Badania interwencyjne alkoholu fenyloetylowego, glikozyzyny cistanche na modelu zwierzęcym zespołu okołomenopauzalnego Ⅲ

Eksperyment 2

EfektGlikozyd fenyloetanolu Cistanchena myszceokołomenopauzalnymodel Materiały i metody

Materiały eksperymentalne

1.1 Zwierzęta doświadczalne

Myszy klasy SPF, gatunek Kunming, samica, 20-25g, dostarczone przez Instytut Produktów Biologicznych w Wuhan. Numer certyfikatu: 42000400000611; Numer certyfikatu laboratorium SYXK (Yu) 2010-001. 1.2 Leki eksperymentalne

Glikozyd fenyloetanolowy Cistanche desericola przygotowano według metody z Eksperymentu 1, a zawartość osiągnęła 66,47%. Kapsułka Gengnian'an, składniki: Rehmannia glutinosa, Rehmannia glutinosa, Alisma, Ophiopogon japonicus, Scrophulariaceae, kora piwonii, Poria cocos, masa perłowa, curculigo, Schisandra chinensis, magnetyt, Polygonum multiflorum vine, Uncaria, pływająca pszenica, Polygonum multiflorum . Funkcje i wskazania: Odżywiają yin i ujarzmiają yang, łagodzą kłopoty i uspokajają umysł. Stosowany w przypadku uderzeń gorąca i pocenia się w okresie menopauzy, zawrotów głowy, szumów usznych, drażliwości i bezsenności. Dane techniczne: 0.3 g na kapsułkę. Sposób użycia i dawkowanie: Doustnie, jednorazowo 3 kapsułki, 3 razy dziennie. Producent: Shanxi Tianxing Pharmaceutical Co., Ltd. Numer partii produkcyjnej: 121104. Numer zatwierdzenia: Krajowy numer zatwierdzenia leku Z14021848.

Izoflawony sojowe i kapsułki miękkie z witaminą E, skład: izoflawony sojowe w proszku, witamina E, olej słonecznikowy, żelatyna, gliceryna, woda, tartrazyna, dwutlenek tytanu. Kultowe składniki i zawartość: Każde 100 g zawiera 55,2 mg izoflawonów sojowych (w przeliczeniu na genisteinę) i 608,5 mg witaminy E. Funkcje zdrowotne: Zwiększają gęstość kości. Sposób użycia i dawkowanie: 1 kapsułka 2 razy dziennie popijając ciepłą wodą. Dane techniczne: 500 mg × 100 kapsułek. Producent: Weihai Ziguang Biotechnology Development Co., Ltd. Numer partii produkcyjnej: 13070302. Numer zatwierdzenia: National Food Health G20080032.

Wynik 1 Wpływ na czynności autonomiczne w mysim modelu okołomenopauzalnym

Wyniki testu aktywności autonomicznej myszy w każdej grupie eksperymentalnej przedstawiono w Tabeli 2 i Rycinie 2.

1.3 Odczynniki eksperymentalne

Karboksymetyloceluloza sodowa, Tianjin Hengxing Chemical Reagent Manufacturing Co., Ltd., numer partii: 20120418; penicylina sodowa do wstrzykiwań, North China Pharmaceutical Co., Ltd., specyfikacja: 4 miliony jednostek, numer partii produkcyjnej: c1206807; roztwór formaldehydu (stopień analityczny), Yantai City Shuangshuang Chemical Co., Ltd., numer partii produkcyjnej: 20130902; 0,9% roztwór chlorku sodu do wstrzykiwań, Chenxin Pharmaceutical Co., Ltd.; specyfikacja: 250ml, numer partii produkcyjnej: 1301265303;

Wodzian chloralu, Instytut Badań Chemicznych Fine Chemical Research Institute w Tianjin Guangfu, numer partii 20120827; zestaw do wykrywania myszy E2 ELISA, firma badawczo-rozwojowa, numer partii: 20131001A; zestaw do wykrywania myszy T ELISA, firma badawczo-rozwojowa, numer partii: 20131001A; Zestaw testowy do wykrywania LH ELISA myszy, firma badawczo-rozwojowa, numer partii: 20131001A;

Zestaw do wykrywania myszy FSH ELISA, firma badawczo-rozwojowa, numer partii: 20131001A. 1.4 Instrumenty eksperymentalne

Waga elektroniczna, Shanghai Minqiao Medical Instrument Co., Ltd., model: JY601; elektroniczna waga analityczna firmy Ohaus (Shanghai), model: AR1140/C; wysokoobrotowa wirówka stołowa, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, model: TGL-168; Elektryczna termostatyczna łaźnia wodna, Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd., model: HWS12; Tester aktywności autonomicznej myszy, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., model: ZZ-6; Miernik unikania ciemności przez mysz, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., model: BA-200; szybkoobrotowa wirówka z chłodzeniem, oddział HKUST Innovation Co., Ltd. w Zhongjia, model: KDC-160HR; regulowana pipeta, Shanghai Leibo Analytical Instrument Co., Ltd.;

Czytnik mikropłytek amerykańskiej firmy BIO-RAD, model: 680;

Mikroskop elektryczny, japońska firma OLYMPUS, model: BX61

JAK DŁUGO DZIAŁA CISTANCHE?

2 Metody eksperymentalne

2.1 Modelowanie i administracja lekami

Metoda modelowania: weź 100 samicę myszy Kunming o wadze 23-25g, losowo wybierz 12 myszy jako grupę ślepą i wykonaj pozorowaną operację, a pozostałe myszy wykorzystaj do stworzenia modeli menopauzy . Po zważeniu myszy znieczulono poprzez dootrzewnowe wstrzyknięcie 10% wodzianu chloralu (0,03 ml/10 g) i unieruchomiono w pozycji brzusznej. Następnie obcięto sierść z grzbietu myszy pod ostatnim żebrem w miejscu przecięcia linii pachowej środkowej i około 1 cm od zewnętrznej strony kręgosłupa, a następnie zdezynfekowano i przycięto. Skóra i mięśnie pleców otwierają się na około 0,5-1 cm, a w polu nacięcia widać mlecznobiałą, błyszczącą masę tłuszczową, w której osadzony jest jajnik. Za pomocą małej pęsety delikatnie chwyć masę tłuszczową i wyciągnij ją z nacięcia, oddziel masę tłuszczową, a zobaczysz grupę cienkich, nieregularnych, żółto-czerwonych jajników. Podczas cięcia należy najpierw podwiązać jajowody (w tym tłuszcz) pod jajnikami cienkimi nitkami, a następnie usunąć jajniki. Po operacji rogi macicy umieszcza się z powrotem w jamie brzusznej, zszywa mięśnie i skórę oraz w ten sam sposób usuwa się oba jajniki. Po operacji zwierzęta ostrożnie hodowano i raz dziennie przez 3 kolejne dni wstrzykiwano domięśniowo penicylinę w dawce 200000 u/kg (0,1 ml każda) w celu zapobiegania infekcji. U każdej myszy wykonywano badanie wymazu z pochwy 5 dni po operacji, raz dziennie przez 5 kolejnych dni, w celu sprawdzenia, czy jajniki zostały całkowicie usunięte. Myszy wykazujące reakcję rujową w rozmazie odrzucono, a 72 całkowicie wykastrowane myszy podzielono losowo i równo na 6 grup w celach doświadczalnych, mianowicie grupę modelową,Grupa kapsułek Gengniang'an, grupa kapsułek miękkich izoflawonów sojowych i duża grupa. , średnie i małe dawkiGlikozyd fenyloetanolu CistancheGrupa. Metoda przygotowania: {{0}.5% CMC Metoda przygotowania: Odważ 4 g karboksymetylocelulozy sodowej i wymieszaj z wodą destylowaną, aby uzyskać 800ml. Dawki dużych, średnich i małych dawek grupy glikozydów fenyloetanolowych Cistanche wynosiły odpowiednio 20{{30}}mg/kg, 100 mg/kg i 50 mg/kg (objętość podawania 0,1 ml/kg). 10g). Sposób przygotowania: Odważ odpowiednio 2000 mg, 1000 mg i 500 mg glikozydu fenyloetanoidowego Cistanche, rozpuść go w niewielkiej ilości 0,5% CMC, następnie dostosuj objętość do 100 ml, dobrze wymieszaj i gotowe. Gengniangan Capsules (675 mg/kg, zmieszane z wodą destylowaną do 67,5 mg/ml, 0,1 ml/10 g, co odpowiada 15-krotności dawki klinicznej); sposób przygotowania: weź 9 kapsułek Gengniangan, najpierw użyj małej ilości 0,5% CMC Dissolve, następnie dostosuj objętość do 40ml i dobrze wymieszaj, aby otrzymać dawkę zawiesiny kapsułek Gengnianan (675mg/kg). Kapsułka miękka z izoflawonem i witaminą E z soi (250 mg/kg, do przygotowania 25 mg/ml, 0,1 ml/10 g użyj wody destylowanej, co odpowiada 15-krotności dawki klinicznej); sposób przygotowania: weź 2 kapsułki izoflawonu sojowego, najpierw użyj małej ilości 0,5 Dissolve% CMC, następnie dostosuj objętość do 40ml i dobrze wymieszaj, aby otrzymać dawkę zawiesiny kapsułek izoflawonu sojowego (250mg/kg).

Sposób przechowywania: przechowywać w lodówce, utrzymywać ciepło podczas stosowania.

Sposób podawania: Zwierzętom w każdej grupie podano odpowiednie leki 10 dnia po zabiegu. Grupie otrzymującej kapsułki Gengnian'an podawano doustnie zawiesinę kapsułek Gengniang'an w dawce 675 mg·kg-1, a grupie pacjentów otrzymujących kapsułki miękkie z izoflawonem sojowym podano doustnie 250 mg·kg-1 zawiesiny kapsułek miękkich izoflawon sojowy, oraz duże, średnie imałe dawki benzenu Cistanchebyły podawane. Grupie otrzymującej etanologlikozyd podano doustnie duże, średnie i małe dawki glikozydu fenyloetanoidowego Cistanche 200mg·kg-1, 10mg·kg-1, 50mg·kg{ {5}}, odpowiednio 0,1 ml/10 g. Grupie ślepej i grupie modelowej podawano przez sondę tę samą objętość 0,5% roztworu CMC raz dziennie przez 21 kolejnych dni.

Zestaw do wykrywania myszy FSH ELISA, firma badawczo-rozwojowa, numer partii: 20131001A. 1.4 Instrumenty eksperymentalne

Waga elektroniczna, Shanghai Minqiao Medical Instrument Co., Ltd., model: JY601; elektroniczna waga analityczna firmy Ohaus (Shanghai), model: AR1140/C; szybka wirówka stołowa, Shanghai Anting Scientific Instrument Factory, model: TGL-168 ; Elektryczna termostatyczna łaźnia wodna, Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd., model: HWS12; Tester aktywności autonomicznej myszy, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., model: ZZ-6; Miernik unikania ciemności przez mysz, Chengdu Taimeng Technology Co., Ltd., model: BA-200; szybkoobrotowa wirówka z chłodzeniem, oddział HKUST Innovation Co., Ltd. w Zhongjia, model: KDC-160HR; regulowana pipeta, Shanghai Leibo Analytical Instrument Co., Ltd.;

Czytnik mikropłytek amerykańskiej firmy BIO-RAD, model: 680;

Mikroskop elektryczny, japońska firma OLYMPUS, model: BX61

2 Metody eksperymentalne

2.1 Modelowanie i podawanie leków

Metoda modelowania: weź 100 samicę myszy Kunming o wadze 23-25g, losowo wybierz 12 myszy jako grupę ślepą i wykonaj pozorowaną operację, a pozostałe myszy wykorzystaj do stworzenia modeli menopauzy . Po zważeniu myszy znieczulono poprzez dootrzewnowe wstrzyknięcie 10% wodzianu chloralu (0,03 ml/10 g) i unieruchomiono w pozycji brzusznej. Następnie obcięto sierść z grzbietu myszy pod ostatnim żebrem w miejscu przecięcia linii pachowej środkowej i około 1 cm od zewnętrznej strony kręgosłupa, a następnie zdezynfekowano i przycięto. Skóra i mięśnie pleców otwierają się na około 0,5-1 cm, a w polu nacięcia widać mlecznobiałą, błyszczącą masę tłuszczową, w której osadzony jest jajnik. Za pomocą małej pęsety delikatnie chwyć masę tłuszczową i wyciągnij ją z nacięcia, oddziel masę tłuszczową, a zobaczysz grupę cienkich, nieregularnych, żółto-czerwonych jajników. Podczas cięcia należy najpierw podwiązać jajowody (w tym tłuszcz) pod jajnikami cienkimi nitkami, a następnie usunąć jajniki. Po operacji rogi macicy umieszcza się z powrotem w jamie brzusznej, zszywa mięśnie i skórę oraz w ten sam sposób usuwa się oba jajniki. Po operacji zwierzęta ostrożnie hodowano i raz dziennie przez 3 kolejne dni wstrzykiwano domięśniowo penicylinę w dawce 200000 u/kg (0,1 ml każda) w celu zapobiegania infekcji. U każdej myszy wykonywano badanie wymazu z pochwy 5 dni po operacji, raz dziennie przez 5 kolejnych dni, w celu sprawdzenia, czy jajniki zostały całkowicie usunięte. Myszy wykazujące reakcję rujową w rozmazie odrzucono, a 72 całkowicie wykastrowane myszy losowo i równo podzielono do celów eksperymentalnych na 6 grup, mianowicie grupę modelową, grupę kapsułek Gengniang'an, grupę kapsułek miękkich izoflawonu sojowego i grupę dużą. , średnie i małe dawkiGlikozyd fenyloetanolu CistancheGrupa. Metoda przygotowania: 0.5% CMC Metoda przygotowania: Odważ 4 g karboksymetylocelulozy sodowej i wymieszaj z wodą destylowaną, aby uzyskać 800 ml. Dawki duże, średnie i małe dawkiGlikozyd fenyloetanolu Cistanchegrupie wynosiły odpowiednio 200mg/kg, 10{{20}}mg/kg i 50mg/kg (objętość podawania 0,1 ml/10 g). Sposób przygotowania: Odważ odpowiednio 2000 mg, 1000 mg i 500 mg glikozydu fenyloetanoidowego Cistanche, rozpuść go w niewielkiej ilości 0,5% CMC, następnie dostosuj objętość do 100 ml, dobrze wymieszaj i gotowe. Gengniangan Capsules (675 mg/kg, zmieszane z wodą destylowaną do 67,5 mg/ml, 0,1 ml/10 g, co odpowiada 15-krotności dawki klinicznej); sposób przygotowania: weź 9 kapsułek Gengniangan, najpierw użyj małej ilości 0,5% CMC Dissolve, następnie dostosuj objętość do 40ml i dobrze wymieszaj, aby otrzymać dawkę zawiesiny kapsułek Gengnianan (675mg/kg). Kapsułka miękka z izoflawonem i witaminą E z soi (250 mg/kg, do przygotowania 25 mg/ml, 0,1 ml/10 g użyj wody destylowanej, co odpowiada 15-krotności dawki klinicznej); sposób przygotowania: weź 2 kapsułki izoflawonu sojowego, najpierw użyj małej ilości 0,5 Dissolve% CMC, następnie dostosuj objętość do 40ml i dobrze wymieszaj, aby otrzymać dawkę zawiesiny kapsułek izoflawonu sojowego (250mg/kg).

Sposób przechowywania: przechowywać w lodówce, utrzymywać ciepło podczas stosowania.

Metoda podawania: zwierzętom w każdej grupie podano odpowiednie leki pierwszego0dnia po zabiegu. Grupie kapsułek Gengnian'an podawano doustnie zawiesinę kapsułek Gengniang'an w dawce 675 mg·kg-1, a grupie pacjentów w kapsułkach miękkich z izoflawonem sojowym podawano doustnie 250 mg·kg-1 izoflawonu sojowego podawano zawiesinę kapsułek miękkich oraz duże, średnie i małe dawki benzenu Cistanche. Grupie otrzymującej etanologlikozyd podano doustnie duże, średnie i małe dawki glikozydu fenyloetanoidowego Cistanche odpowiednio 200 mg·kg-1, 10 mg·kg-1, 50 mg·kg-1, 0,1 ml/10g. Grupie ślepej i grupie modelowej podawano przez sondę tę samą objętość 0,5% roztworu CMC raz dziennie przez 21 kolejnych dni.

2.2 Elementy obserwacyjne i metody wykrywania

Liczbę spontanicznych aktywności myszy w każdej grupie w ciągu 5 minut mierzono w 18. dniu podawania. W dniach od 19 do 20 dnia podawania mierzono opóźnienie myszy wchodzących do ciemni po raz pierwszy i liczbę wstrząsów elektrycznych otrzymanych w ciągu 5 minut od wejścia do ciemni. 2 godziny po ostatniej dawce (12 godzin bez jedzenia i wody) myszy zważono, usunięto im gałki oczne, pobrano krew, oddzielono surowicę i oznaczono zawartość E2, T, LH i FSH w surowicy. wymierzony; myszy następnie uśmiercano przez zwichnięcie odcinka szyjnego i poddano sekcji. , usuń grasicę, śledzionę i tkankę macicy, zważ ich mokrą masę i oblicz wskaźnik narządowy (wskaźnik narządowy=mokra masa narządu mg/masa myszy g), a następnie usuń przysadkę mózgową; utrwalić grasicę, śledzionę, macicę i przysadkę mózgową w 10% roztworze formaliny, zatopić w parafinie, pokroić, wybarwić HE i zmiany morfologiczne tkanek każdej grupy obserwowano pod mikroskopem świetlnym.

2.2.1 Test na liczbę niezależnych działań

Myszy w każdej grupie umieszczono w aparacie do dobrowolnych aktywności, najpierw przystosowywano je do środowiska na 1 minutę, a następnie mierzono liczbę dobrowolnych aktywności w ciągu 5 minut.

2.2.2 Test unikania ciemności

Umieść myszy w każdej grupie w pudełku testowym ogonami skierowanymi w stronę małego otworu prowadzącego do ciemni i przeprowadź szkolenie. Po 24 godzinach ponownie zmierzono okres utajenia myszy wchodzących do ciemni po raz pierwszy i liczbę wstrząsów elektrycznych otrzymanych w ciągu 5 minut po wejściu do ciemni.

2.2.3 Metoda określania zestawu

Pobieranie próbek surowicy: Używaj probówek wolnych od pirogenów i endotoksyn. Podczas operacji należy unikać stymulacji komórek. Po pobraniu krwi odwiruj ją przy 3000 obr./min przez 10 minut, aby szybko i ostrożnie oddzielić surowicę od czerwonych krwinek. Metoda testowa zestawu do wykrywania estradiolu u myszy (E2) ELISA: Wyjmij wymagane paski z torebki z folii aluminiowej, którą utrzymywano w temperaturze pokojowej przez 20 minut, a pozostałe paski zamknij w samouszczelniającym worku i włóż z powrotem do temperatury 4 stopni . Przygotuj dołki wzorcowe i dołki na próbki i dodaj 50 μl standardów o różnych stężeniach do każdego dołka standardowego. Najpierw do studzienki na próbkę należy dodać 10 µl badanej próbki, a następnie dodać 40 µl rozcieńczalnika do próbki (tzn. próbkę rozcieńcza się 5 razy); nie dodawaj go do pustego miejsca. Z wyjątkiem dołka ślepego, dodać 100 µl przeciwciała wykrywającego znakowanego peroksydazą chrzanową do każdego dołka dołka standardowego i dołka próbki, a następnie dobrze zamknąć mieszaninę reakcyjną folią uszczelniającą. Inkubować w łaźni wodnej lub inkubatorze o temperaturze 37 stopni przez 60 minut. Wylać płyn, osuszyć na bibule, napełnić każdą studzienkę roztworem płuczącym i odstawić na 1 minutę. Strząśnij płyn do mycia, osusz na papierze chłonnym i powtórz mycie płytki 5 razy. Najpierw dodaj po 50 μl substratów A i B do każdej studzienki i inkubuj w temperaturze 37 stopni w ciemności przez 15 minut. Wyjmij płytkę z enzymem, dodaj 50 µl roztworu zatrzymującego do każdego dołka i w ciągu 15 minut zmierz wartość absorbancji (wartość OD) każdego dołka przy długości fali 450 nm. W zależności od stężenia produktu wzorcowego i odpowiedniej wartości OD narysuj krzywą regresji produktu wzorcowego i oblicz wartość stężenia każdej próbki zgodnie z równaniem krzywej. Stężenie końcowe to faktycznie zmierzone stężenie pomnożone przez współczynnik rozcieńczenia. Wśród nich stężenia standardowych produktów (S0-S5) wynoszą 0, 4, 8, 16, 32 i 64 pmol/l. Stężenia standardowego zestawu do wykrywania mysiego (mysiego) testosteronu (T) ELISA (S0-55) wynoszą 0, 50, 100, 200, 400 i 800 pg/ml;

Stężenia mysiego (mysiego) hormonu luteinizującego (LH) w standardzie zestawu do wykrywania ELISA (S{{0}}) wynoszą 0, 0,5, 1, 2, 4, 8 mIU/ml;

Stężenia mysiego (mysiego) hormonu folikulotropowego (FSH) w standardzie zestawu do wykrywania ELISA (S0-55) wynoszą 0, 5, 10, 20, 40 i 80 mIU/ml.

2.3 Metody przetwarzania statystycznego

Do analizy danych wykorzystano pakiet statystyki medycznej SPSS17.0 do statystycznego przetwarzania danych. Dane pomiarowe wyrażono jako średnią ± odchylenie standardowe (-x±s). Do porównania pomiędzy grupami wykorzystano jednoczynnikową analizę wariancji. Do sprawdzenia jednorodności wariancji wykorzystano metodę LSD. w przypadku nierównych wariancji zastosowano test Gamesa-Howella, a w przypadku danych o ocenach – test Ridita.

Rycina 3 Wpływ glikozydu fenyloetanolowego Cistanche na okres utajony eksperymentu unikania ciemności w mysim modelu okołomenopauzalnym

Rycina 4 Wpływ glikozydu fenyloetanolowego Cistanche na liczbę wstrząsów elektrycznych w eksperymencie unikania ciemności na modelu myszy w okresie okołomenopauzalnym. Z Tabeli 3 i Ryc. 3–4 można zobaczyć, że w porównaniu z grupą ślepą okres inkubacji i liczba wstrząsów elektrycznych myszy w grupie modelowej uległy znacznemu skróceniu (P<0.01), reflecting the decline in memory in the mouse perimenopausal model. Compared with the model group, Gengnianan, soybean isoflavones, and large and medium doses of Cistanche phenylethanoid glycosides could significantly increase the latency of the dark avoidance test in mice, reduce the number of electric shocks (P<0.01), and improve the memory of mice.

3 Wpływ na wskaźnik narządów w mysim modelu okołomenopauzalnym

Wskaźniki grasicy, śledziony i macicy myszy w każdej grupie eksperymentalnej przedstawiono w Tabeli 4 i Rycinie 5.

Jak widać z Tabeli 4 i Ryciny 5, w porównaniu z grupą ślepą, wskaźnik maciczny myszy w grupie modelowej był znacząco niższy (P<0.01), indicating that removal of the ovaries caused uterine atrophy in the perimenopausal model mice, and removal of the ovaries resulted in insufficient estrogen secretion. Causes immune organ atrophy in perimenopausal mice. Compared with the model group, soy isoflavones, Gengnianan, large and medium doses of Cistanche phenylethanol glycoside can significantly improve the thymus, spleen and uterine index (P<0.01), and low dose Cistanche phenylethanol glycoside can significantly improve the perimenopausal model. Mouse uterine index (P<0.05). 4 Effects on serum sex hormone levels in mouse perimenopausal model

Zawartość E2, T, FSH i LH w surowicy myszy w każdej grupie. Patrz Tabele 5~6 i Rysunki 6~9. Z Tabeli 5–6 i Ryc. 6–9 można zobaczyć, że w porównaniu z grupą ślepą, poziomy E2 i T w surowicy myszy w grupie modelowej były znacząco obniżone (P<0.01), and the levels of LH and FSH were significantly increased (P<0.01). , indicating that removal of ovaries leads to disorders of sex hormone levels in the serum of perimenopausal model mice and the perimenopausal mouse model was successfully replicated. Compared with the model group, each administration group can significantly reduce the elevated LH level in serum (P<0.01); large and medium doses of Cistanche phenylethanol glycoside, Gengniangan, and soybean isoflavones can significantly increase the levels of perimenopausal mice. E2 and T levels in the serum of the early-stage model (P<0.01) and reduced elevated FSH and LH levels in the serum. Low-dose Cistanche phenylethanol glycoside can significantly increase serum E2 levels and reduce serum FSH levels (P<0.05); low-dose Cistanche phenylethanoid glycoside has a tendency to increase serum T levels.

4 Wpływ na poziom hormonów płciowych w surowicy w mysim modelu okołomenopauzalnym

Zawartość E2, T, FSH i LH w surowicy myszy w każdej grupie. Patrz Tabele 5~6 i Rysunki 6~9.

Z Tabeli 5–6 i Ryc. 6–9 można zobaczyć, że w porównaniu z grupą ślepą, poziomy E2 i T w surowicy myszy w grupie modelowej były znacząco obniżone (P<0.01), and the levels of LH and FSH were significantly increased (P< 0.01), indicating that removal of ovaries leads to disorder of sex hormone levels in the serum of perimenopausal model mice, and the perimenopausal mouse model was successfully replicated. Compared with the model group, each administration group can significantly reduce the elevated LH level in serum (P<0.01); large and medium doses of Cistanche deserticola phenylethanol glycoside, Gengniannian, and soybean isoflavones can significantly reduce the level of LH in mice. E2 and T levels in serum of perimenopausal model (P<0.01) and reduced elevated FSH and LH levels in serum. Low-dose Cistanche deserticola phenylethanol glycoside can significantly increase serum E2 levels and reduce serum FSH levels (P<0.05); low-dose Cistanche deserticola phenylethanoid glycoside has a tendency to increase serum T levels. 5. Effects on organ tissue morphology in perimenopausal model mice

Wyniki obserwacji patologicznych i histologicznych macicy, grasicy, śledziony i przysadki mózgowej myszy w każdej grupie doświadczalnej są następujące. Zdjęcia patologiczne przedstawiono w Załączniku 1, zawierającym zdjęcia patologiczne myszy w okresie okołomenopauzalnym.

5.1 Wpływ na morfologię tkanki macicy myszy w okresie okołomenopauzalnym

W zależności od różnego stopnia zmian w endometrium, gruczołach i myometrium myszy w każdej grupie eksperymentów, zastosowano półilościowe standardy, aby podzielić patologiczną morfologię tkanki na cztery poziomy. Mierzono macice myszy w każdej grupie eksperymentów. Wyniki obserwacji przedstawiono w Tabeli 7. Tabela 7 Wpływ glikozydu fenyloetanolowego Cistanche desericola na zmiany patologiczne macicy u myszy w okresie okołomenopauzalnym Jednostka: tylko

„-” Komórki nabłonka endometrium, gruczoły, myometrium i błona surowicza są w normie; „+” komórki nabłonka i gruczoły endometrium ulegają zanikowi, a myometrium i błona surowicza są w normie; "++" nabłonek endometrium Komórki i gruczoły są częściowo zaniknięte, warstwa mięśniowa jest nieznacznie zaniknięta, a błona surowicza jest prawidłowa; „+++” Komórki i gruczoły nabłonka endometrium ulegają znacznej atrofii, a błona surowicza jest prawidłowa.

Po teście Ridita z powyższej tabeli widać, że w porównaniu z grupą ślepą macica myszy w grupie modelowej wykazywała istotne zmiany patologiczne w tkankach (P<0.01). Compared with the model group, soy isoflavone vitamin E soft capsules, Gengnianan capsules, and high-dose Cistanche deserticola phenylethanol glycoside can significantly improve the uterine pathological tissue lesions of mice (P<0.01), and medium-dose Cistanche deserticola phenylethanol glycoside can Significantly improved uterine pathological tissue lesions in mice (P<0.05). 5.2 Effect on thymus and spleen tissue morphology in mouse perimenopausal model

Za pomocą mikrometru zmierz grubość najgrubszej i najwęższej części kory grasicy każdej myszy w każdej grupie doświadczalnej, aby uzyskać średnią; za pomocą mikrometru umieść linię bazową na guzku śledziony i zmierz dwie grubości, przy czym tętnica centralna jest pośrodku. Obliczono i uśredniono grubość guzków śledziony po obu stronach; wyniki przedstawiono w Tabeli 8 i Rycinie 10.

Tabela 8. Wpływ glikozydu fenyloetanolowego Cistanche desericola na zmiany patologiczne w grasicy i śledzionie u myszy w okresie okołomenopauzalnym (-x±s)

Jak widać z Tabeli 8 i Ryciny 10, w porównaniu z grupą ślepą, grubość kory grasicy i objętość guzków śledziony w grupie modelowej uległy znacznemu zmniejszeniu (P<0.01), indicating that the thymus and spleen volumes atrophied after the perimenopausal model was created in mice. Compared with the model group, high-dose Cistanche deserticola phenylethanol glycoside can significantly thicken the thymic cortex (P<0.01), and medium-dose Cistanche deserticola phenylethanoid glycoside can significantly thicken the thymic cortex (P<0.05). Each medication group could significantly increase the volume of splenic nodules. 5.3 Effect on pituitary tissue morphology in mouse perimenopausal model

Pole widzenia o dużym powiększeniu obejmuje obszar 10000 μm

2. Zmierz liczbę komórek bazofili i komórek przedniego przysadki mózgowej w ramce mikroprostokątnej. Wyniki przedstawiono w tabeli 9 i rysunkach 11–12.

Z Tabeli 9 i Ryc. 11-12 można zobaczyć, że w porównaniu z grupą ślepą, liczba komórek bazofili i komórek przedniego płata przysadki mózgowej w grupie modelowej uległa znacznemu zmniejszeniu (P<0.01), indicating that after the perimenopausal model was created in mice, secretion of The cellular source of gonadotropins is reduced. Compared with the model group, each medication group could significantly increase the number of pituitary basophil cells (P<0.01). Except for the low-dose Cistanche deserticola phenylethanol glycoside group, all other medication groups could significantly increase the number of anterior pituitary cells (P<0.01). P<0.01).