Fitochemiczne badania przesiewowe i aktywność estrogenowa całkowitych glikozydów Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrakcyjny

Przez dziesięciolecia podejmowano nieustanne wysiłki na rzecz poprawy jakości ludzkiego życia. Zespół pomenopauzalny jest poważnym problemem dla zdrowia kobiet. Terapia hormonalna jest obecnie podstawą leczenia tego schorzenia. Jednak ta terapia może prowadzić do nadużywania estrogenów, prowadząc do działań niepożądanych i skutków ubocznych. W rezultacie terapia hormonalna okazała się nieskuteczna w łagodzeniu zespołu pomenopauzalnego.Cistanche deserticolato klasyczne zioło tonizujące w tradycyjnej medycynie chińskiej. Wykazuje znaczną aktywność estrogenową. Głównymi związkami aktywnymi tego zioła są glikozydy. W poprzednim eksperymencie zidentyfikowano trzy ważne czynniki wpływające na całkowitą wydajność glikozydów, wydajność akteozydów i aktywność estrogenową, a mianowicie stężenie eluentu, pH i objętość eluentu. W tym eksperymencie określono optymalny proces oczyszczania przy użyciu centralnej metodologii kompozytowego projektu powierzchni odpowiedzi w celu uzyskania glikozydów z tego zioła. Stwierdzono, że optymalne jest stężenie eluentu (etanol) 85 procent i objętość 25 BV przy pH 11. Dwadzieścia jeden aktywnych związków zidentyfikowano za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej/kwadrupolowej spektrometrii masowej czasu przelotu. Badanie to dostarcza cennych informacji dla dalszych dogłębnych badań oceniających aktywność estrogenową glikozydów całkowitychCistanche deserticola.

Słowa kluczowe: Centralny projekt kompozytowy; całkowite glikozydy Cistanche deserticola; LC/Q-TOF-MS; technologia oczyszczania; test wzrostu macicy.

Wstęp

Cistanche deserticolato jadalne, klasyczne zioło tonizujące. Po raz pierwszy wspomniano o tym w ziołowym klasyku Shen Nonga i umieszczono go w najwyższej klasie. Jest to zioło ciepłe i słodkie. Posiada liczne właściwości lecznicze, takie jak odżywienie wątroby i nerek, wzmocnienie mięśni i kości oraz poprawa regulacji immunologicznej wraz z działaniem przeciwstarzeniowym i przeciwnowotworowym [1-4]. Z ekstraktów tego zioła wyizolowano i zidentyfikowano niektóre naturalne związki, z których główne to glikozydy fenyletanoidowe, lignanoidy, irydoidy, polisacharydy i alkaloidy [5-8].

Leki pozyskiwane z roślin leczniczych zawierają różne związki aktywne, które odpowiadają przede wszystkim za ich działanie terapeutyczne. Skuteczność tego samego leku pozyskiwanego z różnych źródeł roślinnych może być różna ze względu na różnice w rodzaju i ilości zawartych w nim związków aktywnych. Dlatego ważne jest, aby zidentyfikować i określić ilościowo wszystkie związki czynne obecne w lekach otrzymanych z roślin leczniczych. To samo dotyczy C. deserticola. Metodologia powierzchni odpowiedzi to eksperymentalna metoda badania interakcji między różnymi czynnikami jednocześnie [9-10]. Może być wykorzystany do optymalizacji parametrów ekstrakcji fitofarmaceutyków i ilościowej oceny związków aktywnych w lekach. Centralna konstrukcja kompozytowa (CCD) jest jednym z projektów eksperymentalnych przydatnych w metodologii powierzchni odpowiedzi. W porównaniu z projektami ortogonalnymi i jednolitymi, CCD ma wyższą precyzję i lepszą przewidywalność [11].

Zespół pomenopauzalny może znacznie obniżyć jakość życia kobiet. Zwykle do leczenia tego stanu stosuje się estrogen. Jednak długotrwałe stosowanie estrogenów może prowadzić do nadużywania, powodując w ten sposób różne reakcje niepożądane i skutki uboczne. Dlatego konieczne jest wybranie alternatywnej terapii, najlepiej leku ziołowego zawierającego estrogen jako składnik aktywny do leczenia zespołu pomenopauzalnego [12-13].

We wstępnym eksperymencie za pomocą spektrometrii mas (MS) zidentyfikowano struktury różnych związków naturalnych uzyskanych z C. deserticola [14]. Potwierdzono, że glikozydy są głównymi związkami aktywnymi o znacznej aktywności estrogenowej [14-15]. Aby opracować bezpieczny i skuteczny składnik aktywny estrogenu w nowym leku, potrzebne jest dogłębne badanie TGCD po oczyszczeniu. W tym badaniu CCD po raz pierwszy zastosowano do optymalizacji oczyszczania wszystkich glikozydów C. deserticola (TGCD). Następnie do oceny aktywności estrogenowej tego samego glikozydu zastosowano test wzrostu macicy. Do jakościowej analizy związków TGCD po oczyszczeniu zastosowano wysokosprawną chromatografię cieczową/kwadrupolową spektrometrię mas z analizą czasu przelotu (HPLC/Q-TOF-MS). Proces ten zastosowano do jednoznacznego wykazania obecności różnych związków aktywnych o działaniu estrogennym w TGCD. Może to jednocześnie stanowić podstawę do jego klinicznego zastosowania w zespole pomenopauzalnym zastępującym estrogen.

Procedura eksperymentalna

Instrumenty

System Agilent 1290 HPLC (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA), system Agilent 6530 kwadrupolowy time-of-flight LC/MS (Q-TOF) (Agilent Technologies, Palo Alto, CA, USA) oraz Chemical HPLC{ {5}}Stacje robocze D były wykorzystywane jako instrumenty chromatograficzne do przetwarzania danych. Do całego badania użyto ultraczystej wody Milli-Q. elektroniczna waga analityczna AR1140 (Ohaus International Ltd.); 680 czytnik mikropłytek (Bio-Rad Corporation); do przygotowania próbki zastosowano wirówkę szybkoobrotową 64R (Beckman Coulter Allegra).

Leki i chemikalia

C. deserticola została zakupiona na rynku leków i zidentyfikowana przez prof. Zhang Deliana (Harbin University of Commerce, Chiny). Standardowy dietylostilbestrol (czystość 99 procent, partia nr 60518) zakupiono od dr Ehrenstorfer (Niemcy). Inne standardy akteozydów (111530-200505) i echinakozydów (111670-200503) uzyskano z Narodowego Instytutu Kontroli Produktów Farmaceutycznych i Biologicznych w Pekinie, Chiny. Czystość każdego wzorca wynosiła >98 procent. Acetonitryl (ACN), metanol i kwas mrówkowy (klasa MS) zakupiono z Thermo Scientific Pierce (Rockford, IL, USA). Ultraczystą wodę otrzymano z Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd. (Hangzhou, Chiny). Wszystkie dostępne w handlu odczynniki miały czystość analityczną.

Przygotowanie całkowitych glikozydów roztworu do oczyszczania C. deserticola

Po zanurzeniu w 75 procentowym etanolu na 12 godzin surowy proszek C. deserticola (100 g) ekstrahowano 800 ml 75 procentowego (v/v) etanolu w 80 stopniach przez 150 minut pod chłodnicą zwrotną. Następnie przefiltrowano go przez dwupoziomowy filtr, a następnie dwukrotnie wyekstrahowano 800 ml 75% etanolu przez dodatkowe 150 min. Następnie przesącze połączono i zatężono pod próżnią w temperaturze 45 stopni. Ekstrakt uzyskano przez usunięcie rozpuszczalnika. Do ekstraktu dodano pewną ilość wody destylowanej, aby uzyskać stężenie 0,5 g/ml, które wykorzystano do przesiewania procesu oczyszczania.

W przypadku adsorpcji z użyciem żywicy makroporowatej AB-8 pH roztworu próbki testowej doprowadzono do 11. Najpierw do wypłukania zanieczyszczeń użyto wody destylowanej 2 BV. Następnie eluent o stężeniu 25 BV 85 procent etanolu został wymyty i zebrany. Na koniec zebrany oczyszczony eluent połączono. Do ekstraktu dodano pewną ilość wody destylowanej w celu uzyskania stężenia 1,5 g/ml, którą stosowano do podawania dożołądkowego. Jako kontrolę pozytywną przygotowano roztwór dietylostilbestrolu (20 ug/ml) z proszkiem dietylostilbestrolu.

Zgodnie ze stopniem oczyszczania ({{0}}.6) pewną ilość ekstraktu (równoważną 1 g C. deserticola) przeniesiono do 10 ml kolby miarowej, rozpuszczono w 50 procentowym (v/v) roztworze metanolu w łaźni ultradźwiękowej przez 5 minut i rozcieńczono do 10 ml. Roztwór medyczny otrzymano po przesączeniu supernatantu przez membranę filtracyjną 0,45 µm. Akteozyd i echinakozyd (po 1 mg) zmieszano i całkowicie rozpuszczono w 10 ml 50% (obj./obj.) roztworu metanolu. Na koniec, przed analizą roztwór wzorcowy przefiltrowano przez 0,45 µm filtr Millipore.

Warunki LC-MS

Rozdział chromatograficzny przeprowadzono w układzie HPLC (Agilent 129{{10}}), wyposażonym w układ dostarczania czwartorzędowego rozpuszczalnika, odgazowywacz próżniowy i detektor z matrycą fotodiodową. Analizę MS/MS przeprowadzono w aparacie Agilent-1290 HPLC/6530 Q-TOF-MS wyposażonym w źródło jonizacji przez elektrorozpylanie zarówno w trybie jonów dodatnich, jak i ujemnych. Do rozdziału zastosowano kolumnę Waters Symmetry Shield RP C18 (4,6 × 250 mm, 5 μm) (Waters Corporation, Milford, MA, USA). Faza ruchoma składała się z 0,2% wodnego roztworu kwasu mrówkowego (obj./obj.) (A) i ACN (B) i była pompowana z szybkością przepływu 0,5 ml/min. Objętość nastrzyku każdej próbki wynosiła 10 µl. Program elucji gradientowej był następujący: 5-23% B przez 0-35 min, 23-25% B przez 35-65 min i 25-5% B przez 65-70 min. Temperaturę kolumny utrzymywano na poziomie 30 stopni . Chromatogramy monitorowano i rejestrowano przy 330 nm. Ciśnienie gazu atomizującego ustawiono na 30 psi, a napięcie kapilarne wynosiło 3,5 kV. Szybkość przepływu suchego gazu wynosiła 8 l/min w temperaturze 30 stopni. Temperaturę gazu osłonowego ustawiono na 400 stopni przy szybkości przepływu 12 l/min. Energia zderzenia została ustawiona na 10-20 eV dla skanów niskoenergetycznych i 30-50 eV dla skanów wysokoenergetycznych. Dane widma masowego rejestrowano w zakresie skanowania 50–1000 Da w trybach skanowania jonów dodatnich i ujemnych. W tym badaniu przeprowadzono szybkie i skuteczne porównanie TGCD ze standardami w tych samych warunkach LC-MS.

Test wzrostu macicy

Zostało to przeprowadzone w ścisłej zgodności z zaleceniami Przewodnika Opieki i Użytkowania Zwierząt Laboratoryjnych Narodowych Instytutów Zdrowia. Wszystkie procedury doświadczalne zostały sprawdzone i zatwierdzone przez Komitet ds. Etyki Zwierząt Uniwersytetu Handlowego Harbin w Chinach.

Niedojrzałe samice myszy Kunming (około 21 dnia urodzenia, odsadzone) ważące 12 ± 2 g zakupiono z Changchun National Biological Industry Base Laboratory Animal Center (Changchun, Chiny). Myszy trzymano w pomieszczeniu o regulowanej temperaturze (22 ± 2 stopnie) z pożywieniem i wodą ad libitum. Eksperymenty na zwierzętach rozpoczęto po pięciu dniach aklimatyzacji. Myszy pościły przez noc wodą ad libitum przed dożołądkowym podaniem roztworu testowego.

Myszy losowo podzielono na 22 grupy, po 10 zwierząt w każdej grupie. Podawano im eksperymentalne leki o tej samej objętości dwa razy dziennie (rano i wieczorem) przez cztery dni w następujący sposób:

Grupa 1: Całkowite dożołądkowe glikozydy roztworu do oczyszczania C. deserticola (20 ml/kg), (objętość roztworu/masa myszy),

Grupa II: Dożołądkowa woda destylowana (grupa kontroli ujemnej) oraz

Grupa III: dożołądkowy dietylostilbestrol (20 ug/ml) (grupa kontroli pozytywnej).

Piątego dnia wszystkie myszy uśmiercono. Macice natychmiast usunięto, zważono i obliczono współczynniki macicy.

Analiza statystyczna

Do identyfikacji statystycznie istotnych różnic w różnych parametrach w różnych grupach eksperymentalnych zastosowano dwustronny test t dla sparowanych próbek. Analizę przeprowadzono przy użyciu oprogramowania statystycznego SPSS (SPSS dla Windows v21.0, SPSS Inc., USA). Różnice uznano za statystycznie istotne przy 95-procentowym poziomie ufności (p <>

Wyniki i dyskusja

Liniowość i korelacja wydajności akteozydów i glikozydów ogółem

Równanie regresji liniowej wydajności akteozydu wyniosło y {{0}}x – 14,75 (gdzie x to stężenie akteozydu, a y to odpowiadająca mu powierzchnia piku) ze współczynnikiem korelacji r=1 w zakresie stężeń 0.12−{{10}}.72 mg/ml. Wskazywało to na liniową krzywą kalibracji. Równanie regresji liniowej całkowitej wydajności glikozydów wyniosło y=26.074x plus 0,0866 (gdzie x to stężenie wszystkich glikozydów, a y to odpowiadająca mu powierzchnia piku) ze współczynnikiem korelacji r { {12}}.9982 w zakresie stężeń 0,013-0,065 mg/ml. Wskazuje to również na liniową krzywą kalibracji.

Badanie metodologiczne

W badaniu metodologicznym zbadano precyzję, odtwarzalność, stabilność i odzyskiwanie próbek. W eksperymencie precyzji względne odchylenie standardowe (RSD) dla akteozydu i glikozydów ogółem wyniosło odpowiednio 1,43% i 0.05%. W eksperymencie odtwarzalności RSD dla akteozydów i glikozydów ogółem wynosił odpowiednio 0.10 procent i 1,44 procent. W 24-godzinnym eksperymencie stabilności, RSD dla akteozydu i całkowitych glikozydów wyniosło odpowiednio 0,14% i 0,90%. W eksperymencie odzysku odzysk akteozydu wynosił 100,50 procent przy RSD 2,08 procent, podczas gdy odzysk całkowitych glikozydów wynosił 99,12 procent przy RSD 1,65 procent. Wszystkie wartości RSD wynosiły mniej niż 3 proc. Wyniki te wykazały dobrą precyzję i powtarzalność. Dodatkowo próbka była stabilna przez 24 godziny. Wyniki odzysku również mieszczą się w dopuszczalnym zakresie (95-105%). Dlatego metoda ta może być stosowana do oznaczania wydajności akteozydów i całkowitej wydajności glikozydów po oczyszczeniu.

Badanie jednoczynnikowe TGCD

Na oczyszczanie TGCD przy użyciu żywicy makroporowatej może mieć wpływ wiele czynników, takich jak rodzaj żywicy, statyczne współczynniki adsorpcji (czas adsorpcji, stężenie wycieku i pH roztworu próbki) oraz warunki elucji (prędkość przepływu, objętość i stężenie). Wykorzystując jako wskaźniki pojemność adsorpcyjną oraz szybkości desorpcji i elucji TGCD, określono warunki doświadczalne na podstawie wyników doświadczeń jednoczynnikowych. Stosując makroporowatą żywicę adsorpcyjną typu AB-8 wyznaczono następujące optymalne warunki: roztwór próbki 00,5 mg/mL, pH 10, czas adsorpcji statycznej 8 h, 2 BV woda destylowana do mycia zanieczyszczeń, 20 BV 80 procent etanol jako eluent i prędkość przepływu 0,5 BV/min. Konkretne wyniki przedstawiono na rysunkach 1-7.

CCD do optymalizacji technologii oczyszczania TGCD

Na podstawie wyników badań jednoczynnikowych jako wskaźniki wybrano trzy czynniki istotnie wpływające na metodę oczyszczania, a mianowicie pH roztworu próbki (x1), stężenie eluentu (x2) oraz objętość eluentu (x3). Zgodnie z zasadą CCD każdy czynnik ma pięć poziomów. Maksymalne i minimalne poziomy tych różnych czynników zostały ustalone zgodnie z wynikami wstępnego eksperymentu. Poziomy czynników przedstawiono w Tabeli 1, a wyniki eksperymentalne przedstawiono w Tabeli 2.

Całkowite wydajności glikozydów i akteozydów określono w celu optymalizacji metody oczyszczania TGCD. Po pierwsze, całkowite wydajności glikozydów i akteozydów zostały ustawione zgodnie z liczbowymi kryteriami pożądalności (d) pomiędzy {{0}}−1. Następnie obliczono pożądalność ogólną (OD) [OD=(d1, d2, d3,....,dn)1/n, gdzie n jest liczbą indeksu]. Oprogramowanie SPSS21.{{10}} i oprogramowanie do projektowania zostały wykorzystane do wielokrotnej regresji liniowej i dwumianowego dopasowania zmiennych niezależnych i OD, z p < 0.05="" uwzględniono="" statystycznie="" istotny="" standard="" równania.="" jako="" model="" najlepiej="" dopasowany="" wybrano="" równanie="" o="" większej="" wartości="" r="" (współczynnik="" korelacji="" wielokrotnej).="" wielowymiarowe="" równanie="" liniowe="" jest="" reprezentowane="" jako="" y="–" 1.02="" –="" 0.131x1="" plus="" 0.034x2="" plus="" 0,012x3="" (r="" {{="" 25}}.55,="" p="0.004)." równanie="" dwumianowe="" to="" y="–" 21,92173="" –="" 0,74079x1="" plus="" 0,62914x2="" plus="" 0,041161x3="" plus="" 0,014972x1x2="" plus="" 2,06050*10-4x1x3="" plus="" 1,05698="" ×="" 10-3x2x3="" -="" 00,029589x{="" {56}},78730="" ×="" 10-3x22="" -="" 2,89446="" ×="" 10-3x32="" (r="00,91," p="00,012)." z="" powyższych="" równań="" widać,="" że="" współczynnik="" korelacji="" wielowymiarowego="" równania="" regresji="" liniowej="" jest="" niższy.="" korelacja="" między="" zmiennymi="" niezależnymi="" i="" zależnymi="" jest="" bardzo="" niska="" i="" uznano="" ją="" za="" niekorzystną="" do="" wykorzystania="" w="" modelu="">

Jednak współczynnik korelacji równania dwumianowego był wysoki, co skutkowało dobrym dopasowaniem. Dlatego wybrano model dwumianowy. Na podstawie kompleksowej analizy figury powierzchni i mapy konturowej w połączeniu z danymi eksperymentalnymi (wartość OD w pobliżu {{0}}.6) uzyskano optymalny zakres metody oczyszczania. Z rysunku 8 widać, że maksymalna wartość OD została wygenerowana, gdy pH roztworu próbki (A) mieściło się w zakresie 9-10, a stężenie eluentu (B) było w zakresie 79-85% . Rysunek 9 pokazuje, że maksymalną wartość OD uzyskano, gdy wartość pH roztworu próbki (A) mieściła się w zakresie 9–10, a objętość eluentu (C) w zakresie 20–25 BV. Rysunek 10 pokazuje, że maksymalną wartość OD uzyskano, gdy stężenie eluentu (B) mieściło się w zakresie 80-85%, a objętość eluentu (C) w zakresie 20-25 BV. Na podstawie kompleksowej analizy tych danych ustalono, że pH roztworu próbki, stężenie eluentu i objętość eluentu mieściły się odpowiednio w zakresie 9-10, 80-85% i 20-25 BV. W oparciu o wielowymiarowe równanie dwumianowe dla wyników zmiennych pochodnych i optymalny schemat, najlepszą metodą oczyszczania TGCD okazała się być przy stężeniu eluentu (etanolu) 85 procent i objętości 25 BV przy pH 11. Odpowiadająca wartość OD wynosiła 0,8332 , a całkowita wydajność glikozydów wyniosła 73,0339 procent . Wrażenie wizualne na podstawie liczb 8-10 wskazuje, że najlepszą metodą jest ta, w której uwzględniono interakcje między dwoma czynnikami, chociaż najlepsza metoda wywnioskowana ze wzoru rozpoznaje tę, w której uwzględniono interakcje między trzema czynnikami. Te dwa wyniki różniły się i uznano, że optymalną metodą oczyszczania jest stężenie eluentu (etanol) 85 procent i objętość 25 BV przy pH 11.

Pomiar wzrostu macicy

Współczynnik macicy każdej grupy przedstawiono w tabeli 3. W porównaniu z grupą kontroli negatywnej wyniki pozostałych grup różniły się istotnie. Stwierdzono, że wszystkie TGCD otrzymane z 20 różnych metod oczyszczania wywierają działanie estrogenne.

Eksperyment potwierdzający

Kompleksowe wyniki testu CCD i wzrostu macicy wykazały, że za optymalną metodę oczyszczania uznano 85 procent stężenia eluentu (etanolu) i objętość 25 BV przy pH 11.

W procesie walidacji średnia wydajność glikozydów ogółem wyniosła 70,9150 procent. Średnie odchylenie między wartościami przewidywanymi a rzeczywistymi wyniosło 2,1180 procent. Można zatem zasugerować, że przewidywalność i wiarygodność eksperymentalna tego modelu są dobre.

Identyfikacja TGCD po oczyszczeniu

Na podstawie czasu retencji i danych MS spekulowano 21 naturalnych składników, w tym kamneozyd 1, 2′-acetyloakteozyd, cistanozyd A, cistanozyd B, syringalid A 3'- - L-ramnopiranozyd, tubulozyd A, tubulozyd B, salidrozyd, cistanozyd G, kwas tenipozyd, dekokoilakteozyd, kwas 8-epiloganowy, echinakozyd, cistanozyd F, cistantubulozyd B1, izoakteozyd, akteozyd, cis-akteozyd, kankanozyd E, osmantuzyd B i cistanozyd C i MS/czas retencji, MS Informacje MS, wzór i spekulowane związki przedstawiono w Tabeli 4.

Q-TOF-MS jest szczególnie odpowiedni do identyfikacji strukturalnej złożonych składników molekularnych leków i żywności, ponieważ może zapewnić możliwe składy pierwiastkowe dzięki dokładnej masie cząsteczkowej i cechom strukturalnym jonów fragmentacyjnych. Aby ustalić systematyczną charakterystykę strukturalną, do identyfikacji wykorzystano również Q-TOF-MS, dane MS, wyszukiwanie w bazach danych i opublikowaną literaturę referencyjną. Wzór cząsteczkowy każdego składnika docelowego został wydedukowany z jonu macierzystego i dopasowany do znanych związków. Wzór ten można dalej określić na podstawie powiązanych z nim jonów fragmentacyjnych. Na przykład pik 5 wykazywał dominujący jon zdeprotonowany przy m/z 654 (C30H38O16), który był identyczny ze składem pierwiastkowym kamneozydu 1. Utrata kofeoilu powstała z jonu fragmentacyjnego przy m/z 493, a utrata ugrupowanie rha powstało z jonu fragmentarycznego przy m/z 347.

Wniosek

Korzystając z technologii LC-Q-TOF-MS, opracowano i w pełni zwalidowano prostą i solidną metodę analizy jakościowej TGCD. Dane walidacyjne do badań przesiewowych i identyfikacji związków naturalnych z TGCD były zadowalające. Spekulowano dwadzieścia jeden związków bioaktywnych z TGCD: salidrozyd, cistanozyd G, kwas genipozydowy, dekafeoilakteozyd, kamneozyd 1, kwas 8-epiloganowy, 2'-acetyloakteozyd, cistanozyd A, cistanozyd B, syringalid A3′{{9 }} L-ramnopiranozyd, echinakozyd, cistanozyd F, cistantubulozyd B1, izoakteozyd, akteozyd, tubulozyd A, cis-akteozyd, kankanozyd E, osmantuzyd B, cistanozyd C i tubulozyd B. Charakterystyka strukturalna tych związków może stanowić podstawę eksperymentalną dla ich kontrolę jakości i dalsze zastosowanie kliniczne ze względu na ich aktywność estrogenową. Może to zaoferować nową i ulepszoną opcję terapeutyczną w leczeniu zespołu pomenopauzalnego, unikając w ten sposób skutków ubocznych i niepożądanych reakcji terapii estrogenowej.

Skróty

TGCDCistanche deserticolaglikozydy całkowite LC/Q-TOF-MS chromatografia cieczowa/kwadrupolowa spektrometria masowa czasu przelotu

Metodologia powierzchni odpowiedzi RSM

Centralna konstrukcja kompozytowa CCD

Spektrometria mas MS HPLC/Q-TOF-MS Wysokosprawna chromatografia cieczowa/kwadrupolowa spektrometria masowa czasu przelotu

ACN Acetonitryl

Objętość łóżka BV

OD ogólna atrakcyjność

LC-MS chromatografia cieczowa-spektrometria mas

Q-TOF-MS kwadrupolowa spektrometria masowa czasu przelotu

TCM tradycyjne chińskie leki

Względne odchylenie standardowe RSD

Podziękowanie

Projekt ten był wspierany przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych w Chinach (nr 81073015), Naturową Fundację Naukową Prowincji Heilongjiang (ZD2017014), Plan Treningu Młodych Innowacyjnych Talentów Kolegium w Prowincji Heilongjiang (UNPYSCT- 2017209). Autorzy deklarują, że nie ma konfliktu interesów w związku z publikacją tego artykułu.

Konflikt interesów

Autorzy stwierdzają brak konfliktu interesów.

Bibliografia

[1] Nan ZD, Zeng KW, Shi SP, Zhao MB, Jiang Y., Tu PF, glikozydy fenyloetanoidowe o działaniu przeciwzapalnym z łodyg Cistanche deserticola hodowanych na pustyni Tarim, Fitoterapia, 2013, 89, {{4} }.

[2] Guo Y., Cao L., Zhao Q., Zhang L., Chen J., Liu B., Zhao B., Wstępna charakterystyka, działanie przeciwutleniające i hepatoprotekcyjne polisacharydów z Cistanche deserticola, International Journal of Biological Macromolecules , 2016, 293, 678-685.

[3] Nan ZD, Zhao MB, Zeng KW, Tian SH, Wang WN, Jiang Y., Tu PF, Przeciwzapalne irydoidy z łodyg Cistanche deserticola hodowanych na pustyni Tarim, Chinese Journal of Natural Medicines, 2016, 14, 61-65.

[4] Peng F., Chen J., Wang X., Xu C., Liu T., Xu R., Zmiany poziomów glikozydów fenyloetanoidowych, aktywności przeciwutleniającej i innych cech jakościowych w plasterkach Cistanche deserticola przez obróbkę parą, chemikalia oraz Biuletyn Farmaceutyczny (Tokio), 2016, 64, 1024-1030.

[5] Wang T., Zhang X., Xie W., Cistanche deserticola YC Ma, „Pustynny Żeń-szeń”: recenzja, The American Journal of Chinese Medicine, 2012, 40, 1123-1141.

[6] Song Y., Song Q., Li J., Zhang N., Zhao Y., Liu X., Jiang Y., Tu P., Zintegrowana strategia ilościowego różnicowania rumiankuCistanche deserticolai C. tubulosa przy użyciu wysokosprawnej chromatografii cieczowej-hybrydowej potrójnej kwadrupolowej liniowej pułapki jonowej spektrometrii masowej, Journal of Chromatography A, 2016, 1429, 238-247.

[7] Li Y., Peng Y., Wang M., Zhou G., Zhang Y., Li X., Rapid screening i identyfikacja różnic między metabolitamiCistanche deserticolai ekstrakt wodny z C. tubulosa u szczurów za pomocą połączonej analizy rozpoznawania wzorców UPLC-Q-TOF-MS, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2016, 131, 364-372.

[8] Li WL, Sun XM, Song H., Ding JX, Bai J., Chen Q., Identyfikacja w oparciu o HPLC/Q-TOF-MS zaabsorbowanych składników i ich metabolitów w surowicy i moczu szczurów po doustnym podaniu Cistanche Wyciąg z deserticola, Journal of Food Science, 2015, 80, H2079-2087.

[9] Almasi A., Dargahi A., Mohamadi M., Biglari H., Amirian F., Raei M., Usuwanie penicyliny G przez połączenie sonolizy i procesu fotokatalitycznego (sonofotokatalitycznego) z roztworu wodnego: optymalizacja procesu za pomocą RSM (Metodologia powierzchni odpowiedzi), Electron Physician, 2016, 8,

[10] 2878-2887. Hou W., Zhang W., Chen G., Luo Y., Optymalizacja warunków ekstrakcji dla maksymalnej aktywności fenolowej, flawonoidowej i przeciwutleniającej z danych z przylistków Melaleuca Liście przy użyciu metodologii powierzchni odpowiedzi, PloS One, 2016, 11,

[11] e0162139. Pooralhossini J., Ghaedi M., Zanjanchi MA, Asfaram A., Wybór ekstrakcji wspomaganej ultradźwiękami w połączeniu ze spektrofotometrią do szybkiego oznaczania kwasu galusowego w próbkach wody: Centralny projekt kompozytu do optymalizacji zmiennych procesowych, Ultradźwięki Sonochemia, 2017, 34 , 692- 699.

[12] Han L., Boakye-Yiadom M., Liu E., Zhang Y., Li W., Song X., Fu F., Gao X., Charakterystyka strukturalna i identyfikacja glikozydów fenyloetanoidowych zCistanches deserticola YC Maprzez UHPLC/ESI-QTOF-MS/MS, Analiza fitochemiczna, 2012, 23, 668-676.

[13] Lu D., Zhang J., Yang Z., Liu H., Li S., Wu B., Ma Z., Analiza ilościowa Cistanches Herba przy użyciu wysokosprawnej chromatografii cieczowej sprzężonej z detekcją diodową i spektrometria mas rozdzielczości w połączeniu z metodami chemometrycznymi. Journal of Separation Science, 2013, 36, 1945-1952.

[14] Li WL, Chen Q., Yang B., Gao S., Zhang JJ, Badanie przesiewowe ekstraktów fitoestrogennych i dawkiCistanche deserticola, Chińskie leki ziołowe, 2013, 5, 292-296.

[15] Li YP, Huang FR, Dong J., Xiao C., Xian RY, Ma ZG, Zhao J., Szybka identyfikacja Cistanche za pomocą technologii obrazowania widma fluorescencyjnego w połączeniu z analizą głównych składników i wyróżnieniem Fishera, Guang Pu Xue Yu Guang Pu Fen Xi, 2015, 35, 689-694.