Działanie promitotyczne Oenothera Biennis na starzejące się ludzkie fibroblasty skórne Część 2

3. Dyskusja

W tym badaniu zbadaliśmy wpływ hydrofilowego ekstraktu komórkowego Oenothera biennis (ObHEx) na starzenie się komórek, ponieważ wykazywał właściwości przeciwstarzeniowe skóry podczas testów w modelach in vitro i ex vivo [18]. Zastosowaliśmy podobny starzejący się model NHDF poddany SIPS do leczenia H2O2 [21,22].

Glikozyd cistanche może również zwiększać aktywność SOD w tkankach serca i wątroby oraz znacznie zmniejszać zawartość lipofuscyny i MDA w każdej tkance, skutecznie wymiatając różne reaktywne rodniki tlenowe (OH-, H₂O₂, itp.) i chroniąc przed uszkodzeniem DNA spowodowanym przez rodniki OH. Glikozydy fenyloetanoidowe Cistanche mają silną zdolność wychwytywania wolnych rodników, wyższą zdolność redukującą niż witamina C, poprawiają aktywność SOD w zawiesinie plemników, zmniejszają zawartość MDA i mają pewien ochronny wpływ na funkcję błony plemników. Polisacharydy Cistanche mogą zwiększać aktywność SOD i GSH-Px w erytrocytach i tkankach płuc eksperymentalnie starzejących się myszy wywołaną przez D-galaktozę, a także zmniejszać zawartość MDA i kolagenu w płucach i osoczu oraz zwiększać zawartość elastyny, mają dobry efekt zmiatania DPPH, przedłuża czas niedotlenienia u starzejących się myszy, poprawia aktywność SOD w surowicy i opóźnia fizjologiczną degenerację płuc u doświadczalnie starzejących się myszy Eksperymenty z degeneracją morfologiczną komórek wykazały, że Cistanche ma dobrą zdolność przeciwutleniającą i ma potencjał, aby być lekiem do zapobiegania i leczenia chorób związanych ze starzeniem się skóry. Jednocześnie echinakozyd w Cistanche ma znaczną zdolność wychwytywania wolnych rodników DPPH oraz zdolność wychwytywania reaktywnych form tlenu i zapobiegania powstawaniu wolnych rodników-

indukował degradację kolagenu, a także ma dobry wpływ naprawczy na uszkodzenia anionowe wolnych rodników tyminy.

Kliknij Gdzie mogę kupić Cistanche

【Więcej informacji:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Aby zrozumieć mechanizm działania ObHEx na starzejące się ludzkie fibroblasty skóry, poprzez ujawnienie szlaków biologicznych zmienionych przez ekstrakt, przeprowadziliśmy niezależne od danych podejście proteomiczne spektrometrii mas. Pozwoliło nam to uzyskać najbardziej kompletną jak dotąd analizę proteomu starzejących się komórek i po raz pierwszy jednoczesną ocenę ilościową wielu markerów starzenia.

Przede wszystkim, aby ocenić indukcję starzenia przez traktowanie H2O2 na komórkach NHFD, określiliśmy ilościowo znane markery starzenia. Nasze dane proteomiczne potwierdziły indukcję starzenia przez stres oksydacyjny: rzeczywiście zaobserwowaliśmy zmienione poziomy już znanych markerów starzenia związanych ze zwiększoną zawartością lizosomów (GLB1 i FUCA1), uszkodzeniem DNA (ATR, ATM, MACROH2A1 i MACRO2A2) i fazą cyklu komórkowego G2 aresztowanie (CDK1NA i MKI67). Ponadto analiza wzbogacenia szlaku białek o najbardziej obniżonej regulacji w komórkach traktowanych H2O2 w porównaniu z komórkami kontrolnymi wskazuje na mitozę, odzwierciedlającą zatrzymanie starzejącej się proliferacji.

Porównując proteom komórek SIPS NHDF traktowanych ObHEx z komórkami nietraktowanymi, stwierdziliśmy, że traktowanie ekstraktem było w stanie częściowo przywrócić poziomy białek i kompleksów odgrywających kluczową rolę w kilku etapach mitozy. Inkubacja ObHEx zwiększyła poziom CDK1, kluczowego białka mitotycznego, które wyzwala wejście w mitozę poprzez tworzenie kompleksu z cykliną B [34]. Co więcej, wszystkie pięć podjednostek kompleksu kondensyny I uległo zwiększeniu. Kompleks ten składa się z dwóch strukturalnych podjednostek utrzymania chromosomów (SMC), SMC2 i SMC4, oraz trzech podjednostek innych niż SMC, NCAPD2, NCAPH i NCAPG. W prometafazie funkcją kompleksu kondensyny I jest promowanie typu kondensacji chromosomów poprzez wprowadzenie dodatnich superskrętów do DNA w sposób zależny od ATP [35]. Oprócz tego ekstrakt zwiększał regulację KNTC1, NUF2 i TRIP13, które są trzema białkami związanymi z kinetochorem, dużym kompleksem, który podczas prometafazy łączy centromerową chromatynę z mikrotubulami z przeciwległych biegunów wrzeciona, aby sprzyjać segregacji chromatyd siostrzanych. 36,37]. Stwierdzono również częściowe przywrócenie poziomów białek MCM. Białka te są rdzeniem replikacyjnego kompleksu helikazy, który rozwija dwuniciowy DNA, dostarczając jednoniciowe jako matryce dla polimerazy DNA. Kompleks MCM jest przekształcany w aktywną helikazę podczas fazy S, ale jest już ładowany na chromatynę podczas telofazy [38,39]. Ekstrakt zwiększył również poziomy IQGAP3, PBK i DHFR. Pierwszy, IQGAP3, jest ważnym regulatorem progresji mitotycznej, ponieważ promuje aktywność cdk7, niezbędną do aktywacji Cdc2 [40,41]; PBK jest kinazą aktywną tylko w mitozie; po ufosforylowaniu oddziałuje z p53, destabilizując go i osłabiając szlak uszkodzeń DNA [42]; a DHFR jest kluczowym enzymem w biosyntezie DNA, którego poziomy są znacznie osłabione w starzejących się ludzkich fibroblastach [43].

Testy bioortogonalne wykazały również zdolność ObHEx do częściowego odwracania cech charakterystycznych starzenia, mianowicie aktywności lizosomalnej i zatrzymania cyklu komórkowego. Rzeczywiście, aby sprawdzić, czy przywrócenie ekspresji białka mitotycznego przez ObHEx przekłada się na reaktywację cyklu komórkowego, przeprowadziliśmy eksperymenty FACS (sortowanie komórek aktywowane fluorescencją) na komórkach SIPS NHDF traktowanych ekstraktem lub nie. Wykazali, że ObHEx był w stanie zmniejszyć frakcję komórek zablokowanych w fazie G2 i promować ich ponowne wejście do cyklu komórkowego starzejących się komórek.

4. Materiały i metody

4.1. Hodowlę komórkową

Normalne ludzkie fibroblasty skórne (NHDF; Promocell) hodowano w pożywce Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM; Gibco) uzupełnionej 10 procentami płodowej surowicy bydlęcej (FBS; Gibco) i 500 U/ml penicyliny-streptomycyny (Gibco) w 95 procentach powietrza , 5 procent CO2 i wilgotna atmosfera w temperaturze 37 ◦C.

4.2. Indukcja przedwczesnego starzenia się wywołanego stresem (SIPS)

W sumie 10 1200 000 komórek NHDF wysiano do każdej z 60 mm szalek do hodowli komórek, jeden dzień przed ich inkubacją ze 100 µM H2O2 w temperaturze 37 ◦C przez 2 godziny [21,22]. Następnie H2O2 przemyto solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS; Gibco) w celu zakończenia traktowania i komórki hodowano w normalnej pożywce przez 4 dni. W przypadku komórek niestarzejących się, użytych jako kontrola, 2240 000} komórek NHDF wysiano do każdej z 60 mm szalek do hodowli komórkowej. Doświadczenie przeprowadzono w 5 powtórzeniach biologicznych.

4.3. Oenothera Biennis Hydrofilowy Ekstrakt (ObHEx) Preparat

Ekstrakt został przygotowany w laboratoriach Arterra Bioscience SpA [18]. Hodowle komórkowe otrzymano z liści roślin Oenothera biennis (dostarczonych przez GEEL Floricultura ss) przez indukowanie proliferacji komórek merystematycznych na płytkach z agarem stałym, aż do uzyskania modzeli. Komórki przeniesiono do płynnej pożywki wzrostowej (Gamborg B5, uzupełnionej kwasem 2,4-dichlorofenoksyoctowym (1 mg/l), adeniną (1 mg/l) i kinetyną (0,01 mg/l )) i hodowano jako kultury zawiesinowe z wytrząsaniem orbitalnym. Po uzyskaniu hodowli około 150 g/l komórki zebrano i poddano lizie w PBS przy pH 7,4 w celu przygotowania rozpuszczalnego w wodzie ekstraktu. Po liofilizacji otrzymany proszek rozpuszczano w wodzie lub pożywce do hodowli komórek w stężeniach odpowiednich do badań.

4.4. Oenothera Biennis hydrofilowy ekstrakt (ObHEx) Kuracja

Komórki NHDF inkubowano przez 24 godziny z 0.{4}} 1 procentem (p/v) ObHEx w kompletnej pożywce. Następnie komórki przemyto trzykrotnie PBS i traktowano przez dodatkowe 24 godziny 0,01% (p/v) ObHEx w pożywce wolnej od surowicy. Następnie oddzielono je przez trypsynizację, odwirowano przy 500 g przez 10 min w 4°C i przemyto dwukrotnie PBS. Nietraktowane komórki kontrolne przeszły te same inkubacje bez ObHEx.

4.5. Przygotowanie próbki do analizy proteomicznej

Peletki ponownie zawieszono w 60µl buforu do testu radioimmunoprecypitacyjnego (RIPA) i poddano lizie przez sonikację. Stężenie białek w lizatach komórkowych oznaczano ilościowo przy użyciu zestawu DC™ Protein Assay Kit (Biorad; #5000112). Trawienie na mikrokolumnie wirówkowej S-TrapTM (Protifi, Huntington, CA, USA) przeprowadzono na 50 µg lizatów komórkowych zgodnie z instrukcjami producenta. Pokrótce, próbki redukowano za pomocą 20 mM tris(2-karboksyetylo)fosfiny (TCEP) i alkilowano za pomocą 50 mM tioacetamidu (CAA) przez 15 minut w temperaturze pokojowej. Następnie dodano wodny roztwór kwasu fosforowego do końcowego stężenia 2,5%, a następnie dodano bufor wiążący S-Trap (90% wodny metanol, 100 mM TEAB, pH 7,1). Następnie mieszaniny załadowano na kolumny S-Trap. Przeprowadzono pięć dodatkowych etapów przemywania w celu dokładnego wyeliminowania SDS. Następnie lizaty komórkowe trawiono 2,5 µg trypsyny (Promega) w temperaturze 47°C przez 1 godzinę. Po elucji peptydy wysuszono pod próżnią, ponownie zawieszono w 2% ACN, 0,1% FA i oznaczono ilościowo za pomocą Nanodrop.

4.6. Identyfikacja i ocena ilościowa białek nanoLC-MS/MS

Łącznie 4{2}}0 ng każdej próbki wstrzyknięto na nanopłytkę (Bruker Daltonics, Brema, Niemcy) system wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) połączony z timsTOF Pro (Bruker Daltonics, Brema , Niemcy) spektrometr masowy. Rozdział HPLC (Rozpuszczalnik A: {{30}},1 procent kwasu mrówkowego w wodzie; Rozpuszczalnik B: 0,1 procent kwasu mrówkowego w acetonitrylu) przeprowadzono przy 250 l/min, stosując kolumnę z upakowanym emiterem (C18, 25 cm × 75 µm 1,6 µm) (Ion Optics, Fitzroy, Australia) przy użyciu elucji gradientowej (2 do 13 procent rozpuszczalnika B przez 41 minut; 13 do 20 procent przez 23 minuty; 20 procent do 30 procent przez 5 minut; 30 procent do 85% przez 5 min, a na koniec 85% przez 5 min w celu przemycia kolumny). Dane spektrometrii masowej uzyskano przy użyciu metody akwizycji niezależnej od danych analizy równoległej akumulacji fragmentacji szeregowej (diaPASEF). Ustawienia pieluszek były następujące: zakres masy od 400 do 1200 Da, zakresy ruchliwości od 0,60 do 1,43 1}/k0, liczba okien ruchomości 1, szacowany czas cyklu 1,79 s, kroki masy na cykl 32.

4.7. Przetwarzanie danych MS i analiza bioinformatyczna

Analizę danych przeprowadzono za pomocą oprogramowania DIA-NN (wersja 1.8) [44]. Przeszukano ludzką bazę danych UniProtKB/Swiss-Prot Homo sapiens (wydanie z lutego 2021 r., 20 408 wpisów) przy użyciu przepływu pracy bez biblioteki. W tym celu sprawdzono opcje „Skrót FASTA do swobodnego wyszukiwania/generowania bibliotek” oraz „Przewidywania widm głębokiego uczenia, RT i IM” pod kątem generowania jonów prekursorowych. Dozwolone były maksymalnie 2 pominięte cięcia trypsyny, a maksymalna zmienna modyfikacja została ustawiona na 5. Karbamidometylacja (Cys) została ustawiona jako stała modyfikacja, podczas gdy wycięcie N-końcowej metioniny białka, utlenianie metioniny i N-końcowa acetylacja zostały ustawione jako zmienne modyfikacje. Zakres długości peptydu ustalono na 7–30 aminokwasów, zakres ładunku prekursora 2–4, zakres m / z prekursora 300–1800, a jon fragmentu m / z zakres 200–1800. Aby przeszukać macierzyste jony masy i fragmentów, dokładność została wywnioskowana automatycznie przez DIA-NN i została ustawiona na około 13 ppm dla każdej analizy. Wskaźniki fałszywych odkryć (FDR) na poziomie białka i peptydu zostały ustawione na 1 procent. Mecz między biegami był dozwolony. W przypadku strategii kwantyfikacji zastosowano Robust LC (wysoka precyzja), zgodnie z zaleceniami w dokumentacji oprogramowania, podczas gdy dla innych parametrów algorytmu zachowano ustawienia domyślne.

Analizę statystyczną i bioinformatyczną przeprowadzono za pomocą oprogramowania Perseus (wersja 1.6.15) bezpłatnie dostępnego na stronie internetowej (dostęp 22 czerwca 2{19}}21) [45] oraz R/R Studio i RStudio wersja 20 21.09.{8}} (dostęp: 12 listopada 2021 r.). Wszystkie analizy statystyczne R przeprowadzono przy użyciu pakietu R stats. Zastosowano macierz raportu pg wyjściową z DIA-NN i intensywności przekształcono log2 do analizy statystycznej. Do porównania statystycznego ustawiliśmy cztery grupy, z których każda zawierała 5 powtórzeń biologicznych. Następnie przefiltrowaliśmy dane, aby zachować tylko białka z co najmniej 3 prawidłowymi wartościami w co najmniej jednej grupie. Następnie dane zostały przypisane, aby wypełnić brakujące punkty danych, tworząc rozkład Gaussa liczb losowych z odchyleniem standardowym 33 procent w stosunku do odchylenia standardowego zmierzonych wartości i przesunięciem średniej o 1,8 odchylenia standardowego w dół, aby zasymulować rozkład niskich wartości sygnału. Test t-Studenta przeprowadzono między SEN a CTRL FDR < 0,05, S0=0,1, aby potwierdzić obecność markerów specyficznych dla starzenia. Następnie, aby zbadać, czy różnica w wielkości efektu między brakiem lub obecnością traktowania jest taka sama dla komórek, w których indukowano starzenie się, czy nie, badano interakcję między obydwoma czynnikami (tj. w R. Następnie wartości p uzyskane dla interakcji obu czynników zostały dostosowane do wielokrotnego testowania metodą Benjaminiego–Hochberga [46] w celu kontrolowania wskaźnika fałszywych odkryć (FDR). Na koniec przeprowadzono analizę post hoc Tukey HSD na białkach wykazujących wartość q <0, 05. Dane proteomiki spektrometrii mas zostały zdeponowane w ProteomeXchange Consortium za pośrednictwem partnerskiego repozytorium PRIDE [47] z identyfikatorem zestawu danych PXD034222.

4.8. Barwienie ß-galaktozydazą związane ze starzeniem

Aktywność ß-galaktozydazy związanej ze starzeniem się (SA-ß-gal) oceniano przy użyciu zestawu do barwienia Cell Signaling Technology (#986{9}}). Łącznie 1250 000 komórek NHDF/dołek wysiano do 6-dołkowej płytki jeden dzień przed SIPS; podczas gdy jako kontrola 250 000 komórek/studzienkę. Po 4 dniach w normalnej pożywce komórki inkubowano lub nie z 0, 01 procent (p/v) ObHEx przez 48 godzin. Następnie przemyto je PBS i potraktowano roztworem utrwalającym przez 15 minut. Po dwóch przemyciach PBS komórki inkubowano z roztworem barwiącym ß-gal (końcowe pH 6,0) zawierającym 5-bromo-4-chloro-3-indolil- -D-galakto -piranozyd (X-Gal) w temperaturze 37 ◦C w suchym inkubatorze przez 20 godzin. Komórki dodatnie są niebieskie. Kolor jest spowodowany rozszczepieniem X-Gal w galaktozie i 5-bromo-4-chloro-3-indoksylu (X) przez SA-ß-gal. Indoksyl utlenia się do 5,{32}}dibromo-4,40 -dichloro-indygo, które tworzy intensywnie niebieski osad. Odsetek komórek dodatnich w całkowitej liczbie komórek oceniono przez zliczenie 100–150 komórek na 5 losowo wybranych obrazach zarejestrowanych przez mikroskop dla każdego stanu. Komórki zliczono stosując oprogramowanie ImageJ. Eksperyment przeprowadzono w trzech powtórzeniach.

4.9. Analiza sortowania komórek aktywowana fluorescencją

Łącznie {{0}} komórek NHDF/dołek wysiano do 6-dołkowej płytki jeden dzień przed SIPS; podczas gdy jako kontrola, 50 000 komórek/dołek. Po 4 dniach w normalnej pożywce komórki kontrolne i starzejące się traktowano lub nie 0, 01 procent (p / v) ObHEx przez 72 godziny. Następnie komórki inkubowano w obecności 5 µg/ml Hoechst 33342 przez 30 min w 37°C. Po trypsynizacji i odwirowaniu przy 500 g przez 2 min, ponownie zawieszono je w 200 µl PBS. Na koniec zmierzono fluorescencję komórek za pomocą analizatora komórek BD LSFortessa Cell Analyzer. Dane analizowano przy użyciu oprogramowania FlowJo v10.8.1. Eksperyment przeprowadzono w trzech powtórzeniach.

5. Wnioski

Uzyskane tutaj globalne profilowanie proteomu związane z głębokim starzeniem dostarcza setek białek rozregulowanych przez SIPS, które mogą być wykorzystane przez społeczność naukową do dalszego zrozumienia starzenia i oceny skutków nowych potencjalnych modulatorów. Co więcej, nasza praca dowodzi promitotycznego mechanizmu działania ObHEx na starzejące się fibroblasty ludzkiej skóry: poprzez wzrost ekspresji białek mitotycznych, sprzyja przywróceniu proliferacji starzejących się komórek. Dlatego w oparciu o te wyniki proponujemy ObHEx jako silny adiuwant przeciwko starzeniu się związanemu ze starzeniem się skóry.

Autorskie Wkłady:Konceptualizacja, SC, MCM i ICG; metodologia, SC, KR, IM, CC (Cerina Chhuon) i ICG; oprogramowanie, KR; dochodzenie, SC, IM, CC (Cerina Chhuon), KT, SF, ADL, IP i CC (Corinne Cordier); zasoby, MCM i ICG; pisanie — przygotowanie projektu oryginału, SC i ICG; pisanie — recenzja i redakcja, SC, MCM i ICG Wszyscy autorzy przeczytali i zgodzili się na opublikowaną wersję manuskryptu.

Oświadczenie o dostępności danych:Dane proteomiki spektrometrii mas zostały zdeponowane w ProteomeXchange Consortium za pośrednictwem partnerskiego repozytorium PRIDE [47] z identyfikatorem zbioru danych PXD034222 (szczegóły konta recenzenta: nazwa użytkownika: recenzent_pxd034222@ebi.ac.uk; hasło: fK9Pjv90) .

Podziękowanie: Badanie to było wspierane przez Programma Operativo Complementare Ricerca e Innovazione 2014–2020, Asse I „Capitale Umano”, Azione I.1 „Dottorati Innovativi con caratterizzazione Industriale”. Dziękujemy pozostałym członkom platformy Proteomics Neckerowi Vincentowi Jungowi i Joannie Lipeckiej za ich nieocenione wsparcie naukowe i owocne sugestie.

Bibliografia

1. Di Micco, R.; Krizhanovsky, V.; Baker, D.; d'Adda di Fagagna, F. Starzenie się komórek w procesie starzenia: od mechanizmów do możliwości terapeutycznych. Nat. Wielebny Mol. Biol komórkowy. 2021, 22, 75–95. [CrossRef] [PubMed]

2. González-Gualda, E.; Piekarz, AG; Fruk, L.; Muñoz-Espín, D. Przewodnik po ocenie starzenia się komórek in vitro i in vivo. LUTY J. 2021, 288, 56–80. [CrossRef] [PubMed]

3. Sikora, E.; Bielak-Żmijewska, A.; Mosieniak G. Czym jest, a czym nie jest starzenie się komórek. Postępy Biochem. 2018, 64, 110–118. [CrossRef] [PubMed]

4. Choi, E.-J.; Kil, IS; Cho, EG. Pęcherzyki zewnątrzkomórkowe pochodzące ze starzejących się fibroblastów osłabiają skórny wpływ na różnicowanie keratynocytów. Int. J. Mol. nauka 2020, 21, 1022. [CrossRef] [PubMed]

5. Krtolica, A.; Parrinello S.; Lockett, S.; Desprez, PY; Campisi, J. Starzejące się fibroblasty promują wzrost komórek nabłonka i powstawanie nowotworów: związek między rakiem a starzeniem. proc. Natl. Acad. nauka Stany Zjednoczone 2001, 98, 12072–12077. [Odnośnik]

6. Właschek, M.; Maity, P.; Makrantonaki, E.; Scharffetter-Kochanek, K. Tkanka łączna i starzenie się fibroblastów w starzeniu się skóry. J. Inwestuj. Dermatol. 2021, 141, 985–992. [Odnośnik]

7. Paez-Ribes, M.; González-Gualda, E.; Doherty, GJ; Muñoz-Espín, D. Celowanie w starzejące się komórki w medycynie translacyjnej. EMBO mol. Med. 2019, 11, e10234. [Odnośnik]

8. Soto-Gamez, A.; Demaria, M. Interwencje terapeutyczne w przypadku starzenia się: przypadek starzenia się komórek. Odkrycie leku Dzisiaj 2017, 22, 786–795. [Odnośnik]

9. Latorre, E.; Birar, W.C.; Sheerin, AN; Jeynes, JCC; Hooper, A.; Dawe, HR; Melzer, D.; Cox, LS; Faragher, RGA; Ostler, el.; i in. Modulacja małych cząsteczek ekspresji czynnika splicingowego jest związana z ratowaniem przed starzeniem się komórek. BMC Cell Biol. 2017, 18, 31. [Odsyłacz]

10. Munir, R.; Semmar, N.; Farman, M.; Ahmad, NS Zaktualizowany przegląd działań farmakologicznych i składników fitochemicznych wiesiołka (rodzaj Oenothera). Azjatycki Pac. J.Trop. Biomed. 2017, 7, 1046–1054. [Odnośnik]

11. Timoszuk, M.; Bielawska K.; Skrzydlewska, E. Wiesiołek dwuletni (Oenothera biennis) Aktywność biologiczna zależna od składu chemicznego. Przeciwutleniacze 2018, 7, 108. [CrossRef]

12. Lee, SY; Kim, CH; Hwang, BS; Choi, KM; Yang, I.-J.; Kim, G.-Y.; Choi, YH; Park, C.; Jeong, J.-W. Ochronne działanie Oenothera Biennis przed stresem oksydacyjnym wywołanym nadtlenkiem wodoru i śmiercią komórek w keratynocytach skóry. Życie 2020, 10, 255. [Odsyłacz]

13. Granica S.; Czerwińska, ME; Piwowarski, JP; Ziaja M.; Kiss, AK Skład chemiczny, działanie przeciwutleniające i przeciwzapalne ekstraktów z nadziemnych części Oenothera Biennis L. i Oenothera Paradoxa Hudziok otrzymanych po uprawie nasion. J. Agric. Chemia spożywcza. 2013, 61, 801–810. [Odnośnik]

14. Fecker, R.; Buda, V.; Alexa, E.; Avram, S.; Paweł, IZ; Muntean, D.; Cocan, I.; Watz, C.; Minda, D.; Dehelean, Kalifornia; i in. Badania fitochemiczne i biologiczne ekstraktu wodno-alkoholowego Oenothera Biennis L. Biomolecules 2020, 10, 818. [CrossRef]

15. Schäfer, L.; Kragballe, K. Suplementacja olejem z wiesiołka w atopowym zapaleniu skóry: wpływ na kwasy tłuszczowe w neutrofilach i naskórku. Lipidy 1991, 26, 557–560. [Odnośnik]

16. Barbulova, A.; Apone, F.; Colucci, G. Roślinne kultury komórkowe jako źródło aktywnych składników kosmetycznych. Kosmetyki 2014, 1, 94–104. [Odnośnik]

17. Cezar, ŁK; Cech, NB Synergia i antagonizm w ekstraktach z produktów naturalnych: Kiedy 1 plus 1 nie równa się 2. Nat. Szturchać. Przedstawiciel 2019, 36, 869–888. [Odnośnik]

18. Ceccacci, S.; De Lucia, A.; Tito, A.; Tortora, A.; Falanga, D.; Arciello S.; Ausanio, G.; Di Cicco, C.; Monti, MC; Apone, F. Ekstrakt z kultur komórkowych An Oenothera Biennis obdarzony działaniem przeciwstarzeniowym skóry poprawia właściwości mechaniczne komórek. Metabolity 2021, 11, 527. [CrossRef]

19. Farwick, M.; Köhler, T.; Schild, J.; Mentel, M.; Maczkiewicz, U.; Pagani, V.; Bonfigli, A.; Rigano, L.; Bureik, D.; Gauglitz, GG Pentacykliczne triterpeny z Terminalia Arjuna wykazują wiele korzyści dla starzejącej się i suchej skóry. Farmakologia skóry. Fizyol. 2014, 27, 71–81. [Odnośnik]

20. Bonte, F.; Dumas, M.; Chaudagne, C.; Meybeck, A. Wpływ kwasu azjatyckiego, kwasu madekasowego i azjatyckiego na syntezę ludzkiego kolagenu I. Planta Med. 1994, 60, 133–135. [Odnośnik]

21. Chowdhary, S. Wpływ stresu oksydacyjnego na indukowanie starzenia się ludzkich fibroblastów. J. Karolina Południowa. Acad. nauka 2018, 16, 2.

22. Wang, Z.; Wei, D.; Xiao, H. Metody indukcji starzenia się komórek przy użyciu stresu oksydacyjnego. Metody Mol. Biol. 2013, 1048, 135–144. [PubMed]

23. Hildebrand, DG; Lehle S.; Borst, A.; Haferkamp, ​​S.; Essmann, F.; Schulze-Osthoff, K. - Fukozydaza jako nowy wygodny biomarker starzenia się komórek. Cykl komórkowy 2013, 12, 1922–1927. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, BY; Han, JA; Im, JS; Morrone, A.; Johung, K.; Goodwin, EC; Kleijer, WJ; DiMaio, D.; Hwang, ES Beta-galaktozydaza związana ze starzeniem jest lizosomalną beta-galaktozydazą. Starzejąca się komórka 2006, 5, 187–195. [CrossRef] [PubMed]

25. Gorgoulis, V.; Adams, PD; Alimonti, A.; Bennett, DC; Bischof, O.; Biskup C.; Campisi, J.; Collado, M.; Evangelou, K.; Ferbeyre, G.; i in. Starzenie się komórek: definiowanie ścieżki do przodu. Komórka 2019, 179, 813–827. [Odnośnik]

26. Matsuoka, S.; Ballif, BA; Smogorzewska, A.; McDonald, ostry dyżur; Hurow, KE; Luo, J.; Bakalarski, CE; Zhao, Z.; Solimini, N.; Lerenthal, Y.; i in. Analiza substratów ATM i ATR ujawnia rozległe sieci białek reagujące na uszkodzenia DNA. Nauka 2007, 316, 1160–1166. [Odnośnik]

27. Zhang, R.; Chen, W.; Adams, PD Analiza molekularna powstawania ognisk heterochromatyny związanych ze starzeniem. Mol. Biol komórkowy. 2007, 27, 2343–2358. [Odnośnik]

28. LaBaer, ​​J.; Garrett, lekarz medycyny; Stevenson, LF; Slingerland, JM; Sandhu, C.; Chou, HS; Fattaey, A.; Harlow, E. Nowe czynności funkcjonalne dla rodziny inhibitorów CDK P21. Geny Dev. 1997, 11, 847 – 862. [Odnośnik]

29. Scholzen, T.; Gerdes, J. Białko Ki-67: ze znanego i nieznanego. J. Cell Physiol. 2000, 182, 311–322. [Odnośnik]

30. Passos, JF; von Zglinicki, T. Metody sortowania komórek młodych i starzejących się komórek. Metody Mol. Biol. 2007, 371, 33–44.

31. Dai, Y.; Tang, H.; Pang, S. Kluczowe role fosfolipidów w regulacji starzenia się i długości życia. Przód. Fizyol. 2021, 12, 1998. [Odsyłacz]

32. Dashty, M. Hedgehog Signal Pathway jest powiązany z chorobami związanymi z wiekiem. J. Diabetes Metab. 2014, 5, 2. [Odsyłacz]

33. Wang, D.; Lu, P.; Liu, Y.; Chen, L.; Zhang, R.; Sui, W.; Dumitru, AG; Chen, X.; Wen, F.; Ouyang, H.-W.; i in. Izolacja żywych przedwcześnie starzejących się komórek przy użyciu technologii FUCCI. nauka Rep. 2016, 6, 30705. [Odsyłacz]

34. Qian, J.; Beullens, M.; Huang, J.; De Munter, S.; Dzierżawa, B.; Bollen, M. Cdk1 porządkuje zdarzenia mitotyczne poprzez koordynację przełącznika fosfatazy związanego z chromosomem. Nat. Komuna. 2015, 6, 10215. [Odsyłacz]

35. Kong, M.; Cutts, EE; Pan, D.; Beuron, F.; Kaliyappan, T.; Xue, C.; Morris, PE; Musacchio, A.; Vannini, A.; Greene, EC Human Condensin I i II napędzają rozległe, zależne od ATP zagęszczanie DNA związanego z nukleosomem. Mol. Komórka 2020, 79, 99–114.e9. [Odnośnik]

36. Kops, GJPL; Gassmann, R. Ukoronowanie kinetochoru: włóknista korona w segregacji chromosomów. Trendy Cell Biol. 2020, 30, 653–667. [Odnośnik]

37. Ma, HT; Poon, RYC TRIP13 Funkcje w ustanowieniu punktu kontrolnego zespołu wrzeciona poprzez uzupełnienie O-MAD2. Przedstawiciel komórki 2018, 22, 1439–1450. [Odnośnik]

38. Kuipers, MA; Stasewicz, TJ; Sasaki, T.; Wilson, KA; Hazelwood, KL; McNally, JG; Davidson, MW; Gilbert, DM Wysoce stabilne ładowanie białek Mcm na chromatynę w żywych komórkach wymaga replikacji do rozładowania. J. Cell Biol. 2011, 192, 29–41. [Odnośnik]

39. Meng, Q.; Gao, J.; Zhu, H.; On, H.; Lu, Z.; Hong, M.; Zhou, H. Badanie proteomiczne seryjnie pasażowanych komórek fibroblastów skóry ludzkiej ujawnia regulację w dół białek kompleksu chromosomów kondensacyjnych zaangażowanych w starzenie replikacyjne. Biochem. Biofiza. Rez. Komuna. 2018, 505, 1112–1120. [Odnośnik]

40. Larochelle, S.; Pandur, J.; Fisher, RP; Salz, Wielka Brytania; Suter, B. Cdk7 jest niezbędny do mitozy i aktywności kinazy aktywującej Cdk in vivo. Geny Dev. 1998, 12, 370–381. [Odnośnik]

41. Leone, M.; Cazorla-Vázquez, S.; Ferrazzi, F.; Wiederstein, JL; Grundl, M.; Weinstock, G.; Vergarajauregui, S.; Eckstein, M.; Krüger, M.; Gaubatz S.; i in. IQGAP3, cel YAP, jest wymagany do prawidłowej progresji cyklu komórkowego i stabilności genomu. Mol. Rak Res. 2021, 19, 1712–1726. [CrossRef] [PubMed]

42. Nandi, AK; Ford, T.; Fleksher, D.; Neuman, B.; Rapoport, AP Tłumienie punktu kontrolnego uszkodzenia DNA przez PBK, nową kinazę mitotyczną, obejmuje interakcję białko-białko z supresorem guza P53. Biochem. Biofiza. Rez. Komuna. 2007, 358, 181–188. [CrossRef] [PubMed]

43. Dobry, L.; Dimri, lekarz ogólny; Campisi, J.; Chen, KY Regulacja ekspresji genu reduktazy dihydrofolianowej i składników E2F w ludzkich diploidalnych fibroblastach podczas wzrostu i starzenia. J. Cell Physiol. 1996, 168, 580–588. [Odnośnik]

44. Demichev, V.; Messner, CB; Vernardis, SI; Lilley, KS; Ralser, M. DIA-NN: Sieci neuronowe i korekcja zakłóceń umożliwiają głębokie pokrycie proteomem przy wysokiej przepustowości. Nat. Metody 2020, 17, 41–44. [Odnośnik]

45. Tyanova, S.; Temu, T.; Sinitcyn, P.; Carlson, A.; Hein, MÓJ; Geiger, T.; Mann, M.; Cox, J. Platforma obliczeniowa Perseusza do kompleksowej analizy danych (Prote) Omics. Nat. Metody 2016, 13, 731–740. [Odnośnik]

46. ​​Benjamini, Y.; Hochberg, Y. Kontrolowanie wskaźnika fałszywych odkryć: praktyczne i skuteczne podejście do wielokrotnego testowania. JR Stat. soc. Ser. B (metodol.) 1995, 57, 289–300. [Odnośnik]

47. Perez-Riverol, Y.; Bai, J.; Bandla, C.; García-Seisdedos, D.; Hewapathirana, S.; Kamatchinathan, S.; Kundu, DJ; Prakasz, A.; Frericks-Zipper, A.; Eisenacher, M.; i in. Zasoby bazy danych PRIDE w 2022 r.: centrum dowodów proteomicznych opartych na spektrometrii mas. Kwasy nukleinowe Res. 2021, 50, D543–D552. [Odnośnik]

【Więcej informacji:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】