Badanie dotyczące poprawy wpływu ekstraktu glikozydów fenyloetanoidowych z Rouchongrong (Cistanche Deserticola) na metabolizm lipidów w wątrobie myszy ApoE -/- z dietą wysokotłuszczową opartą na regulacji ekspresji ACOX1 - CPT2

STRESZCZENIE Cel:Aby zbadaćdziałanie ekstraktu glikozydów fenylotanoidowychzCistanche desericola(PGCD) na metabolizm lipidów w wątrobie myszy ApoE-/- indukowany dietą wysokotłuszczową. Metody: 70 myszy płci męskiej ApoE-/- karmionych dietą wysokotłuszczową podzielono na 5 grup, grupa modelowa (MOD), grupa kontroli pozytywnej. Myszom z grupy kontroli pozytywnej podano atorwastatynę [20 mg / (kg·d)] + ezetymib [20 mg / (kg ·d)](A + E), PGCD podano grupy z niską, średnią i wysoką dawkąPGCD[250, 500, 1000 mg / (kg·d)]; kolejnych 14 samców myszy C57BL/6J na diecie achow uznano za normalną grupę kontrolną (CON). W 12-ty weekend oznaczono zawartość TG oraz aktywność ALT i AST w surowicy i tkance wątroby zgodnie z instrukcją obsługi. Świeżą tkankę wątroby homogenizowano i określano zawartość syntazy kwasów tłuszczowych (FAS), długołańcuchowej dehydrogenazy acylo-CoA (LCAD) i peroksydazy glutationowej (GSH - Px),dysmutaza ponadtlenkowa (SOD)Aktywność badano metodą ELISA, natomiast zawartość dialdehydu malonowego (MDA) i nadtlenku lipidów (LPO) mierzono metodą kid. Ekspresję mRNA oksydazy acylo-koenzymu A 1 (ACOX1) i palmitoilotransferazy karnitynowej 2 (CPT2) wykryto za pomocą eksperymentów RT-PCR.

KLIKNIJ TUTAJ, ABY POZNAĆ 80%GLIKOZYDY FENYLETANOIDOWENATURALNY ORGANICZNY EKSTRAKT Z CISTANCHE

Wsparcie dla Wecistanche – największego eksportera Cistanche w Chinach:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Kup więcej szczegółów specyfikacji:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Wyniki:W odróżnieniu od grupy modelowej,wszystkie trzydawkowe PGCD obniżyły poziom TGw wątrobie i surowicy w sposób zależny od dawki oraz obniża aktywność ALT i AST w surowicy. Wszystkie trzydawkowe PGCD zmniejszały zawartość FAS w sposób zależny od dawki i znacząco zwiększały zawartość LCAD w wątrobie.Promowane PGCDdziałanie GSH – Px i SOD oraz znacząco zmniejszało zawartość MDA i LPO w wątrobie. Eksperymenty RT-PCR wykazały, że PGCD podwyższa poziomy mRNA ACOX1 i CPT2 w tkance wątroby.

Wniosek:PGCD może poprawić metabolizm lipidów i reakcję na stres oksydacyjny oraz zmniejszyć odkładanie lipidów w tkance wątroby poprzez regulację ekspresji mRNA ACOX1 i CPT2.

Słowa kluczowe:Ekstrakt glikozydów fenyloetanoidowych z Cistanche desericola; ACOX1; CPT2;metabolizm lipidów;stres oksydacyjny; Myszy ApoE-/-

Niealkoholowa stłuszczeniowa choroba wątroby(NAFLD) to jedna z najbardziej rozpowszechnionych chorób wątroby na świecie, występująca u prawie 30% populacji ogólnej. Stłuszczeniowa choroba wątroby w Chinach rośnie w tempie 0,594% rocznie [1]. Występowanie i rozwój NAFLD są ściśle powiązane z nadmierną podażą kalorii w organizmie. Dieta wysokotłuszczowa prowadzi do nadmiernego gromadzenia się tłuszczu w wątrobie i indukuje NAFLD[2], a początkowym etapem jej patogenezy jest odkładanie się triacyloglicerolu (TG) w komórkach wątroby[2] 3). Do chwili obecnej nie ma konkretnych leków terapeutycznych ukierunkowanych na patogenezę NAFLD. Znalezienie bezpiecznych, skutecznych leków o jasnych mechanizmach zapobiegania i leczenia NAFLD stało się ważnym zadaniem badaczy. Cistanche Deserticola YC Ma jest rośliną pasożytniczą z rodzaju Cistanche z rodziny Orobanchaceae. Jego główny składnik, glikozydy fenyloetanoidowe, ma działanie wzmacniające funkcje odpornościowe organizmu, przeciwdziała starzeniu, przeciwdziała promieniowaniu, jest przeciwutleniaczem i hepatoprotekcją, a także ma inne działanie[4-5). Celem tego badania jest przeprowadzenie wstępnych badań nad mechanizmemGlikozydy fenyloetanoidowe z Cistanche desericola(PGCD) w poprawie metabolizmu lipidów.

1 Materiały eksperymentalne

1.1 Leki eksperymentalne

Mięsiste łodygi Cistanche desericola (zawartość wilgoci 8,5%) zakupiono od Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.; glikozydy fenyloetanoidowe (główne składniki werbaskozyd i echinaceazyd) substancje referencyjne (oba o czystości > 98%) zakupiono od Manster, Chengdu, Sichuan Biotechnology Co., Ltd.; Atorwastatyna: Pfizer Szanghaj; Ezetymib: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Zwierzęta doświadczalne

Samce myszy C57BL/6J i myszy ApoE-/- w wieku 6 do 8 tygodni, masa ciała (20 ± 2) g, zakupione od Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd., numer licencji: SCXK (Su) 2016-0010 , cykl świetlny 12 h / 12 h, temperatura (22 ± 1) stopień, wilgotność 50% ~ 60%, swobodny pobór pożywienia i wody. Przed eksperymentem myszy karmiono standardową dietą przez tydzień, aby się przystosować. Wszelka opieka nad zwierzętami i eksperymenty są zgodne z przepisami Komisji ds. Etyki Doświadczalnej na Zwierzętach Pierwszego Uniwersytetu Medycznego w Shandong (nr etyki: W202107080303).

1.3 Eksperymentalne dotagenci

Pasza wysokotłuszczowa: Harlan Teklad; Zestawy TG, ALT, AST: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; Zestawy FAS, LCAD: Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd.; Zestaw GSH-Px: Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd.; Zestawy SOD, MDA, LPO, BCA: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Zestaw Trizol: Invitrogen, Carlsbad, Kalifornia; Startery ACOX1 i CPT2: zaprojektowane przez Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 instrumenty eksperymentalne Hei – Ekspert VAP Wyparka rotacyjna: Niemcy

Heidolf; Wielofunkcyjny czytnik mikropłytek Varioskan LUX: ThermoFisher; Liofilizator próżniowy FD8508: Ilshin, Korea Południowa; Homogenizator F6/10: Shanghai Fluoroco; Wysokosprawny chromatograf cieczowy Agilent1260, spektrofotometr UV Cary 3500: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT – przyrząd do PCR: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Masa ciała i wskaźnik wątrobowy

Pod koniec 12. tygodnia myszy głodzono i ważono. Myszy znieczulono pentobarbitalem sodu i uśmiercono. Wątroby zebrano w celu obliczenia wskaźnika wątrobowego.

2.3.2 Wykrywanie wskaźnika surowicy

Pobrać surowicę i wykryć aktywność aminotransferazy asparaginianowej (AST) i aminotransferazy alaninowej (ALT) w surowicy w kolejności zgodnej z działaniem zestawu; BCA określa zawartość białka w surowicy i wykrywa zawartość TG.

2.3.3 Wykrywanie czynników związanych z metabolizmem lipidów w tkance wątroby

W temperaturze 4 stopni odważyć odpowiednią ilość świeżej wątroby i homogenizować ją w PBS, odwirować (promień wirówki 7,5 cm, 3 000 obr./min) homogenat przez 1 min, pobrać supernatant i zmierzyć zawartość białka w tkankę wątroby przez BCA. Zawartość TG w tkance, metoda ELISA do wykrywania zawartości syntazy kwasów tłuszczowych (FAS) i długołańcuchowej dehydrogenazy acylo-CoA (LCAD) w tkance wątroby.

2.3.4 Wykrywanie czynników utleniających związanych z tkanką wątroby

W temperaturze 4 stopni odważyć odpowiednią ilość świeżej wątroby i homogenizować ją w PBS, odwirować homogenat (promień odśrodkowy 7,5 cm, 3 000 obr/min) przez 15 min, pobrać supernatant i zmierzyć zawartość białka w tkankę wątroby z BCA. Postępuj zgodnie z odczynnikami. Instrukcje na opakowaniu wykrywają aktywność dysmutazy ponadtlenkowej (SOD) i peroksydazy glutationowej (GSH-Px), a jednocześnie wykrywają poziom dialdehydu malonowego (MDA) i nadtlenku lipidów (LPO).

2. 3. 5 Wykrywanie RT-PCR

Ekspresja mRNA ACOX1/CPT2 w tkance wątroby: Pobierz odpowiednią ilość świeżej tkanki wątroby, użyj zestawu Trizol do ekstrakcji całkowitego mRNA tkanki wątroby, użyj odwrotnej transkryptazy MuLV do syntezy cDNA i użyj cDNA jako matrycy do przeprowadzenia ilościowej fluorescencji w czasie rzeczywistym Wykrywanie PCR (Qpcr). warunki reakcji były następujące: wstępna denaturacja w temperaturze 95 stopni przez 2 minuty; denaturacja w 95 stopniach przez 10 s, wyżarzanie: 60 stopni przez 30 s, wydłużanie w 72 stopniach przez 35 s, 34 cykle i na koniec wydłużanie w 72 stopniach przez 5 minut i kwantyfikacja w czasie rzeczywistym za pomocą automatycznego analizatora. Ekspresja mRNA ACOX1 i CPT2. Oprogramowanie Rotor-gene Q. Do analizy danych wykorzystano 1,7 (Qiagen), a do zliczenia względnych poziomów mRNA i GAPDH zastosowano metodę 2-△△Ct. Każdą grupę eksperymentów przeprowadzono równolegle > 3 razy. Sekwencje starterów są następujące: GAPDH, w górę: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', w dół: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, powyżej: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' poniżej: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, w górę: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' w dół: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 Metody statystyczne

Do analizy danych wykorzystano oprogramowanie statystyczne SPSS 20.0. Dane pomiarowe wyrażono jako (x ± s). Do porównania pomiędzy grupami wykorzystano jednoczynnikową analizę wariancji. Za różnicę istotną statystycznie uznano p < 0,05.