Domięśniowe wzmocnienie za pomocą HIFN-alfa 2b zwiększa ochronę indukowaną przez BCGphipps w mysim modelu trądu

Abstrakcyjny:

Odporność gospodarza na Mycobacterium leprae obejmuje spektrum mechanizmów, począwszy od ochrony opartej na odporności komórkowej, a skończywszy na uszkodzeniach związanych z odpornością humoralną, jak w typowych-2 reakcjach na trąd. Chociaż interferony typu I (IFN) uczestniczą w eliminacji patogenów wewnątrzkomórkowych, ich udział w wytwarzaniu przeciwciał i CD3 plus FOXP3 plus regulatorowe limfocyty T (Treg) w ochronie za pośrednictwem szczepionki BCG w trądzie jest nieznany. Szczepienie pierwotne BCGphipps (BCGph), a następnie domięśniowe podanie dawki przypominającej hIFN{5}}b znacznie zmniejszyło wielkość zmiany i wzrost Mycobacterium lepraemurium w skórze. Komórki regulatorowe pęcherzyka T (TFR), podgrupa Treg indukowana przez immunizację lub infekcję, znajdują się w centrach rozmnażania (GC) i modulują wytwarzanie przeciwciał.

Stwierdziliśmy upośledzoną indukcję Treg i ulepszone GC w drenujących węzłach chłonnych myszy otrzymujących szczepionkę BCGph i szczepionych hIFN{0}}b. Co więcej, myszy te wywoływały znaczne ilości IL-4 i IL-10 w surowicy. Zatem nasze wyniki potwierdzają adiuwantowe właściwości hIFN{3}}b w kontekście primingu BCGph w celu zwiększenia odporności ochronnej przeciwko trądowi skóry.

Odporność ochronna odnosi się do zdolności organizmu do obrony przed patogenami zakaźnymi poprzez wytwarzanie przeciwciał, limfocytów T itp. i jest jednym z ważnych mechanizmów odporności organizmu na choroby. Odporność odnosi się do zdolności organizmu do rozpoznawania i reagowania na różne obce substancje (w tym patogeny, ciała obce, komórki nowotworowe itp.), w tym odporność komórkową i odporność humoralną. Odporność ochronna jest częścią odporności, a obie są ze sobą ściśle powiązane. Dobra odporność może sprzyjać poprawie odporności ochronnej, aby lepiej zapobiegać występowaniu chorób. Jednocześnie poprawa odporności ochronnej może również wzmocnić odporność, pozwalając organizmowi lepiej radzić sobie z różnymi wyzwaniami zewnętrznymi. Dlatego utrzymanie zdrowego układu odpornościowego, w tym dobrej odporności ochronnej, jest bardzo ważne dla utrzymania dobrego stanu zdrowia. Z tego punktu widzenia bardzo ważna jest również odporność. Jeśli chcemy poprawić naszą odporność, Cistanche może znacznie poprawić naszą odporność człowieka. Polisacharydy w Cistanche mogą regulować odpowiedź immunologiczną ludzkiego układu odpornościowego i wzmacniać komórki odpornościowe. Zdolność do stresu, wzmacnia działanie bakteriobójcze komórek odpornościowych.

Kliknij korzyści zdrowotne cistanche

Słowa kluczowe:

Mycobacterium lepraemurium; mysi trąd; interferon alfa; BCGphipps; centra rozmnażania; limfocyty T regulatorowe.

1. Wstęp

Mycobacterium leprae i Mycobacterium lepromatosis, czynniki etiologiczne ludzkiego trądu [1,2], atakują skórę i nerwy obwodowe [3]. Chociaż dostępne są terapie wielolekowe (MDT) na trąd, liczba nowych przypadków pozostaje stabilna (700,{4}} rocznie).

Ponadto brak skutecznej procedury diagnostycznej utrudnia śledzenie transmisji M. leprae [4–7]. Genetyczne predyspozycje do wczesnego trądu [8] podkreślają potrzebę trafnej diagnozy i opracowania tanich immunoterapii w celu zmniejszenia zachorowalności na trąd w krajach rozwiniętych [9,10]. Spektrum objawów klinicznych trądu koreluje z rodzajem wywołanej odpowiedzi immunologicznej. Na przykład trąd tuberkuloidowy (TT), charakteryzujący się dominującą odpowiedzią Th1, ogranicza wzrost prątków poprzez aktywację mikrobójczych funkcji makrofagów przez IFN. W przeciwieństwie do tego, produkcja klasycznych cytokin Th2 (IL-4 i IL-10) została powiązana z utratą ochrony i zwiększonym wzrostem prątków w rozsianym trądzie lepromatycznym (LL) [10]. Istnieją również podtypy pośrednie, które reprezentują mieszaninę odpowiedzi Th1 i Th2 [10].

Zakażenie myszy M. lepraemurium (MLM) [11,12] zostało wykorzystane do badania mechanizmów immunologicznych ludzkiego trądu [11–13], mimo że MLM nie wykazuje tropizmu dla nerwów obwodowych [11,13], jak M. leprae robi [14]. Niemniej jednak obie prątki nie nadają się do hodowli i rosną powoli w żywicielu, podwajając swoją liczbę w ciągu 1–3 tygodni.

Eksperymentalne zakażenie podskórne małymi dawkami bakterii ściśle naśladuje naturalną chorobę, która zwykle występuje, gdy przerwanie barier ułatwia kolonizację prątków, wywołując reakcję immunologiczną na poziomie obwodowym [13,15–17]. Podczas gdy odporność komórkowa (CMI) jest upośledzona, odporność humoralna jest praktycznie niezmieniona w trądzie ludzkim i mysim [18]. Ponadto komórki Th1- lub Th2-, inne limfocyty T kształtują odporność gospodarza na infekcję M. leprae [18,19].

Intrygujące jest, jak M. leprae wpływa na odporność gospodarza w różnych podtypach chorób prątkowych. Jedna z hipotez głosi, że patogen obniża humoralną i komórkową odporność gospodarza na infekcję skóry i nerwów obwodowych [3,14,15]. Istnieją również dowody na to, że Bacillus upośledza aktywację makrofagów. Zmniejsza również ekspresję TNF-alfa i cząsteczek, takich jak prostaglandyny, które indukują wytwarzanie IL-1 oraz reaktywnych związków pośrednich tlenu i azotu (ROI i RNI), krytycznych dla prątkobójczych funkcji makrofagów [20–22].

Odpowiedzi humoralne generowane w GKS drugorzędowych i trzeciorzędowych tkanek limfatycznych uczestniczą w odporności ochronnej przeciwko patogenom [23–26]. Niedawny raport na temat trądu podkreślił kluczową rolę Treg w hamowaniu odpowiedzi komórek Th1 i Th17 [19]. Rzeczywiście, równowaga między tymi podzbiorami komórek T w GC [27-29] dyktuje ochronne lub patologiczne wyniki chorób zakaźnych i autoimmunologicznych [30,31] i ma kluczowe znaczenie dla rozwoju terapii indukujących odporność ochronną [26,27 ].

W szczególności pomocnicze komórki folikularne T (TFH), a zwłaszcza komórki regulatorowe mieszków włosowych T (TFR) modulują odpowiedź GC w celu wywołania długotrwałych humoralnych odpowiedzi immunologicznych, jednocześnie zapobiegając wytwarzaniu autoprzeciwciał [32,33]. Biorąc pod uwagę, że IFN typu I jest związany z wytwarzaniem zarówno TFH, jak i Treg, okazuje się on obiecującym adiuwantem do stymulacji odpowiedzi TFH w GKS w kontekście szczepienia BCG [34].

Podanie śluzówkowe IFN typu I indukuje dojrzewanie komórek dendrytycznych i wytwarzanie CXCR5 plus CD4 plus TFH, ułatwiając rozwój GC i wytwarzanie przeciwciał o wysokim powinowactwie w węzłach chłonnych [34]. W przeciwieństwie do tego, IFN typu I znoszą odporność gospodarza na gruźlicę człowieka poprzez hamowanie produkcji indukowalnej syntazy tlenku azotu (iNOS), IL-12p40, IL-1A i IL-1, jednocześnie indukując antagoniści IL{8}} i IL-1R [35–38]. Zatem udział IFN typu I jest zależny od kontekstu [38–42]. IFN typu I są wytwarzane na stałym poziomie, ale gdy patogen wewnątrzkomórkowy zaatakuje gospodarza, indukowanych jest kilka heterogenicznych i złożonych wrodzonych odpowiedzi przeciwwirusowych lub przeciwbakteryjnych [43-48], w tym zmiana klasy przeciwciał, hipermutacja somatyczna i wzmocnienie dostępności antygenu w GC, co doprowadzi do silnej i skutecznej odpowiedzi przeciwciał [34,49].

Wcześniej informowaliśmy o ochronie zapewnianej przez kolejne domięśniowe dawki przypominające IFN u myszy zaszczepionych Mycobacterium bovis BCG i poddanych prowokacji MLM [42] lub przeciwko prowokacji aerozolem M. tuberculosis [41]. U myszy prowokowanych MLM ochrona korelowała ze zwiększoną produkcją iNOS, tlenku azotu i przeciwciał IgG3 [42]. W kontekście prowokacji M. tuberculosis chronione myszy wywołały odpowiedź Th1 [41].

W nowszych badaniach IFN typu I modulowały autofagię i metabolizm w trądzie [50]. W tym badaniu zdecydowaliśmy się dalej badać ochronę przed mysim trądem wywołaną przez szczepienie M. bovis BCGphipps (BCGph) i postać farmaceutyczną ludzkiego IFN- 2b [51]. W ostatnich badaniach rekombinowany BCG, w którym zachodzi ekspresja ludzkiego IFN{3}}b, został zastosowany do skutecznego leczenia raka pęcherza moczowego [51–55]. Zgodnie z tymi danymi, naszym celem w tym badaniu była analiza ochrony indukowanej przez stymulację BCGph i dawkę przypominającą hIFN{6}}b w mysim modelu trądu. Podsumowując, nasze wyniki wskazują na potencjał podskórnej dawki pierwotnej BCGph i domięśniowego wzmocnienia hIFN- 2b w celu wywołania ochronnej odporności przeciwko trądowi u ludzi.

2. Materiał i metody

2.1. Zwierząt

Wolne od specyficznych patogenów myszy Balb/c hodowano i trzymano w obiektach dla zwierząt Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politécnico Nacional w Mexico City.

Wszystkie doświadczenia na zwierzętach zostały przeprowadzone po zatwierdzeniu (07 marca 2014) przez Institutional Animal Care and Management Committee (CIE-ENCB ZOO 016/2014).

2.2. Mikroorganizmy

Szczep BCG Phipps (ATCC® 35744™) (BCGph) jest wariantem szczepu BCG, który utracił region RD1 kodujący ESAT-6 i CFP10, z najmniejszą liczbą epitopów limfocytów T , 316, w porównaniu z BCG Tokio, 359 i BCG Pasteur, 331, (Zhang i in., 20}13) [51] i zostało dostarczone przez dr Hernández-Pando (INCMNSZ, Mexico City, MX). Zawiesiny szczepionek przechowywano następnie w temperaturze –8{38}} ◦C aż do użycia. Nienadający się do hodowli szczep Mycobacterium lepraemurium (MLM) został wyizolowany ze śledziony myszy z czteromiesięczną infekcją za pomocą procedury opisanej przez Prabhakaran i wsp., 1976 [56], a następnie oczyszczony przy użyciu procedury osobistej izolacji opisanej przez Drapera P. , 1980 [57]. Pokrótce, 4 g tkanki śledziony zawieszono w 20 ml 0,2 M sacharozy i zmielono w szklanym homogenizatorze typu Potter-Elvehjem. Otrzymaną zawiesinę wirowano przez 20 minut przy 150 x g w celu usunięcia resztek komórek (Sorvall RV5B, rotor HB4) (Sorvall Instruments, Wilmington, DE, USA). Następnie 9 ml supernatantu nałożono na 12 ml 0,3 M sacharozy i probówki wirowano przy 3500 x g przez 10 minut w temperaturze 4–10°C (Sorvall RC5B). Otrzymany osad bogaty w pałeczki ponownie zawieszono w 20 ml 0,2 M sacharozy i porcje po 9 ml nałożono na 12 ml 1,5 M KCl.

Następnie probówkę wirowano w 4°C przez 10 min przy 3500×g. Bakterie zebrano, przemyto trzykrotnie solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS) (0,01 M Na/K fosforan, 0,15 M NaCl, pH 7,4) i ponownie zawieszono w 40 ml roztworu zawierającego mieszaninę Percoll (3 części) i 0,1 procent Tween 80 (7 części). Zawiesinę odwirowano przy 23, 000 x g. Osad bakterii zebrano i przemyto pięć razy PBS aż do wyeliminowania Percoll. Czystość preparatu bakteryjnego potwierdzono metodą barwienia metodą Ziehla-Neelsena. Oczyszczoną zawiesinę pałeczek przygotowano w syntetycznej pożywce OADC 7H9 Middlebrook Broth (DIFCO, Detroit, MI, USA) (pożywka 7H{22}}OADC) i oznaczono ilościowo za pomocą nefelometrycznej krzywej odniesienia przygotowanej ze znanymi ilościami bakterii. Zawiesinę bakteryjną podzielono na porcje i zamrożono w temperaturze -20°C, aż była gotowa do użycia.

2.3. Szczepienia

Grupy ośmiotygodniowych myszy Balb/c (n=6) immunizowano podskórnie 8 x 103 jednostek tworzących kolonie (CFU) BCGphipps w 200 µl sterylnego PBS. Miesiąc później każdej grupie myszy podano domięśniowo dawkę przypominającą w ciągu trzech kolejnych dni (30, 31 i 32 dni po szczepieniu) 100 µl PBS lub 100, 200 lub 300 jednostek międzynarodowych (IU) hIFN{{14} }b (Urifron, Probiomed, Azcapotzalco, Meksyk, Meksyk).

2.4. Wyzwanie M. lepraemurium

Do eksperymentów z prowokacją myszy zaszczepiono śródskórnie 2 x 106 żywych MLM w 20 µl PBS. Następnie myszy trzymano w standardowych warunkach i dostarczano im oczyszczoną wodę i karmę dla gryzoni Purina (Cuautitlan Izcalli, Meksyk) ad libitum. Zakażone myszy monitorowano przez osiem tygodni, punkty czasowe, w których zmiany były widoczne na skórze zakażonych zwierząt. Postęp choroby był zmienny u myszy i skorelowany z terapiami eksperymentalnymi (PBS, BCGph lub hIFN- 2b).

2.5. Testy immunoenzymatyczne (ELISA)

Przeciwciała w surowicach myszy zakażonych MLM mierzono za pomocą pośrednich testów immunoenzymatycznych (ELISA). W skrócie, płytki 96-dołkowe (Nunc, Rochester, NY, USA) opłaszczano przez noc w temperaturze 4°C 1,0 µg peptydoglikolipidów rozpuszczonych w etanolu [38]. Po odparowaniu etanolu w temperaturze pokojowej [37] niespecyficzne wiązanie blokowano 3% odtłuszczonym mlekiem w PBS przez 2 do 3 godzin. Po odrzuceniu roztworu blokującego do studzienek dodano 0,1 ml surowicy rozcieńczonej (1:100) w 1% odtłuszczonym mleku w PBS i inkubowano przez noc w temperaturze 4°C.

Następnie płytki obficie przemyto PBS i związane przeciwciała wykryto za pomocą {{0}},1 ml anty-mysiej IgG (1:4000, BD 550487, BD Pharmingen, San Diego, Kalifornia, USA), IgG{6}}HRP (1:2500, ab 97240, Abcam, Cambridge, MA, USA), IgG2a-HRP (1:2500, ab97245, Abcam), IgG2b-HRP (1: 2500, ab97250, Abcam) lub IgG{20}}HRP (1:2500, ab97260, Abcam) lub sprzężone z biotyną szczurze przeciwciało monoklonalne anty-mysie IgA (1:1000, BD 550487, BD Pharmingen), a następnie przeciwciało anty-mysie Ig skoniugowane z peroksydazą chrzanową (HRP) (1:1000, BD 550487, BD Pharmingen) lub awidyna-HRP (ab 59653, abcam) Substrat chromogenny, tetrametylobenzydyna w 0,05 M buforze cytrynianowo-fosforanowym (pH 5.2), z dodatkiem 0,01% nadtlenku wodoru (H2O2), dodano do studzienek w celu wywołania koloru. Reakcję zatrzymano za pomocą 1 M H3PO4. Gęstości optyczne mierzono przy 450 nm w czytniku ELISA do mikropłytek (LabSystems Multiskan Plus, LabX, Midland, ON, Kanada). IFN-, IL{51}}, IL-17, IL-6, TNF- i IL-10 mierzono w surowicy za pomocą specjalnych zestawów ELISA do kanapek (PEPROTEC Inc., Cranbury , NJ, Stany Zjednoczone). zgodnie z instrukcjami producenta.

2.6. Pomiary NO w surowicach myszy

W skrócie, surowice traktowano etanolem (1:1) w celu wytrącenia białek i innych czynników zakłócających. Po wirowaniu przy 3{11}}00 obr./min przez 20 min, 20 µl odzyskanej surowicy umieszczono w dołkach płytki ELISA wraz ze 100 µl odczynnika Griessa i 80 µl wody destylowanej. Odczynnik Griessa jest mieszaniną objętościową roztworu A (2% sulfanilamidu w 5% kwasie fosforowym) i roztworu B (0,1% dichlorowodorku N-(1-}naftylo)etylenodiaminy. Po 30 minutach inkubacji w temp. W temperaturze 25◦ C uzyskany różowy kolor zarejestrowano czytnikiem ELISA przy długości fali 595 nm.Wartości ekstrapolowano na krzywą wzorcową azotynu sodu w zakresie 1–100 µM.

2.7. Immunofluorescencja

Pierwotne przeciwciała uzyskano z następujących firm: Kozie anty-iNOS (klon M{1}}, Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, USA), Królicze anty-nitrotyrozyna (AB 5411, EMD, Millipore, Burlington, MA, USA ), biotyna szczur Ly6C/Ly6G (klon RB6-8C5, BD Pharmingen), kozi anty-CD3 epsilon (klon M{10}}, Santa Cruz Biotechnology), szczurzy antymysi FoxP3 (klon FJK{{12} }s, eBioscience, San Diego, Kalifornia, USA), kozi antygen jądrowy przeciw proliferacji komórek (klon C-20, Santa Cruz Biotechnology), FITC-aglutynina orzechowa (L7381- 1MG, SIGMA, St Louis, MO, USA) i APC-szczur anty-mysi CD45R (klon RA3-6B2, BD Pharmingen).

Pierwotne przeciwciała ujawniono za pomocą następujących przeciwciał drugorzędowych: Alexa Fluor 568 ośle IgG przeciw kozim (A11057, Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA), Alexa Fluor 488 ośle IgG przeciw królikowi (711-546, Jackson ImmunoResearch Laboratories , West Grove, PA, USA) i streptawidyna Alexa Fluor 680 (S32358, Thermo Fisher Scientific).

Skrawki parafinowane o grubości 5 µm utrwalone w formalinie inkubowano w 6 0 ◦C przez noc w celu odparafinowania. Skrawki tkanek szybko przeniesiono do ksylenów (247642-2,5 l, SIGMA) i uwodniono przez kolejne zanurzenie szkiełek w alkoholu absolutnym, 96% alkoholu, 70% alkoholu i wodzie. Szkiełka zanurzono w roztworze do odzyskiwania antygenu, gotowano przez 30 minut i schładzano przez 10 minut w temperaturze pokojowej (RT). Szkiełka przepłukano kilka razy w wodzie i przeniesiono do PBS. Wiązanie niespecyficzne blokowano 5% normalną surowicą oślego w PBS zawierającym 0,1% Tween 20 i 0,1% Triton-X{17}}, przez 30 min w temperaturze pokojowej w wilgotnej komorze. Pierwotne przeciwciała dodano do szkiełek i inkubowano przez noc w wilgotnej komorze w RT. Szkiełka delikatnie przemyto w PBS i znakowane fluorescencyjnie przeciwciała drugorzędowe inkubowano przez 2 godziny w RT lub przez noc w wilgotnej komorze.

Na koniec szkiełka płukano przez 1 godzinę w PBS i mocowano za pomocą przeciwblaknięcia Vectashield z DAPI (H-1200, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Zdjęcia wykonano mikroskopem Zeiss Axioplan. Wszystkie centra rozmnażania (GC) w skrawku węzłów chłonnych mierzono za pomocą zautomatyzowanego narzędzia mikroskopu Carl Zeiss, a średni rozmiar GC obliczano za pomocą oprogramowania Prism. CD3 plus FoxP3 plus Treg zliczono w 5 losowych 200 x polach na tkankę, aby obliczyć średnią liczbę komórek dodatnich na pole.

2.8. Analiza statystyczna

Statystycznie istotne różnice między grupami obliczono za pomocą jednoczynnikowej analizy ANOVA, wielokrotnych porównań Newmana-Keulsa, dwustronnego testu t-Studenta dla par i par, a wartości P <{3}}, 05 uznano za statystycznie istotne. Różnice statystyczne obliczono za pomocą programu Graph Pad Prism.

3. Wyniki

3.1. BCGphipps (BCGph)-Priming, a następnie kolejne domięśniowe podanie przypominające hIFN- 2b chroni myszy Balb/c przed śródskórną prowokacją M. lepraemurium.

Wcześniej opracowaliśmy protokół prim-boost oparty na kolejnych domięśniowych dawkach przypominających IFN po szczepieniu myszy BCG [42] z obiecującymi wynikami ochrony. W ostatnich badaniach wykorzystano rekombinant BCG, który wykazuje ekspresję ludzkiego IFN- 2b do leczenia raka pęcherza moczowego [51,53]. Dlatego w niniejszym badaniu naszym celem była analiza ochrony indukowanej przez priming BCGph, a następnie wzmocnienie hIFN - 2 b w mysim modelu trądu, zgodnie ze schematem przedstawionym na rycinie 1.

Rycina 1. Protokół szczepienia przypominającego do oceny ochrony myszy przed śródskórną prowokacją M. lepraemurium. Grupy myszy Balb/c (n=6) szczepiono podskórnie niską dawką BCGph (8 x 103 CFU). Myszom z każdej grupy podano domięśniowo dawkę przypominającą w kolejnych dniach (30, 31 i 32 dni po szczepieniu) PBS lub hIFN{8}}b. Myszy prowokowano 2 x 106 żywych MLM osiem tygodni po ostatniej dawce przypominającej. Następnie myszy uśmiercono i zebrano biopróbki osiem tygodni po prowokacji. Rozwój zmian skórnych monitorowano i mierzono, jak opisano w Materiał i metody.

Pokrótce, myszy poddano śródskórnej prowokacji MLM, osiem tygodni po trzecim szczepieniu przypominającym z 300 j.m. hIFN- 2b. Postęp choroby monitorowano przez następne osiem tygodni. Pod koniec tego okresu zebraliśmy pachwinowe węzły chłonne w celu wykrycia GC i wyliczenia Treg i innych populacji komórek za pomocą immunofluorescencji. Wykorzystaliśmy również immunofluorescencję do wizualizacji produkcji iNOS przez aktywowane makrofagi, lokalizację reszt nitrotyrozyny (NT) i akumulację komórek szpiku Gr -1 plus w skórze naszych eksperymentalnych myszy. Dodatkowo zebraliśmy surowicę, aby zmierzyć cytokiny i przeciwciała przeciwko glikolipidom MLM metodą ELISA (ryc. 1).

Po pierwsze, aby ocenić efekt ochronny primingu BCGph i wzmocnienia hIFN{0}}b przeciwko śródskórnej prowokacji myszy z MLM, zmierzyliśmy zmiany skórne i uwidoczniliśmy kolonizację skóry prątkami przez barwienie Ziehla-Neelsena (Rysunek 2A–E). Skóra myszy nieprimowanych, które otrzymały tylko nośnik (PBS), bez prowokacji MLM, nie wykazywała prątków (ryc. 2A). Myszy zaszczepione nośnikiem i poddane prowokacji MLM wykazywały znaczne ilości prątków MLM w skórze (Figura 2B), podczas gdy primowanie myszy BCGph doprowadziło do zmniejszenia wzrostu prątków (Figura 2C). Kolejne podawanie hIFN{5}}b również zmniejszało wzrost prątków w skórze w porównaniu z myszami prowokowanymi MLM (ryc. 2D). Myszy, którym podano szczepionkę BCGph i szczepionkę przypominającą hIFN- 2b miały najniższy wzrost prątków (ryc. 2E). Zgodnie z tymi danymi, u zdrowych myszy poddanych prowokacji MLM, które otrzymały tylko nośnik (PBS), rozwinęły się najbardziej rozległe zmiany skórne (35 ± 9,9 mm2), podczas gdy myszy, którym podano szczepionkę BCGph, miały zmiany skórne podobnej wielkości do tych, które rozwinęły się w myszy zaszczepione nośnikiem i prowokowane MLM (13,5 ± 4,24 mm2) (Figura 2F). Myszy, którym wstrzyknięto podskórnie hIFN- 2b, wykazywały mniejsze zmiany skórne (20 ± 1,77 µm2). Warto zauważyć, że myszy, którym podano szczepionkę BCGph i podano dawkę przypominającą hIFN{25}}b, wykazywały znaczące zmniejszenie wielkości zmian skórnych (5 ± 7,07 mm2) (p < 0,05) (ryc. 2F).

\

Rycina 2. Zmiany skórne i wzrost prątków u Balb/c poddanych prowokacji M. lepraemurium. Ochronę myszy oceniano przez rozwój zmian skórnych i wizualizację wzrostu prątków w zmianach skórnych osiem tygodni po prowokacji MLM. Zmiany skórne barwiono metodą Ziehl-Neelsena. Reprezentatywne zdjęcia w powiększeniu 400× (A) myszy nieprimowanych i myszy nieprowokowanych; (B) myszy zaszczepione PBS i poddane prowokacji MLM; (C) myszy szczepione BCGph i poddane prowokacji MLM; (D) myszy zaszczepione domięśniowo hIFN- 2b i poddane prowokacji MLM; (E) myszy zaszczepione BCGph, wzmocnione hIFN- 2b i poddane prowokacji MLM; (F) Skuteczna ochrona jest równoważna albo z brakiem zmian skórnych, albo ze znacznym zmniejszeniem rozmiaru zmian skórnych, wyrażonym w mm2, n=6 myszy/grupę. * p<0,05; ** p < 0,005; *** p < 0,0005 uznano za istotne statystycznie.

3.2. Minimalna patologia skóry u myszy poddanych szczepieniu BCGphipps i wzmocnionych hIFNa 2b koreluje ze zmniejszoną akumulacją nitrotyrozyny i upośledzoną infiltracją neutrofili

Tlenek azotu ma kluczowe znaczenie dla zabijania patogenów wewnątrzkomórkowych. Jednak nadmierna produkcja tlenku azotu, rodników ponadtlenkowych (O,- i nadtlenku wodoru prowadzi do wytwarzania toksycznego i niestabilnego nadtlenoazotynu, cząsteczki, która reaguje z resztami tyrozyny na białkach, tworząc stabilny NT 56-601. Chociaż nadtlenoazotyn zabija prątki, uszkadza także komórki odpornościowe [57-59].

Dlatego zdecydowaliśmy się szukać komórek wytwarzających iNOS i neutrofili w skórze naszych eksperymentalnych myszy za pomocą immunofluorescencji. Widzieliśmy sygnały tła dla iNOS i NT oraz bardzo niewiele komórek Gr -1 plus w skórze myszy otrzymujących tylko PBS (ryc. 3A). Zwiększone obciążenie mykobakteriami i powiększone zmiany martwicze w skórze korelowały z nagromadzeniem pozostałości NT w martwiczym obszarze skóry (58,59 myszy nieszczepionych (ryc. i złagodzenie patologii skóry, naciek NT i neutrofilów był zmniejszony u myszy otrzymujących kolejne szczepienia hIFN- 2b (ryc. 3D) lub myszy BCGph szczepionych pierwotnie i wzmacnianych hIFN 2b (ryc. 3E). }} plus neutrofile i zmniejszone obszary NT zbiegły się z najmniejszym obszarem zapalnym w skrawkach histologicznych skóry myszy szczepionych pierwotnie BCGph i wzmocnionych hIFN- 2b (ryc. 3F).

Rycina 3. Ochrona jest związana ze zmniejszoną akumulacją nitrotyrozyny, upośledzoną akumulacją neutrofili i łagodzeniem stanu zapalnego skóry. Skrawki zmian skórnych barwiono kombinacją przeciwciał swoistych dla iNOs (czerwony), NT (zielony) i Gr-1 (biały). Reprezentatywne 200× zdjęcia z (A) Skóry myszy nienaprawionych i nieprowokowanych, (B) myszy zaszczepionych PBS i prowokowanych MLM, (C) myszy szczepionych BCGphipps i prowokowanych MLM, ( D) myszy zaszczepione domięśniowo hIFN- 2b i poddane prowokacji MLM oraz (E) myszy szczepione pierwotnie BCGph, wzmocnione hIFN- 2b i poddane prowokacji MLM; (F, G) ocena ilościowa obszaru zapalnego za pomocą zautomatyzowanych narzędzi mikroskopu Zeiss Axioplan, zmiany skórne zebrano osiem tygodni po prowokacji za pomocą MLM, grafika przedstawia średni obszar zajmowany przez komórki zapalne w zmianach skórnych spowodowanych trądem, wyrażony w µm2. Pasek skali=100 µm. n=6 myszy/grupa * p < 0,05; ** p < 0,005; *** p < 0,0005 uznano za istotne statystycznie.

Wytwarzanie NO nie było statystycznie istotne w porównaniu z innymi grupami doświadczalnymi, jednak w grupie myszy szczepionych BCGph i wzmocnionych hIFN- 2b stężenie NO było wyższe (68,28 µM/L ± 0 0,889) niż w grupach PBS i MLM (62,79 µM/L ± 1,04), BCGph (63,37 µM/L ± 0,225), hIFN- 2b (62,57 µM/L ± 1,028 ) (Rysunek 3G).

3.3. Cytokiny przeciwzapalne są zwiększone w surowicy myszy zaszczepionych BCGphipps i wzmocnionych hIFN- 2b

Cytokiny pro- i przeciwzapalne mierzono w surowicy myszy Balb/c po prowokacji MLM. Zgodnie ze stanem immunosupresyjnym wywołanym przez MLM, stężenia cytokin prozapalnych były niskie w surowicy myszy Balb/c zaszczepionych PBS i poddanych prowokacji MLM (IFN-, 625 ± 442 pg/ml; TNF-, 697 ± 436 pg/ml). ml; IL-6, 68 ± 48 pg/ml; IL -17, 95 ± 67 pg/ml). W przeciwieństwie do nich, mieli umiarkowane poziomy cytokin przeciwzapalnych w surowicy (IL-10, 1763 ± 124 pg/ml i IL-4, 1250 ± 173 pg/ml). Chociaż myszy były chronione przez szczepienie pierwotne BCGph i kolejne szczepienia przypominające hIFN{21}}b, ogólnoustrojowe ilości cytokin prozapalnych nie różniły się statystycznie od tych u myszy zaszczepionych PBS i poddanych prowokacji MLM. Nieoczekiwanie stężenie IL-4 (1875 ± 352 pg/ml, p < 0,05) i IL -10 (4250 ± 271 pg/ml) było istotnie zwiększone w surowicy tych myszy w porównaniu z myszami zaszczepionymi PBS i poddanymi prowokacji MLM (Tabela 1). Wyniki te sugerują, że nasz protokół szczepień może aktywować szlaki przeciwzapalne, aby zapobiec uszkodzeniu tkanek.

3.4. Upośledzona akumulacja Treg w drenujących węzłach chłonnych (DLN) myszy otrzymujących szczepionkę BCGphipps lub wzmocnioną hIFN- 2b

Biorąc pod uwagę, że Treg produkują IL-10 [61,62], zdecydowaliśmy się na ilościowe oznaczenie CD3 plus FOXP3 plus Treg w drenujących węzłach chłonnych (DLN), zlokalizowanych w pobliżu miejsca szczepienia. U niezainfekowanych myszy (PBS) Treg były nadal obecne (113 ± 9, 8 CD3 plus FOXP3 plus pole Treg / 200 ×) (ryc. 4A). Zgodnie z oczekiwaniami, Treg były znacząco zwiększone u myszy poddanych prowokacji MLM, które nie otrzymały szczepionki (BCGph) lub hIFN{12}}b (214 ± 30 CD3 plus FOXP3 plus Tregs/200 × pole) (Rysunek 4B). Odpowiednio, niższe poziomy Treg obserwowano u myszy szczepionych BCGph (160 ± 26 CD3 plus FOXP3 plus Tregs/200 × pole) (Rysunek 4C) i myszy, które otrzymały hIFN- 2 b (162 ± 33 CD3 plus FOXP3 plus pole Tregs/200 ×) (ryc. 4D); myszy zaszczepione BCGph i wzmocnione hIFN- 2b (127 ± 16 CD3 plus FOXP3 plus Tregs/200 × pole) (Rysunek 4E) miały podobną gęstość Treg niż nieszczepione myszy bez hIFN- 2b wzmacnianie. Jednak po ślepym zliczeniu CD3 plus FOXP3 plus Treg w DLN naszych eksperymentalnych myszy stwierdziliśmy, że Treg były znacznie zmniejszone w DLN myszy po szczepieniu BCGph (p=0, 0013), hIFN - 2 szczepienie b (p=0,0074) lub połączone szczepienie pierwotne BCGph i przypominanie hIFN{47}}b (p=0,0013) w porównaniu z myszami prowokowanymi MLM (Figura 4E).

Rycina 4. Upośledzona akumulacja limfocytów T regulatorowych (Treg) w drenujących węzłach chłonnych (DLN) myszy szczepionych szczepionką BCGphipps i szczepionych hIFN- 2b. Myszy uśmiercono i zebrano DLN osiem tygodni po prowokacji MLM. DLN barwiono przeciwciałami specyficznymi dla CD3 (czerwony) i FOXP3 (zielone jądra) w celu wykrycia CD3 plus FOXP3 plus Treg za pomocą immunofluorescencji. ( A ) Podstawowa akumulacja Treg w DLN nieszczepionych myszy; (B) Treg w DLN były zwiększone po prowokacji MLM i porównywalnie zmniejszone w (C) zaszczepionym BCGph, (D) zaszczepionym hIFN- 2b i (E) zaszczepionym BCGph-hIFN- 2b wzmocnione myszy; (F) analiza morfometryczna wykazuje znaczące zmniejszenie liczby Treg w DLN myszy otrzymujących szczepionkę BCGph/hIFN- 2b otrzymujących dawkę przypominającą. Pasek skali=100 µm, n=6 myszy/grupa * p < 0.05; ** p < 0, 005; *** p < 0,0005 uznano za statystycznie istotne.

3.5. BCGphipps Priming i hIFN{2}}b Boosting wpływają na odpowiedzi GC w mysich DLN

Istnieją specjalne Treg zlokalizowane w GC, znane jako T pęcherzykowe komórki regulatorowe (TFR, modulują one zarówno odpowiedzi GC, jak i zapobiegają wytwarzaniu autoreaktywnych komórek plazmatycznych (28,33). Zmniejszone Treg w DLN sugerują, że odpowiedzi GC mogą być wyzwalane u myszy zaszczepione BCGph i wzmocnione hlFN-a 2b. Zgodnie z brakiem stymulacji antygenowej, nie wykryliśmy GC w DLN niezainfekowanych myszy Ryc. 5A). Małe GC były obecne w DLN myszy nieszczepionych, prowokowanych MLMLrysunek 5B).

Rycina 5. Szczepionka BCGphipps i dawka przypominająca hFN-a 2b wpływają na odpowiedzi GC w DLN po prowokacji MLM. Myszy uśmiercono osiem tygodni po prowokacji ML M. Drenażowe węzły chłonne (DLN) wybarwiono specyficznym antygenem jądrowym proliferacji komórek (PCNA, czerwone jądra), aglutyniną orzeszków ziemnych (PNA, zielony) i CD45R (B22 {{13 }}, biały) w celu identyfikacji GC zawierających zwarte skupiska komórek B PCNA*PNA plus * B220low GC. Komórki GC B w DL N (A) myszy nieszczepionych i nie prowokowanych; (B) myszy zaszczepionych PBS i poddanych prowokacji MLM; (C) myszy szczepione BCGph i prowokowane MLM; (D) myszy, którym podano domięśniowo dawkę przypominającą hlFN-a 2b i prowokowano MLM; (E) myszy zaszczepione BCGph wzmocnione hlFN-a 2b i poddane prowokacji ML M; ( F ) GC mierzono w poszczególnych DL N myszy doświadczalnych, obliczając średni rozmiar GC. Pasek skali=100 um.=6 myszy/grupę. „ p < 0 0,05, * p < 0,005; *** y < 0,0005 uznano za statystycznie istotne.

Rycina 5. Szczepienie pierwotne BCGphipps i szczepienie przypominające hlFN-a 2b wpływają na odpowiedzi GC w DLN po prowokacji ML M. Myszy uśmiercono osiem tygodni po prowokacji ML M. Drenażowe węzły chłonne (DLN) barwiono przeciwciałami swoistymi dla antygenu jądrowego proliferujących komórek (PCNA, czerwone jądra), aglutyniny orzeszków ziemnych (PNA, zielone) i CD45R (B22 {{ 13}}, biały) w celu identyfikacji GC zawierających zwarte skupiska komórek B PCNAPNA plus plus B22 0 low GC. Komórki GC B w DL N (A) myszy nieszczepionych i nie prowokowanych; (B) myszy zaszczepionych PBS i poddanych prowokacji MLM; (C) myszy szczepione BCGph i poddane prowokacji MLM; (D) myszy, którym podano domięśniowo szczep przypominający hlFN-a 2b i prowokowano MLM; (E) myszy szczepione pierwotnie BCGph wzmocnionym hlFN-a 2b i prowokowano MLM; ( F ) GC mierzono w poszczególnych DLN myszy doświadczalnych, aby obliczyć średni rozmiar GC. Pasek skali=100 um. 1=6 myszy/grupę. „ y < 0 0,05. * y < 0,005, *** y < 0,0005 uznano za statystycznie istotne.

Co ciekawe, myszy szczepione BCGph miały znacznie większe GC niż myszy prowokowane MLM (Figura 5C). Myszy immunizowane hlFN-a 2b (figura 5D) miały GC o wielkości porównywalnej z tymi u myszy poddanych prowokacji MLM. Myszy szczepione pierwotnie BCGph i szczepione przypominająco hlFN-a 2b miały GC o pośredniej wielkości (Figura 5E). Aby uzyskać bardziej ilościową ocenę odpowiedzi GC w DLN, obliczyliśmy średni rozmiar GC w poszczególnych sekcjach DLN. Zgodnie z naszymi obserwacjami stwierdziliśmy znaczące zmniejszenie średniej wielkości GC w DLN po wstrzyknięciu hlFN-a 2b oraz w protokole szczepienia pierwotnego BCGph/wzmocnienia hIFN-a 2b (ryc. 5E).

3.6. Porównywalne poziomy przeciwciał swoistych dla glikolipidów u myszy poddanych prowokacji M. lepraemurium po szczepieniu pierwotnym BCGphipps i wzmocnieniu hIFN{3}}b

Zgodnie z różnicami zaobserwowanymi w tworzeniu i organizacji GC, zmierzyliśmy stężenie przeciwciał specyficznych dla glikolipidów wyekstrahowanych z MLM. Ogólnie, nasze wyniki pokazują, że ogólnoustrojowe ilości różnych klas i izotypów przeciwciał swoistych dla glikolipidów nie zostały zmienione przez szczepienie, kolejne podawanie hIFN- 2b ani protokół szczepienia wstępnego BCGph/hIFN- 2b ( Tabela 2). Myszy otrzymujące dawkę przypominającą tylko hIFN{4}}b wywoływały wyższą ilość przeciwciał IgG i IgG1 w surowicy. Jednak poziomy przeciwciał IgG i Ig G1 nie były statystycznie istotne w porównaniu z innymi grupami doświadczalnymi (Tabela 2).

4. Dyskusja

W niniejszym badaniu wykazaliśmy, że nasz protokół szczepienia podstawowego oparty na podskórnym szczepieniu BCGphipps i kolejnym domięśniowym przypominaniu wzrastającymi ilościami hIFN- 2b chronił myszy przed śródskórną prowokacją MLM.

Protokół pierwotnego wzmocnienia zapobiegał wzrostowi MLM w skórze i łagodził miejscową patologię poprzez zmniejszanie produkcji NT i zapalenia neutrofilowego (ryc. 3E). Spowodowało to również indukcję cytokin przeciwzapalnych (IL-4 i IL-10), które prawdopodobnie przeciwdziałały nadmiernemu zapaleniu skóry i objawiały się ogólnoustrojowo. Nieoczekiwanie, chociaż schemat terapeutyczny zmniejszył CD3 plus FOXP3 plus Treg w DLN (ryc. 4E), odpowiedzi GC nie uległy drastycznemu wzmocnieniu (ryc. 5E), a stężenia w surowicy przeciwciał specyficznych dla glikolipidów były podobne we wszystkich myszy szczepione tylko hIFN- 2b (Tabela 2). Niemniej jednak nasze dane eksperymentalne potwierdzają potencjalne zastosowanie szczepienia pierwotnego BCG z adiuwantem domięśniowego wzmocnienia IFN 2b, jako obiecującej immunoterapii, która zasługuje na eksplorację w leczeniu trądu u ludzi.

Objawy kliniczne trądu korelują ze spektrum immunologicznym wykrywanym u pacjentów i wahają się od LL do TT [2,4,14,18]. Ogólnie odporność gospodarza na M. leprae charakteryzuje się głównie spolaryzowaną odpowiedzią T pomocniczą (Th1/Th2). Z jednej strony spektrum, chociaż LL charakteryzuje się energią, nadal istnieje pewna reaktywność na antygeny prątków i wytwarzanie IL-4 i IL-10. Natomiast w TT dominująca odpowiedź Th1 prowadzi do aktywacji makrofagów za pośrednictwem IFN, co przyspiesza eliminację prątków. Myszy zakażone MLM zazwyczaj rozwijają trąd podobny do lepromatycznego bez wyraźnej dominacji odporności humoralnej lub komórkowej [18-20].

Ochronne przeciwciała wywołane infekcją lub szczepieniem [63] są wytwarzane w procesie zwanym dojrzewaniem powinowactwa, który zachodzi w ośrodkach rozmnażania utworzonych w drugorzędowych (śledziona, węzły chłonne) lub trzeciorzędowych narządach limfatycznych (TLO) generowanych w tkankach obwodowych [23,25]. . To właśnie w GC produkcja komórek B pamięci i długowiecznych komórek plazmatycznych wydzielających przeciwciała przyczynia się do wytworzenia długoterminowej odporności na przyszłe spotkania z patogenami. Skuteczna indukcja odpowiedzi GC zależy od współpracy wielu typów komórek, w tym limfocytów B, komórek pomocniczych pęcherzyków T (TFH), makrofagów ciałka cieniowatego i komórek dendrytycznych pęcherzyków (FDC) [64]. Rzeczywiście, szczepionki wyzwalają pomyślne odpowiedzi GC i ektopowe centra rozmnażania w węzłach chłonnych [24,25,31,49].

Ponadto komórki pomocnicze pęcherzyka T i komórki regulatorowe pęcherzyka T [27–30] utrzymują delikatną równowagę między indukcją skutecznych odpowiedzi przeciwciał a autoimmunizacją. Chociaż w naszym badaniu nie wykluczyliśmy indukcji autoimmunizacji, nadal koncentrowaliśmy się na skutkach protokołu prim-boost z BCGph i hIFN{3}}b na Treg z DLN. Chronione myszy miały znacznie mniej CD3 plus FOXP3 plus Treg w swoich DLN. Konieczne są jednak dalsze badania w celu ustalenia, czy niektóre z tych Treg są komórkami pomocniczymi pęcherzyków T, które regulują reakcje GC [27–30]. Wyniki te mogą sugerować, że skuteczna indukcja odporności ochronnej w połączeniu z niewielkim spadkiem Treg w DLN jest wymagana do kontrolowania wzrostu prątków i zapobiegania patologicznemu zapaleniu skóry.

Wcześniejsze badania donosiły o ogólnoustrojowym i śluzówkowym wpływie IFN typu I na komórki pomocnicze pęcherzyka T i komórki regulatorowe pęcherzyka T [19,32,64]. Rzeczywiście, IFN typu I pośrednio zwiększa TFH w węzłach chłonnych poprzez stymulację pobudzenia limfocytów T przez komórki dendrytyczne [34]. IFN typu I promuje również zmianę izotypu w GC. Ponadto niedawne badanie wykazało, że IFN typu I wyzwala stymulowane przez CXCL{4}} tworzenie TLO w płucach [49].

Zatem indukcja CXCL13 przez IFN typu I może zwiększyć rekrutację naiwnych komórek B do wtórnych narządów limfatycznych i zwiększyć produkcję komórek plazmatycznych wydzielających przeciwciała, globalnie poprawiając długotrwałą pamięć i odpowiedzi immunologiczne komórek plazmatycznych [23-25,64 ], szczególnie w obecności adiuwantów, takich jak poli IC [65]. Ponadto podawanie IFN typu I indukuje powstawanie GC w płucach pacjentów dotkniętych chorobami autoimmunologicznymi [31] lub gruźlicą [66,67]. Zatem blokada CXCL13 może pomóc w leczeniu tych przewlekłych zaburzeń zapalnych [49]. W tym kontekście zaobserwowaliśmy bardzo łagodny spadek wielkości GC w DLN chronionych myszy otrzymujących szczepionkę podstawową (ryc. 5E). Jednak potrzebne są dodatkowe badania, aby lepiej zdefiniować korelację między tworzeniem GC a ochroną indukowaną u tych myszy, które otrzymały szczepionkę podstawową. W eksperymentalnych ustawieniach szczepienia pierwotnego BCGph i domięśniowego wzmocnienia hIFN- 2b (51), myszy w naszym badaniu doświadczyły lepszej ochrony po podaniu BCGph-hIFN- 2}b (80 procent) niż po samym BCGph (60 procent), co określono na podstawie braku lub niewielkiego rozmiaru zmian skórnych (Figura 2) i porównywalnej ilości przeciwciał IgG i IgG1 swoistych dla glikolipidów MLM (Tabela 2). Nasze wyniki kontrastują ze zwiększoną ilością IgG u myszy chronionych przez szczepienie innym szczepem BCG (Pasteur) [41]. Dane te sugerują, że rodzaj szczepu BCG użytego do przygotowania szczepionki może wpływać na wynik humoralnej odpowiedzi immunologicznej przeciwko MLM lub M. leprae [51].

Co więcej, kilka badań nad gruźlicą wykazało potencjalne i korzystne efekty heterologicznej strategii prim-boost w indukcji ochronnych odpowiedzi immunologicznych [68-70]. Ponadto dobrze wiadomo, że rodzaj i droga immunizacji wpływają na wielkość przeciwciał i odpowiedzi immunologicznej komórek. Co zaskakujące, chronione myszy wykazują znacznie wyższe IL-4 i IL-10 w surowicy w porównaniu z myszami traktowanymi wyłącznie PBS, BCGph lub samym hIFN{5}}b (Tabela 1). Obecnie w naszym laboratorium badamy, w jaki sposób cytokiny przeciwzapalne wpływają na odporność ochronną w trądzie. Jednak kilka badań wykazało, że skuteczna odporność komórkowa na prątki opiera się na delikatnej równowadze między ochroną a zapobieganiem patologii [71]. Ponadto istnieją dowody na indukcję obu typów cytokin w innych modelach eksperymentalnych [72–75].

Nasze zbiorcze wyniki sugerują, że powodzenie naszego protokołu prim-boost zależy od indukcji zrównoważonej odpowiedzi immunologicznej, która skutecznie eliminuje MLM w skórze i ogranicza uszkodzenia tkanek poprzez indukcję cytokin przeciwzapalnych (IL{2}} i IL10), które prawdopodobnie chronią komórki odpornościowe [76,77]. Rzeczywiście, IL-10 wytwarzana przez indukowane Treg moduluje stany zapalne na powierzchniach błony śluzowej, szczególnie te związane z nieswoistymi zapaleniami jelit [77,78]. Odkrycia te uzasadniają szczegółowe badanie kinetyczne aktywacji komórek B, tworzenia GC i regulacji, wytwarzania komórek regulatorowych pęcherzyka T i aktywacji NF-κB w naszym systemie prim-boost z BCGph i hIFN{11}}b, a następnie infekcją MLM w celu mieć bardziej mechanistyczne zrozumienie roli komórek odpornościowych i szlaków NF-κB w indukcji ochronnej odporności w skórze i węzłach chłonnych po prowokacji MLM.

5. Wnioski

Na podstawie tych danych możemy wywnioskować, że kolejne domięśniowe szczepienia przypominające hIFN- 2b wzmacniają szczepienie M. bovis BCG, chroniąc przed śródskórną prowokacją MLM i ujawniając obiecujące właściwości adiuwantowe ludzkiego IFN-a 2b w kontekście BCG szczepienia zapobiegające zakażeniom trądem na terenach endemicznych. Zgodnie z naszą najlepszą wiedzą jest to pierwsze doniesienie o skuteczności terapeutycznej BCGphipps w połączeniu z farmaceutyczną postacią hIFN{3}}b w przedklinicznym modelu choroby podobnej do trądu.

Autorskie Wkłady:

Projekt badania, GGG, OR-E., SOI-T. i JR-M.; prowadzenie badań, GGG, OR-E., SOI-T. i JR-M.; analiza danych: GGG, OR-E., SOI-T. i JR-M.; interpretacja danych, GGG, OR-E., SOI-T. i JR-M.; rękopis redakcyjny, GGG, OR-E., SOI-T. i JR-M.; korekta treści manuskryptu, GGG, OR-E., SOI-T. i JR-M.; GGG, OR-E., SOI-T. i JR-M. wziąć odpowiedzialność za integralność analizy danych. Wszyscy autorzy przeczytali i zgodzili się na opublikowaną wersję manuskryptu.

Finansowanie:

GGG i OR-E. były wspierane przez SNI, CONACYT (Meksyk, Meksyk). GGG otrzymało wsparcie od Perfil Prodep 2019–2022 i JR-M. był wspierany ze środków wewnętrznych z Department of Medicine University of Rochester Medical Center oraz RO1AI111914.

Oświadczenie Instytucjonalnej Komisji Rewizyjnej:

Wszystkie doświadczenia na zwierzętach przeprowadzono po zatwierdzeniu przez Instytucjonalną Komisję ds. Opieki nad Zwierzętami i Zarządzania (ZOO{0}}). CIE-ENCB ZOO 016/2014, 07 marca 2014 r.

Oświadczenie o świadomej zgodzie:

Nie dotyczy.

Oświadczenie o dostępności danych:

Dane będą udostępniane zgodnie z wytycznymi instytucji.

Podziękowanie:

Jesteśmy wdzięczni Ricardo Villalobosowi za pomoc w IHC i Rogelio Hernandez Pando (INCMNSZ, Mexico City), który dostarczył szczep BCGphipps.

Konflikt interesów:

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Bibliografia

1. KTO. Światowa Organizacja Zdrowia: Gruźlica — fakty globalne 2011/2102. Genewa: WHO Stop TB Dep. 2012. Dostępne online: http://www.who.int/tb/publications/2011/factsheet_tb{6}}.pdf (dostęp: 1 lutego 2021 r.).

2. Dobrze, PE Trąd: Co jest „eliminowane”? Byk. Światowy Organ Zdrowia. 2007, 85, 1–2. [Odnośnik]

3. Rambukkana, A. W jaki sposób Mycobacterium leprae atakuje obwodowy układ nerwowy? Trendy Mikrobiol. 2000, 8, 23–28. [Odnośnik]

4. Rodriguez, JIA; Triellato, GL; Meirelles, NML; Teixeira, CC; Lyon S.; Esteves, ARM Metody klasyfikacji trądu: badanie porównawcze o charakterze skierowania w Brazylii. Int. J. Zarażać. Dis. 2016, 45, 118–122. [CrossRef] [PubMed]

5. Geluk, A.; van der Ploeg, J.; Teles, OBR; Kees, L.; Franken, MC; Prins, C.; Wouter, DJ; Sarno, NE; Sampaio, PE; Otenhoff, THM Racjonalne połączenie peptydów pochodzących z różnych białek Mycobacterium leprae poprawia czułość w immunodiagnostyce zakażenia M. leprae. Clin. Vacc. immunol. 2008, 15, 522–533. [CrossRef] [PubMed]

6. Geluk, A.; Bobosha, K.; Schip, JJVDP-V.; Spencer, JS; Banu S.; Martins, MVSB; Cho, SN; Franken, KLMC; Kim, HJ; Bekele, Y.; i in. Nowe biomarkery mające znaczenie w diagnostyce trądu, mające zastosowanie w obszarach hiperendemicznych dla trądu. J. Immunol. 2012, 188, 4782–4791. [Odnośnik]

7. Geluk, A. Biomarkery na trąd: czy wolisz T (komórki)? Lepr. Obj. 2013, 84, 3–12. [CrossRef] [PubMed]

8. Alcaïs, A.; Alter, A.; Antoni G.; Orłowa, M.; Nguyen, VT; Singh, M.; Vanderborght, PR; Katoch, K.; Mira, MT; Vu, HT; i in. Stopniowa replikacja identyfikuje allel limfotoksyny o niskiej produkcji jako główny czynnik ryzyka wczesnego początku trądu. Nat. Genet. 2007, 39, 517–522. [CrossRef] [PubMed]

9. Avanzi, C.; Singh, P.; Truman, RW; Suffys, PN Epidemiologia molekularna trądu: aktualizacja. Infekować. Genet. ewolucja 2020, 86, 104581. [Odsyłacz]

10. Lastoria, JC; Abreu, MA Przegląd trądu epidemiologicznych aspektów klinicznych i etnopatogennych - część 1. Biustonosze. Dermatol. 2014, 89, 205–218. [Odnośnik]

11. Rojas-Espinosa, O. Aktualne tematy dotyczące profili odpowiedzi immunologicznej gospodarza na infekcje mykobakteryjne; Recenzja książki; Tomioka, H., wyd.; Drogowskaz badawczy: Trivandrum, Indie, 2009; s. 97–140.

12. Adams, LB; Pena, TM; Sharma, R.; Hagge, AD; Schurr, E.; Truman, RW Spostrzeżenia z modeli zwierzęcych na temat immunogenetyki trądu. Recenzja. pam. Inst. Oswaldo. Cruz. 2012, 107, 197–208. [Odnośnik]

13. Rojas-Espinosa, O.; Becerril-Villanueva, E.; Wek-Rodriguez, K.; Arce-Paredes, P.; Reyes-Maldonado, E. Porażenie tylnych kończyn u myszy zakażonych Mycobacterium lepraemurium wynika z uszkodzenia kości, a nie z zajęcia nerwów. Clin. Do potęgi. immunol. 2005, 140, 436–442. [Odnośnik]

14. Modlin, LR Wrodzona odpowiedź immunologiczna w trądzie. bież. Opinia. immunol. 2010, 22, 48–54. [Odnośnik]

15. Oliveira, RB; Ochoa, MT; Sieling, Pensylwania; Rea, TH; Rambukkana, A.; Sarno, EN; Modlin, RL Ekspresja Toll-Like Receptor 2 na ludzkich komórkach Schwanna: mechanizm uszkodzenia nerwów w trądzie. Infekować. odporność 2003, 71, 1427-1433. [Odsyłacz] 16. MacMicking, J.; Xie, QW; Nathan, C. Tlenek azotu i funkcja makrofagów. rok Wielebny Immunol. 1997, 15, 323–350. [Odnośnik]

17. Evans, T.; Maślany, L.; Stolarz, A.; Springall, DR; Polak, J.; Cohen, J. Ludzkie neutrofile leczone cytokinami zawierają indukowalną syntazę tlenku azotu, która wytwarza nitrację połkniętych bakterii. proc. Natl. Acad. nauka Stany Zjednoczone 1996, 93, 9553–9554. [CrossRef] [PubMed]

18. Fonseca, AB; Szymon, doktor medycyny; Cazzaniga, RA; de Moura, TR; de Almeida, RP; Duthie, MS; Trzcina, SG; de Jesus, AR Wpływ wrodzonych i adaptacyjnych odpowiedzi immunologicznych na zróżnicowane wyniki kliniczne trądu. Infekować. Dis. Ubóstwo 2017, 6, 5–13. [CrossRef] [PubMed]

19. Sadhu, S.; Khaitan, BK; Joshi, B.; Sengupta, U.; marynarz, AK; Mitra, DK Wzajemność między regulatorowymi komórkami T i komórkami Th17: znaczenie dla spolaryzowanej odporności w trądzie. PLoS negl. trop. Dis. 2016, 10, e0004338. [CrossRef] [PubMed]

20. Rojas-Espinosa, O.; Wek-Rodríguez, K.; Arce-Paredes, P. Wpływ egzogennej peroksydazy na ewolucję mysiego trądu. Int. J. Lepr. Inny Mykobakt. Dis. 2002, 70, 191–200.

21. Ischiropoulos, H. Biologiczne azotowanie tyrozyny: patofizjologiczna funkcja tlenku azotu i reaktywnych form tlenu. Łuk. Biochem. Biofiza. 1998, 356, 1–11. [Odnośnik]

22. Młody lipid DB Leprosy zapewnia klucz do wejścia do komórki Schwanna. Trendy Mikrobiol. 2001, 9, 52–54. [Odnośnik]

23. Bannard, O.; Cyster, JG Centra kiełkowania: zaprogramowane do dojrzewania powinowactwa i dywersyfikacji przeciwciał. bież. Opinia. immunol. 2017, 45, 21–30. [CrossRef] [PubMed] 24. Victora, DG; Nussenweig, MC Centra kiełkowania. rok Wielebny Immunol. 2012, 30, 429–457. [CrossRef] [PubMed]

25. Cirelli, KM; Crotty, SH Wzmocnienie centrum zarodkowego dzięki rozszerzonej dostępności antygenu. bież. Opinia. immunol. 2017, 47, 64–69. [Odnośnik]

26. Good-Jacobson, KL; Szumilas, CG; Chen, L.; Sharpe, Ah; Tomayko, MM; Shlomchik, MJ PD-1 reguluje przeżywalność komórek B w centrum rozmnażania oraz tworzenie i powinowactwo długowiecznych komórek plazmatycznych. Nat. immunol. 2010, 11, 535–542. [Odnośnik]

27. Wollenberg, I.; Agua-Doce, A.; Hernández, A.; Almeida, C.; Oliveira, VG; Faro, J.; Graca, L. Regulacja reakcji ośrodka rozrodczego przez Foxp3 plus komórki T regulujące pęcherzyki. J. Immunol. 2011, 187, 4553–4560. [CrossRef] [PubMed]

28. Litterman, MA; Pierson, W.; Lee, SK; Kallies, A.; Kawamoto, S.; Rayner, TF; Srivastava, M.; Divekar, DP; Beaton, L.; Hogan, JJ; i in. FOXP3 plus pęcherzykowe limfocyty T regulatorowe kontrolują odpowiedź centrum rozmnażania. Nat. Med. 2011, 17, 975–982. [Odnośnik]

29. Miles, B.; Connick, E. Kontrola ośrodka rozmnażania przez komórki T regulujące pęcherzyki podczas infekcji. Przód. immunol. 2018, 9, 2704–3710. [Odnośnik]

30. Fu, W.; Liu, X.; Lin, X.; Feng, H.; Słońce, L.; Li, S.; Chen, H.; Tang, H.; Lu, L.; Jin, W.; i in. Niedobór komórek regulatorowych pęcherzyków T sprzyja autoimmunizacji. J. Exp. Med. 2018, 215, 815–825. [Odnośnik]

31. Pitzalis, C.; Jones, GW; Bombardieri, M.; Jones, SA Ektopowe struktury podobne do limfoidalnych w infekcji, raku i autoimmunizacji. Nat. Wielebny Immunol. 2014, 14, 447–462. [Odnośnik]

32. Aloulou, M.; Carr, EJ; Gador, M.; Bignon, A.; Liblau, RS; Fazilleau, N.; Linterman, MA Follicular regulatorowe limfocyty T mogą być specyficzne dla immunizującego antygenu i pochodzić z naiwnych komórek T. Nat. Komuna. 2016, 7, 10579–10589. [Odnośnik]

33. Vinuesa, CG; Sanz, I.; Cook, MC Dysregulacja ośrodków rozmnażania w chorobie autoimmunologicznej. Nat. Wielebny Immunol. 2009, 9, 845–857. [Odnośnik]

34. Cucak, H.; Yrlid, U.; Reizis, B.; Kalinke, U.; Johansson-Lindborn, B. Sygnalizacja interferonu typu I w komórkach dendrytycznych stymuluje rozwój komórek pomocniczych pęcherzyków T mieszkających w węźle chłonnym. Immunitet 2009, 31, 491–501. [Odnośnik]

35. Desvignes, L.; Wilk, AJ; Ernst, JD Dynamiczne role IFN typu I i typu II we wczesnej infekcji Mycobacterium tuberculosis. J. Immunol. 2012, 188, 6205–6215. [Odnośnik]

36. Teles, MBR; Graeber, GT; Krutzik, RS; Montoya, D.; Schenk, M.; Lee, JD; Komisopoulou, E.; Kelly-Scumpia, K.; Chun, R.; Iyer, SS; i in. Interferon typu I tłumi wywołane interferonem typu II ludzkie reakcje przeciwbakteryjne. Nauka 2013, 339, 1448–1453. [Odnośnik]

37. Ji, DX; Yamashiro, LH; Chen, KJ; Mukaida, N.; Kramnik, I.; Darwin, KH; Vance, RE W podatności na Mycobacterium tuberculosis wywołanej interferonem typu I pośredniczy IL-1Ra. Nat. Mikrobiol. 2019, 4, 2128–2135. [Odnośnik]

38. Manca, C.; Tsenova, L.; Bergtold, A.; Freeman, SH; Tovey, M.; Musser, MJ; Barry, WE, 3 miejsce; Freedman, HV; Kaplan, G. Wirulencja klinicznego izolatu Mycobacterium tuberculosis u myszy jest określana przez brak indukcji odporności typu Th1 i jest związana z indukcją IFN-/. proc. Natl. Acad. nauka USA 2007, 98, 5752–5757. [CrossRef] [PubMed]

39. Telesca, C.; Angelico, M.; Piccolo, P.; Nosotti, L.; Morrone, A.; Longhi, C.; Carbone, M.; Baiocchi, L. Leczenie interferonem alfa zapalenia wątroby typu D wywołuje zaostrzenie gruźlicy u imigranta. J. Zarażać. 2007, 54, e223–e226. [CrossRef] [PubMed]

40. Giacomini, E.; Remoli, ME; Gafa, V.; Pardini, M.; Fattorini, L.; Coccia, EM IFN- poprawia immunogenność BCG poprzez działanie na dojrzewanie DC. J. Leukoc. Biol. 2008, 85, 462–468. [CrossRef] [PubMed]

41. Rivas-Santiago, CE; Guerrero, GG IFN-wzmocnienie Mycobacterium bovis Bacillus Calmette Güerin-szczepionka promuje odpowiedź komórkową typu Th1 i ochronę przed zakażeniem M. tuberculosis. BioMed Res. Int. 2017, 2017, 6760. [Odsyłacz]

42. Guerrero, GG; Rangel-Moreno, J.; Islas-Trujillo, S.; Rojas-Espinosa, O. Sukcesywne wzmacnianie domięśniowe za pomocą IFN-alfa chroni myszy szczepione Mycobacterium bovis BCG przed zakażeniem M. lepraemurium. BioMed Med. Rez. Int. 2015, 2015, 414027.

43. McNab, F.; Mayer-Barber, K.; Sher, A.; Wack, A.; O'Garra, A. Interferon typu I w chorobie zakaźnej. Nat. Wielebny Immunol. 2015, 15, 67–103. [Odnośnik]

44. O'Shea, JJ; Visconti, R. IFN typu I i regulacja odpowiedzi TH1: zagadki zarówno rozwiązane, jak i pojawiły się. Nat. immunol. 2000, 1, 17–19. [Odnośnik]

45. González-Navajas, JM; Lee, J.; Dawid M.; Raz, E. Funkcje immunomodulacyjne interferonów typu I. Nat. Wielebny Immunol. 2012, 12, 125–135. [Odnośnik]

46. ​​Le Bon, A.; Twardy interferon DF typu I jako bodziec do primingu krzyżowego. Fakt wzrostu cytokin Rev. 2008, 19, 33–40. [Odnośnik]

47. Bracci, L.; Canini, I.; Puzelli S.; Sestili, P.; Venditti, M.; Spada, M.; Donatelli, I.; Belardelli, F.; Proietti, E. IFN typu I jest silnym adiuwantem śluzówkowym do selektywnego szczepienia donosowego przeciwko wirusowi grypy u myszy i wpływa na wychwytywanie antygenu na poziomie błony śluzowej. Szczepionka 2005, 23, 2994–3004. [Odnośnik]

48. Kanapa, RB; Atmar, RL; Kate, TR; Quarles, JM; Keitel, Waszyngton; Arden, NH; Wells, J.; Nino, D.; Wyde, PR Kontrastujące działanie interferonu typu I jako adiuwantu śluzówkowego w szczepionce przeciw grypie u myszy i ludzi. Szczepionka 2009, 27, 5344–5348. [CrossRef] [PubMed]

49. Denton, AE; Innocentin S.; Carr, EJ; Bradford, BM; Lafouresse, F.; Mabbott, NA; Morbe, U.; Ludewig B.; Pan młody, JR; Good-Jacobson, KL; i in. Interferon typu I indukuje CXCL13 do wspierania tworzenia ektopowego centrum kiełkowania. J. Exp. Med. 2019, 216, 621–637. [Odnośnik]

50. Toledo, PTG; Batista-Silva, LR; Medeiros, RCA; Lara, FA; Moraes, MO Interferony typu I, autofagia i metabolizm gospodarza w trądzie. Przód. immunol. 2018, 23, 806–817. [Odnośnik]

51. Zhang, W.; Zhang, Y.; Zheng, H.; Pan, Y.; Liu, H.; Du, P.; Wan, L.; Liu, J.; Zhu, B.; Zhag, G.; i in. Sekwencjonowanie i analiza genomu szczepów szczepionek BCG. PLoS JEDEN 2013, 8, e071243. [Odnośnik]

52. Wek-Rodriguez, K.; Silva-Miranda, M.; Arce-Paredes, P.; Rojas-Espinosa, O. Wpływ reaktywnych pośredników tlenowych na żywotność i zakaźność Mycobacterium lepraemurium. Int. J. Exp. Patol. 2007, 88, 137–145. [Odnośnik]

53. Kim, SH; Cohen, B.; Novick, D.; Rubinstein, M. Ssacze receptory interferonu typu I składają się z dwóch podjednostek: IFN-R1 i IFN-R2. Gene 1997, 196, 279–286. [Odnośnik]

54. Luo, Y.; Chen, X.; Han, RA; O'Donnell, M. Rekombinowany Bacillus Calmette-Guérin (BCG) eksprymujący ludzki interferon-alfa 2B wykazuje zwiększoną immunogenność. Clin. Do potęgi. immunol. 2001, 123, 264–270. [CrossRef] [PubMed]

55. Słońce, E.; Nian, X.; Liu, C.; Wentylator, X .; Han, R. Budowa rekombinowanego ludzkiego IFN -2 b BCG i jego działanie przeciwnowotworowe na komórki raka pęcherza moczowego in vitro. Genet. Mol. Rez. 2015, 14, 3436–3449. [CrossRef] [PubMed]

56. Prabhakaran, K.; Harris, EB; Kirchheimer, WF Wiązanie dopa znakowanej 14C przez Mycobacterium leprae in vitro. Int. J. Lepr. Inny Mykobakt. Dis. 1976, 44, 58–64.

57. Draper, P. Oczyszczanie Mycobacterium leprae. W Proceedings of Annex 4 of Report of the Five Meeting of the Scientific Working Group on the Immunology of Leprosy (IMMLEP), Genewa, Szwajcaria, 24-26 czerwca 1980; Światowa Organizacja Zdrowia: Genewa, Szwajcaria, 1980.

58. Ischiropoulos, H.; Nelson, J.; Duran, D.; Al-Mehdi, A. Reakcje tlenku azotu i nadtlenoazotynu z cząsteczkami organicznymi i peroksydazą chrzanową: Zakłócenia w oznaczaniu nadtlenku wodoru. Wolny Radic. Biol. Med. 1996, 20, 373–381. [Odnośnik]

59. Schön, T.; Hernandez-Pando, R.; Negesse, Y.; Leekassa R.; Sundqvist, T.; Britton, S. Ekspresja indukowalnej syntazy tlenku azotu i nitrotyrozyny w granicznych zmianach trądu. br. J. Dermatol. 2001, 145, 809–815. [Odnośnik]

60. Silva-Miranda, M.; WeK-Rodriguez, K.; Martinez, CE; Rojas-Espinosa, O. Ekspresja cyklooksygenazy -2, alfa 1- kwaśnej glikoproteiny i indukowanej syntazy tlenku azotu w rozwijających się zmianach mysiego trądu. Int. J. Exp. Ścieżka. 2006, 87, 485–494. [Odnośnik]

61. Hernández-Pando, R.; Schön, T.; Orozco, EH; Serafin, T.; Estrada-Garcia, I. Ekspresja indukowalnej syntazy tlenku azotu i nitrotyrozyny podczas ewolucji eksperymentalnej gruźlicy płuc. Do potęgi. Toksyczny. Patol. 2001, 53, 257–265. [Odnośnik]

62. Izcue, A.; Coombes, JL; Powrie, F. Limfocyty regulatorowe i zapalenie jelit. rok Wielebny Immunol. 2009, 27, 313–338. [Odnośnik]

63. Sakaguchi, S.; Miyara, M.; Costantino, CM; Hafler, DA FOXP3 plus regulatorowe komórki T w ludzkim układzie odpornościowym. Nat. Wielebny Immunol. 2010, 10, 490–500. [Odnośnik]

64. Plotkin, SA Korelaty ochrony wywołanej szczepieniem. Clin. Immunol szczepionkowy. 2010, 17, 1055–1065. [CrossRef] [PubMed]

65. Wu, H.; Chen, Y.; Liu, H.; Xu, L.-L.; Teuscher, P.; Wang S.; Lu, S.; Dent, AL Follicular regulatorowe limfocyty T hamują wytwarzanie cytokin przez komórki T pomocnicze pęcherzyków i optymalizują odpowiedzi IgG u myszy. Eur. J. Immunol. 2016, 46, 1152–1161. [CrossRef] [PubMed]

66. Jeyanathan, M.; Damjanovic, D.; Shaler, CR; Lai, R.; Wortzman, M.; Yin, C.; Zganiacz, A.; Lichty, D.; Xing, Z. Wrodzona odporność z odciskiem różnicowym przez szczepienie przypominające błonę śluzową określa wyniki ochrony immunologicznej przeciw gruźlicy, niezależnie od odporności komórek T. Immunol błony śluzowej. 2013, 6, 612–625. [CrossRef] [PubMed]

67. Jeyanathan, M.; Shao, Z.; Yu, X.; Harkness, R.; Jiang, R.; Li, J.; Xing, Z.; Zhu, T. AdHu5Ag85A Immunizacja przypominająca błonę śluzową dróg oddechowych zwiększa ochronę przed gruźlicą płuc u naczelnych innych niż ludzie, którym podano szczepionkę BCG. PLoS ONE 2015, 10, e0135009. [Odnośnik]

68. Afhami, S.; Drumond, Wirginia; D'Agositnio, MR; Jeyanathan, M.; Gillgrass, A.; Xing, Z. Zaawansowane strategie szczepionek immunoterapeutycznych przeciwko gruźlicy płuc. Przód. immunol. 2020, 11, 557809. [Odsyłacz]

69. Torrado, E.; Robinson, RT; Cooper, AM Komórkowa odpowiedź na mykobakterie: równoważenie ochrony i patologii. Trendy Immunol. 2011, 32, 66–72. [Odnośnik]

70. Xu, X.; Gao, W.; Cheng S.; Yin, D.; Li, F.; Wu, Y.; Słońce, D.; Zhou, S.; Wang, D.; Zhang, Y.; i in. Mechanizmy przeciwzapalne i immunomodulujące atorwastatyny w mysim modelu urazowego uszkodzenia mózgu. J. Neuroinflamm. 2017, 14, 167–182. [Odnośnik]

71. Azeem, W.; Maukon, BR; Appel, S.; Maegrete, AO; Kalland, KH Podwójne właściwości pro- i przeciwzapalne komórek dendrytycznych pochodzących z monocytów. Przód. immunol. 2020, 11, 438–453. [Odnośnik]

72. Sultana, S.; Bishay, B. Neutralizacja TNFR-1 i TNFR-2 moduluje septyczne zapalenie stawów wywołane przez S. aureus poprzez regulację poziomów cytokin prozapalnych i przeciwzapalnych podczas postępu choroby. immunol. Łotysz. 2018, 196, 33–51. [Odnośnik]

73. Pornografia, D.; Gilligan, MM; Huang S.; Gartung, A.; Cortes-Puch, I.; Sime, PJ; Phipps, RP; Serhan, CHN; Hammock, BD Rezolucja stanu zapalnego: dwukierunkowe podejście do zapobiegania burzom cytokin w COVID{3}} Cancer Metastasis Rev. 2020, 39, 337–340. [Odnośnik]

74. Longhi, poseł; Trumpfheller, C.; Idoyaga, J.; Caskey, M.; Matos, I.; Kluger, C.; Salazar, AM; Colonna, M.; Steinman, RM Komórki dendrytyczne wymagają ogólnoustrojowej odpowiedzi interferonu typu I, aby dojrzeć i wywołać odporność CD4 plus Th1 z poli IC jako adiuwantem. J. Exp. Med. 2009, 206, 1589–1602. [Odnośnik]

75. Khader, SA; Guglani L.; Rangel-Moreno, J.; Gopal, R.; Junecko, BAF; Fontanna, JJ; Martino, C.; Perła, JE; Tighe, M.; Lin, Y.-Y.; i in. IL{3}} jest wymagana do długoterminowej kontroli Mycobacterium tuberculosis i tworzenia się pęcherzyków limfocytów B w zakażonym płucu. J. Immunol. 2011, 187, 5402–5407. [CrossRef] [PubMed]

76. Choreño-Parra, JA; Bobba, S.; Rangel-Moreno, J.; Ahmed, M.; Mehra S.; Rosa B.; Martin, J.; Mitreva, M.; Kaushal, D.; Zuñiga, J.; i in. Zakażenie Mycobacterium tuberculosis HN878 indukuje podobne do ludzkich pęcherzyki komórek B u myszy. J. Zarażać. Dis. 2020, 221, 1636–1646. [CrossRef] [PubMed]

77. Schmidt, EG; Haribhai, D.; Williams, JB; Aggarwal, P.; Jia, S.; Charbonnier, LM; Yan, K.; Lorier, R.; Turner, A.; Ziegelbauer, J.; i in. IL-10 wytwarzana przez komórki iTreg kontroluje zapalenie okrężnicy i czynniki chorobotwórcze np. Komórki Treg podczas immunoterapii. J. Immunol. 2012, 189, 5628–5648. [Odnośnik]

78. Rubcowo, YP; Rasmussen, JP; Chi, Y.; Fontenot, J.; Castelli, I.; Tak, X.; Treuting, P.; Siewe, I.; Roers, A.; Henderson, WRJ; i in. Regulacyjna interleukina pochodząca z limfocytów T-10 ogranicza stany zapalne na interfejsach środowiskowych. Odporność 2018, 28, 546–558. [CrossRef] [PubMed]

For more information:1950477648nn@gmail.com