Polisacharydy z Cistanche mogą znacznie opóźnić starzenie się funkcji płuc

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

Sun Yun Wang Dejun Liu Xiaomei Shi Le Zhang Hongquan

(Instytut Medycyny, Uniwersytet Yangzhou, Yangzhou 225001)

Starzenie sięto proces, w którym tkanki i narządy organizmu ulegają degeneracji funkcjonalnej i morfologicznej, a nawet starzeją się w ciągu życia. Płuco jest bezpośrednio połączone ze środowiskiem zewnętrznym i przyjmuje krążenie krwi z całego ciała. Jest najbardziej podatny na różne szkodliwe czynniki w środowisku i w ciele. Jest to jeden z najwcześniejszych narządów w ciele, w którym dochodzi do starzenia. Rolę wolnych rodników w procesie starzenia potwierdzają badania wielu naukowców. Ten eksperyment wykorzystuje ozon do stworzenia eksperymentalnego modelu starzenia do obserwacjiwpływ polisacharydów z Cistanche na tolerancję na hipoksję, działanie antyoksydacyjne i ultrastrukturę płuc starzejących się myszy. Wpływ. Oczekuje się, że położy podwaliny pod badaniapolisacharydy z Cistanchew opóźnianiu zmian zwyrodnieniowych płuc oraz w opiece nad starszym układem oddechowym.

Celem pracy jest obserwacja zmian zwyrodnieniowych w ultrastrukturze komórek tkanki płucnej u starzejących się eksperymentalnie myszy oraz wpływupolisacharydy z Cistanchena tym. Stosując ozon (Ozon, Ob) ciągłą inhalację przez 4 tygodnie w celu wywołania metody modelowej starzenia się płuc, stosując polisacharyd z Cistanche 50 i 100 gramów do podawania modelowym myszom przez 6 tygodni w celu wykrycia tolerancji niedotlenienia, płuc i ponadtlenku surowicy u starzejących się myszy Dysmutaza (SOD ) aktywność i zawartość dialdehydu malonowego (MDA). Pod mikroskopem elektronowym obserwowano zmiany organelli i ultrastruktury tkanki płucnej. Wyniki Doświadczalne starzejące się myszy wywołane przez ozon znacznie zmniejszyły tolerancję na hipoksję; SOD w płucach i surowicy zmniejszyło się, a MDA wzrosło. W porównaniu z grupą modelową, polisacharyd z Cistanche może znacznie wydłużyć czas tolerancji niedotlenienia u starzejących się myszy (P<0.01), improve="" the="" activity="" of="" sod="" in="" the="" serum,="" reduce="" the="" content="" of="" mda=""><0.01), and="" delay="" the="" degeneration="" of="" mitochondria="" and="" lamellar="" bodies="" in="" the="" lung="" cells="" of="" aging="" mice=""><0.01). conclusion="">Polisacharydy z Cistanche mogą znacznieopóźnij eksperyment Fizjologiczna degeneracja i morfologia komórkowa płucstarzejących się płciowo myszy.

1 materiał

1.1 Zwierzęta

3 mon-age czyste myszy szczepu ICR, 18~22g, ¥^ każda połowa, dostarczone przez Centrum Doświadczalne Zwierząt Uniwersytetu Yangzhou, numer certyfikatu: Su Dongzhi 98002^

1.2 Leki i odczynniki

Polisacharydy z Cistanche: Dostarczone przez Nanjing Wild Plant Research Institute, przygotowane z wodą destylowaną do 2,5 g·LT, 5.0gL-1; Zestawy testowe SOD, MDA są dostarczane przez Nanjing Juli Biomedical Engineering Research Institute.

1.3 Instrument

spektrofotometr ultrafioletowy UV755B, produkt fabryki instrumentów analitycznych w Szanghaju; generator ozonu, produkt Wuxi Medical Instrument Factory; Transmisyjny mikroskop elektronowy H-300, produkt firmy Hitachi w Japonii.

2 Metoda

2 1 Przygotowanie eksperymentalnego modelu starzenia się płuc z urazem zmiany zapachu Myszy ICR zostały wzięte z projektu dziennego i eksperymentalnego, a myszy w grupie modelowej i grupie leczonej zostały pogrupowane losowo.

Eksperymentalny model starzenia był tworzony nieprzerwanie przez 4 tygodnie. W tym samym czasie grupie kontrolnej (weź normalne myszy zakupione w tej samej partii) i grupie modelowej podano 20 ml-kg ^d'1 z normalną solą fizjologiczną, Polisacharyd z grupy leczenia Cistanche I i II Polisacharyd z Cistanche 50, 100 mg-kg-1-d-' podawano dożołądkowo, a okres podawania wynosił 6 tygodni. Po ostatnim podaniu przeprowadzono różne testy indeksowe.

2.2 Metoda badania tolerancji hipoksji (2)

Każdą grupę myszy umieszczono w 250 ml butelce mielącej zawierającej 20 g wapna sodowanego. Wazelinę szczelnie zamknięto i rejestrowano czas od włożenia myszy do butelki do uduszenia i śmierci w normalnej temperaturze i ciśnieniu.

2.3 Płuca i krew

Oznaczenie zawartości SOD^MDA dla każdej grupy myszy 1 h po ostatnim podaniu, usunąć gałki oczne i pobrać krew w celu oddzielenia surowicy; następnie myszy uśmiercono, pobrano tkanki płuc i dodano sól fizjologiczną do szklanego homogenizatora w celu przygotowania 100 g homogenatu tkanki płucnej -f1, aktywność SOD płuc i surowicy określono metodą oksydazy Huangsuyin i określono zawartość MDA metodą kondensacji kwasu tiobarbiturowego.

2.4 Metoda przygotowania próbek do mikroskopii elektronowej (3)

Eksperyment jest podzielony na grupę kontrolną, grupę modelową i grupę wysokodawkową. Metody modelowania i administracji są takie same jak powyżej. Po ostatnim podaniu z każdej grupy wybiera się losowo 3 myszy z każdej grupy i uśmierca je szyjką, po czym pobiera się odpowiednio prawe boki. Tkanka wierzchołka płuc, 0,4 mmol, L-1 aldehyd glutarowy i 0,04 mmol, podwójna fiksacja z L'1 OfeO4, odwadnianie gradientem acetonu, osadzanie Epon 812, ołów-uran barwienie elektronów, transmisyjny mikroskop elektronowy Hitachi H-300 z powiększeniem od 10,000 do 20,000 Obserwuj zmiany i zmiany strukturalne głównych organelli pod wielokrotnością.

2.5 Wyniki obróbki statystycznej wyraża się w dziesiątkach s gleby, a porównanie dwóch średnich próbek wykorzystuje test t.

3. Wyniki

3.1 Wpływ polisacharydu z Cistanche na tolerancję niedotlenienia u starzejących się myszy

Godzinę po ostatnim podaniu myszom w każdej grupie badano czas tolerancji na hipoksję. Wyniki pokazały, że czas, w którym starzejące się myszy mogły tolerować niedotlenienie, był znacznie krótszy niż u normalnych myszy. Czas jest znacznie wydłużony w porównaniu z grupą modelową, ale nie ma znaczącej różnicy w porównaniu z grupą kontrolną, co wskazuje, że polisacharyd z Cistanche może znacznie poprawić tolerancję na hipoksję u starzejących się myszy, patrz Tabela 1

3.2 Wpływ polisacharydu Cistanche na funkcję antyoksydacyjną starzejących się myszy

Krew (surowicę) i tkankę płuc (homogenat płuc) myszy w każdej grupie zebrano po ostatnim podaniu i określono SOD i MDA. Wyniki Aktywność SOD w surowicy i płucach starzejących się myszy zmniejszyła się, a zawartość MDA wzrosła. W porównaniu z grupą kontrolną różnica była znacząca. Polisacharydy z Cistanche mogą zwiększać aktywność SOD surowicy i płuc u starzejących się myszy oraz zmniejszać zawartość MDA. W porównaniu z grupą kontrolną nie ma istotnej różnicy, a różnica w grupie modelu starzenia jest istotna, patrz Tabele 2 i 3.

3.3 Wpływ polisacharydu z Cistanche na ciemność wewnątrzkomórkową komórek nabłonka pęcherzykowego⑷

Metoda produkcji mikroskopu elektronowego jest taka sama jak poprzednio. Analiza morfometryczna: Pod mikroskopem elektronowym każdą próbkę obserwowano w 10 polach widzenia w celu pomiaru organelli. Wyniki wykazały, że mitochondria i ciałka blaszkowate w grupie modelowej uległy zmniejszeniu, błona podstawna uległa pogrubieniu, a liczba polisomów wzrosła. W porównaniu z grupą kontrolną wystąpiły istotne różnice. Poprawiły to polisacharydy z grupy wysokodawkowej Cistanche. W porównaniu z grupą modelową różnica była znacząca i była w zasadzie zbliżona do grupy kontrolnej. Zobacz Tab. 4.

3.4 Zmiany w ultrastrukturze komórek nabłonka płuc u eksperymentalnie starzejących się myszy i wpływ polisacharydów Cistanche

Starzejący się model myszy można zobaczyć pod mikroskopem elektronowym: komórki nabłonka pęcherzyków płucnych typu I są pojedynczą warstwą typu spłaszczonego o grubości około {{0}}.2 pm. Jądro jest małe i gęste. W cytoplazmie okołojądrowej występuje kilka mitochondriów, kompleks Golgiego i rozproszona retikulum endoplazmatyczne. Stosunkowo rzadkie, z mniejszą liczbą mikrowłókien i mikrotubul. Pod mikroskopem elektronowym obserwowano zmiany histologiczne płuc starzejących się myszy. Głównymi zmianami były komórki nabłonka pęcherzykowego typu II. Mikrokosmki na wolnej powierzchni komórek zmniejszyły się lub zniknęły, ciałka blaszkowate były osłabione, struktura blaszkowata była zamazana, a kilka komórek miało małe komórki blaszkowate. Ciało znika i jest wydrążoną lub jednorodną amorficzną substancją podobną do paska o niskiej gęstości elektronowej. Mitochondria i szorstka retikulum endoplazmatyczne są zmniejszone w ciele komórki. Błona podstawna komórek nabłonka wyrostka zębodołowego jest oczywiście pogrubiona, aw śródmiąższu wyrostka zębodołowego widoczna jest proliferacja komórek przepony i fibroblastów (ryc. 1,2). Chociaż wewnętrzna błona jądrowa i obrzęk mitochondrialny były widoczne w grupie polisacharydów Cistanche, stopień był znacznie zmniejszony w porównaniu z grupą modelową (ryc. 3.4). Obserwacje pod mikroskopem elektronowym grupy leczącej wykazały, że komórki nabłonka tego typu były płaskie, o gładkiej powierzchni, bez jądra, a niektóre miały grubość około 0,1. W okołojądrze znajdowało się kilka organelli i widoczne były cząstki radu. Komórki typu II mają krótkie kosmki na powierzchni, dużą liczbę mitochondriów, szorstką retikulum endoplazmatyczne i kompleks Golgiego w cytoplazmie (ryc. 5,6)

Model starzenia się uszkodzeń spowodowanych przez ozon opiera się na wolnorodnikowej teorii starzenia. Uszkodzenia wolnych rodników tlenowych odgrywają ważną rolę w procesie starzenia się płuc. Płuca są jedynym organem komunikującym się ze środowiskiem zewnętrznym. Przez pewien czas zwierzęta są stale wdychane z ozonem. Płuca jako pierwsze są narażone na działanie ozonu i są najbardziej podatne na uszkodzenia. Po dostaniu się ozonu do organizmu szybko generuje wysoce aktywne wolne rodniki anionu ponadtlenkowego. Nadmiar wolnych rodników przekracza zdolność organizmu do wymiatania, niszczy i zużywa enzymy wychwytujące wolne rodniki (takie jak SOD) w organizmie, a następnie powoduje starzenie się narządów, a nawet ciała. W tym eksperymencie znacznie zmniejszyła się zdolność przeciw niedotlenieniu u starzejących się myszy wywołana przez ozon, zmniejszyła się aktywność substancji przeciwutleniającej SOD w surowicy i tkance płucnej, a metabolit MDA peroksydacji lipidów znacznie wzrósł. Dzięki zastosowaniu ciągłej infuzji Rongrong Duojing 50,100 mg-kg1 doświadczalnym starzejącym się myszom, starzejące się myszy mają oczywistą tolerancję na hipoksję. Zwiększona aktywność dysmutazy ponadtlenkowej do wymiatania wolnych rodników. Zawartość metabolitów peroksydacji lipidów jest zmniejszona, co wskazuje, że polisacharydy z Cistanche mogą wzmacniać funkcję antyoksydacyjną starzejących się myszy.

Ciała blaszkowate w cytoplazmie pęcherzykowych komórek nabłonkowych typu n są często wykorzystywane do pomiaru funkcji komórek nabłonkowych. Wydzieliny blaszkowatych ciałek głodowych nazywane są surfaktantami pęcherzykowymi, które występują na granicy pęcherzyków płucnych powietrze-ciecz i mogą zmniejszać napięcie powierzchniowe pęcherzyków. Zmiany starzeniowe ciałek blaszkowatych mogą prowadzić do redukcji substancji powierzchniowo czynnych pęcherzyków płucnych. Napięcie powierzchniowe pęcherzyków jest stosunkowo duże, a siła cofania pęcherzyków wzrasta, co powoduje ich kurczenie się. Obserwacje za pomocą mikroskopii elektronowej wykazały, że komórki nabłonka pęcherzyków płucnych typu n starzejących się myszy uległy znacznym zmianom. Widać osłabienie ciałek blaszkowatych, zatarcie struktury, obrzęk i zmniejszenie mitochondriów, zmniejszenie szorstkiej retikulum endoplazmatycznego oraz znaczne pogrubienie błony podstawnej. Chociaż podobne zmiany strukturalne można zaobserwować po zastosowaniu polisacharydu z Cistanche, stopień ten jest znacznie zmniejszony, co wskazuje, że polisacharyd z Cistanche może znacząco poprawić lub opóźnić morfologiczne zmiany zwyrodnieniowe ciałek blaszkowatych komórek nabłonka płuc i zwyrodnienie mitochondriów u starzejących się myszy. Większość struktury komórkowej jest w zasadzie nienaruszona, co opóźnia zmiany ultrastruktury płuc. Wyniki tego badania sugerują, że polisacharydy z Cistanche mogą zmniejszać strukturalne i funkcjonalne zmiany spowodowane przez uszkodzenia oksydacyjne płuc wywołane przez ozon, opóźniać starzenie się płuc i dostarczać dowodów eksperymentalnych dla badań stosowanych.