Neuroprotekcyjne działanie czterech glikozydów fenyloetanoidowych na apoptozę wywołaną przez H2O2-na komórkach PC12 przez szlak Nrf2/ARE

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Maiquan Li 1, Tao Xu 1, Fei Zhou 1, Mengmeng Wang 1, Huaxin Song 1, Xing Xiao i Baiyi Lu 1,*

1. Wstęp

Stres oksydacyjny, który jest brakiem równowagi homeostazy antyoksydantów, indukuje peroksydację lipidów, uszkodzenie białka i DNA, starzenie się komórek i śmierć komórek. Proces ten prawdopodobnie przyczynia się do kilku zaburzeń neurodegeneracyjnych, takich jak choroba Alzheimera (AD), choroba Parkinsona (PD) oraz niedokrwienie/reperfuzja [1]. Wiadomo, że nadtlenek wodoru (H2O2), który jest jedną z głównych reaktywnych form tlenu (ROS), powoduje peroksydację lipidów i uszkodzenia DNA [2]. Ponadto H2O2 jest endogennym źródłem wolnych rodników hydroksylowych, które przyczyniają się do poziomu tła komórkowego stresu oksydacyjnego [3,4]. Dlatego strategie terapeutyczne zapobiegające apoptozie wywołanej stresem oksydacyjnym mogą mieć potencjał w leczeniu chorób neurodegeneracyjnych.

Nuclear factor erythroid 2-czynnik 2 (Nrf2) jest czynnikiem transkrypcyjnym silnie powiązanym ze stresem oksydacyjnym. Aktywacja Nrf2 indukuje transkrypcję wielu genów antyoksydacyjnych i detoksykacyjnych, w tym oksydoreduktazy hemowej-1 (HO-1), oksydoreduktazy NAD(P)H chinonu 1, przeciwzapalnych [13] i immunomodulujących [14 ] bioaktywności. Osmanthusfragrans jest powszechnym składnikiem kilku azjatyckich produktów spożywczych i jest od dawna spożywany. Wcześniej wykazaliśmy, że ekstrakty kwiatowe O.fragrans poprawiały uczenie się przestrzenne i pamięć, hamowały uszkodzenia oksydacyjne i wykazywały działanie neuroprotekcyjne w przypadku starzenia wywołanego d-galaktozą w mysim modelu ICR [15]. Salidrozyd, akteozyd i izoakteozyd są główną odpowiedzią PhG na działanie przeciwutleniające ekstraktów z kwiatów O.fragrans [16].

Badania nad neuroprotekcyjnym działaniem PhG przyniosły pożądane rezultaty. Salidroside znacząco zmniejszał apoptozę komórek PC12, które były eksponowane w MPP plus [17,18]. Akteozyd łagodził również apoptozę wywołaną MPP plus i stres oksydacyjny w komórkach PC12 [19] i uszkodzenie komórek SH-SY5Y wywołane przez Ap25-35- [20]. Echinakozyd badano pod kątem apoptozy indukowanej przez czynnik martwicy nowotworu (TNFα) w komórkach SH-SY5Y [21], toksyczności dopaminergicznej indukowanej przez MPTP u myszy [22], pierwotnych hodowlach komórek kory mózgowej szczurów uszkodzonych glutaminianem [23] i { {19}}Uszkodzenie wywołane przez OHDA w komórkach PC12 [24]. Wyniki wskazują, że PhG wykazują działanie cytoochronne i są potencjalnymi środkami do leczenia chorób neurodegeneracyjnych. Badania wykazały, że właściwości przeciwutleniające PhG są podstawą wielu innych bioaktywności tych związków [25]. Jednak niewiele badań dotyczyło molekularnego mechanizmu PhG przeciwko toksyczności oksydacyjnej.

W naszym badaniu wybraliśmy cztery typowe PhG: salidrozyd (monosacharydy fenyletanoidowe), akteozyd (disacharydy fenyletanoidowe), izoakteozyd (disacharydy fenyletanoidowe) i echinakozyd (trisacharydy fenyletanoidowe). Zastosowaliśmy model śmierci neuronów przy użyciu zróżnicowanych komórek PC12 [26], aby zbadać działanie ochronne i mechanizm molekularny PhG na model komórek PC12 indukowanych H2O2-. Wykazaliśmy, że PhG aktywowały szlak Nrf2/ARE poprzez wiązanie się z białkiem 1 związanym z ECH podobnym do Kelcha (Keap1). Proces ten zwiększał aktywność enzymów antyoksydacyjnych i zwiększał odporność komórek PC12 na stres oksydacyjny.

Leczenie zaburzeń neurodegeneracyjnych:PhG z cistanche

2. Wyniki

2.1. PhG tłumione H2O2-Indukowana cytotoksyczność w komórkach PC12

Zbadano działanie cytotoksyczne H2O2 i PhG (0.1,1,5 i 10 卩g/mL) na komórki PC12. Wyniki pokazały, że H2O2 indukował utratę żywotności komórek PC12 w sposób zależny od stężenia i czasu (Figura 1A). Ekspozycja komórek PC12 na 200 H2O2 przez 2 godziny skutkowała żywotnością komórek na poziomie 57,4 procent. Wstępne traktowanie komórek PhG przy 0.1,1, 5 i 10 昭/ml nie miało wpływu na żywotność komórek (Figura 1B) i znacznie chroniło komórki PC12 przed uszkodzeniami wywołanymi przez H2O2- poprzez poprawę żywotność komórek wynosi odpowiednio 9549-220,141 procent, 12,092-250,289 procent, 1.470-90,289 procent i 3.411-110,441 procent ( Rysunek 1C). Jednak wstępne traktowanie salidrozydem (0,1 μg/ml), izoakteozydem (0,1, 1, 5 i 10 μg/ml), echinakozydem (0,1,1 i 5 μg/ml) nie wykazało istotnych różnic w komórkach indukowanych HzOz. uraz. Wstępne traktowanie komórek PhG polepszyło również charakterystykę morfologiczną indukowaną przez H2O2 (Figura 1D).

Rysunek 1.PhG hamowały cytotoksyczność indukowaną przez H2O2-w komórkach PC12. Żywotność komórek wykrywano testem MTT. Cytotoksyczne działanie H2O2 (A) i PhG (B) w różnych stężeniach na komórki PC12. (C) PhG atenuowane przez H2O2-indukowane zmniejszenie żywotności komórek. Komórki PC12 inkubowano z PhG (0.1 i 10 mg/mL) przez 24 godziny, a następnie inkubowano z 200 pM H2O2 przez kolejne 2 h po usunięciu PhG. (D) Obserwacja morfologiczna. Komórki po leczeniu obserwowano pod mikroskopem z kontrastem fazowym (x100), CK: grupa normalna, H2O2: grupa leczona H2O2, HL: grupa leczona niską dawką salidrozydu, HH: grupa leczona wysoką dawką salidrozydu, ML: grupa leczona niską dawką salidrozydu, MH: grupa leczona wysoką dawką akteozydu, IL: grupa leczona niską dawką izoakteozydu, IH: grupa leczona wysoką dawką izoakteozydu, SL: grupa leczona niską dawką echinakozydu, SH: grupa leczona wysoką dawką echinakozydu. ** p < 0,01="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" nieleczoną;="" #="" p="">< 0,05,="" względem="" grupy="" traktowanej="" h2o2;="" ##="" p="">< 0,01="" względem="" grupy="" traktowanej="">

2.2. PhG tłumione przez H2O2-Indukowane wewnątrzkomórkowe gromadzenie ROS, peroksydacja lipidów (MDA) i zwiększona aktywność dysmutazy ponadtlenkowej (SOD) w komórkach PC12

Ekspozycja komórek PC12 na 200 pM H2O2 przez 2 godziny zwiększyła poziomy ROS, zawartość MDA i obniżyła aktywność SOD (Figura 2). Wstępne leczenie PhG osłabiało poziom ROS, salidrozydu i akteozydu, a wysoka dawka wstępnego leczenia izoakteozydem i echinakozydem istotnie osłabiała poziom ROS (p < 0,01).="" wstępne="" traktowanie="" salidrozydem="" nie="" wykazało="" wpływu="" na="" zawartość="" mda,="" ale="" wstępne="" traktowanie="" akteozydem="" znacząco="" osłabiło="" zawartość="" mda="" (p="">< 0,05).="" wstępne="" traktowanie="" izoakteozydem="" i="" echinakozydem="" znacznie="" zmniejszyło="" zawartość="" mda="" do="">

Rysunek 2.PhG blokowały akumulację ROS i MDA oraz zwiększały aktywność SOD w komórkach PC12. Komórki PC12 inkubowano z PhG (0.1 i 10 4g/ml) przez 24 godziny, a następnie inkubowano z 200 |^M H2O2 przez kolejny 2 godziny po usunięciu PhG. (A) PhG blokowały akumulację ROS i MDA. (B) PhG blokowały akumulację MDA. (C) PhGs zwiększyły aktywność SOD. CK: grupa normalna, Model: grupa leczona H2O2, Salidrozyd: grupa leczona salidrozydem, Akteoside: grupa leczona akteozydem, Izoakteozyd: grupa leczona izoakteozydem, Echinakozyd: grupa leczona echinakozydem. ** p < 0,01="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" nieleczoną;="" #="" p="">< 0,05,="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" leczoną="" h2o2,="" ##="" p="">< 0,01="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" leczoną="">

2.3.PhGs odwrócone H2O2-Apoptoza indukowana w komórkach PC12

Traktowanie H2O2 (200 |1M) przez 2 godziny znacząco zwiększyło apoptozę w komórkach PC12, z całkowitą szybkością apoptozy do 16,02 procent (Figura 3). Jednak wstępne traktowanie PhG (0,1 i 10 µg/ml) przez 24 h zmniejszyło szybkość apoptozy w sposób zależny od stężenia (p < 0,01).="" salidrozyd,="" akteozyd,="" izoakteozyd="" i="" echinakozyd="" znacznie="" zmniejszyły="" odsetek="" apoptozy="" komórek="" o="" 4.750-6.627="" procent,="" 4.413-5.800="" procent,="" 6.593-100,047="" procent="" i="" 1.530-7.510="" procent="">

Rysunek 3. PhG odwracały apoptozę indukowaną przez H2O2-w komórkach PC12. Komórki PC12 inkubowano z PhG (0.1 i 10 卩g/mL) przez 24 godziny, a następnie inkubowano z 200 pM H2O2 przez kolejne 2 godziny po PhG zostały usunięte. Następnie mierzono apoptozę za pomocą cytometrii przepływowej z użyciem sondy fluorescencyjnej PI/FITC. CK: grupa normalna, Model: grupa leczona H2O2, Salidrozyd: grupa leczona salidrozydem, Akteoside: grupa leczona akteozydem, Izoakteozyd: grupa leczona izoakteozydem, Echinakozyd: grupa leczona echinakozydem. ** p < 0,01="" w="" porównaniu="" z="" grupą="" nieleczoną;="" ##="" p="">< 0,01="" względem="" grupy="" traktowanej="">

2.4. PhG odwrócił H2O2-indukował obniżenie ekspresji białka HO-1, NQO1, GCLC i GCLM

HO{{0}}, NQO1 i ligaza glutaminianowo-cysteinowa (GCL) są ważnymi komórkowymi enzymami antyoksydacyjnymi, a HO-1, NQO1 oraz katalityczne lub modyfikujące podjednostki GCL (GCLC lub GCLM) są Nrf2-regulowane geny niższego rzędu [27]. Po leczeniu obserwowano ekspresję białka HO-1, NQO1, GCLC i GCLM. Stwierdzono oczywistą różnicę między ekspresją białka HO-1 i NQO1 z lub bez H2O2 (Figura 6A-C) (p < 0.01).="" phg="" (0.1="" i="" 10="" p^g/ml)="" odwróciły="" indukowaną="" przez="" h2o2-="" regulację="" w="" dół="" ekspresji="" białka="" ho-1="" (z="" wyjątkiem="" salidrozydu="" w="" {{32}="" },1="" pg/ml),="" nqo1="" (z="" wyjątkiem="" akteozydu="" w="" 0,1="" pg/ml)="" (p="">< {{40}}.01).="" h2o2="" obniżył="" również="" ekspresję="" białek="" gclc="" i="" gclm="" (p="">< 0.05)="" (rysunek="" 6a,d,e).="" phg="" (0.1="" i="" 10="" pg/ml)="" odwróciły="" indukowaną="" przez="" h2o2-="" regulację="" w="" dół="" ekspresji="" białka="" gclc="" (z="" wyjątkiem="" echinakozydu="" przy="" 0,1="" pg/ml)="" (p="">< 0,01)="" i="" gclm="" (z="" wyjątkiem="" salidrozydu="" w="" stężeniu="" 0,1="" pg/ml)="" (p="">< 0,01).="" następnie="" do="" dalszej="" oceny="" roli="" enzymów="" antyoksydacyjnych="" w="" regulacji="" ochrony="" phg="" przed="" cytotoksycznością="" indukowaną="" przez="" h2o2-="" zastosowano="" chemiczne="" inhibitory="" ho-1.="" phg="" (0,1="" i="" 10="" pg/ml)="" zapobiegały="" cytotoksyczności="" indukowanej="" przez="" h2o2-,="" ale="" taki="" efekt="" ochronny="" został="" odwrócony="" przez="" inhibitor="" ho-1="" znpp="" (p="">< 0,01)="" przy="" 20="" pm="" (figura="" 6f,="" p="">< 0,01)="">

2.5. Ekspresja Keap1 i analiza dokowania molekularnego

W warunkach fizjologicznych Keap1 działa jako białko represorowe Nrf2, wiążąc się z domeną Neh2 Nrf2 i kierując Nrf2 do ligazy ubikwitynowej E3 opartej na Cul3- w celu ubikwitynacji i późniejszej degradacji przez proteasom 26S [28]. Zdolność wiązania PhG do Keap1 została oceniona za pomocą analizy dokowania molekularnego w celu zbadania mechanizmu ich działania przeciwutleniającego.

Działanie przeciwutleniające: CistanchePhGs

3. Dyskusja

Zbadaliśmy neuroprotekcję PhG na cytotoksyczności indukowanej H2O2 w komórkach PC12. Wyniki pokazują, że wstępne traktowanie PhG znacząco tłumiło cytotoksyczność indukowaną HzOz, osłabiało wewnątrzkomórkowy poziom ROS, poprawiało poziom wewnątrzkomórkowych enzymów antyoksydacyjnych i ostatecznie odwracało cytotoksyczność indukowaną przez H2O2- w komórkach PC12. Co więcej, PhG zwiększyły aktywację transkrypcyjną Nrf2, odwróciły indukowaną HzOz regulację w dół ekspresji białek HO-1, NQO1, GCLC i GCLM. Ponadto PhG wykazywały potencjalną interakcję z miejscem wiązania Nrf2 w białku Keap1.

W uszkodzeniu komórek PC12 wywołanym przez H2O2-, peroksydacja lipidów, która odnosi się do oksydacyjnej degradacji lipidów, zwiększa przepuszczalność błon, prowadząc do uszkodzenia komórek [29]. Tworzenie MDA jest powszechnie stosowane jako wskaźnik peroksydacji lipidów [30]. H2O2 zwiększył produkcję ROS i wyczerpał enzymy obrony antyoksydacyjnej, takie jak SOD, katalaza i GPx. Proces ten prowadzi do stresu oksydacyjnego [31], który odgrywa kluczową rolę w powstawaniu i progresji większości zaburzeń neurodegeneracyjnych. Zgodnie z poprzednimi badaniami zaobserwowaliśmy podwyższony poziom ROS, zmniejszenie wewnątrzkomórkowych enzymów antyoksydacyjnych i zwiększoną apoptozę komórek PC12 po leczeniu H2O2. Wstępne traktowanie PhG znacznie osłabiło wywołany HzOz wzrost wewnątrzkomórkowych ROS, poprawiło wewnątrzkomórkowe enzymy antyoksydacyjne i ostatecznie odwróciło cytotoksyczność indukowaną HzOz w komórkach PC12.

Kuang i in. [32] donieśli, że echinakozyd wykazywał istotny wpływ neuroprotekcyjny na cytotoksyczność indukowaną przez H2O2-w komórkach PC12 poprzez mitochondrialny szlak apoptotyczny. W tym badaniu odkryliśmy, że echinakozyd, salidrozyd, akteozyd i izoakteozyd wykazywały działanie neuroprotekcyjne poprzez zwiększenie aktywności antyoksydacyjnej komórek PC12, ponieważ zwiększały aktywację transkrypcyjną Nrf2 i regulowały ekspresję białek HO-1, NQO1 w dół rzeki. GCLC i GCLM. Liczne badania wyraźnie wykazały, że aktywacja docelowych genów Nrf2, w szczególności HO-1, w astrocytach i neuronach silnie chroni przed zapaleniem, uszkodzeniem oksydacyjnym i śmiercią komórki. Stwierdzono, że układ HO-1 jest bardzo aktywny w ośrodkowym układzie nerwowym, a jego modulacja najwyraźniej odgrywa kluczową rolę w patogenezie zaburzeń neurodegeneracyjnych [33]. Ostatnie badania wyjaśniły również rolę Nrf2 w progresji i ryzyku PD [9] oraz Keap1 jako skutecznego celu reaktywacji Nrf2 w AD [34]. Wyniki potwierdzają nowe dowody na Nrf2 jako cel terapeutyczny w chorobach neurodegeneracyjnych.

Analiza dokowania molekularnego wykazała, że ​​PhG mogą wiązać się z Keap1 z następującymi zdolnościami wiązania: echinakozyd > izoakteozyd > akteozyd > salidrozyd. Zgodnie z tymi wynikami, wstępne traktowanie PhG doprowadziło do translokacji jądrowej Nrf2 z następującą ekspresją Nrf2 w jądrze: echinakozyd > izoakteozyd * akteozyd > salidrozyd. Założyliśmy, że liczba glikozydów wpływała na możliwy tryb wiązania PhG i Keap1, a tryb wiązania dalej powodował uwalnianie Nrf2 z Keap1. Proces ten spowodował aktywację Nrf2 i dalszych genów, a ostatecznie chroni komórki PC12 przed stresem oksydacyjnym indukowanym przez H2 O2 -.

Neuroprotekcyjne działanie cistanchePhGs

4. Materiały i metody

4.1. Związki chemiczne i odczynniki

Salidroside (nr CAS {{0}}), akteozyd (nr CAS 61276-17-3), izoakteozyd (nr CAS 61303-13-7) i echinakozyd (nr CAS {{3} }) zakupiono od YYuanye Biotechnology Company (Szanghaj, Chiny). PhG rozpuszczono w PBS w celu wytworzenia roztworu podstawowego 10 mg/ml, który przechowywano w -20 stopniu. H2O2 zakupiono od Aladdin® (Szanghaj, Chiny). Pożywkę RPMI-1640 i płodową surowicę bydlęcą zakupiono od Hyclone (Logan, UT, USA), a 0,5% trypsynę EDTA, penicylinę i streptomycynę zakupiono od Keyi (Hangzhou, Chiny). Zestawy diagnostyczne MDA, SOD, MTT i DCFH-DA zakupiono z Beyotime Institute of Biotechnology (Nanjing, Jiangsu, Chiny). Zestaw do podwójnego barwienia Annexin V-FITC/PI zakupiono od Solarbio Life Sciences (Pekin, Chiny). Przeciwciała przeciwko Nrf2, histonowi H3, Keap1, HO-1, NQO1, GCLC, GCLM i p-aktynie, IgG przeciwko nadtlenkowi chrzanu myszy (HRP) i przeciwko króliczym HRP-IgG zakupiono od Abcam (Londyn, Wielka Brytania). Inhibitory HO-1 i ZnPP zakupiono od Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). RNAiso Plus, zestaw odczynników PrimeScript™RT z gDNA Eraser i SYBR® Premix Ex Taq™ II zostały zakupione w Takara (Shiga, Japonia). Odczynnik do transfekcji Lipofectamine® RNAiMAX zakupiono od Thermo Fisher Scientific (Waltham, UK). Sekwencje siRNA Nrf2 były następujące: forward, CCGAAUUACAGUGUCUUAA; i na odwrocie, UUAAGACACUGUAAUUCGG. Tymczasem kontrolne sekwencje siRNA były następujące: forward, UUCUCCGAACGUGUCACGU; i na odwrocie, ACGUGACACGUUCGGAGAA.

4.2. Hodowlę komórkową

Linię guza chromochłonnego nadnerczy myszy (komórki PC12) uzyskano z Instytutu Biochemii i Biologii Komórki, SIBS, (CAS, Szanghaj, Chiny). Komórki utrzymywano w RPMI-1640 (Hyclone) zawierającym 10 procent płodowej surowicy bydlęcej (Hyclone), 100 U/ml penicyliny i 0,1 mg/ml streptomycyny w 37°C z 5% CO2. Medium zmieniano co drugi dzień.

4.3. Test żywotności komórki

Komórki PC12 wysiano na płytkach 96-studzienkowych w ilości 2 x 104 komórek/studzienkę. Po przyłączeniu komórki wstępnie inkubowano z lub bez inhibitora przez 20 min, inkubowano z lub bez PhG przez 24 godziny, a następnie inkubowano z H2O2 przez kolejne 2 godziny po usunięciu PhG. Po inkubacji komórki traktowano 5 mg/ml MTT przez 4 godziny w 37°C i ostrożnie usunięto pożywkę. Kryształy formazanu, które utworzyły się przez przeżywające komórki, rozpuszczono w 150 µl DMSO w celu wytworzenia niebieskiego koloru [35] i zmierzono absorbancję przy 570 nm na czytniku płytek. Kontrole wykorzystywały to samo stężenie pożywki z samym DMSO. Żywotność komórek znormalizowano jako procent kontroli.

Stężenia PhGs (0.1,1,5 i 10 Rg/ml) dobierano w zależności od analizy cytotoksyczności PhG i odnotowanego efektu cytoochronnego echinakozydu [32]. Zgodnie z raportem, nie wykazano efektu cytotoksyczności poniżej 10 μg/ml, a echinakozyd wykazywał działanie cytoochronne w modelu komórek uszkodzonych HzOz.

4.4. Test apoptozy

Apoptozę wykryto za pomocą zestawu do podwójnego barwienia Annexin V-FITC/PI (Solarbio). Komórki PC12 wysiano na 6-dołkowych płytkach w ilości 2 x 105 komórek/dołek. Po przyłączeniu komórki traktowano PhG (0,1 i 10 µg/ml) przez 24 godziny i inkubowano z H2O2 przez kolejne 2 godziny po usunięciu PhG. Po inkubacji komórki przemyto zimnym PBS, odwirowano dwukrotnie przy 1500 obr./min przez 10 min i ponownie zawieszono w 500 µl buforu wiążącego. Aneksyna V znakowana FITC (5 µl) i jodek propidyny.

Skróty

GCLC podjednostka katalityczna ligazy glutaminianowo-cysteinowej

GCLM podjednostka modyfikatora katalitycznego ligazy glutaminianowo-cysteinowej

nadtlenek wodoru H2O2

HO-1 oksygenaza hemowa 1

Keap1 Kelch ECH białko asocjacyjne 1

NQO1 NAD(P)H oksydoreduktaza chinonowa 1

Nuklearny czynnik erytroidalny Nrf2 2-powiązany czynnik 2

PhGs salidrozyd, akteozyd, izoakteozyd i echinakozyd

reaktywne formy tlenu ROS

Protoporfiryna cynkowa ZnPP

Ekstrakt z Cistanche deserticola: PHG cistanche

Bibliografia

1. Słońce, AY; Chen, YM Stres oksydacyjny i zaburzenia neurodegeneracyjne. J. Biomed. Nauka. 1998, 5, 401-414. [Odsyłacz] [PubMed]

2. Maheshwari, A.; Mikro, MM; Aggarwal, A.; Szarma, RK; Nandan, D. Ścieżki zaangażowane w apoptozę jąder komórek zarodkowych indukowaną przez H2O2 in vitro. FEBS J. 2009,276, 870-881. [Odsyłacz] [PubMed]

3. Halliwell, B. Reaktywne formy tlenu a ośrodkowy układ nerwowy. J. Neurochem. 1992, 59,1609-1623. [Odsyłacz] [PubMed]

4. Richardson, JS; Subbarao, KV; Ang, LC O możliwej roli indukowanej żelazem peroksydacji wolnych rodników w zwyrodnieniu nerwowym w chorobie Alzheimera. Anny. Akademia Nowego Jorku. Nauka. 1992, 648, 326-327. [Odsyłacz] [PubMed]

5. Zhang, DD Mechanistyczne badania szlaku sygnałowego Nrf2-Keap1. Metab. 2006, 38, 769-789. [Odsyłacz] [PubMed]

6. Ito, K.; Tong, KI; Yamamoto, M. Molecular mechanizm aktywujący szlak Nrf2-Keap1 w regulacji odpowiedzi adaptacyjnej na elektrofile. Wolna Rada. Biol. Med. 2004, 36, 1208-1213. [Odsyłacz] [PubMed]

7. Kong, AN; Owuor, E.; Yu, R.; Hebbar, V.; Chen, C.; Hu, R.; Mandlekar, S. Indukcja enzymów ksenobiotycznych przez szlak kinazy mapy i element odpowiedzi przeciwutleniającej lub elektrofilowej (ARE / EpRE). Metab. Rev 2001, 33, 255-271. [Odsyłacz] [PubMed]

8. Buendia, I.; Michalska P.; Navarro, E.; Gameiro, I.; Egea, J.; Leon, R. Nrf2-ARE path: nowy cel przeciwko stresowi oksydacyjnemu i zapaleniu układu nerwowego w chorobach neurodegeneracyjnych. Pharmacol. Tam. 2016, 157, 84-104. [Odsyłacz] [PubMed]

9. Skibiński, G.; Hwang, V; Ando, ​​DM; Daub, A.; Lee, AK; Ravisankar, A.; Modan, S.; Finucane, MM; Shabby, BA; Finkbeiner, S. Nrf2 łagodzi LRRK2- i neurodegenerację indukowaną przez α-synukleinę poprzez modulowanie proteostazy. Proc. Natl. Acad. Nauka. USA 2016, 114, 1165-1170. [Odsyłacz] [PubMed]

10. Jimenez, C.; Riguera, R. Glikozydy fenyloetanoidowe w roślinach: Struktura i aktywność biologiczna. Nat. Szturchać. Rep. 1994, 11, 591-606. [Odsyłacz] [PubMed]

11. Georgiew, M.; Alipiewa, K.; Orhan, I.; Abrashev, R.; Denew, P.; Angelova, M. Działanie przeciwutleniające i hamujące cholinoesterazy Verbascum xanthophoeniceum Griseb. i jego glikozydy fenyloetanoidowe. Chemia Spożywcza 2011, 128, 100-105. [Odsyłacz] [PubMed]

12. Li, N.; Wang, J.; Ma, J.; Gu, Z.; Jiang, C.; Yu, L.; Fu, X. Neuroprotekcyjne działanieCistanches HerbaTerapia pacjentów z umiarkowaną chorobą Alzheimera. Uzupełnienie oparte na dowodach. Alternatywnie. Med. 2015, 2015,103985. [Odsyłacz] [PubMed]

13. Liu, YL; On, WJ; Mo, L.; Shi, MF; Zhu, YY; Pan, S.; Li, XR; Xu, QM; Yang, SL Działanie przeciwdrobnoustrojowe, przeciwzapalne i toksykologiczne glikozydów fenyloetanoidowych z Monochasma savatieri Franch. ex Maxim. J. Etnofarmakol. 2013,149, 431-437. [Odsyłacz] [PubMed]

14. Dong, Q.; Yao, J.; Kieł, JN; Ding, K. Charakterystyka strukturalna i aktywność immunologiczna dwóch ekstrahowanych zimną wodą polisacharydów zCistanche deserticola YC Ma. Węglowodan. Res. 2007, 342,1343-1349. [Odsyłacz] [PubMed]

15. Xiong, L.; Mao, S.; Lu, B.; Yang, J.; Zhou, F.; Hu, Y.; Jiang, Y.; Shen, C.; Ekstrakt z kwiatów Zhao, Y. Osmanthusfragrans i akteozyd chronią przed starzeniem indukowanym d-galaktozą w modelu myszy ICR. J. Med. Jedzenie 2016, 19, 54-61. [Odsyłacz] [PubMed]

16. Jiang, Y.; Mao, S.; Huang, W.; Lu, B.; Cai, Z.; Zhou, F.; Li, M.; Lou, T.; Zhao, Y. Profile glikozydów fenyletanoidowych i działanie przeciwutleniające osmanthusfragrans Lour. Kwiaty według UPLC/PDA/MS i symulowanego modelu trawienia. J. Rolnictwo. Chemia Spożywcza 2016, 64, 2459-2466. [Odsyłacz] [PubMed]

17. Li, X.; Tak, X.; Li, X.; Słońce, X.; Liang, Q.; Tao, L.; Kang, X.; Chen, J. Salidroside chroni przed apoptozą wywołaną MPP plus w komórkach PC12 poprzez hamowanie szlaku NO. Mózg Res. 2011,1382, 9-18. [Odsyłacz] [PubMed]

18. Zhang, L.; Ding, W.; Słońce, H.; Zhou, Q.; Huang, J.; Li, X.; Xie, Y.; Chen, J. Salidroside chroni komórki PC12 przed apoptozą wywołaną MPP plus poprzez aktywację szlaku PI3K/Akt. Chemia Spożywcza Toksykol. 2012, 50, 2591-2597. [Odsyłacz] [PubMed]

19. Sheng, GQ; Zhang, JR; Pu, XP; Ma, J.; Li, CL Ochronne działanie werbaskozydu na neurotoksyczność indukowaną jonem 1-metylo-4- fenylopirydyniowym w komórkach PC12. Eur. J. Pharmacol. 2002, 451, 119-124. [Odn.]

20. Wang, H.; Xu, Y.; Yan, J.; Zhao, X.; Słońce, X.; Zhang, Y.; Guo, J.; Zhu, C. Acteoside chroni ludzkie komórki nerwiaka niedojrzałego SH-SY5Y przed uszkodzeniem komórek wywołanym przez beta-amyloid. Mózg Res. 2009, 1283, 139-147. [Odsyłacz] [PubMed]

21. Min., D.; Jin, YZ; Yong, J.; Zheng, BL; Yao, HW Echinakozyd ratuje komórki neuronalne SHSY5Y przed apoptozą indukowaną TNFa. Podbródek. Pharmacol. Byk. 2005, 505, 11-18.

22. Zhao, Q.; Gao, Japonia; Li, WW; Cai, DF Efekty neurotroficzne i neuroratunkowe echinakozydu w podostrym mysim modelu choroby Parkinsona z MPTP. Mózg Res. 2010,1346, 224-236. [Odsyłacz] [PubMed]

23. Koo, KA; Śpiewane, SH; Park, JH; Kim, SH; Lee, KY; Kim, YC In vitro neuroprotekcyjne działanie glikozydów fenyloetanoidowych z dychotoma Callicarpa. Planta Med. 2005, 71, 778-780. [Odsyłacz] [PubMed]

24. Liu, YG; Li, X.; Xiong, C.; Yu, B.; Pu, X.; Tak, XS Syntetyczne pochodne glikozydów fenyloetanoidowych jako potencjalne środki neuroochronne. Eur. J. Med. Chem. 2015, 95, 313-323. [Odsyłacz] [PubMed]

25. Fu, G.; Pang, H.; Wong, YH Naturalnie występujące glikozydy fenyloetanoidowe: Potencjalne wskazówki dla nowych leków. Aktualn. Med. Chem. 2008, 15, 2592-2613. [Odsyłacz] [PubMed]

26. Greene, LA; Tischler, AS Założenie noradrenergicznej linii klonalnej komórek guza chromochłonnego nadnerczy szczura, które odpowiadają na czynnik wzrostu nerwów. Proc. Natl. Acad. Nauka. USA 1976, 73, 2424-2428. [Odsyłacz] [PubMed]

27. Liang, QN; Sheng, YC; Jiang, P.; Ji, LL; Xia, YY; Min, Y.; Wang, ZT Różnica systemu antyoksydacyjnego glutationu w wątrobie świeżo odsadzonych i młodych myszy i jego udział w hepatotoksyczności indukowanej przez izolinę. Łuk. Toksykol. 2011, 85, 1267-1279. [Odsyłacz] [PubMed]

28. Kobayashi, A.; Kang, M.; Okawa, H.; Ohtsuji, M.; Zenke, Y; Chiba, T.; Igarashi, K.; Yamamoto, M. Czujnik stresu oksydacyjnego Keap1 działa jako adapter dla ligazy E3 opartej na Cul3- w celu regulacji degradacji proteasomów Nrf2. Mol. Komórka. Biol. 2004,24, 7130-7139. [Odsyłacz] [PubMed]

29. Korneliusz, C.; Crupi, R.; kalabryjska, V; Graziano A.; Milone, P.; Pennisi, G.; Radak Z.; Kalabryjski, EJ; Cuzzocrea, S. Urazowe uszkodzenie mózgu: stres oksydacyjny i neuroprotekcja. Przeciwutleniacz. Sygnał redoks. 2013, 19, 836-853. [Odsyłacz] [PubMed]

30. Hou, Z.; Luo, W.; Słońce, X.; Hao, S.; Zhang, Y.; Xu, F.; Wang Z.; Liu, B. Sól fizjologiczna bogata w wodór chroni przed uszkodzeniami oksydacyjnymi i deficytami poznawczymi po łagodnym urazowym uszkodzeniu mózgu. Mózg Res. Byk. 2012, 88, 560-565. [Odsyłacz] [PubMed]

31. Ansari, MA; Roberts, KN; Scheff, SW Przebieg w czasie stresu oksydacyjnego wywołanego stłuczeniem i białek synaptycznych w korze mózgowej w szczurzym modelu TBI. J. Neurotrauma 2008, 25, 513-526. [Odsyłacz] [PubMed]

32. Kuang, R.; Słońce, Y.; Yuan, W.; Lei, L.; Zheng, X. Ochronne działanie echinakozydu, jednego z glikozydów fenyloetanoidowych, na cytotoksyczność indukowaną przez H2O2-w komórkach PC12. Planta Med. 2009, 75, 1499-1504. [Odsyłacz] [PubMed]

33. Scapagnini, G.; Vasto, S.; Abrahama, NG; Caruso, C.; Zella, D.; Fabio, G. Modulacja ścieżki Nrf2/ARE przez polifenole spożywcze: strategia neuroprotekcyjna żywieniowa dla zaburzeń poznawczych i neurodegeneracyjnych. Mol. Neurobiol. 2011, 44, 192-201. [Odsyłacz] [PubMed]

34. Kerr, F.; Sofolaadesakin, O.; Iwanow, Dania; Gatliff, J.; Gomez, PB; Bertranda, HC; Martinez, P.; Callard, R.; Snoeren, I.; Cochem, HM Direct Keap1-zakłócenie Nrf2 jako potencjalny cel terapeutyczny w chorobie Alzheimera. PLoS Genet. 2017, 13, e1006593. [Odsyłacz] [PubMed]

35. Hansen, MB; Nielsen, SE; Berg, K. Ponowne badanie i dalszy rozwój precyzyjnej i szybkiej metody barwienia do pomiaru wzrostu komórek/uśmiercania komórek. J. Immunol. Metody 1989, 119, 203-210. [Odn.]

36. Press, C. Wirtualne badania przesiewowe w odkrywaniu leków; Crc Press: Boca Raton, Floryda, USA, 2005.

37. Muegge, I.; Marcina, YC; Hajduka, PJ; Fesik, SW Ocena punktacji PMF w przyłączaniu słabych ligandów do białka wiążącego FK506. J. Med. Chem. 1999, 42, 2498—2503. [Odsyłacz] [PubMed]

38. Kuntz, ID; Blaney, JM; Oatley, SJ; Langridge, R.; Ferrin, TE Geometryczne podejście do oddziaływań makrocząsteczka-ligand. J. Mol. Biol. 1982,161, 269-288. [Odn.]

39. MD, E.; Murray, CW; Auton, TR; Paoliniego, GV; Mee, RP Empiryczne funkcje scoringowe: I. Opracowanie szybkiej empirycznej funkcji scoringowej do oceny powinowactwa wiązania ligandów w kompleksach receptorowych. J. Comput.-Aided Mol. Des. 1997,11,425-445.

© 2018 przez autorów. Licencjobiorca MDPI, Bazylea, Szwajcaria. Ten artykuł jest artykułem z otwartym dostępem rozpowszechnianym na warunkach licencji Creative Commons Attribution (CC BY) (http:ZZcreativecommons.org/licenses/byZ4.0Z).