Badanie nad chemicznymi składnikami Cistanche Deserticola, chińskiego leku ziołowego do odżywiania nerek i wzmacniania Yang
Mar 09, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964audrey.hu@wecistanche.com
Wprowadzenie
Cistanche deserticolanależąca do rodziny Orobanchaceae jest suchą, mięsistą łodygą Cistanche deserticola, która jest słodka, słona i ciepła. Ma działanie Tonizujące nerki, wzmacniające Yang, nawilżające jelita i rozluźniające jelita. Stosowany jest głównie w leczeniu impotencji, przeziębienia i bólu w talii i kolanach, niepłodności, suchości jelit i zaparć. Zgłaszano również działania farmakologiczne Cistanche deserticola.
Instytut Tradycyjnej Medycyny Chińskiej Chińskiej Akademii Tradycyjnej Medycyny Chińskiej przeprowadził badania chemiczne i farmakologiczne dotycząceCistanche deserticola. Udowodniono, że jego ekstrakt etanolowy wpływa na układ odpornościowy. Oddzielono i zidentyfikowano dziewięć związków jako D-Mannitol - Sitosterol, daukosterol, kwas bursztynowy, Triakontanol, 8-glukozyd epibrucyny, betaina, glikolipid kwasu kawowego i związki polisacharydowe. Oprócz mannitolu i glukozydu 8-epibrucyny po raz pierwszy uzyskano inne składniki z Cistanche deserticola. Glikolipid kwasu kawowego, betaina, mannitol, kwas bursztynowy i inne związki wykazują różnorodne działania fizjologiczne. Mają wpływ na układ odpornościowy, funkcje seksualne, układ sercowo-naczyniowy, wątrobę, przeciwdziałają starzeniu się i tak dalej.
Część eksperymentalna
Temperaturę topnienia mierzono mikroskopem Boetius PHMK, a termometr nie był regulowany; Spektrometrię masową (EI) wyznaczono za pomocą przyrządu MMH 70-70 (Wielka Brytania), a FD wyznaczono za pomocą chromatografii gazowej-spektrometru masowego M-80 (Japonia); Magnetyczny rezonans jądrowy (widmo wodoru) oznaczano za pomocą przyrządu typu JEOL FX 90Q (Japonia); widmo ultrafioletowe zostało określone za pomocą przyrządu typu UV-3000; Widmo w podczerwieni mierzono przyrządem Hitachi typu 260-50, tabletkowanie KBr i żele krzemionkowe wytworzono z morskich zakładów chemicznych w Qingdao, żel LH-20 wytworzono w Szwecji. Suszone łodygi mięsne Cistanche deserticola zostały zakupione od pekińskiej firmy zajmującej się materiałami leczniczymi i zidentyfikowane przez Zhang Yanzhen.
1. Ekstrakcja i separacja
Cistanche deserticola jest kruszony, perkolowany 95 procentowym etanolem, rozpuszczalnik jest odzyskiwany, rozpuszczany w niewielkiej ilości wody, ekstrahowany eterem, chromatografia kolumnowa na żelu krzemionkowym, eluowany eterem naftowym-eterem (6:4) w celu uzyskania białych kryształów ( I). Warstwę wodną wyekstrahowaną eterem odparowuje się, ogrzewa i rozpuszcza w etanolu, ochładza w celu uzyskania kłaczkowatego osadu (II). Cistanche deserticola poddaje się perkolacji 50 procentami etanolu. Ekstrahowano octanem etylu, chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym, eluując octanem etylu, 20ml każda (to samo poniżej). Łącznie zebrano 37 próbek i zbadano metodą chromatografii cienkowarstwowej. Część zawierającą początkowo wypływający kryształ (III) połączono. 24 ~ 37 próbek odfiltrowano z białego kłaczka (II) i odparowano do sucha. Pozostałość poddano chromatografii kolumnowej na żelu krzemionkowym i eluowano układem butanon-octan etylu-benzen-woda (4:3:2:0,2). Zebrano 12 próbek, z których oddzielono 8 ~ 11 próbek pomarańczowych kryształów; warstwę wodną wyekstrahowano octanem etylu wyekstrahowano n-butanolem, chromatografią kolumnową na żelu krzemionkowym i eluowano mieszaniną chloroform-metanol-woda (6:4:1). Piąta próbka rozpuściła krystalizację cienkowarstwową (IV), druga część chromatografii cienkowarstwowej połączona z niebieską częścią fluorescencyjną, następnie zastosowała chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym, eluowaną chloroformem-metanolem-wodą (7:3:2,5 ), zastosowali tę samą metodę w połączeniu z niebieską częścią fluorescencyjną, przeszli przez kolumnę żelową LH-20, eluowali mieszaniną metanol-woda (1:1), ósma próbka rozpuściła trochę żółtego proszku (V), kontynuowała elucję do 37 części, w połączeniu z wymaganą częścią powyżej, chromatografia kolumnowa na żelu krzemionkowym, rozprowadzona za pomocą butanon-octan etylu-benzen-woda (4:3:2:0,2), odciąć niebieski segment fluorescencyjny i eluować metanolem w celu uzyskania światła brązowy proszek (VI).
95-procentowy ekstrakt etanolowy, usuwający eter naftowy i dichlorometan, rozpuszczający się w metanolu, niskociśnieniowa chromatografia kolumnowa na żelu krzemionkowym, eluująca metanolem-chloroformem (9:l), po 20 ml, 18-28 części rozpuściły bezbarwne kryształy (VII) ; wyekstrahowano wodą pozostałość Cistanche deserticola po ekstrakcji etanolem, a następnie zatężono pozostałość, ochłodzenie, rozpuszczenie dużej liczby białych kryształów (VIII), usunięcie skrystalizowanego roztworu wodnego, a następnie potraktowano 4-krotną ilością etanolu w celu wytworzenia więcej opadów (IX).
2. Identyfikacja
Związek I: biały kryształ igłowy otrzymano przez rekrystalizację z acetonu, temperatura topnienia 136 ~ 137 stopni. Odczynnik z kwasem siarkowym stężonym bezwodnikiem octowym wykazał reakcję dodatnią (zielony). EIMS m/z: 414 (M plus). Chromatografia cienkowarstwowa Wartość Rf i widmo w podczerwieni były zgodne ze standardem - Sitosterol, więc jest to potwierdzone jako - Sitosterol.
Związek II poddano rekrystalizacji przez dwukrotne ogrzewanie i refluks z etanolem, w wyniku czego otrzymano biały kłaczkowaty osad o temperaturze topnienia 290 ~ 291 stopni. Odczynnik z kwasem siarkowym stężonym bezwodnikiem octowym wykazał reakcję dodatnią (zielony), - Odczynnik naftolowy wykazał reakcję dodatnią. EIMS m/z:396 (pik zasady), 382, 255, 213, 81, 57, 43. Chromatografia cienkowarstwowa była zgodna ze znanym produktem daukosterolu, a temperatura topnienia mieszaniny nie spadła. Zostało potwierdzone jako daukosterol.
Związek III metanol rekrystalizował do kilku podłużnych kryształów, mpl87 ~ 189 stopni, pH 2. EIMS m/z:119 (M plus 1), 118 (M plus ), 101, 100, 74, 73, 55 (pik zasadowy), 45, 28, 27. IR (KBr) cm-1: 3100 ~ 2500 (szerokość, OH), 1690 (C=O), 1420, 1310, 1200, 920, 800. Wartość RF chromatografii cienkowarstwowej jest taki sam jak standardu kwasu bursztynowego. Ponadto jest to zgodne ze standardowym widmem masowym i standardowym widmem w podczerwieni kwasu bursztynowego, a temperatura topnienia mieszaniny nie zmniejsza się. Jest potwierdzony jako kwas bursztynowy
Związek IV rekrystalizuje się z etanolu w postaci białego błyszczącego ciała stałego o temperaturze topnienia 83 ~ 84 stopni. EIMS m/z:420(M plus -H2O), 57 (pik podstawowy). Wartość Rf chromatografii cienkowarstwowej jest taka sama jak dla znanego triakontanolu, a temperatura topnienia mieszaniny nie spada. Powyższe dane są zgodne z Triacontanolem opisanym w literaturze.
Związek VI: po rozpuszczeniu w acetonie przeprowadzono chromatografię kolumnową na żelu krzemionkowym i eluowano 60% metanolem w celu uzyskania jasnożółtych cienkich bezpostaciowych kryształów, które są łatwo rozpuszczalne w wodzie i rozpuszczalne w metanolu, etanolu i acetonie, odczynnik -Naftol wykazał reakcję dodatnią . IR (KBr) cm-1: 3700 ~ 3000 (OH), 2900 (CH2, CH3), 1690 (C=O), 1600520 (C=C), 1440, 1350 , 1280, 1260 (COC), 1156, 1110, 1050 (CO), 807. UV λ nm (log ε): 218 (sh, 4,30), 249 (3,91), 291 (4,08), 330 (4,15). H-NMR (CD3COD3) δ ppm: 1,18 (3H, D, J=6, CH3 na ramnozie), 2,75 (2h, t, J=7.2, 2H w pozycji C), 4,75 ( 1H, D, J=8, C1-H na glukozie), 5,17 (1H, D, J=1,8, C1-H na ramnozie), 4,20 ~ 3,30 (12H, m, 2H w pozycji C, 6H na glukozie, 4H na ramnozie), 6,27 (1H, D, J=16, 1H w pozycji C), 7,52 (1H, a, J {{76} } Pozycja C (1H), 6,60 (1H, a, J=8, C5 "'-H), 6,90 (1H, DD, J=8 / 2, C6"' - H), 7,10 (1H, D, J=2, C2 "'-H), 6,70 (1H, D, J=2, C2-H), 6,65 (1H, D, J {{ 105}}, C5-H), 6,52 (1H, DD, J=8 / 2, C6-H), H-NMR (DMOS) ppm: 7,43 (1H. s, OH), 8,07 (1H, s, OH), 850 (2H, s, 2*OH), zniknęły po zaostrzającej się wymianie wody.[a] 22D: - 680,37 stopnia (C {{126} }.67MeOH).FDMS m/z:647(M plus plus Na), 625 (M plus plus 1), 624 (M plus), 479 (M plus 1-ramnozyl), 478 (M plus -ramnozyl ), który jest zgodny ze wzorem cząsteczkowym C29H36O15. Po kwasowej hydrolizie związku VI na chromatografie papierowym widoczne są dwie brązowe plamki grafika. Wartość Rf jest całkowicie zgodna z ramnozą i glukozą, a temperatura topnienia nie spada po zmieszaniu ze znanym akteozydem. Powyższe dane są zgodne z grupą 3,4-dihydroksy opisaną w literaturze - Fenetoksy-o- -L-ramnozyl (1 → 3) - 4-grupa kwasu o-kafeowego - D- glukopiranozyd jest zasadniczo rakotwórczy.
Związek VII jest białym kryształem otrzymanym przez rekrystalizację acetonu z metanolem o temperaturze powyżej 299 (rozkład), doskonale rozpuszczalny w wodzie, łatwo rozpływający się i rozpuszczalny w etanolu i metanolu. Odczynnik alkaloidowy wykazuje reakcję dodatnią. Wartości doświadczalne (w procentach) analizy elementarnej: C47.29,H9.16,N10.54; wartości teoretyczne (procenty): C47,54,H9,52,N11,11. Jest zgodny ze wzorem cząsteczkowym C5H11NO2.1/2H2O. IR (KBr) cm-1: 3360 (związany NH, OH), 2940, 1620 (C= O), 1470, 1390, 1330, 1240, 1125, 980, 930, 890. H- NMR (D2O) 5 ppm: 3,28 (9H,s, 3*CH3), 3,88 (2H,s,CH2), 4,68 (D2O). EIMS m/z:117(M plus), 100, 85, 73, 59, 58 (pik zasady), 44, 42. Chromatografia cienkowarstwowa jest całkowicie zgodna z wartością Rf standardu betainy i temperaturą topnienia mieszanina nie spada. Widmo magnetycznego rezonansu jądrowego, widmo w podczerwieni i widmo masowe są zgodne ze standardowym widmem betainy, więc betaina jest rozpoznawana.
Związek IX: rozpuszczono w wodzie, wyekstrahowano n-butanolem-chloroformem (1:4) i usunięto zanieczyszczenia. Warstwę wodną potraktowano 4-krotną ilością etanolu, osad rozpuszczono w wodzie, odbarwiono nadtlenkiem wodoru, a związki drobnocząsteczkowe usunięto przez dializę. Membranę potraktowano 5-krotną ilością etanolu w celu uzyskania jasnożółtego osadu. Reakcja Fehlinga była ujemna przed hydrolizą osadu, a po hydrolizie powstał brązowo-czerwony osad. Po hydrolizie kwasowej hydrolizat poddano chromatografii bibułowej. W porównaniu ze standardowym cukrem wykryto tylko glukozę, więc potwierdzono, że wykryto polisacharydy, które składają się głównie z glukozy.
