Identyfikacja EST reagujących na nadtlenek wodoru zaangażowanych w biosyntezę glikozydów fenyloetanoidowych w hodowli komórek Cistanche Salsa

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN i in

Abstrakcyjny
Nadtlenek wodoru jest skutecznym inicjatorem abiotycznym, który może indukować biosyntezę metabolitów wtórnych w roślinach. Pokazujemy, że w hodowli zawiesiny komórkowej rośliny leczniczej tolerującej sólCistancheSalsa, produkcja składników bioaktywnychfenyletanoidglikozydy(PeGs) wzrosła po traktowaniu H2O2. Aby zidentyfikować geny związane z PeGs(fenyletanoidglikozydy)biosynteza pod wpływem H2O2, skonstruowaliśmy bibliotekę hybrydyzacji subtraktywnej supresji genów reagujących na H2O2 przy użyciuCistancheSalsalinii komórkowej i zidentyfikowano 105 eksprymowanych znaczników sekwencji (EST) i 85 genów. Przypisy funkcjonalne biblioteki EST i analizy ontologii genów wykazały geny związane z różnymi reakcjami na stres, biosyntezą metabolitów wtórnych i regulacją transkrypcji. Wśród nich zidentyfikowaliśmy dwa geny związane z PeGs(fenyletanoidglikozydy)szlak biosyntezy (4-ligaza kumaranowo-koenzymu A i 4-hydroksylaza cynamonowa) oraz dwa czynniki transkrypcyjne typu WRKY. Ekspresje wybranych genów po traktowaniu H2O2 analizowano metodą RT-qPCR. Wczesna zwiększona transkrypcja PeG(fenyletanoidglikozydy)geny szlaku biosyntezy po leczeniu ujawniły, że H2O2 indukował PeGs(fenyletanoidglikozydy)biosynteza poprzez regulację w górę jej kluczowych genów.
Dodatkowe słowa kluczowe: -4-hydroksylaza cynamonowa, 4-ligaza kumaranowo-koenzymu A, hybrydyzacja subtraktywna z supresją.CistancheSalsa. fenyletanoidglikozydy.

Wstęp

CistancheSalsajest wieloletnim pasożytem roślin na korzeniu Haloxylos ammodendrun i rośnie na pustynnym obszarze zachodnich Chin. Przez wieki,Cistanchegatunek był stosowany jako tradycyjna medycyna ziołowa (Wang et al. 2012). Składniki bioaktywne sąfenyletanoidglikozydy(PeG), które mają niezwykły wpływ na usuwanie reaktywnych form tlenu (ROS), ochronę przed promieniowaniem, wzmocnienie odporności i przeciwdziałanie starzeniu się (Nan i wsp. 2013). PeGi(fenyletanoidglikozydy)biosynteza wCistanchejest inicjowany z fenyloalaniny (ryc. 1 Suppl.), a zsyntetyzowany kwas kawowy jest dalej glikozylowany, tworząc różne PeG(fenyletanoidglikozydy)(Wang i in. 2012). Trzy główne PEG(fenyletanoidglikozydy), echinakozyd, akteozyd i 2'-acetyloakteozyd są uważane za najbardziej aktywne składnikiCistanche(Kobayashi i wsp. 1984). Aby ulepszyć ich zawartość wCistancheW hodowli komórkowej testowano różne elicytory, w tym chitozan, putrescynę, Agplus i stres osmotyczny (Ouyang i wsp. 2005a,b, Cheng i wsp. 2005, 2006, Liu i wsp. 2007, Liu i Cheng 2008). Jednak geny zaangażowane w PeGs(fenyletanoidglikozydy)biosynteza wCistanche, głównie geny szlaku metabolizmu fenyloalaniny, były rzadko identyfikowane. Tylko gen kodujący liazę amoniakalną fenyloalaniny (PAL) został niedawno zidentyfikowany w Cistanche deserticola (Hu i wsp. 2011). Inne geny kodujące, na przykład, -4-hydroksylazę cynamonową (C4H), która może katalizować konwersję cynamonianu do kwasu kumarowego, oraz 4-ligazę kumaranowo-koenzymu A (4CL), niezbędny gen dla ligniny i flawonoidów biosyntezy, nie zostały znalezione wCistanche.
Użyliśmy kultury komórkowejCistancheSalsastudiować PEG(fenyletanoidglikozydy)biosynteza i ekspresja genów pokrewnych. Zbadaliśmy również wpływ skutecznego elicitora H2O2 na PeGs(fenyletanoidglikozydy)biosynteza. Ponadto, aby znaleźć wczesne reagujące geny zaangażowane w PeGs(fenyletanoidglikozydy)biosyntezy przeprowadziliśmy supresyjną hybrydyzację subtrakcyjną (SSH) w celu skonstruowania biblioteki cDNA genów reagujących na H2O2-.

Rys. 1. Względna ekspresja genów określona metodą RT-qPCR po traktowaniu H2O2. CsWRKY1 - Czynnik transkrypcyjny WRKY (Contig07), CsC4H1 -hydroksylaza cynamonowa 4-(Contig09), Cs4CL1 - 4-kumaran: ligaza (Contig03), białko szoku cieplnego CsHSP1 - 70 kDa (Contig 01) i dysmutaza ponadtlenkowa CsSOD1 - (Contig16). Komórki traktowano 80 μg dm-3 H2O2 w płynnej pożywce przez 2 godziny i ekspresję porównywano z kontrolą traktowaną wodą. Średnia plus - SD trzech powtórzeń biologicznych; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Materiały i metody

Linia komórkowa CS2001 została założona z płatkówCistancheSalsa(CA Mey.) Beck zebrany w prowincji Neimenggu i podhodowany. Metoda hodowli była podobna do protokołu opublikowanego wcześniej (Liu et al. 2007). Generalnie do podhodowli stosowano stałą pożywkę Murashige i Skooga (1962; MS), a do PeGs pożywkę płynną(fenyletanoidglikozydy)biosynteza (była to zmodyfikowana pożywka MS z dodatkiem 30 g dm-3 glukozy i 2,0 mg dm-3indolu-3-kwasu octowego). W przypadku traktowania H2O2, 5.0 ± 0,2 g komórek w okresie szybkiego wzrostu, zwykle 20 do 30 dni po przeszczepieniu ich na pożywkę stałą, inokulowano do pożywki płynnej o objętości 50 cm3 w kolbie Erlenmeyera o pojemności 250 cm3 i hodowane w ciemności z lub bez różnych stężeń H2O2. PeGi(fenyletanoidglikozydy)zawartość po 10 d indukcji przez H2O2 analizowano zgodnie z wcześniej opublikowaną metodą (Liu et al. 2007) opartą na wysokosprawnej chromatografii cieczowej w układzie faz odwróconych z elucją gradientową metanolem.

Komórki 2 godziny po potraktowaniu H2O2 zebrano z pożywki za pomocą bibuły filtracyjnej przy użyciu lejka Buchnera, a następnie zamrożono w ciekłym azocie i zmielono na proszek. Każde 2 g proszku komórkowego poddano lizie przy użyciu mieszaniny 1 cm3 2-merkaptoetanolu, 1 cm3 200 g sm{{10}} sarkozylu, i 8 cm3 buforu GTC (5 M izotiocyjanian guanidyny, 62,5 mM Tris-HCl, pH 8,0, 6,25 mM EDTA, pH 8,0, 5 mM tiomocznik i 10 mM ditiotreitol). Komórki następnie inkubowano na lodzie przez 15 min, następnie dodano 1/3 objętości 8,5 M CH3COOK, pH 6,0 i komórki inkubowano na lodzie przez 15 min, a następnie odwirowano przy 15 000 g przez 15 min . Supernatant dodano do równej objętości izopropanolu w celu wytrącenia całkowitego RNA. Całkowity RNA był dalej oczyszczany za pomocą minizestawu RNeasy (Qiagen, Hilden, USA) zgodnie z instrukcjami producenta. Informacyjny RNA wyizolowano z całkowitego RNA przy użyciu zestawu Oligotex mRNA midi (Qiagen).

fenyletanoidglikozydywCistancheSalsa

Bibliotekę SSH wygenerowano z kontrolnych i 30 procentowych próbek komórek wywoływanych przez H2O2- 2 godziny po wzbudzeniu przy użyciu zestawu do odejmowania cDNA do selekcji PCR (Clontech, Mountain View, USA). Do konstrukcji biblioteki produkty oczyszczono oddzielnie stosując zestaw do oczyszczania żelu (Qiagen) i sklonowano do wektora pGEM przy użyciu zestawu do klonowania TA (Tiangen, Pekin, Chiny). Plazmidy z niezależnych klonów wyizolowano i zsekwencjonowano przy użyciu startera T7. Wszystkie eksprymowane sekwencje znacznika sekwencji (EST) z biblioteki (z usuniętymi sekwencjami wektora) zastosowano do składania kontigu z CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). EST pogrupowano w kontig i singletony; użyto ich do wyszukiwania homologii przy użyciu programu BLASTx w NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov). Sekwencje były następnie opisywane, analizowane i klasyfikowane zgodnie z terminami ontologii genów (GO) przy użyciu Blast2GO (http://www.blast2go.com).
Ilościową reakcję łańcuchową polimerazy w czasie rzeczywistym (RT-qPCR) przeprowadzono zgodnie z Bustin i in. (2009). Próbki cDNA zsyntetyzowano przy użyciu zestawu odczynników PrimeScript RT (Takara, Dalian, Chiny) z 0,5 ug całkowitego RNA. RT-qPCR przeprowadzono przy użyciu zestawów SYBR Premix Ex Taq II i ROX plus (Takara) w systemie PCR w czasie rzeczywistym ABI 7300 (Applied Biosystems, Foster City, USA) z trzema powtórzeniami technicznymi. Podkłady zostały zaprojektowane przy użyciu internetowego oprogramowania Primer3 zgodnie z instrukcją dostarczoną przez Takara; startery zastosowane w tym badaniu wymieniono w Tabeli 1 Suppl. Ekspresje genów znormalizowano do 18S RNA, którego ekspresja była stabilna we wszystkich próbkach.

Wyniki analizowano za pomocą R w wersji 3.1.1, istotność różnic zweryfikowano testem t-Studenta.

Wyniki

Biosynteza wszystkich trzech głównych PeG wywołana nadtlenkiem wodoru(fenyletanoidglikozydy)wCistancheSalsakomórki w zawiesinie (Tabela 1), ale bez widocznego wpływu na wzrost komórek (Fig. S2). Zawartość echinakozydu wzrosła już po zabiegu 10 ug dm-3 H2O2 (P < 0.05),="" wyższy="" wzrost="" odnotowano="" po="" zabiegu="" 20="" ug="" dm="" -3="" traktowanie="" h2o2="" (p="">< 0,01),="" a="" najwyższy="" wzrost="" nastąpił="" po="" traktowaniu="" 40,="" 80="" i="" 160="" µg="" dm-3="" h2o2.="" podobne="" wyniki="" pokazano="" dla="" akteozydu,="" ale="" jego="" zawartość="" osiągnęła="" szczyt="" po="" potraktowaniu="" 80="" μg="" dm-3="" h2o2.="" biosynteza="" 2'-acetyloakteozydu="" była="" mniej="" wrażliwa="" na="" działanie="" h2o2;="" znaczący="" wzrost="" jego="" zawartości="" (p="">< 0,05)="" nastąpił="" przy="" stężeniach="" h2o2="" powyżej="" 40="" ug="" sm-3.="" po="" obróbce="" 80="" ug="" dm-3="" h2o2,="" ilość="" wszystkich="" trzech="" głównych="">(fenyletanoidglikozydy)znacznie wzrosła (P < 0.01)="" w="" porównaniu="" z="" kontrolą.="" dlatego="" to="" stężenie="" wykorzystano="" w="" dalszych="">
Aby wygenerować bibliotekę wzbogaconą o wczesne reagujące geny, które są regulowane w górę przez H2O2, użyliśmy cDNA zCistancheSalsakomórki zawiesinowe potraktowano 80 μg dm-3 H2O2 przez 2 godziny. Sekwencjonowanie jednoprzebiegowe 129 rekombinowanych klonów w bibliotece SSH dało 105 czystych EST po wykluczeniu sekwencji wektora. Te czyste EST zastosowano do złożenia przez CAP3 i wytworzono 18 kontigów i 67 singletonów (Tabela 2). Tak więc z tej biblioteki wyizolowano 85 genów. Średnia długość czystych 105 EST wynosiła 527 bp, co jest odpowiednie dla klasyfikacji funkcjonalnej opartej na podobieństwie sekwencji.

fenyletanoidglikozydywCistancheSalsa

Wszystkie 85 genów uzyskanych w bibliotece pobrano za pomocą BLASTx względem nienadmiarowej bazy danych białek GenBank pod kątem podobieństwa sekwencji (wartość E mniejsza lub równa 0.001). Dwadzieścia jeden genów nie wykazało trafień w bazie danych, mogą one być specyficzne dlaCistancheSalsa. Wyniki z BLASThits zostały zaimportowane do oprogramowania Blast2GO w celu dalszych analiz wzbogacania ścieżek GO i KEGG. Spośród 64 genów z trafieniami BLAST, 50 oznaczono zgodnie z opisem genów homologicznych z innych gatunków. Opisane geny nazwano zgodnie z opisem trafień BLAST. Analiza GO (ryc. 3 Suppl.) pokazuje, że wśród tych 50 genów było 14 genów zaangażowanych w odpowiedzi na bodźce i ponad 30 genów związanych z procesami metabolicznymi (tab. 1 i 2). Spośród tych genów, zgodnie z oczekiwaniami, wyizolowano dwa homologi genów szlaku biosyntezy PeG: ligazę 4-kumaranowo-koenzymu A (o nazwie Cs4CL1: Contig03) i 4-hydroksylazę cynamonową (o nazwie CsC4H1: Contig14). Ponadto przeprowadzono RT-qPCR w celu potwierdzenia indukowanej ekspresji genów z biblioteki po traktowaniu H2O2.

Aby potwierdzić, że niezbędne geny zidentyfikowane z biblioteki SSH reagowały na traktowanie H2O2, ekspresja dwóch PeG(fenyletanoidglikozydy)Geny związane ze szlakiem biosyntezy (Cs4CL1, CsC4H1), dwa geny indukowane przez ROS (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099) oraz jeden gen podobny do czynnika transkrypcyjnego z rodziny WRKY (CsWRKY1: Contig 07) zmierzono po leczeniu metodą RT-qPCR z H2O2 (rys. 1). Wyrażenia CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 i CsWRKY1 były regulowane w górę ponad 15-krotnie, 3-krotnie, 45-krotnie i 4-krotnie, odpowiednio 2 godziny po H2O2 leczenie. Ekspresja CsHSP1 została zmieniona tylko 1,8-krotnie po traktowaniu H2O2.
Przebieg w czasie ekspresji CsWRKY1, CsC4H1 i Cs4CL1 po traktowaniu H2O2 poddano dalszej analizie metodą RT-qPCR (ryc. 2). Ekspresja CsC4H1 i Cs4CL1 była silnie zwiększona (odpowiednio ponad 80-krotnie i 50-krotnie) po 16-h leczenia, a następnie obniżona po 32 godzinach. Ekspresja CsWRKY1 była zwiększona ponad 20-krotnie po 4 godzinach, a następnie spadła od 8 godzin później (ryc. 2).

Rys. 2. Względna ekspresja CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) i Cs4CL1 (C) w różnych czasach po traktowaniu 80 µg dm-3 H2O2. Wyrażenia znormalizowano do kontroli; (traktowany wodą). Średnia plus - SD trzech powtórzeń biologicznych; * - P < 0,05,="" **="" -="" p=""><>

Dyskusja

Nadtlenek wodoru jest dobrze znanym elicytorem roślinnym, który wykazuje różnorodny wpływ na rośliny. Podobnie jak ROS, może indukować system usuwania ROS składający się z dysmutazy ponadtlenkowej, katalazy, peroksydaz itp. i służy jako dalszy sygnał soli, osmotyki i odwodnienia

podkreśla (Wi i in. 2006, Kar 2011, Furlan i in. 2013, Sathiyaraj i in. 2014). Zasugerowano, że generowaniu H2O2 w roślinach towarzyszy indukowana biosynteza metabolitów wtórnych wCistancheSalsaHodowlę komórkową. Zgodnie z oczekiwaniami nasze wyniki pokazują, że PeGs(fenyletanoidglikozydy)biosynteza wSalsa Cistanchehodowlę komórkową indukowano po potraktowaniu H2O2 (Tabela 1). Zawartość trzech głównych PEG(fenyletanoidglikozydy)wzrosła po traktowaniu H2O2, co wskazuje na jego kluczową rolę w biosyntezie PeGs. Geny wzbogacone w bibliotekę SSH dodatkowo sugerowały jego wpływ na PeGs(fenyletanoidglikozydy)indukcja biosyntezy wSalsa Cistanche.

Wiele znanych genów reagujących na H2O2-, takich jak peroksydaza askorbinianowa (CISTH069, Karyotou i Donaldson 2005), oksydoreduktaza h-chinonu (CISTH125, Bello i wsp. 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah i wsp. 2014), oraz geny odpowiedzi odpornościowej na choroby (Contig10, Nanda, i wsp. 2010), wzbogacono w bibliotece SSH (Tabela 3, Tabela 2 Suppl.). Niektóre z tych typowych genów reagujących na ROS z indukowaną ekspresją po traktowaniu H2O2 zostały dodatkowo potwierdzone przez RT-qPCR (Fig. 1 i 2) wskazując, że skonstruowano tutaj kwalifikowaną bibliotekę SSH. W tej bibliotece znaleziono również dwa geny szlaku biosyntezy PeG, CsC4H1 i Cs4CL1, i te dwie ekspresje genów były indukowane przez traktowanie H2O2 w sposób zależny od czasu (Fig. 2). Sugeruje to, że traktowanie H2O2 indukowało PeGs(fenyletanoidglikozydy)biosynteza na poziomie genetycznym poprzez regulację genów szlaku PAL. Jednak PAL i inne geny biosyntezy PeGs niższego rzędu (Wang i wsp. 2012) nie zostały zidentyfikowane w bibliotece SSH; może to być spowodowane tym, że biblioteka nie została wystarczająco zsekwencjonowana. Związek między ekspresjami indukowanymi przez CsC4H1 i Cs4CL1 a zwiększoną biosyntezą PeGs po traktowaniu H2O2 powinien zostać wyjaśniony w dalszej analizie.

Oprócz genów szlaku PAL indukowanych przez traktowanie H2O2, w bibliotece SSH znaleziono dwa czynniki transkrypcyjne z rodziny WRKY (CsWRKY1, CsWRKY2) (Tabela 3 i Tabela 2 Suppl.), a ekspresję indukowaną przez CsWRKY1 potwierdzono metodą RT-qPCR . Jego ekspresja reagowała na traktowanie H2O2 wcześniej niż ekspresja dwóch genów szlaku PAL, Cs4CL1 i CsC4H1 (ryc. 2). We wcześniejszych badaniach zaobserwowano koekspresję niektórych czynników transkrypcyjnych WRKY i genów szlaku PAL w ryżu (Gupta i wsp. 2012). Ponadto ekspresja genu PAL jest podwyższona w mutancie z nadekspresją OsWRKY03 (Liu i wsp. 2005). Wspomniane powyżej dwa czynniki transkrypcyjne z rodziny WRKY mogą być również zaangażowane w PeGs(fenyletanoidglikozydy)biosynteza wCistancheSalsa. Co ciekawe, w bibliotece SSH znaleziono EST związane z odwodnieniem (CISTH067, CISTH064), co może sugerować, że traktowanie H2O2 było związane z ekspresją genów reagujących na odwodnienie wCistancheSalsajak zaobserwowano w innych roślinach (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). Jeden gen związany z sygnalizacją gibereliny (GA), receptor gibereliny podobny do gid1b (CISTH092), został zidentyfikowany w bibliotece SSH, co sugeruje połączenie sygnalizacji GA i traktowania H2O2 wCistancheSalsa, co odnotowano również w jęczmieniu (Bahin i in. 2011). Potrzebne są jednak dalsze badania, aby potwierdzić, czy te geny są powiązane z PeG(fenyletanoidglikozydy)biosynteza. Poza wymienionymi powyżej genami, skonstruowana tutaj biblioteka SSH również prezentuje geny z trafieniami BLAST lub bez nich. Poprawia nasze zrozumienie wpływu H2O2 na C. salsa i przede wszystkim dostarcza informacji o jej genach zaangażowanych w biosyntezę PeGs.

Podsumowując, oceniliśmy wpływ H2O2 na PeGs(fenyletanoidglikozydy)indukcja wCistancheSalsaHodowlę komórkową. Bibliotekę SSH skonstruowano po potraktowaniu H2O2, a ekspresję wybranych genów potwierdzono metodą RT-qPCR. Zidentyfikowano dwa geny związane ze szlakiem biosyntezy PeG i inne geny reagujące na H2O2-. Te odkrycia poszerzą naszą wiedzę na temat peG indukowanych przez H2O2-(fenyletanoidglikozydy)biosynteza wCistancheSalsado poziomu molekularnego, dostarczając informacji do manipulacji genamiCistancheSalsakultury komórkowe w celu ulepszenia PeG(fenyletanoidglikozydy)produkcja.

Od: "Identyfikacja EST reagujących na nadtlenek wodoru zaangażowanych w biosyntezę glikozydów fenyloetanoidowych w hodowli komórek Cistanche salsa" przezJ. CHEN i in.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN i in. DOI: 10.1007/s10535-015-0541-y

Bibliografia

Bahin E., Bailly C., Sotta B., Kranner I., Corbineau F., Leymarie J.: Przesłuch między reaktywnymi formami tlenu a hormonalnymi szlakami sygnałowymi reguluje stan spoczynku ziarna w jęczmieniu. - Środowisko komórki roślinnej. 34: 980-993, 2011.
K. Baruah, P. Norouzitallab, L. Linayati, P. Sorgeloos, P. Bossie, r.: Reaktywne formy tlenu generowane przez produkt indukujący białko szoku cieplnego (Hsp) przyczyniają się do wytwarzania Hsp70 i Hsp{{1} } pośredniczy w odporności ochronnej Artemia franciscana przeciwko chorobotwórczym vibrios. - Dev. komp. Immunol. 46: 470-479, 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: Ekspresja NAD(P)H: oksydoreduktazy chinonowej 1 w komórkach HeLa – rola nadtlenku wodoru i fazy wzrostu. - J. biol. Chem. 276: 44379-44384, 2001.
Bustin SA, Vandesompele J., Pfaffl MW: Standaryzacja qPCR i RT-qPCR. - Genet. inż. Biotechnologia. Aktualności 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:CistancheKultury zawiesinowe komórek deserticola:fenyletanoidglikozydybiosynteza i aktywność przeciwutleniająca. - Biochem procesowy. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ Poprawafenyletanoidglikozydybiosynteza wCistancheHodowle zawiesinowe komórek deserticola za pomocą chitozanowego elicitora. - J. Biotechnol. 121: 253-260, 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: Kwas abscysynowy pośredniczy w wytwarzaniu nadtlenku wodoru w orzeszkach ziemnych wywołanym stresem wodnym. - Biol. Zakład. 57: 555-558, 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: Pojedynczy funkcjonalny gen odporności na zarazę Pi54 aktywuje złożony mechanizm obronny ryżu. - J. doś. Nerw. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: Molekularna charakterystyka genu liazy fenyloalaniny zCistanchedeserticola. - Mol. Biol. Rep. 38: 3741-3750, 2011.
Kar, RK: Reakcje roślin na stres wodny: rola reaktywnych form tlenu. - Roślina Zachowanie Sygnału 6: 1741-1745, 2011.
Karyotou, K., Donaldson, RP: peroksydaza askorbinianowa, zmiatacz nadtlenku wodoru w błonach glioksysomalnych. - Łuk godz. Biochem. Biofizyka. 434: 248-257, 2005.
Kobayashi H., Karasawa H., Miyase T., Fukushima S.: Badania nad składnikamicistanchejest zioła. 4. Izolacja i struktury 2 nowych glikozydów fenylopropanoidowych, cistanozydu-C i cistanozydu-D. - Chem. Farmacja Byk. 32: 3880-3885, 1984.

Liu, CZ, Cheng, XY: Ulepszeniefenyletanoidglikozydybiosynteza w kulturach komórkowychCistanchedeserticola przez stres osmotyczny. - Rep. komórek roślinnych 27: 357-362, 2008.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: Lepsza akumulacjafenyletanoidglikozydyprzez podawanie prekursora do hodowli zawiesinowejCistancheSalsa. - Biochem. inż. J. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, aktywator transkrypcji ryżu, który działa w obronie szlaku sygnalizacyjnego przed OsNPR1. - Komórka Res. 15: 593-603, 2005.
Murashige, T., Skoog, F.: Poprawiona pożywka do szybkiego wzrostu i testów biologicznych z kulturami tkanek tytoniu. - Fizjol. Zakład. 15: 473-497, 1962.
Nan, ZD, Zeng, KW, Shi, SP, Zhao, MB, Jiang, Y., Tu, PF:Fenyletanoidglikozydyo działaniu przeciwzapalnym z łodygCistanchedeserticola hodowana na pustyni Tarim. - Fitoterapia 89: 167-174, 2013.
Nanda AK, Andrio E., Marino D., Pauly N., Dunand C.: Reaktywne formy tlenu podczas wczesnych interakcji roślina-mikroorganizm. - J. Integra. Biol roślinny. 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Ulepszona produkcjafenyletanoid glikozydyprzez podawanie prekursora do hodowli komórkowejCistanchedeserticola. - Biochem procesowy. 40: 3480-3484, 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Ulepszona produkcjafenyletanoidglikozydyza pomocąCistanchekomórki deserticola hodowane w wewnętrznym bioreaktorze z pętlą pneumatyczną z przesiewaczem pionowym. - Mikrobiol enzymatyczny. Tech. 36: 982-988, 2005b.
Salcedo-Morales, G., Jimenez-Aparicio, AR, Cruz-Sosa, F., Trejo-Tapia, G.: Charakterystyka anatomiczna i histochemiczna haustorium in vitro z korzeni Castilleja tenuiflora. - Biol. Zakład. 58: 164-168, 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Parvin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: Aklimatyzacja nadtlenku wodoru zwiększa tolerancję soli poprzez aktywację białek związanych z obroną w Panax żeń-szeń CA Meyer. - Mol. Biol. Rep. 41: 3761-3771, 2014.
Schmidt, R., Mieulet, D., Hubberten, HM, Obata, T., Hoefgen, R., Fernie, AR, Fisahn, J., Segundo, BS, Guiderdoni, E., Schippers, JHM, Mueller-Roeber, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 reguluje sygnalizację zależną od reaktywnych form tlenu podczas początkowej odpowiedzi na stres solny
w ryżu. - Komórka roślinna 25: 2115-2131, 2013.
Wang, T., Zhang, XY, Xie, WY:Cistanchedeserticola YC Ma, „Pustynny Żeń-szeń”: recenzja. - Amer. J. podbródek. Med. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Wzór osadzania się nadtlenku wodoru w osłonkach liści ryżu pod wpływem stresu solnego. - Biol. Zakład. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 reguluje reakcje stresowe na suszę i otwieranie aparatów szparkowych wywołane niebieskim światłem przez hamowanie akumulacji reaktywnych form tlenu u Arabidopsis. - Fizjol roślin. 162: 1030-1041, 2013.