Suplementacja żelaza opóźnia starzenie się i wydłuża żywotność komórek poprzez wzmocnienie funkcji mitochondriów Ⅱ
Mar 23, 2023
3.2. Suplementacja żelaza zwiększa odporność na stres oksydacyjny
Starzenie się komórek jest związane zzwiększony stres oksydacyjnyuszkadza systemy biologiczne i łagodzi choroby związane z wiekiem [34]. Ponieważ suplementacja żelaza opóźniała starzenie się, zbadaliśmy jej wpływ nastres oksydacyjny. Użyliśmystres oksydacyjnyzwiązek indukujący, nadtlenek wodoru (H2O2), w celu zbadania odporności komórek na utlenianie. Komórki najpierw hodowano w obecności żelaza do fazy stacjonarnej (72 h) w pożywce SD. Następnie komórki przemyto i inkubowano z różnymi stężeniami H2O2 w pożywce YPD i rósł przez 24 godziny.utleniająceodporność na stres analizowano porównując wzrost komórek traktowanych H2O{1}}z komórkami kontrolnymi nietraktowanymi. Stwierdziliśmy, że komórki uzupełnione żelazem były odporne na stres oksydacyjny w porównaniu z kontrolą (ryc2a i S3). Aby potwierdzić, że suplementacja żelaza zapewnia odporność na stres oksydacyjny, BPS został dodany do żelaza i wzrostu komórek za pomocą H2O2 został przeanalizowany. Dodatek BPS zmniejszył odporność na stres oksydacyjny komórek uzupełnionych żelazem (ryc2B). Wyniki te korelują z rolą suplementacji żelaza w opóźnianiu starzenia i wydłużaniu życia komórek.
3.3. Suplementacja żelaza wzmacnia funkcje mitochondrialne
Mitochondria są głównym ośrodkiem komórkowym dla wykorzystania i metabolizmu żelaza [35-38]. Spadek funkcji mitochondriów jest związany ze starzeniem się [39–43]. Żelazo służy jako kofaktor kilku białek mitochondrialnych, w tym klastrów żelazowo-siarkowych i białek zawierających hem [44-46]. Te białka zawierające żelazo biorą udział w mitochondrialnym cyklu kwasu trikarboksylowego (TCA) i łańcuchu transportu elektronów (ETC) (ryc. 3a). Zbadaliśmy, czy zwiększenie długości życia komórek przez suplementację żelaza wymagało funkcji mitochondriów. Aby to przetestować, przeanalizowaliśmy ekspresję genów cyklu mitochondrialnego TCA. Odkryliśmy, że suplementacja żelaza znacząco indukuje ekspresję kilku genów cyklu TCA (ryc. 3b i S4a). Metabolity cyklu TCA -ketoglutaran i szczawiooctan mogą wytwarzać glutaminian i asparaginian w reakcjach kataplerotycznych w mitochondriach (ryc. 3a). Aminokwasy te są wykorzystywane w biosyntezie białek, lipidów i nukleotydów [47–49]. Co ciekawe, ekspresja genów biosyntezy glutaminianu (GDH1 i GDH3) i asparaginianu (AAT1 i AAT2) była zmniejszona w komórkach uzupełnionych żelazem (ryc. 3c). Ten profil ekspresji sugeruje, że suplementacja żelaza sprzyja zachowaniu zamiast konsumpcji półproduktów cyklu TCA. Zgodnie z tym pomysłem, ekspresja genów mitochondrialnego szlaku anaplerotycznego (PYC1, PYC2 i GDH2) została znacząco zwiększona w komórkach uzupełnionych żelazem (ryc. 3c). PYC1 i PYC2 kodują karboksylazę pirogronianową, która przekształca pirogronian w szczawiooctan. GDH2 koduje dehydrogenazę glutaminianową, która syntetyzuje -ketoglutaran z glutaminianu. Łącznie wyniki te sugerują, że suplementacja żelazem konfiguruje komórki w stanie metabolicznym, który sprzyja anaplerozie i zapobiega kataplerozie w celu zwiększenia metabolitów cyklu TCA.
Rysunek 3.Suplementacja żelaza poprawia funkcje mitochondriów. (a) Przegląd mitochondriówCykl TCA (kwasu trikarboksylowego) i ETC (łańcuch transportu elektronów) z głównym kataplerotycznym izilustrowano reakcje anaplerotyczne. (b) Prototroficzny szczep drożdży inkubowano ze 100 ulµM FeSO44 i hodowano w pożywce SD przez 8 godzin w temperaturze 30°C◦C. RNA ekstrahowano z hodowli iekspresję wskazanych genów cyklu TCA analizowano za pomocą ilościowego RT-PCR. (c) Wyrażenieanaliza genów kataplerotycznych (GDH1, GDH3, AAT1,IAAT2) i geny anaplerotyczne (PYC1, PYC2,IGDH2) przeprowadzono za pomocą ilościowego RT-PCR. (d) Analiza ekspresji genów ETC została przeprowadzona przezilościowa RT-PCR. Znaczenie statystyczne (*p < 0.05) was determined by Student's t-test.
Reakcje cyklu TCA generują NADH i FADH2 które są utleniane przez kompleksy ETC I i II i są wymagane do funkcjonowania cyklu TCA (ryc3A). ChociażS. cerevisiaenie ma kompleksu I, równoważniki redukujące są przenoszone do łańcucha oddechowego przez dehydrogenazy NADH. Dehydrogenaza bursztynianowa odgrywa centralną rolę i uczestniczy zarówno w cyklu TCA, jak i kompleksie ETC II (ryc.3A). Uderzające jest to, że ekspresja dehydrogenazy bursztynianowej (SDH1ISDH2) był silnie regulowany w górę wśród wszystkich analizowanych genów cyklu TCA (ryc3b,d). Wyniki te wskazują, że strumień cyklu TCA kontynuuje w kierunku ETC zamiast akumulacji określonego produktu pośredniego. Podobnie, ekspresja wszystkich innych genów kompleksów ETC była silnie regulowana w górę w komórkach uzupełnionych żelazem (ryc.3D). ETC wiąże się z wytwarzaniem reaktywnych form tlenu (ROS), które regulują ekspresjęSOD2gen [50]. Koduje dysmutazę nadtlenku manganu (MnSOD), która jest głównym zmiataczem ponadtlenku mitochondrialnego.SOD2ekspresja genów została zwiększona w komórkach uzupełnionych żelazem (rysunek uzupełniający S4a), co jest zgodne z ekspresją genów ETC. Następnie przeanalizowaliśmy potencjał błony mitochondrialnej (MMP), który jest generowany przez pompy protonowe kompleksów ETC I, III i IV. Odkryliśmy, że suplementacja żelaza zwiększa MMP komórek (rysunek dodatkowy S4b). Następnie zbadaliśmy strukturę mitochondriów za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej. Odkryliśmy, że suplementacja żelaza zapobiega fragmentacji mitochondriów (rysunek dodatkowy S4c). W sumie wyniki te wskazują, że suplementacja żelaza wzmacnia funkcje mitochondrialne komórek.
3.4. Suplementacja żelaza zwiększa poziom ATP wymagany do wydłużenia życia komórek
Mitochondrialne reakcje cykliczne TCA wytwarzają redukujące równoważniki NADH i FADH2, które przenoszą elektrony do ETC i wytwarzają trójfosforan adenozyny (ATP) poprzez fosforylację oksydacyjną (OXPHOS) (ryc.3A). Ponieważ ekspresja cyklu TCA i genów ETC została wzmocniona przez suplementację żelaza, przetestowaliśmy jej wpływ na syntezę ATP. Zgodnie z profilem ekspresji mitochondrialnego cyklu TCA, ekspresja genu ETC i poziomy ATP były wysokie w komórkach uzupełnionych żelazem (ryc.4A). Następnie zapytaliśmy, czy ATP jest wymagane do przedłużenia żywotności komórek uzupełnionych żelazem. Zahamowaliśmy syntezę ATP i zmierzyliśmy CLS drożdży. Antymycyna A (AMA) jest inhibitorem syntezy ATP, który wiąże się z kompleksem III i blokuje transfer elektronów w mitochondrialnym ETC [51]. Najpierw zbadaliśmy poziom ATP i stwierdziliśmy, że leczenie AMA hamuje syntezę ATP (ryc4B). Następnie przetestowaliśmy wpływ AMA na żywotność komórek uzupełnionych żelazem. Komórki drożdży inkubowano z żelazem i AMA w pożywce SD. Wzrost komórek osiągnął nasycenie po 24 godzinach (rysunek dodatkowy S5). Następnie zmierzyliśmy przeżycie i stwierdziliśmy, że leczenie AMA hamuje przedłużenie życia za pośrednictwem suplementacji żelaza (ryc.4C). Wszystkie te odkrycia ujawniają, że suplementacja żelaza zwiększa poziom ATP, który jest wymagany do przedłużenia życia komórek. Zaobserwowaliśmy również, że żywotność komórek traktowanych AMA była niższa niż w przypadku kontroli (ryc4c), dodatkowo potwierdzając, że niezdolność do syntezy ATP zagrażała długości życia.
3.5. Suplementacja żelaza zapobiega przyspieszonemu starzeniu się mutanta z nokautem AMPK
AMPK jest głównym regulatorem homeostazy energii komórkowej [20,21]. Wysoce konserwatywny ludzki analog AMPK w drożdżachS. cerevisiaejest białkiem Snf1 [52]. AMPK aktywuje funkcje mitochondrialne do produkcji ATP w warunkach ograniczonej energii. Ostatnie doniesienia wykazały, że spadek funkcji mitochondriów wraz z wiekiem wynika częściowo z upośledzonej aktywności AMPK w organizmach w różnym wieku [53,54]. Zatem brak aktywności AMPK wpływa na funkcje mitochondriów i upośledza wiele funkcji komórkowych, w tym metabolizm, odporność na stres i przeżycie komórek, które są najbardziej krytycznymi wyznacznikami starzenia się i długości życia. Zgodnie z poprzednimi badaniami mystwierdził, żesnf1mutacja knockout upośledziła poziom ATP, odporność na stres oksydacyjny i długość życia (ryc5a–c).
Rysunek 5.Suplementacja żelaza ratuje przyspieszone starzenie się mutanta z nokautem AMPK. Theprototroficzne drożdże typu dzikiego i mutant z nokautem AMPK (snf1∆) szczepy hodowano do stanu stacjonarnegofaza w pożywce SD przez 72 godziny w temperaturze 30°C◦C. (a) Analiza ATP typu dzikiego isnf1∆ szczepy. (b) Utleniającyanaliza stresu dzikich isnf1∆ szczepy z różnymi H2O2 stężenia. (c) Chronologicznaanaliza długości życia (CLS) typu dzikiego isnf1∆ szczepy. (d) Analiza ATP typu dzikiego isnf1∆ szczepyinkubowane z różnymi stężeniami FeSO44. (e) Analiza stresu oksydacyjnego typu dzikiego isnf1∆ szczepy inkubowane z różnymi stężeniami FeSO44. (f) Analiza CLS typu dzikiego isnf1∆ szczepy inkubowane z różnymi stężeniami FeSO44. Znaczenie statystyczne (*p < 0.05) was determinedprzez Studentat-test.
odsnf1mutant ma wadliwe funkcje mitochondriów, sprawdziliśmy, czy suplementacja żelaza może uratować fenotypy przyspieszonego starzenia. Dlatego uzupełniliśmy żelazo dosnf1mutanta i przeanalizował poziom ATP, stres oksydacyjny i długość życia. Stwierdziliśmy, że suplementacja żelaza zwiększyła poziom ATP, odporność na stres oksydacyjny i długość życia (ryc5d-f). W sumie odkrycia te potwierdziły, że suplementacja żelaza opóźnia starzenie i wydłuża żywotność komórek poprzez zwiększenie funkcji mitochondriów.
4. Dyskusja
Składniki odżywcze określają stan funkcjonalny komórek, a niedobór niezbędnych składników odżywczych zagraża zdrowiu człowieka [55,56]. Ponadto składniki odżywcze są głównymi regulatorami metabolizmu komórkowego, który kontroluje kilka procesów biologicznych, w tymstarzenie się, główny czynnik ryzyka z kilkuchoroby przewlekłe. Spadek waktywność metabolicznajest jednym ze znaków rozpoznawczychstarzenie się [10]. Niedawne badania na różnych organizmach, w tym na ssakach, wykazały, że opóźnienie starzenia i wydłużenie okresu zdrowia jest możliwe dzięki interwencjom przeciwstarzeniowym, w tym podawaniu leków rapamycyny i metforminy [11,16]. Leki te są ukierunkowane na wykrywające składniki odżywcze kompleksy TORC1 i AMPK, które są ważnymi regulatorami metabolizmu komórek.11,16].
Żelazo jest niezbędnym składnikiem odżywczym zaangażowanym w kilka kluczowych reakcji metabolicznych w komórkach [23–26]. Niedobór żelaza upośledza aktywność metaboliczną, powodując upośledzenie funkcji komórkowych, prowadząc do wielu chorób, w tym anemii, upośledzenia funkcji poznawczych i utraty funkcji poznawczych.siła mięśni [26,57–59]. Niedobór żelaza jest powszechny w populacjach osób starszychWiększe bądź równe65 lat [60–62].
Ponieważ żelazo reguluje procesy metaboliczne, zbadaliśmy jego rolę w procesie starzenia. Wykorzystaliśmy drożdże jako organizm modelowy do zbadania roli żelaza w chronologicznym starzeniu. Zbadaliśmy wpływ suplementacji żelaza na CLS drożdży. Stwierdziliśmy, że zarówno FeSO4 i FeCl3 wydłużył żywotność komórek. Używając różnych soli siarczanu, chlorku i chelatora żelaza, potwierdziliśmy, że żelazo wydłuża żywotność komórek. Starzenie się jest związane ze stopniową akumulacją stresu oksydacyjnego, który jest szkodliwy dla funkcji komórkowych i zmniejsza przeżywalność komórek.34]. Ponieważ stwierdziliśmy, że suplementacja żelaza opóźnia starzenie, przetestowaliśmy, czy może zapewnić odporność na stres oksydacyjny. Aby zbadać fenotyp stresu oksydacyjnego, potraktowaliśmy komórki środkiem indukującym utlenianie H2O2 i zmierzono przeżywalność komórek. Stwierdziliśmy, że suplementacja żelaza zwiększa odporność na stres oksydacyjny w porównaniu z grupą kontrolną. Odkrycia te korelują z rolą suplementacji żelaza w wydłużaniu życia.
Ponadto odkryliśmy przeciwstarzeniowy mechanizm suplementacji żelaza. Mitochondria są głównymi komórkowymi konsumentami wykorzystania i metabolizmu żelaza [35–38]. Najpierw przeanalizowaliśmy ekspresję mitochondrialnych genów cyklu TCA. Odkryliśmy, że ekspresja prawie wszystkich genów cyklu TCA była zwiększona przez suplementację żelaza. Co ważne, suplementacja żelazem obniżyła ekspresję anaplerozy mitochondrialnej i zwiększyła ekspresję kataplerotycznych genów metabolicznych. Wyniki te pokazują, że suplementacja żelaza zwiększa syntezę półproduktów cyklu TCA i zapobiega ich wykorzystaniu komórkowemu. Odkrycia te potwierdziły przeciwstarzeniowe działanie suplementacji żelaza, ponieważ regularny eksport produktów pośrednich cyklu TCA wpływa na integralność mitochondriów [47]. Ponadto uzupełnianie mitochondrialnej puli węgla jest niezbędne do utrzymania funkcji mitochondriów wymaganych do przeżycia podczas starzenia się komórek.
Cykl pośredni TCA Wykazano, że -ketoglutaran przedłuża życie różnych organizmów [63]. Stwierdziliśmy jednak, że suplementacja żelaza zwiększa ekspresję -dehydrogenaza ketoglutaranowa (KGD1IKGD2), który konwertuje - ketoglutaran, tworząc sukcynylo-CoA. Ponadto zaobserwowaliśmy, że ekspresja genów dehydrogenazy bursztynianowej (SDH1ISDH2) był silnie regulowany w górę wśród innych testowanych genów cyklu TCA. Co ważne, dehydrogenaza bursztynianowa uczestniczy zarówno w cyklu TCA, jak i kompleksie ETC II. Wyniki te sugerują, że zamiast akumulacji określonego związku pośredniego cyklu TCA, przeciwstarzeniowe działanie suplementacji żelaza może obejmować szlak ETC.
Ponieważ cykl TCA jest funkcjonalnie powiązany z ETC, przeanalizowaliśmy ekspresję genów ETC. Odkryliśmy, że suplementacja żelazem silnie zwiększa ekspresję genów ETC. Produkty cyklu TCA NADH i FADH2 są utleniane przez kompleksy ETC i generują ATP przez OXPHOS. Stwierdziliśmy, że suplementacja żelaza zwiększa komórkowy poziom ATP, co jest skorelowane z regulacją w górę cyklu TCA i genów ETC. Następnie wyjaśniliśmy, czy wzrost poziomu ATP przez suplementację żelaza jest wymagany do przedłużenia życia komórek. Stwierdziliśmy, że wydłużenie życia przez suplementację żelaza zostało zniesione przez hamowanie syntezy ATP. Zatem te ustalenia sugerują, że suplementacja żelaza zwiększa poziom ATP, który jest wymagany do przedłużenia życia komórek. Nasze wyniki są zgodne z wcześniejszymi doniesieniami pokazującymi rolę ATP w życiu komórek [51,64,65]. Ponadto wykorzystaliśmy suplementację żelaza w celu wzmocnienia funkcji mitochondriów i uratowania krótkiego życia i wrażliwego na stres oksydacyjny fenotypu mutanta AMPK. W sumie wyniki te ujawniły, że suplementacja żelaza wzmacnia funkcje mitochondriów, które opóźniają starzenie i wydłużają żywotność komórek.
Ostatnie badania wykazały, że suplementacja żelaza przywraca defekt mitochondrialny mutantów z uszkodzonym lizosomem i zapobiega spadkowi mitochondriów podczas starzenia [66,67]. Zatem nasze wyniki potwierdzają wcześniejsze ustalenia, że suplementacja żelaza poprawia funkcje mitochondriów. Co ciekawe, jedno z wcześniejszych badań wykazało, że suplementacja żelaza uratowała przyspieszone replikacyjne starzenie się mutantów z uszkodzonym lizosomem; Jednakżewpływ na komórki typu dzikiego nie został uwzględniony w raporcie [67]. Niemniej jednak nasze wyniki są skorelowane z wcześniejszymi ustaleniami i pomimo różnych modeli starzenia (starzenie chronologiczne) stwierdziliśmy, że suplementacja żelaza opóźnia starzenie i zwiększa żywotność komórek. Tak więc, łącznie, nasze wyniki i poprzednie raporty wyraźnie sugerują, że suplementacja żelaza może być potencjalnym środkiem terapeutycznym ukierunkowanym na starzenie się i zwiększającym długość życia.
Materiały uzupełniające:Rysunek S1: Analiza wzrostu i chronologicznej długości życia komórek drożdży z dodatkiem żelaza; Rysunek S2: Analiza wzrostu różnych komórek drożdży uzupełnionych solami zawierającymi żelazo, siarczany i chlorki; Rysunek S3: Analiza odporności na stres oksydacyjny komórek drożdży z dodatkiem żelaza. Rysunek S4: Ekspresja genów mitochondrialnych, potencjał błonowy i analiza struktury komórek drożdży z dodatkiem żelaza; Rysunek S5: Analiza wzrostu komórek drożdży z dodatkiem żelaza i antymycyny A; Tabela S1: Lista starterów użytych do RT-PCR w tym badaniu.
Autorskie Wkłady:JLJ: Metodologia, analiza formalna, dochodzenie i przegląd; TCYN: metodologia, analiza formalna, dochodzenie i przegląd; FN: Walidacja, analiza formalna i przegląd; FE: Recenzowanie, redagowanie i nadzór; Magister: konceptualizacja, gromadzenie danych, metodologia, pisanie, recenzowanie, edytowanie i nadzór. Wszyscy autorzy przeczytali i zgodzili się na opublikowaną wersję manuskryptu.
Finansowanie:Ta praca była wspierana przez Bioinformatics Institute (BII), A*STAR Career Development Fund (C210112008) oraz grant Global Healthy Longevity Catalyst Awards (MOH{1}}).
Podziękowanie:Dziękujemy Maurer-Stroh Sebastian, Lee Hwee Kuan, Loo Lit Hsin, Chiam Keng Hwee i Prakash Arumugam za wsparcie tych badań.
Konflikt interesów:Autorzy deklarują brak konkurencyjnych interesów finansowych i niefinansowych.
Bibliografia
1. Bloom, DE; Konserwy, D.; Lubet, A. Globalne starzenie się populacji: fakty, wyzwania, rozwiązania i perspektywy.Chall. Solut. Perspektywa. Dedal2015, 144, 80–92.
2. Departament Narodów Zjednoczonych ds. Gospodarczych i Społecznych, Wydział ds. Ludności.Perspektywy ludności świata 2019; Najciekawsze (ST/ESA/SERA/423); ONZ: Nowy Jork, NY, USA, 2019.
3. Robine J.Starzejące się populacje: żyjemy dłużej, ale czy jesteśmy zdrowsi?Organizacja Narodów Zjednoczonych, Departament Ekonomii i Spraw Społecznych, Wydział Ludności: Nowy Jork, NY, USA, 2021; UN DESA/POP/2021/TP/NR.
4. Niccoli, T.; Partridge, L. Starzenie się jako czynnik ryzyka choroby.bież. Biol.2012, 22, R741–R752. [Odnośnik krzyżowy] [PubMed]
5. Hou, Y.; Dan, X.; Babbar, M.; Wei, Y.; Hasselbalch, SG; Croteau, DL; Bohr, VA Starzenie się jako czynnik ryzyka chorób neurodegeneracyjnych.Nat. ks. Neurol.2019, 15, 565–581. [Odnośnik krzyżowy] [PubMed]
6. Harman, D. Proces starzenia: główny czynnik ryzyka chorób i śmierci.proc. Natl. Acad. nauka USA1991, 88, 5360–5363. [Odnośnik krzyżowy] [PubMed]
7. Partridge, L.; Deelen, J.; Slagboom, PE W obliczu globalnych wyzwań starzenia się.Natura2018, 561, 45–56. [Odnośnik krzyżowy] [PubMed] 8. Fontana L.; Kennedy'ego,
BK; Longo, VD; Uszczelki, D.; Melov, S. Badania medyczne: Leczenie starzenia.Natura2014, 511, 405–407. [Odnośnik krzyżowy] [PubMed]
9. Fontana L.; Partridge, L.; Longo, VD Wydłużenie zdrowego życia — od drożdży po ludzi.Nauka2010, 328, 321–326. [Odnośnik krzyżowy] [PubMed]
10. López-Otín, C.; Blasco, MA; Partridge, L.; Serrano, M.; Kroemer, G. Cechy starzenia.Komórka2013, 153, 1194–1217. [Odnośnik krzyżowy]
11. Partridge, L.; Fuentealba, M.; Kennedy, BK Dążenie do spowolnienia starzenia się poprzez odkrywanie leków.Nat. Wielebny Drug Discov.2020, 19, 513–532. [Odnośnik krzyżowy]
12. Zimmermann, A.; Hofer S.; Pendl, T.; Kainz, K.; Zrobione z.; Carmona-Gutierrez, D. Drożdże jako narzędzie do identyfikacji związków przeciwstarzeniowych.Rez. drożdży FEMS2018, 18, foy020. [Odnośnik krzyżowy]
13. Kaeberlein, M.; Burner, CR; Kennedy, BK Najnowsze osiągnięcia w dojrzewaniu drożdży.PLoS Genet.2007, 3, e84. [Odnośnik krzyżowy]
14. Longo, VD; Shadel, GS; Kaeberlein, M.; Kennedy, B. Starzenie replikacyjne i chronologiczne wSaccharomyces cerevisiae. Metabolizm komórkowy2012, 16, 18–31. [Odnośnik krzyżowy] 15. Longo, VD; Fabrizio, P. Chronologiczne starzenie się Saccharomyces cerevisiae.Odporność na starzenie Drożdże2011, 57, 101–121. [Odnośnik krzyżowy]
16. Kulkarni, AS; Gubbi S.; Barzilai, N. Korzyści z metforminy w łagodzeniu oznak starzenia.Metabolizm komórkowy2020, 32, 15–30. [Odnośnik krzyżowy]
17. Alfatah, M.; Wong, JH; Krishnan, VG; Lee, YC; Grzech, QF; Boże, CJH; Kong, KW; Lee, WT; Lewis, J.; Hoon, S.; i in. TORC1 reguluje odpowiedź transkrypcyjną na glukozę i cykl rozwojowy poprzez szlak Tap42-Sit4-Rrd1/2 u Saccharomyces cerevisiae.BMC Biol.2021, 19, 1–22. [Odnośnik krzyżowy]
18. Saxton, RA; Sabatini, sygnalizacja DM mTOR we wzroście, metabolizmie i chorobie.Komórka2017, 168, 960–976. [Odnośnik krzyżowy]
