Część Ⅰ: Możliwe znaczenie rozpuszczalnego receptora hormonu luteinizującego podczas rozwoju i dorosłości u chłopców i mężczyzn

Proste podsumowanie

Hormony rozrodcze hormon luteinizujący (LH) i ludzka gonadotropina kosmówkowa (hCG), oba agoniści receptora hormonu luteinizującego (LHCGR), są niezbędne do rozmnażania samców w okresie rozwoju i dorosłości. lHCGR ulega ekspresji i stymuluje produkcję testosteronu przez komórki Leydiga w jądrach. W tym badaniu wykazaliśmy, że rozpuszczalny LHCGR jest obecny we krwi, moczu i nasieniu zdrowych chłopców i mężczyzn, a także u pacjentów z aberracjami chromosomów płci. Pokazujemy, w jaki sposób krążące poziomy sLHCGR korelują z rozwojem dojrzewania płciowego, funkcją jąder i jakością nasienia oraz pokazujemy, że LHCGR jest uwalniany z płodowej ludzkiej tkanki innej niż gonadalna. HCG jest uwalniany do surowicy przez jądra i inne narządy, co sugeruje możliwą pozagonadalną rolę LH lub hCG u chłopców i mężczyzn.

Abstrakcyjny

Hormon luteinizujący (LH) i ludzka gonadotropina kosmówkowa (hCG) są agonistami receptora hormonu luteinizującego (LHCGR), który reguluje męskie funkcje rozrodcze. lHCGR może być uwalniany do płynów ustrojowych. Chcieliśmy ustalić, czy rozpuszczalny LHCGR jest markerem funkcji gonad. Przeprowadzono badania przekrojowe, podłużne i interwencyjne na 195 zdrowych chłopcach i mężczyznach oraz 396 mężczyznach z niepłodnością, niedoborem lub zespołem Klinefeltera (KS) w celu powiązania LHCGR mierzonego w surowicy, nasieniu, moczu i tętnicach wątroby/nerek z funkcją gonad . lHCGR mierzono in vitro i in vivo na modelach ludzkiej tkanki jąder i linii komórkowych, mysich modelach ksenoprzeszczepów, a wyniki Western blot u ludzi wykazały, że fragmenty LHCGR wykryto w podobnej wielkości surowicy i tkankach gonad przy użyciu trzech różnych przeciwciał. Nawet po ludzkich ksenoprzeszczepach test LHCGR-ELISA nie wykazał międzygatunkowej reaktywności krzyżowej ani niespecyficznych reakcji w surowicy myszy. W przeciwieństwie do tego, sLHCGR został uwolniony do pożywki hodowlanej po hodowli nerki i nadnercza ludzkiego płodu. Poziom sLHCGR w surowicy był istotnie niższy u zdrowych chłopców w okresie dojrzewania (p=0.0001). U zdrowych mężczyzn stężenie sLHCGR w surowicy było ujemnie skorelowane ze stosunkiem inhibiny B/FSH (-0,004, p=0,027). U niepłodnych mężczyzn stężenie sLHCGR w nasieniu było ujemnie skorelowane z FSH w surowicy (0,006, p=0,009), stężeniem plemników (-3,5, p=0,003) i całkowitą liczbą plemników ( -3.2, str.=0.007). Wstrzyknięcie hCG zmniejszyło sLHCGR w surowicy i moczu zdrowych mężczyzn (p <0,01). Podsumowując, sLHCGR jest uwalniany do płynów ustrojowych i jest związany z rozwojem dojrzewania i funkcją gonad. Krążący sLHCGR u samców orchidei sugeruje, że sLHCGR w surowicy może pochodzić z tkanek innych niż gonady i może funkcjonować w tkankach innych niż gonady. (Badania kliniczne: NTC01411527, NCT01304927, NCT03418896).

Słowa kluczowe

receptor LH; dojrzewanie; rozwój; bezpłodność;Korzyści Cistanche; skutki pozagonadalne; gonadotropiny; nerka płodu; nadnercza płodu; TCAM2; NTera2

Kliknij tutaj, aby kupićZiołowy Ekstrakt Cistanche

Wstęp

Hormon luteinizujący (LH) i ludzka gonadotropina kosmówkowa (hCG) są agonistami receptora hormonu luteinizującego (LHCGR), który jest niezbędny do męskiej reprodukcji w okresie rozwoju i dorosłości [1]. HCG jest receptorem sprzężonym z białkiem G, o którym wiadomo, że ulega ekspresji w komórkach Leydiga, ziarnistej luteinie i komórkach błonowych i jest silnym regulatorem produkcji steroidów płciowych [1]. hCG jest silnym i trwałym agonistą, ale ma znaczenie fizjologiczne tylko podczas rozwoju płodu [2]. Z wyjątkiem niektórych raków zarodkowych i raków trzustki, hCG nie jest wytwarzana w wieku dorosłym, chociaż wcześniejsze badanie wykazało niskie pulsacyjne wydzielanie hCG przysadki mózgowej u dorosłych mężczyzn i kobiet. hCG jest stosowany u kobiet w celu wywołania owulacji podczas leczenia niepłodności, u mężczyzn w celu stymulacji syntezy testosteronu i potencjalnej spermatogenezy u mężczyzn z hipogonadyzmem lub jako test diagnostyczny w kierunku endogennej produkcji testosteronu [4]. Ablacja mysiego receptora LH (LHCGR) prowadzi do dramatycznego spadku testosteronu i jakości nasienia [5], a kilka grup badawczych zidentyfikowało mutacje i SNP w LHCGR, wykazując jego znaczenie dla funkcji rozrodczych człowieka [6-8].

Gen LHCGR znajduje się na chromosomie 2 i składa się z 11 eksonów, z których eksony 1-10 kodują zewnątrzkomórkowe domeny strukturalne, a ekson 11 koduje 7 transbłonowych i wewnątrzkomórkowych domen strukturalnych [9]. Istnieje kilka izoform LHCGR, z których jedna jest uważana za wydzielaną, ponieważ nie ma kotwicy przezbłonowej [10]. Inną możliwością jest to, że uwalnianie LHCGR do płynów ustrojowych zależy od enzymatycznego rozszczepienia białek na błonie komórkowej, takich jak ADAM, MMP i inne znane rozszczepione białka transbłonowe. Rzeczywiście, wykazano, że hCG specyficznie reguluje w górę MMP-2 i MMP{8}} [11,12], a kilka badań wykazało posttranskrypcyjną regulację LHCGR [13,14]. Rozpuszczalny LHCGR (LHC) został zmierzony w kobiecej surowicy i płynie pęcherzykowym za pomocą platformy ELISA [15,16]. Specyficzność przeciwciał użytych w teście ELISA została potwierdzona poprzez ekspresję różnych fragmentów LHCGR w komórkach CHO w celu lokalizacji epitopu i wykrycia ekspresji w ludzkim łożysku [15-17]. sLHCGR wykryto w surowicy metodą LC-MS/MS [18]. stężenia sLHCGR w surowicy u kobiet były związane z leczeniem niepłodności, stanem przedrzucawkowym, porodem przedwczesnym i ciążą u dzieci z zespołem Downa, ale nie zostały potwierdzone przez inne grupy badawcze. Według naszej wiedzy, sLHCGR nigdy nie został opisany w płynach ustrojowych zdrowych mężczyzn, rozwijających się dorastających chłopców lub mężczyzn z aberracjami chromosomów płciowych. sLHCGR może działać w męskim krążeniu jako marker funkcji gonad poprzez transport wiązania z wysokim powinowactwem lub zmianę aktywności LH lub hCG.

Materiały i metody

1. Kohorty

Młodzi mężczyźni z populacji ogólnej

W Danii wszyscy zdrowi młodzi mężczyźni w wieku powyżej 18 lat muszą przejść badanie fizykalne w celu ustalenia ich przydatności do służby wojskowej. Od 1996 r. corocznie bada się jakość nasienia około 300 poborowych, reprezentujących populację ogólną. Wszyscy dostarczyli próbki nasienia, wypełnili kwestionariusz, wykonali badanie ultrasonograficzne jąder i pobrali próbki krwi. Próbki surowicy i nasienia z biobanku, jak również oceny ultrasonograficzne oraz informacje dotyczące BMI i wieku od 148 mężczyzn ankietowanych w latach 2013 i 2014 zostały włączone do obecnego badania (zgoda Komisji Etyki: H-KF{7}}).

Zdrowi chłopcy przed i po okresie dojrzewania

Kopenhaskie badanie adolescencji jest połączonym badaniem przekrojowym i podłużnym zdrowych duńskich dzieci [20]. Z losowo wybranych szkół publicznych do udziału zaproszono 6203 dzieci. Łączna liczba uczestników to 2020 dzieci. Obserwacja podłużna 209 dzieci (101 chłopców) była prowadzona co 6 miesięcy i obejmowała badanie fizykalne, ocenę Tannera etapów dojrzewania oraz próbki krwi i moczu. Do tego badania włączono trzydziestu sześciu chłopców z obserwacją podłużną w celu oceny sLHCGR w okresie dojrzewania (badanie kliniczne: NTC01411527).

Niepłodni mężczyźni bez poważnych chorób współistniejących

Badanie Copenhagen-Bone-Gonad jest badaniem kohortowym 307 niepłodnych mężczyzn bez ciężkich chorób współistniejących, którzy uczęszczali do naszej kliniki dla mężczyzn w latach 2011-2015, w tym łącznie 1427 mężczyzn [21,22]. Wszyscy mężczyźni zostali skierowani do naszej kliniki z powodu niskiej jakości nasienia i chęci rodzicielstwa. Wszyscy przeszli badanie fizykalne, w tym USG jąder, pobrano próbki krwi i pobrano próbki nasienia. Specjalista uzyskał ich szczegółową historię medyczną. Naukowcy obserwowali mężczyzn przez 150 dni i przyjmowali witaminę D lub placebo, jak opisano wcześniej. Wszystkie dane dostarczone w tym badaniu pochodziły z pierwszej wizyty przed interwencją, a wszystkie uwzględnione zmienne zostały wstępnie zdefiniowane (badanie kliniczne: NCT01304927).

Standaryzowane Cistanche

Mężczyźni i chłopcy z zespołem Klinefeltera oraz pacjenci z anorchią

Z naszej męskiej kliniki zidentyfikowaliśmy 64 chłopców i mężczyzn z zespołem Klinefeltera (KS), 47 po okresie dojrzewania i 16 przed okresem dojrzewania, określonych według stopnia zaawansowania Tannera. Mieliśmy dostęp do dokładnych aberracji chromosomowych, historii medycznej, początku dojrzewania i informacji o surowicy. Siedmiu chłopców przeszło długoterminową obserwację z regularną oceną kliniczną i pobieraniem krwi przed iw trakcie dojrzewania.

Włączyliśmy również 8 mężczyzn z prawidłową liczbą chromosomów, którym usunięto obustronne jądra z powodu wcześniejszych schorzeń: raka zarodkowego jąder (n {1}}), rozlanego raka gruczołu krokowego (n {2}}), obustronnego wnętrostwa i dziecięcej orchiektomii ( n=1), obustronna neoplazja zarodkowa in situ (n=1) i zaawansowany rak jąder po usunięciu pozostałych jąder z powodu urazu (n=1).

Dorośli poddawani pomiarowi przepływu Splanchnicus

Włączyliśmy trzech mężczyzn i trzy kobiety po menopauzie z prawidłową czynnością wątroby, którzy zostali przyjęci z podejrzeniem niedokrwienia krezki i skierowani na pomiar trzewnego przepływu krwi, ale nie wykazali niedokrwienia krezki. Próbki krwi pobrano jednocześnie z wątroby, nerki, żyły udowej i odpowiedniej tętnicy (zgoda Komisji Etyki: H.18048245)

Badanie interwencyjne: zdrowi mężczyźni narażeni na ludzką gonadotropinę kosmówkową

Jedenastu zdrowych mężczyzn zostało zrekrutowanych do udziału w interwencji klinicznej za pośrednictwem duńskiego ogłoszenia Rigshospitalet. Ochotnikom podawano 5000 j.m. ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej i mierzono ich maksymalną produkcję endogennego testosteronu, porównując wyjściowe próbki krwi i moczu z próbkami kontrolnymi pobranymi 8, 24 i 72 godziny po wstrzyknięciu hCG (badanie kliniczne: NCT03418896).

2. Myszy, tkanki ludzkie i linie komórkowe

Dwa szczepy ludzkich komórek raka jądra NTera-2 i TCam-2, reprezentujące odpowiednio raka zarodkowego i nasieniaka, zostały użyte i hodowane zgodnie z wcześniejszym opisem [23].

Surowice pobrano od nagich myszy wolnych od guza (WT) i ksenoprzeszczepów myszy nagich TCam-2 traktowanych odpowiednio wektorem, LH lub hCG (Animal Experimentation Inspectorate, Kopenhaga, Dania, numer licencji: 2012-15-2934-00051) .

Tkanki ludzkich płodów pierwszego trymestru zostały pobrane z tkanek dawców kobiet po planowanych aborcjach. Płodową tkankę nerkową i tkankę nadnerczy płodu hodowano w modelach kropli zawiesiny, jak opisano wcześniej, a pożywkę pobrano do analizy [24,25] (zgoda Komisji Etyki: H-1-2012-007).

Dorosłe próbki jąder pobrano od mężczyzn z wyciętymi jajnikami z rakiem jąder (zgoda Komisji Etyki: H{{0}}). Tkankę okołoguzową zawierającą obszary niezłośliwe przechowywano w temperaturze - 80°C lub utrwalano przez noc w temperaturze 4°C w formalinie lub zmodyfikowanym utrwalaczu Stieve'a (200 ml 37% formaldehydu, 40 ml kwasu octowego w 1 litrze 0,05 M fosforanu bufor, pH 7,4).

3. Analizy biochemiczne

Wykrywanie całkowitego sLHCGR w surowicy, nasieniu, moczu i różnych pożywkach hodowlanych przeprowadzono w procesie walidacji przy użyciu zestawów ELISA z New Dutch Biomarker Catalyst Laboratory (NBCL), stosując przeciwciało LHR029 przeciwko ludzkiemu LHCGR i mierząc wszystkie z nich wielokrotnie. test ELISA miał granicę wykrywalności 0,01 pmol/ml i maksymalny poziom 15,55. Sześciu mężczyzn z populacji ogólnej z poziomami sLHCGR powyżej górnej granicy wykrywalności rozcieńczono ich próbki i ponownie zmierzono, wykazując poziomy do 30 pmol/ml. wydajność platformy ELISA została szczegółowo opisana wcześniej [15-17].

Suplementy Cistanche

Przygotowaliśmy również dwa różne wewnętrzne testy ELISA, ustawione przez naszych techników laboratoryjnych, a wszystkie dalsze odczynniki zostały dostarczone przez firmę Origin Biomarkers Ltd, Wielka Brytania, zgodnie z ich sugerowaną konfiguracją [26]. Po pierwsze, wykryto krążący sLHCGR związany z hCG za pomocą kanapkowych zestawów ELISA z przeciwciałami 5A10C9 (ProMab) i am0{{2{22}}}}904pun ( OriGene) skierowane odpowiednio przeciwko LHCGR i hCG. Po drugie, w podobny sposób zastosowaliśmy wewnętrzny test ELISA, aby określić całkowite próbki tętnic i żył z wątroby, nerek oraz kończyn dolnych od sześciu dorosłych sLHCGR, w których użyliśmy tego samego przeciwciała LHR0}29 (NBCL Holland) przeciwko sLHCGR. Przetestowano dwa różne protokoły. Wszystkie pomiary sLHCGR opisane w tym artykule przeprowadzono przy użyciu testu NBCL ELISA, z wyjątkiem kompleksu hCG-sLHCGR i próbek tętniczych/żylnych z narządów opisanych powyżej. Testosteron u zdrowych chłopców był analizowany za pomocą zestawu RIA powlekanego DPC (Diagnostic Products, Los Angeles, CA) z granicą wykrywalności (LOD) 0,23 nmol/l i CV 8,6% przy użyciu immunofluorescencji czasowo-rozdzielczej (Defia; Wallac, Turku, Finlandia), granica wykrywalności wynosiła 0,20 nmol/l przy CV 6,4%. U dorosłych testosteron i globulinę wiążącą hormony płciowe (SHBG) analizowano za pomocą testu immunologicznego chemiluminescencyjnego (Access, Beckman Coulter, USA) z LOD odpowiednio 0,35 nmol/l i 0,33 nmol/l. Poziomy FSH i LH w surowicy iw moczu mierzono za pomocą immunofluorescencji czasowo-rozdzielczej (Delfia; Wallac, Turku, Finlandia) z granicami wykrywalności odpowiednio 0,06 i 0,05 IU/l oraz CV i lt; oba po 5 proc. Test inhibiny B przeprowadzono przy użyciu swoistego dwustronnego testu immunologicznego (inhibina B genII, Beckman Coulter, USA) CV <11 procent. W przypadku AMH zastosowaliśmy test immunoenzymatyczny Beckman Coulter (Immunotech, Beckman Coulter, Marsylia, Francja) i CV <8 procent. Na koniec oznaczono IGF1 i IGF-BP3 przy użyciu testu chemiluminescencyjnego systemu immunodiagnostycznego IDS-iSYS z CV wynoszącymi odpowiednio 10 procent i 9 procent. Wolny estradiol obliczano za pomocą stałej Mazera, a wolny testosteron (FT) za pomocą wzoru Vermeulena [27,28].

Analiza nasienia

Zdrowi młodzi mężczyźni i niepłodni dorośli uczestnicy dostarczyli próbki nasienia i uzyskali samodzielnie zgłaszane informacje na temat czasu trwania abstynencji wytryskowej. Analiza nasienia została przeprowadzona przez przeszkolonych techników, jak opisano wcześniej [19]. Objętość nasienia oceniano przez ważenie. W celu oceny żywotności plemników, 10 μl dobrze wymieszanych powtórzeń nasienia umieszczono na szkiełkach i zbadano pod mikroskopem × 400x w nagrzanej części do 37°C. Plemniki sklasyfikowano jako: zaawansowane żywotne (WHO klasa a plus B), niepostępujące żywotne (klasa C) lub nieaktywne (klasa D). Zastosowano średnią z dwóch ocen żywotności. Aby ocenić stężenie plemników, próbki rozcieńczono w wodnym destylowanym roztworze 0,6 mol/l NaHCO3 i 0,4 procent (obj./obj.) formaldehydu, a następnie oceniono za pomocą hemocytometru Bürker-Türk i wykorzystano średnią ocen. Liczono tylko plemniki z ogonkami. Na koniec przygotowano rozmazy i barwiono je metodą Pap, a morfologię plemników oceniano ściśle według kryteriów [29].

Western blot

Ludzką tkankę jąder homogenizowano w buforze do lizy, rozcieńczano w buforze do ładowania SDS, a następnie ogrzewano w temperaturze 95°C przez 5 min. Próbki załadowano na 4-20 procent prefabrykowanych żeli poliakryloamidowych (BioRad, nr kat. 456-8096) i poddano działaniu napięcia 100 V przez 1 godzinę w celu rozdzielenia białek. Aby wykryć sLHCGR w surowicy, usunięto albuminę i IgG przy użyciu zestawu do usuwania albumin/IgG Pierce (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA, nr kat. 89875) przed załadowaniem próbek na żel. po elektroforezie żelowej białka przenoszono na membrany z difluorku poliwinylidenu przy użyciu mokrej bibuły (BioRad). Błony zamknięto w soli fizjologicznej buforowanej tris i 5% odtłuszczonym mlekiem w proszku przez 1 godzinę, następnie inkubowano przez noc w 4°C z pierwszorzędowymi przeciwciałami i przez 1 godzinę w RT z drugorzędowymi przeciwciałami. Membrany przemyto wzmocnioną chemiluminescencją (Thermo Scientific Super Signal West Femto Maximum Sensitive Substrate, nr kat. 34095) i fotodetektorem z systemem obrazowania chemiDoc MP (BioRad, nr kat. 17001402). Do wykrycia LHCGR w tkance i surowicy zastosowano trzy różne przeciwciała: Aviva System Biology (OASG04237); NBCL Holland, to samo przeciwciało, co w zestawie ELISA surowicy (LHR029) i Santa Cruz Biotechnology (Dallas, TX, USA, SC- 26341). -2} mikroglobuliny zastosowano jako kontrolę obciążenia.

Immunohistochemia

Immunohistochemię przeprowadzono zgodnie z wcześniejszym opisem [25]. W skrócie, skrawki utrwalono zmodyfikowanym utrwalaczem Stiff, odparafinowano i ponownie uwodniono. Ekstrakcję antygenu przeprowadzono w autoklawie zawierającym cytrynianowy bufor do ekstrakcji (1 0 mM, pH 6,{8}}). Endogenną peroksydazę blokowano 3% (obj./obj.) H2O2 w metanolu przez 30 min. Pomiędzy każdym etapem skrawki przemywano TBS. Skrawki inkubowano z 0,5% surowicą końską BSA przez 30 minut, a następnie inkubowano przez noc z dwoma różnymi pierwszorzędowymi przeciwciałami przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej (LHR029 dla WB/ELISA, Santa Cruz Biotechnology SC - 25828). Skrawki inkubowano z drugorzędowymi przeciwciałami przez 30 minut. Obrazy wizualizowano za pomocą aminoetylokarbazolu (AEC, Invitrogen, Life Technologies/Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Kontrole negatywne były bez przeciwciał pierwszorzędowych. Żadna z kontroli negatywnych nie była wybarwiona. Barwienie kontrastujące wykonano za pomocą hematoksyliny Mayera, a montaż wykonano za pomocą Aquatex. Skrawki oceniano na mikroskopie Nikon Microphot-FXA (Nikon Corporation, Melville, NY, USA). Ostateczną analizę przeprowadzono przy użyciu oprogramowania NDPview w wersji 1.2.36 (Hamamatsu Photonics, Iwata City, Japonia.

Korzyści ekstraktu Cistanche dla nerek

BIBLIOGRAFIA

1. Dufau, ML Receptor hormonu luteinizującego. rok Wielebny Fizjol. 1998, 60, 461–496.

2. Rao, CV Różnicowe właściwości wiązania ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej i ludzkiego hormonu luteinizującego z błonami plazmatycznymi ciałek żółtych bydła. Acta Endocrinol. 1979, 90, 696–710.

3. Odell, WD; Griffin, J. Pulsacyjne wydzielanie ludzkiej gonadotropiny kosmówkowej u normalnych dorosłych. N. angielski J. Med. 1987, 317, 1688-1691.

4. Bang, AK; Nordkap, L.; Almstrup, K.; Priskon L.; Petersen, JH; Rajpert-De Meyts, E.; Andersson, AM; Juul, A.; Jørgensen, N. Dynamiczne badanie GnRH i hCG: ustanowienie nowych diagnostycznych poziomów referencyjnych. Eur. J. Endokrynol. 2017, 176, 379–391.

5. Zhang, FP; Poutanen, M.; Wilbertz, J.; Huhtaniemi, I. Normalny prenatalny, ale zatrzymany poporodowy rozwój seksualny myszy z nokautem receptora hormonu luteinizującego (LuRKO). Mol. Endokrynol. 2001, 15, 172–183.

6. Bruysters, M.; Christin-Maitre, S.; Verhoef-Post, M.; Sułtan, C .; Ślimak, J.; Faugeron, I.; Larue, L.; Lumbroso, S.; Themmen, APN; Bouchard, P. Nowa mutacja splicingowa receptora LH jest odpowiedzialna za hipogonadyzm męski z nieprawidłową produkcją plemników w propositus i niepłodność z regularnymi cyklami u chorej siostry. Szum. Reprodukcja 2008, 23, 1917–1923.

7. Latronico, AC; Arnhold, IJP Inaktywacja mutacji ludzkiego receptora hormonu luteinizującego u obu płci. Semin. Reprodukcja Med. 2012, 30, 382–386.

8. Simoni, M.; Tüttelmann, F.; Michel, C.; Böckenfeld, Y.; Nieschlag, E.; Gromoll, J. Polimorfizmy genu receptora hormonu luteinizującego / gonadotropiny kosmówkowej: Związek z jądrami zstępującymi w złym kierunku i niepłodnością męską. Farmakogenet. Genom. 2008, 18, 193–200.

9. Ascoli, M.; Fanelli, F.; Segaloff, DL Receptor lutropiny/choriogonadotropiny, perspektywa z 2002 r. endokr. Rev. 2002, 23, 141–174.

10. Tena-Sempere, M.; Zhang, FP; Huhtaniemi, I. Trwała ekspresja skróconej postaci kwasu rybonukleinowego przekaźnika receptora hormonu luteinizującego w jądrach szczura po selektywnym zniszczeniu komórek Leydiga przez metanosulfonian etylenu. Endokrynologia 1994, 135, 1018–1024.

11. Fluhr, H.; Bischof-Islami, D.; Krenzer, S.; Licht, P.; Bischof, P.; Zygmunt, M. Ludzka gonadotropina kosmówkowa stymuluje metaloproteinazy macierzy -2 i -9 w komórkach cytotrofoblastycznych oraz zmniejsza tkankowy inhibitor metaloproteinaz -1, -2 i -3 w komórkach decidualizowanych komórki podścieliska endometrium. Urodzaj. Sterylne. 2008, 90, 1390–1395.

12. Licht, P.; Fluhr, H.; Neuwinger, J.; Wallwiener D.; Wildt, L. Czy ludzka gonadotropina kosmówkowa jest bezpośrednio zaangażowana w regulację implantacji u ludzi? Mol. Komórka. Endokrynol. 2007, 269, 85–92.

13. Li, Y.-X.; Guo, X.; Gulappa, T.; Menon, B.; Menon, KMJ SREBP odgrywa rolę regulacyjną w ekspresji mRNA receptora LH/hCG w ludzkich komórkach ziarnistych-luteinowych. J. Clin. Endokrynol. Metab. 2019.

14. Menon, KMJ; Menon, B.; Wang, L.; Gulappa, T.; Harada, M. Molekularna regulacja ekspresji receptora gonadotropin: Związek z metabolizmem steroli. Mol. Komórka. Endokrynol. 2010, 329, 26–32.

15. Chambers, AE; Griffin, C.; Naif, SA; Mills, I.; młyny, my; Syngelaki, A.; Nicolaides, KH; Banerjee, S. Ilościowe testy ELISA dla kompleksu LHCGR rozpuszczalnego w surowicy i kompleksu hCG-LHCGR: Potencjalna diagnostyka w badaniach przesiewowych ciąży w pierwszym trymestrze pod kątem urodzenia martwego dziecka, zespołu Downa, porodu przedwczesnego i stanu przedrzucawkowego. Reprodukcja Biol. Endokrynol. 2012, 10, 113.

16. Chambers, AE; Nayini, KP; młyny, my; Lockwood, GM; Banerjee, S. Krążący receptor LH/hCG (LHCGR) może identyfikować przed leczeniem pacjentów IVF zagrożonych OHSS i słabą implantacją. Reprodukcja Biol. Endokrynol. 2011, 9, 161.

17. Chambers, AE; Stanley, PF; Randeva, H.; Banerjee, S. Uwalnianie za pośrednictwem mikropęcherzyków rozpuszczalnego receptora LH / hCG (LHCGR) z transfekowanych komórek i eksplantatów łożyska. Reprodukcja Biol. Endokrynol. 2011, 9, 64.

18. Gao, HJ; Chen, YJ; Zuo, D.; Xiao, MM; Li, Y.; Guo, H.; Zhang, N.; Chen, RB Ilościowa analiza proteomiczna do wysokowydajnych badań przesiewowych różnicowych glikoprotein w surowicy raka wątrobowokomórkowego. Biol raka. Med. 2015, 12, 246–254.

19. Priskoorn, L.; Nordkap, L.; Bang, AK; Krause, M.; Holmboe, SA; Egeberg Palme, DL; Skrzydło, SB; Mørup, N.; Carlsen, E.; Joensen, ONZ; i in. Średnia liczba plemników pozostaje niezmieniona pomimo ograniczenia palenia przez matkę: wyniki dużego badania przekrojowego z corocznymi badaniami trwającymi ponad 21 lat. Szum. Reprodukcja 2018, 33, 998–1008.

20. Sørensen, K.; Aksglaede, L.; Petersen, JH; Juul, A. Ostatnie zmiany w czasie dojrzewania u zdrowych duńskich chłopców: skojarzenia ze wskaźnikiem masy ciała. J. Clin. Endokrynol. Metab. 2010, 95, 263–270.

21. Blomberg Jensen, M.; Lawaetz, JG; Petersen, JH; Juul, A.; Jørgensen, N. Wpływ suplementacji witaminy D na jakość nasienia, hormony rozrodcze i wskaźnik żywych urodzeń: randomizowane badanie kliniczne. J. Clin. Endokrynol. Metab. 2018, 103, 870–881.

22. Blomberg Jensen, M.; Gerner Lawaetz, J.; Andersson, AM; Petersen, JH; Nordkap, L.; Bang, AK; Ekbom, P.; Joensen, ONZ; Prætorius, L.; Lundstrøm, P.; i in. Niedobór witaminy D i niski poziom zjonizowanego wapnia są powiązane z jakością nasienia i poziomem steroidów płciowych u niepłodnych mężczyzn. Szum. Reprodukcja 2016, 31, 1875–1885.

23. Lorenzen, M.; Nielsen, JE; Andreassen, CH; Juul, A.; Toft, BG; Rajpert-De Meyts, E.; Daugaard, G.; Blomberg Jensen, M. Receptor hormonu luteinizującego jest wyrażany w guzach zarodkowych jąder: możliwe implikacje dla wzrostu guza i rokowania. Nowotwory 2020, 12, 1358.

24. Eldrup, E.; Theilade, S.; Lorenzen, M.; Andreassen, CH; Poulsen, KH; Nielsen, JE; Hansen, D.; El Fassi, D.; Berg, JO; Bagi, P.; i in. Hiperkalcemia po zastrzykach z oleju kosmetycznego: odkrycie etiologii, patogenezy i ciężkości. J. Bone Miner. Rez. 2020, 36, 322–333.

25. Jørgensen, A.; Macdonald, J.; Nielsen, JE; Kilcoyne, KR; Perlman S.; Lundvall, L.; Langhoff Thuesen, L.; Juul Zając, K.; Frederiksen, H.; Andersson, AM; i in. Sygnalizacja węzłowa reguluje rozwój komórek rozrodczych i ustanowienie sznurów nasiennych w jądrze ludzkiego płodu. Przedstawiciel komórki 2018, 25, 1924–1937.e4.

26. Chambers, AE; Fairbairn, C.; Gaudoin, M.; Mills, W.; Woo, ja.; Pandian, R.; Stańczyk, FZ; Chung, K.; Banerjee, S. Rozpuszczalny receptor LH-HCG i estradiol jako predyktory ciąży i żywych urodzeń w IVF. Reprodukcja Biomed. Online 2019, 38, 159–168.

27. Vermeulen, A.; Verdonck, L.; Kaufman, JM Krytyczna ocena prostych metod szacowania wolnego testosteronu w surowicy. J. Clin. Endokrynol. Metab. 1999, 84, 3666-3672.

28. Mazer, NA Nowatorska metoda arkusza kalkulacyjnego do obliczania wolnych stężeń testosteronu, dihydrotestosteronu, estradiolu, estronu i kortyzolu w surowicy: Z ilustrującymi przykładami z populacji mężczyzn i kobiet. Sterydy 2009, 74, 512–519.

29. Menkveld, R.; Stander, FS; Kotze, TJ; Kruger, TF; van Zyl, JA Ocena cech morfologicznych plemników ludzkich według bardziej rygorystycznych kryteriów. Szum. Reprodukcja 1990, 5, 586–592.

Li Juel Mortensen¹, Mette Lorenzen¹, Anne Jørgensen², Jakub Albrethsen², Nielsa Jørgensena², Søren Møller^3,4, Anna-Maria Andersson², Anders Juul^2,4i Martina Blomberga Jensena^1,5

1. Grupa Endokrynologii Szkieletu, Minerałów i Gonad, Uniwersytecki Wydział Wzrostu i Rozrodu, Rigshospitalet, 2100 Kopenhaga, Dania; li.juel.mortensen@regionh.dk (LJM); mette.lorenzen.01@regionh.dk (ML)

2. Department of Growth and Reproduction and International Centre for Research and Research Training in Endocrine Disruption of Male Reproduction and Child Health (EDMaRC), Rigshospitalet, University of Copenhagen, Blegdamsvej 9, 2100 Kopenhaga, Dania; Anne.Joergensen.02@regionh.dk (AJ); Jakob.Christian.Albrethsen@regionh.dk (JA); Niels.Joergensen@regionh.dk (New Jersey); Anna-Maria.Andersson@regionh.dk (A.-MA); Anders.Juul@regionh.dk (AJ)

3. Centre for Functional and Diagnostic Imaging and Research, Department of Clinical Physiology and Nuclear Medicine 260, Hvidovre Hospital, 2650 Kopenhaga, Dania; Soeren.Moeller@regionh.dk

4. Katedra Medycyny Klinicznej, Wydział Nauk o Zdrowiu, Uniwersytet Kopenhaski, 2200 Kopenhaga, Dania

5. Division of Bone and Mineral Research, Harvard School of Dental Medicine/Harvard Medical School, Boston, MA 02115, USA