Nowe obiecujące ścieżki terapeutyczne kurkuminy w chorobach mózguⅡ

3. Efekty terapeutyczne kurkuminy w chorobie Parkinsona

PD jest drugą najczęstszą chorobą neurodegeneracyjną po AD. Szacuje się, że w 2020 r. na PD na całym świecie będzie cierpieć 10 mln osób (https://www.epda.eu.com/, dostęp 27 października 2021 r.) [72]. PD wpływa głównie na neurony wytwarzające dopaminę w istocie czarnej śródmózgowia, prowadząc do poważnych dysfunkcji motorycznych i poznawczych. W idiopatycznej chP mechanizmy patofizjologiczne obejmują produkcję β-synukleiny i mitochondrialnego kompleksu I wpływającego na dysfunkcję oddechową, spowodowanego przez ROS [73]. Charakteryzuje się również akumulacją agregatów białkowych, składających się głównie z -synukleiny, z powodu niewydolności mechanizmów degradacji białek, takich jak układ lizosomalny [74,75].

Kliknij, aby otrzymać organiczny cistanche na chorobę Alzheimera i chorobę Parkinsona

Większość istniejących metod leczenia ma charakter wyłącznie objawowy. Obejmuje to suplement dopaminy, który tymczasowo kontroluje dysfunkcję motoryczną spowodowaną degeneracją dopaminergicznego układu nigrostriatalnego. Głęboka stymulacja mózgu (DBS) jest stosowana w lekoopornej chorobie Parkinsona. Aby zapobiec stresowi oksydacyjnemu i zmniejszyć postęp choroby, stosowanie naturalnych przeciwutleniaczy pozostaje potencjalną terapią alternatywną. Biorąc pod uwagę neuroprotekcyjne, przeciwzapalne i przeciwutleniające działanie kurkuminy na neurodegenerację wywołaną stresem, omawiamy tutaj ostatnie odkrycia związane z korzystnym działaniem kurkuminy w zmniejszaniu progresji PD i zapobieganiu [12].

Chociaż patogeneza PD jest nadal w dużej mierze niejasna, zaproponowano kilka mechanizmów i różne dowody potwierdzają ważną rolę dysfunkcji mitochondriów w patogenezie PD [76]. Niedawne badanie donosi o ochronnym działaniu kurkuminy przed dysfunkcją mitochondriów i śmiercią komórek w modelu PD z powaleniem PINK1 za pośrednictwem siRNA [77]. Inne badanie opisuje wpływ kurkuminy na dysfunkcję mitochondriów w modelu toksyczności parakwatu w PD, w fibroblastach pochodzących z LRRK{6}}dodatniej mutacji PD i kontroli zdrowia.

Wstępne traktowanie tego modelu komórkowego kurkuminą przed leczeniem parakwatem poprawiło maksymalne oddychanie i oddychanie związane z ATP bez wpływu na wydolność oddechową. Po leczeniu parakwatem późniejsze leczenie fibroblastów kurkuminą nie poprawiło oddychania mitochondrialnego w odniesieniu do trzech parametrów (oddychanie maksymalne, oddychanie związane z ATP i zapasowa pojemność oddechowa), co sugeruje zapobiegawcze działanie kurkuminy przed wystąpieniem choroby Parkinsona. 78]. Niedawne badanie przeprowadzone przez Motawi i in. [79] badający wpływ kurkuminy i suplementów diety na mysi model choroby Parkinsona z rotenonem wykazali ogólną statystycznie istotną poprawę.

Rzeczywiście, podawanie kurkuminy myszom leczonym rotenonem poprawiło poziom β-synukleiny i zmniejszyło liczbę ciałek Lewy'ego. Zachowanie zwierząt również uległo poprawie, a poziomy mediatorów stanu zapalnego zostały znacząco obniżone u myszy leczonych kurkuminą w porównaniu z grupą kontrolną. Należą do nich IL{3}}, CRP i Ang II, u których wcześniej wykazano działanie prozapalne i prozwłóknieniowe, które przyczyniają się do postępującego pogorszenia funkcji narządów w PD [80]. Podczas oceny markerów PD stwierdzono znaczny spadek poziomu ekspresji genu adenozyny A2AR u myszy leczonych kurkuminą w porównaniu z grupą otrzymującą rotenon. Inną obiecującą poprawę poziomów dopaminy i serotoniny odnotowano w mysich modelach choroby Parkinsona leczonych kurkuminą.

Ponadto leczenie kurkuminą prowadzi do zmniejszenia stresu oksydacyjnego w mysich modelach PD [79]. Inne dowody potwierdzające wskazują na podobne wyniki w szczurzych modelach PD z wyższymi reakcjami szczurów na leczenie kurkuminą w odniesieniu do stresu oksydacyjnego i wskaźników energetycznych. Dlatego kurkumina łagodziła poważne skutki PD w modelu szczurzym i może być postrzegana jako potencjalny suplement diety [81]. Dowody z literatury wykazały, że upośledzenie szlaku autofagii-lizosomu (ALP) odgrywa kluczową rolę w patogenezie PD. Niedawne badanie skupiło się na wpływie kurkuminy na oligomer alfa-synukleiny (S) za pomocą metody symulacji dynamiki molekularnej i wykazało, że kurkumina zmniejsza stabilność strukturalną oligomeru S poprzez zaburzanie jego ogólnych właściwości.

Ponadto kurkumina zapobiegała agregacji oligomerów β-synukleiny i hamowała tworzenie się fibryli [82]. Ze względu na zdolność kurkuminy do zmniejszania nieprawidłowo sfałdowanej β-synukleiny poprzez promowanie autofagii, ostatnie badania dotyczyły jej wpływu na regulację autofagii. Tak więc traktowanie modelu komórkowego dla PD wykazało zwiększoną ekspresję łańcucha lekkiego 3 związanego z mikrotubulami białka 1 (LC3-II), oznaczanie białka osocza jądrowego jądrowego czynnika transkrypcyjnego EB (TFEB) i autofagii- pokrewne białko białko błony lizosomu 2 (ALAMP2A).

Powoduje to promowanie syntezy autofagii-lizosomu i autofagicznego klirensu -synukleiny [83,84]. TFEB został zidentyfikowany jako jeden z kluczowych kluczowych regulatorów autofagii i biogenezy lizosomów [85, 86]. Potwierdziło to hipotezę, że TFEB można uznać za nowy cel terapeutyczny PD. Pochodna kurkuminy, zwana E4 (analog kurkuminy), była w stanie aktywować i promować translokację TFEB z cytoplazmy do jądra.

Tej translokacji towarzyszy stymulacja autofagii i biogenezy lizosomalnej. Mechanicznie związek E4 aktywował TFEB poprzez hamowanie szlaku AKT-MTORC1. Dodatkowo, w modelach komórek PD wykazano, że E4 zmniejsza poziomy β-synukleiny i chroni przed cytotoksycznością MPP plus (jon 1-metylo-4- fenylopirydyniowy) w komórkach nerwowych. Te obiecujące dane pokazujące działanie ochronne E4 in vitro wymagają jednak dalszych testów eksperymentalnych in vivo, ponieważ biodostępność E4 w mózgu wciąż nie jest znana. Skuteczność neuroprotekcyjna E4 wymaga dalszych badań na modelach zwierzęcych PD [87].

Ponadto dootrzewnowe wstrzyknięcie kurkuminy in vivo promowało ekspresję białka LC{0}}II i hamowało ekspresję P62 na korzyść autofagii. Kurkumina hamowała ekspresję synukleiny i apoptozę neuronów dopaminowych w mysim modelu PD indukowanym MPTP (kurkumina 80 mg/kg przez 14 dni) i poprawiała zaburzenia ruchowe u myszy [33]. Wykazano, że znieczulenie sewofluranem wywołuje upośledzenie funkcji poznawczych poprzez aktywację autofagii w hipokampie młodych myszy [88]. Co ciekawe, kurkumina była w stanie modulować autofagię przy 300 mg/kg przez sześć dni i hamować upośledzenie pamięci u myszy wywołane sewofluranem [89].

Ochronne działanie kurkuminy badano przy podawaniu doustnym w 6-hydroksyloaminie (6-}OHDA) - zwierzęcym modelu choroby Parkinsona. Neuroprotekcyjne działanie kurkuminy w dawce (200 mg/kg) 2 tygodnie przed i po zabiegu oceniono na podstawie analiz morfologicznych i behawioralnych. Czynność motoryczną oceniano trzy tygodnie po operacji. Kurkumina znacznie poprawiła nieprawidłowe zachowanie motoryczne i wykazano, że chroni przed zmniejszonymi neuronami dopaminergicznymi w istocie czarnej i jądrze ogoniastym skorupy, jak wykazano przez immunoreaktywność hydroksylazy tyrozynowej (TH).

Dootrzewnowe podanie metyloglikakonityny, selektywnego antagonisty 7-nAChR, odwróciło te neuroprotekcyjne działanie. Potwierdziło to implikację 7-nAChR w efektach, w których pośredniczy kurkumina. W tym badaniu wykazano, że kurkumina ma działanie neuroprotekcyjne w szczurzym modelu PD 6-hydroksylaminy ({5}}}OHDA) poprzez mechanizm, w którym pośredniczy 7- nAChR [90]. Zhang i in. wykazali, że ekspresja G2385R-LRRK2 indukowała neurodegenerację w ludzkim nerwiaku niedojrzałym SH-SY5Y i mysich neuronach pierwotnych. Ta neurotoksyczność, w której pośredniczy stres oksydacyjny, powoduje aktywację szlaku apoptozy.

Kurkumina, która wykazuje działanie przeciwutleniające, znacząco chroni przed połączonym G2385R-LRRK{2}}indukowanym neurodegeneracją poprzez osłabienie mitochondrialnych poziomów ROS, aktywację kaspazy -3/7 i rozszczepienie PARP oraz zmniejszenie środowiskowego stresora komórkowego H2O2 (Rysunek 2). Wyniki te dostarczają nowych informacji na temat mechanizmów neurodegeneracji związanej z G2385R-LRRK{10}}i potencjalnego efektu terapeutycznego kurkuminy u pacjentów z chorobą Parkinsona będących nosicielami G2385R [91].

Oprócz omówionych powyżej mechanizmów neuroprotekcyjnych kurkuminy przeciwko PD, nowe rosnące zainteresowanie osią jelitowo-mózgową w PD może wyjaśnić neuroprotekcyjne właściwości kurkuminy pomimo jej ograniczonej biodostępności. Kurkumina może działać pośrednio na ośrodkowy układ nerwowy poprzez oś mikrobiota-jelito. Złożony system dwukierunkowy, który odgrywa zasadniczą rolę w zdrowiu mózgu, pozostaje nie do końca poznany. Ostatnie badania wykazały, że kurkumina przywraca dysbiozę mikrobiomu jelitowego. Dysbiozę definiuje się jako stabilny stan społeczności drobnoustrojów, który funkcjonalnie przyczynia się do etiologii, diagnozy lub leczenia choroby [92].

Jednak modyfikacje kurkuminy przez bakterie nie tworzą bardziej aktywnego metabolitu kurkuminy [93]. Ta wzajemna interakcja może utrzymać zrównoważone funkcje fizjologiczne i odgrywać kluczową rolę w neuroprotekcji i zapobieganiu rozwojowi i progresji PD. Pomimo zwiększonego zainteresowania badawczego związanymi z PD objawami niemotorycznymi, takimi jak depresja, zaburzenia węchowe, zaparcia, sen i zaburzenia zachowania, wpływ kurkuminy na PD wymaga dalszych badań.

Podsumowując, kurkumina wykazała obiecujące efekty w leczeniu PD (tabela S1) (patrz ryc. 1). Jednak zbadanie większej liczby preparatów kurkuminy w modelach in vivo i badaniach klinicznych zapewniłoby dalszy postęp w stosowaniu kurkuminy jako terapii zapobiegawczej w celu zablokowania lub spowolnienia początku choroby Parkinsona.

4. Kurkumina jako kandydat do terapii w SM

Stwardnienie rozsiane jest przewlekłą, neurozapalną, autoimmunologiczną chorobą demielinizacyjną OUN u młodych dorosłych, która dotyka miliony ludzi [94]. Stwardnienie rozsiane jest związane z kilkoma procesami patofizjologicznymi, w tym przewlekłym stanem zapalnym, zmienionym układem odpornościowym, naruszeniem BBB w postaci epizodów rzutowo-remisyjnych (RR), naciekiem dużej liczby leukocytów, stresem oksydacyjnym, demielinizacją, która w konsekwencji prowadzi do uszkodzenia aksonów i neuronów, remielinizacją i aktywacji systemów naprawczych [95–98].

Chociaż podstawowa przyczyna stwardnienia rozsianego jest nadal nieznana, naukowcy uważają, że stwardnienie rozsiane jest chorobą wieloczynnikową, która obejmuje kombinację czynników genetycznych, środowiskowych i autoimmunologicznych, które przyczyniają się do ryzyka rozwoju stwardnienia rozsianego [99]. Początkowa faza zapalenia charakteryzuje się udziałem IL-22, IL{2}} i limfocytów T prowadzącymi do aktywacji kaskady zapalnej i innych cech patofizjologicznych SM, które są przyczyną demielinizacji i uszkodzenie aksonów [100].

Do tej pory dostępne jest tylko leczenie objawowe SM, które koncentruje się na leczeniu nawrotów i ustępowaniu epizodów choroby. Obecne leczenie stwardnienia rozsianego jest znane jako terapia modyfikująca przebieg choroby (DMT), w ramach której opracowano różne związki. Większość z tych terapii to związki immunomodulujące, zatwierdzone do leczenia różnych typów SM i ukierunkowane na różne szlaki patofizjologiczne [101,102]. Stosowane są inne strategie leczenia obejmujące stosowanie terapii komórkami macierzystymi, jak autologiczny przeszczep hematopoetycznych komórek macierzystych (aHSCT) oraz terapie monoklonalne zubażające limfocyty B [102].

Nawroty są dominującą cechą kliniczną RRMS, ale występują również w początkowej fazie wtórnie postępującej postaci SM [103]. Wybór strategii leczenia rzutowo-remisyjnej postaci SM (RRMS), występującej u 85–90% chorych na SM, pozostaje kontrowersyjny [104]. Wynika to ze zmienności objawów towarzyszących SM u każdej osoby. Pomimo wielu dostępnych terapii pojawiły się nowe wyzwania dotyczące identyfikacji odpowiedniej strategii terapeutycznej dla każdego przypadku. Ponadto profil bezpieczeństwa i skuteczności tych związków, jak również zrozumienie możliwych skutków ubocznych, pozostaje wyzwaniem.

Skutki uboczne, niepowodzenia terapii, doniesienia o toksyczności i wysokie koszty obecnych leków chemicznych to czynniki przemawiające za rozważeniem stosowania roślin leczniczych, w tym kurkuminy, do celów terapeutycznych. Ostatnio zidentyfikowano kilka właściwości kurkuminy, z których niektóre mogą być skuteczne w leczeniu SM, w szczególności jej właściwości przeciwzapalne poprzez hamowanie wydzielania cytokin prozapalnych (ryc. 1) [103].

Tutaj dokonamy przeglądu różnych właściwości i głównych efektów kurkuminy w leczeniu SM (Tabela S1). Biorąc pod uwagę nieodzowną rolę astrocytów w poprawie i wyzdrowieniu ze stwardnienia rozsianego, linia komórkowa ludzkich astrocytów (U373-}MG) została wykorzystana jako komórkowy model stwardnienia rozsianego we wcześniejszym badaniu [105]. W komórkach wstępnie traktowanych LPS kurkumina zmniejszała uwalnianie zarówno aktywności IL6, jak i MMP9, chociaż nie wpływała na poziom mRNA insulinopodobnego czynnika wzrostu (IGF)-1 ani neurotrofiny-3. Potwierdza to przeciwzapalne działanie kurkuminy na astrocyty w OUN [106]. Eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia (EAE) wytworzone przez wstrzyknięcie mieliny myszom zastosowano jako eksperymentalny model do badania SM.

Wzrasta również zainteresowanie kurkuminą jako potencjalnym kandydatem terapeutycznym na stwardnienie rozsiane. Co ciekawe, ostatnie odkrycia dotyczące wpływu kurkuminy na szczurze modele EAE wykazały, że spolimeryzowany nanoCUR (PNC) podawany w dawce 12,5 mg/kg miał skuteczny efekt terapeutyczny ze znaczącym wpływem na wyniki EAE i wykazał mechanizmy naprawy mieliny.

PNC zwiększył mielinizację poprzez ulepszony mechanizm naprawy, który indukuje wzmocnione czynniki neurotroficzne. Ponadto odwraca stan zapalny układu nerwowego wywołany przez EAE poprzez hamowanie ekspresji genów prozapalnych NF-kB, IL-1, IL-17, TNF- i MCP{6}} oraz zwiększanie aktywności anty- ekspresja genów zapalnych IL-4, IL-10, FOXP3 i TGF- . Ponadto PNC modulował ekspresję markerów stresu oksydacyjnego.

Co ciekawsze, wstępne leczenie PNC zwiększyło markery komórek progenitorowych i opóźniło rozwój EAE [27,107,108]. Biorąc pod uwagę znaczenie oligodendrocytów i ich niedojrzałych progenitorów, które są ważnymi celami strategii terapeutycznych w leczeniu chorób demielinizacyjnych, zbadano wpływ kurkuminy na oligodendrocyty. Badanie wpływu kurkuminy na różnicowanie progenitorów oligodendrocytów (OP), szczególnie w chorobach zapalnych, wykazało, że kurkumina poprawia różnicowanie OP poprzez zwiększoną ekspresję markerów związanych z różnymi etapami rozwoju.

Kurkumina była w stanie aktywować PPAR- w OP, wykazując zależną od kurkuminy translokację jądrową PPAR- [109]. Zdolność kurkuminy do promowania różnicowania OP w (niedojrzałe oligodendrocyty) OL obejmuje kilka mechanizmów, w tym aktywację PPAR i ERK1/2 oraz zapobieganie szkodliwym skutkom wywołanym przez TNF{7}}. Niedawne badanie potwierdziło skuteczność nanoformulacji kurkuminy na właściwości zapalne u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym. Rzeczywiście, kurkumina znacznie zmniejszyła ekspresję miRNA, w tym miR-145, miR-132, miR-16, a także mediatorów stanu zapalnego, takich jak STAT-1, NF-kB, AP -1, IL-1, IL-6, IFN-, CCL2, CCL5, TNF-.

Z drugiej strony nanoCUR wywołał znaczny wzrost poziomu ekspresji Sox2, Sirtuiny-1, Foxp3 i PDCD1. Ponadto poziomy wydzielania IFN-, CCL2 i CCL5 były drastycznie zmniejszone w grupie pacjentów leczonych kurkuminą w porównaniu z grupą placebo [110]. Komórki pomocnicze T 1 (Th1) i pomocnicze T 17 (Th17) są zaangażowane w patogenezę SM i uważa się, że są celami terapeutycznymi [111] (patrz Ryc. 2). Ostatnie badania na modelach EAE i pacjentach ze stwardnieniem rozsianym podkreśliły kluczową rolę komórek Th17 w pośredniczeniu w autoimmunologicznym zapaleniu nerwów. Uważa się, że Th17, prozapalna linia komórek efektorowych Th, jest najważniejszym producentem cytokin IL17 [112].

W związku z tym komórki te biorą udział w demielinizacji i degeneracji aksonów/neuronów. Co ciekawe, w porównaniu z grupą placebo odsetek komórek Th17 i poziom ekspresji ROR t i IL-17 były istotnie obniżone u pacjentów z SM, którzy otrzymywali cotygodniowe zastrzyki z interferonu -1a (Actovex) i suplementowali z NanoCUR przez 6 miesięcy [113]. Przede wszystkim wynik EDSS w grupie pacjentów z SM, którym suplementowano nanoCUR, wykazał lepszą jakość w porównaniu z grupą placebo. Ogólnie rzecz biorąc, nanoCUR może hamować postęp choroby u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym. Podsumowując, nanoCUR można potencjalnie postrzegać jako środek neuroprotekcyjny przeciwko postępowi SM, ukierunkowany przede wszystkim na właściwości zapalne SM.

Inne badania wykorzystujące modele EAE zasugerowały centralną rolę CD4 plus regulatorowych komórek T (Treg) w patogenezie i zaostrzeniach SM [114-117]. Należy podkreślić, że częstotliwość i funkcja tłumienia komórek Treg są upośledzone u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym [118, 119]. Inne niedawne badanie przeprowadzone przez Dolati i in. opisali wpływ nanoCUR na funkcję i częstotliwość Treg u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym. Jedna grupa otrzymywała efekty kapsułek nanoCUR przez co najmniej sześć miesięcy, inna grupa otrzymywała placebo jako grupa kontrolna. U pacjentów ze stwardnieniem rozsianym zaobserwowano zwiększoną częstość krążących Treg z wyższą ekspresją FoxP3.

Ogólnie rzecz biorąc, nanoformuła kurkuminy była w stanie obniżyć wynik EDSS u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym w porównaniu z wartością wyjściową, co sugeruje powrót do zdrowia po nawrotach, a nie rzeczywistą poprawę. Na podstawie powyższych wyników stwierdzono, że nanoCUR jest uważany za środek immunomodulujący poprzez regulację funkcji układu odpornościowego i zapobieganie autoreaktywności poprzez modulację proporcji i funkcji komórek Treg u pacjentów z SM [120].

Te obserwacje pokazują, że nanoCUR może przywrócić częstotliwość i funkcję komórek Treg u pacjentów ze stwardnieniem rozsianym, podkreślając pojawiające się mechanizmy terapeutyczne kurkuminy w leczeniu stwardnienia rozsianego jako strategii promowania remielinizacji.

Mechanizm choroby Cisanche przeciw chorobie Alzheimera i chorobie Parkinsona

Cistanche to tradycyjny chiński lek ziołowy stosowany od wieków w leczeniu różnych schorzeń, w tym choroby Alzheimera i choroby Parkinsona. Mechanizm działania Cistanche w tych chorobach nie jest do końca poznany, ale istnieje kilka potencjalnych sposobów, w jakie może on być korzystny.

Jednym z głównych sposobów, w jaki Cistanche może pomóc w chorobie Alzheimera, jest zmniejszenie produkcji blaszek beta-amyloidowych w mózgu. Uważa się, że blaszki te odgrywają kluczową rolę w rozwoju choroby Alzheimera, a ograniczenie ich produkcji może pomóc spowolnić lub zapobiec postępowi choroby.

Cistanche może mieć również działanie neuroprotekcyjne, pomagając chronić komórki mózgowe przed uszkodzeniem i degeneracją. Może to być szczególnie pomocne w chorobie Parkinsona, która charakteryzuje się degeneracją neuronów produkujących dopaminę w mózgu. Dodatkowo Cistanche może mieć działanie przeciwzapalne, które może pomóc zmniejszyć stan zapalny w mózgu i poprawić funkcje poznawcze. Uważa się, że stan zapalny odgrywa rolę w rozwoju choroby Alzheimera i choroby Parkinsona.

Ciąg dalszy nastąpi...

Tarek Benameur 1,†, Giulia Giacomucci 2,† , Maria Antonietta Panaro 3,† , Melania Ruggiero 3 , Teresa Trotta 4 , Vincenzo Monda 4,5 , Ilaria Pizzolorusso 6 , Dario Domenico Lofrumento 7 , Chiara Porro 4,* i Giovanni Messina 4

1 Wydział Nauk Biomedycznych, College of Medicine, King Faisal University, Al-Ahsa 31982, Arabia Saudyjska; tbenameur@kfu.edu.sa

2 Wydział Neuronauki, Psychologii, Badań nad Lekami i Zdrowia Dziecka, Uniwersytet we Florencji, 50134 Florencja, Włochy; giuliagiacomucci.md@gmail.com

3 Biotechnologie i Biofarmacja, Wydział Nauk Biologicznych, Uniwersytet w Bari, 70125 Bari, Włochy; mariaantonietta.panaro@uniba.it (MAPA); melania.ruggiero@uniba.it (MR)

4 Wydział Medycyny Klinicznej i Doświadczalnej, Uniwersytet w Foggia, 71121 Foggia, Włochy; teresa.trotta@unifg.it (TT); vincenzo.monda@unicampania.it (maszyna wirtualna); Giovanni.messina@unifg.it (GM)

5 Zakład Medycyny Dietetycznej i Sportowej, Sekcja Fizjologii Człowieka, Katedra Medycyny Eksperymentalnej, Luigi Vanvitelli University of Campania, 81100 Neapol, Włochy

6 Oddział Neuropsychiatrii Dzieci i Młodzieży, Departament Zdrowia Psychicznego, ASL Foggia, 71121 Foggia, Włochy; ilaria.pizzolorusso@virgilio.it

7 Wydział Nauk i Technologii Biologicznych i Środowiskowych, Sekcja Anatomii Człowieka, Uniwersytet w Salento, 73100 Lecce, Włochy; dario.lofrumento@unisalento.it