connell, M.; Windle, H.; Kelleher, D.; Loscher, CE Białka warstwy powierzchniowej wyizolowane z Clostridium difficile indukują reakcje klirensu w makrofagach. Zarażają mikroby. 2014, 16, 391–400. [CrossRef] [PubMed]

59. Chen, Y.; Huang, K.; Chen, ŁK; Wu, HY; Hsu, Cypr; Tsai, YS; Ko, toaleta; Tsai, PJ Cholesterol błonowy ma kluczowe znaczenie dla wiązania białek warstwy powierzchniowej Clostridium difficile i wyzwalania aktywacji inflamasomów. Przód. Immunol. 2020, 11, 1675. [CrossRef] [PubMed]

60. Kelly, CP Czy możemy zidentyfikować pacjentów z wysokim ryzykiem nawrotu zakażenia Clostridium difficile? Clin. Mikrobiol. Infekować. 2012, 18 (Suppl. 6), 21–27. [Odniesienie]

61. Wultt, M.; Noren, T.; Ljungh, A.; Åkerlund, T. Odpowiedź przeciwciał IgG na toksyny A i B u pacjentów z zakażeniem Clostridium difficile. Clin. Szczepionka Immunol. 2012, 19, 1552–1554. [Odniesienie]

62. Zostaw, BA; Blair, B.; Leney, M.; Knauber, M.; Reilly, C.; Lowy, I.; Gerding, DN; Kelly, Kalifornia; Katchar, K.; Baxter, R.; i in. Przeciwciała przeciw toksynie B w surowicy korelują z ochroną przed nawracającymi zakażeniami Clostridium difficile (CDI). Szczepionka 2010, 28, 965–969. [CrossRef] [PubMed]

63. Pantosti, A.; Cerquetti, M.; Viti, F.; Ortisi, G.; Mastrantonio, P. Analiza immunoblot odpowiedzi immunoglobuliny G w surowicy na białka powierzchniowe Clostridium difficile u pacjentów z biegunką związaną z antybiotykami. J. Clin. Mikrobiol. 1989, 27, 2594–2597. [CrossRef] [PubMed]

64. Drudy, D.; Calabi, E.; Kyne, L.; Sougioultzis, S.; Kelly, E.; Fairweather, N.; Kelly, CP Odpowiedź ludzkich przeciwciał na białka warstwy powierzchniowej w zakażeniu Clostridium difficile. FEMS Immunol. Med. Mikrobiol. 2004, 41, 237–242. [CrossRef] [PubMed]

65. O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; McDonalda, GS; DB, NE; Kelleher, DP Bierna immunizacja chomików przeciwko zakażeniu Clostridium difficile przy użyciu przeciwciał skierowanych przeciwko białkom warstwy powierzchniowej. Mikrobiolog FEMS. Łotysz. 2005, 246, 199–205. [Odniesienie]

66. DB, NE; O'Brien, JB; McCabe, MS; Athié-Morales, V.; Kelleher, DP Aktywna immunizacja chomików przeciwko zakażeniu Clostridium difficile przy użyciu białek warstwy powierzchniowej. FEMS Immunol. Med. Mikrobiol. 2008, 52, 207–218. [Odniesienie]

67. Brun, P.; Scarpa, M.; Grillo, A.; Palù, G.; Mengoli, C.; Zecconi, A.; Spigaglia, P.; Mastrantonio, P.; Castagliuolo, I. Clostridium difficile TxAC314 i SLP-36kDa wzmacniają odpowiedź immunologiczną na jednocześnie podawany antygen. J. Med. Mikrobiol. 2008, 57, 725–731. [Odniesienie]

68. Shirvan, AN; Aitken, R. Izolacja rekombinowanych przeciwciał skierowanych przeciwko białkom powierzchniowym Clostridium difficile. Braz. J. Mikrobiol. 2016, 47, 394–402. [Odniesienie]

69. Péchiné, S.; Denève, C.; Le Monnier, A.; Hoys, S.; Janoir, C.; Collignon, A. Immunizacja chomików przeciwko zakażeniu Clostridium difficile przy użyciu proteazy Cwp84 jako antygenu. FEMS Immunol. Med. Mikrobiol. 2011, 63, 73–81. [Odniesienie]

70. Kandalaft, H.; Husak, G.; Aubry, A.; van Faassen, H.; Guan, Y.; Arbabi-Ghahroudi, M.; MacKenzie, R.; Logana, SM; Tanha, J. Celowanie w białka warstwy powierzchniowej za pomocą przeciwciał jednodomenowych: potencjalne podejście terapeutyczne przeciwko chorobie związanej z Clostridium difficile. Aplikacja Mikrobiol. Biotechnologia. 2015, 99, 8549–8562. [Odniesienie]