Badanie wpływu odporności u myszy

Aby dowiedzieć się więcej informacji plz kontaktdavid.wan@wecistanche.com

Dwóch z trzydziestu mężczyznDBA/2NCrl(D2N) myszy używane jako szczep kontrolny w analizie danych tłaDBA/2N-MDXmyszy, u których stwierdzono nieprawidłowe wyniki sugerujące infekcję. Przypadek 1: Tygodniowy samiec myszy D2N 4- wykazał białą zmianę blaszkowatą w lewej nerce (brak objawów klinicznych) i przeprowadzono badanie patologiczne nerki. W kanalikach i śródmiąższu lewej nerki obserwowano naciek komórek zapalnych, głównie neutrofili, a w lewym odcinku nerki wykryto Staphylococcus aureus (S.aureus). Dlatego ta zmiana w lewej nerce została zdiagnozowana jako ropnakanalikowo-śródmiąższowezapalenie nerek spowodowane zakażeniem S. aureus. Przypadek 2: Lewy kręcz szyi z utratą masy ciała wykryto u 9-tygodniowego samca myszy D2N. Ocena histologiczna wykazała wysiękowy stan zapalny wokół ujścia gardłowego trąbek Eustachiusza oraz ropne zapalenie obu ucha środkowego i lewego ucha wewnętrznego z tworzeniem ropni i skupiskami jako gram-dodatnie mikrokolonie. S. aureus zidentyfikowano z wymazów z obu zewnętrznych kanałów słuchowych. W rezultacie ten przypadek kręczu szyi był spowodowany przez S. aureus – ropne zapalenie ucha środkowego i internet. S. aureus jest dobrze znanym patogenem oportunistycznym, który może często powodować choroby ropne u immunokompetentnych zwierząt laboratoryjnych. Jednakże, według naszej wiedzy, ten przypadek zakażenia S. aureus z kręczem szyi u myszy D2N nie został zgłoszony.

Kliknij tutaj, aby dowiedzieć się więcej o Cistanche

Izolaty gronkowca złocistego opornego na metycylinę (MRSA) pojawiły się u myszy laboratoryjnej w Centrum Nauki o Zwierzętach Laboratoryjnych Narodowego Kolegium Medycznego Obrony Narodowej w 2018 roku iMRSAizolaty zostały odzyskane od myszy również w innych pomieszczeniach dla myszy. Na tych izolatach MRSA przeprowadzono typowanie molekularne, takie jak typowanie sekwencji wielolocus (MLST), typowanie białka A (spa) Staphylococcus aureus, typowanie SCCmec i typowanie koagulazy w celu określenia ich genotypów. Wszystkie izolaty wykazały identyczne genotypy (ST1, spa t1784, SCCmec typu IV i koagulaza typu VII), co sugeruje, że izolaty były identycznymi klonami. Przed pojawieniem się MRSA w 2018 r. w tym ośrodku nie wyizolowano żadnych izolatów o takich genotypach, założono, że klon MRSA został przywieziony do ośrodka przez ludzi lub zwierzęta laboratoryjne. STl1 jest pierwszym pozaszpitalnym MRSA odzyskanym od dzieci w Stanach Zjednoczonych, jednak ST1 jest obecnie odzyskiwany od ludzi i zwierząt na całym świecie. W Japonii szczepy ST1 i SCCmec typu IV wyizolowano z ludzi i kotów, co sugeruje, że ST1 jest przenoszony między ludźmi a zwierzętami. Szczep MRSA z tymi genotypami, ale także ze spa tl784 został pozyskany od ludzi. Obecnie rozróżnienie między MRSA nabytym w szpitalu, pozaszpitalnym MRSA i MRSA związanym z żywym inwentarzem jest bardziej niejednoznaczne. Wyniki te sugerują, że myszy mogą działać jako rezerwuary MRSA.

W niedawnej immunoterapii nowotworów aktywność cząsteczek takich jak PD-1 jest hamowana w celu zwiększenia aktywności komórek odpornościowych przeciwko rakowi. Pomimo wysokiego efektu terapeutycznego zdarzają się przypadki, w których choroba autoimmunologiczna rozwija się w immunoterapii nowotworów. W tym miejscu opracowaliśmy system, który może degradować PD-1 w sposób określony w czasie w hodowanych komórkach i myszach za pomocąSystem degronu SMASH. Białko fuzyjne PD-1-SMASH w komórkach Jurkat i splenocytach CD3 plus zostało zmniejszone o 1 dzień po podaniu Asunapreviru (ASV) lub Grazopreviru (GRV), które są inhibitorami proteazy NS3/4A. Wzrost komórek gruczolakoraka MC-38 zaszczepionych myszom PD-1-cherry-SMASh knockin (KI) z ASV był hamowany w porównaniu z myszami typu dzikiego (WT) i nieleczonymi myszami KI. Co więcej, myszy WT, którym przeszczepiono komórki szpiku kostnego KI po napromieniowaniu śmiertelnym promieniowaniem, mogły odrzucić komórki MC-38 z GRV. Myszy KI wyglądały na zdrowe i nie wykazywały objawów choroby autoimmunologicznej. Sugerujemy, że zastosowanie systemu degronowego w organizmach żywych ma przyczynić się do postępu nie tylko w różnych badaniach biologicznych, ale także w leczeniu chorób.

Progesteron (P4) jest wydzielany z łożyska w celu utrzymania ciąży i działa jako regulator odporności. Glukokortykoid to kolejnyimmunoregulatorowysteryd do regulacji stanu zapalnego. W tym badaniu ludzkie komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) przeszczepiono myszom NOG w celu wywołania choroby przeszczep przeciw gospodarzowi (GVHD) i wykorzystano do porównania efektów P4 i kortyzolu (COR). PBMC stymulowano w obecności różnych stężeń P4 lub COR, a komórki analizowano metodą cytometrii przepływowej (FCM). AlikwotyPBMCprzeszczepiono myszom NOG i P4 lub COR wstrzyknięto myszom dwa razy w tygodniu. Po 28 dniach przeprowadzono analizy FCM i immunohistochemiczne. W rezultacie wysokie stężenie P4 hamowało aktywację limfocytów T in vitro, podczas gdy hamowanie nie było kontynuowane po usunięciu. Tłumienie aktywacji komórek T było mniejsze w leczeniu COR w porównaniu z P4, a wyczerpanie komórek T było bardziej widoczne. Myszy, którym wstrzyknięto P4- miały więcej splenocytów, zwłaszcza limfocytów T CD8, w porównaniu z myszami kontrolnymi. Jednak niższa ekspresja CD25, mniejsza infiltracja ludzkich limfocytów T do płuc i wątroby oraz mniejszaGVHDzaobserwowano objawy. Z drugiej strony, liczba splenocytów, zwłaszcza komórek T, u myszy, którym wstrzyknięto COR była znacznie niższa, a komórki aktywowane/wyczerpane były liczne. Wyniki te sugerują, że P4 woli utrzymywać komórki T w porównaniu z COR in vitro.

Helicobacter hepaticus i Helicobacter bills są znane jako patogeny wywołujące zapalenie wątroby i zapalenie okrężnicy u myszy. Istnienie kilku pozytywnych przypadków jest nadal potwierdzane corocznie w eksperymentalnych zwierzętach hodowlanych w Japonii. Jako próbki do badania PCR H. hepatica i H. bilis najlepiej użyć zawartości jelita ślepego lub świeżego kału.

Ostatnio różni producenci wytwarzali odczynniki do transportu i przechowywania DNA i RNA. Oczekuje się, że te odczynniki sprawią, że problemy z transportem próbek wykorzystywanych do testów PCR zostaną rozwiązane. Dlatego w niniejszym badaniu przydatność odczynnika do przechowywania kwasu nukleinowego badano wykonując test PCR Helicobacter z wykorzystaniem zawartości jelita ślepego zakonserwowanego odczynnikiem do konserwacji kwasu nukleinowego. W rezultacie próbki przechowywane przez 7 dni przy użyciu roztworu konserwującego mogły zostać wykryte Helicobacter na tym samym poziomie co próbka świeża. Z powyższego zasugerowano, że w teście PCR Helicobacter, nawet jeśli transport trwa kilka dni, możliwe jest przeprowadzenie testu z dużą dokładnością poprzez transportowanie próbki zanurzonej w odczynniku do przechowywania kwasów nukleinowych lotem chłodniczym.

Wcześniej opracowaliśmy zmutowane szczepy E.coli o znacznie zwiększonym przyleganiu do stałych powierzchni in vitro poprzez modyfikację genów, które reagują na głód składników odżywczych. Aby ocenić interakcję między tymi szczepami E. coli o zwiększonej adhezji (AEE) a środowiskiem jelitowym in vivo, oceniliśmy ich zdolność do kolonizacji przewodu pokarmowego poprzez zaszczepienie myszy.

Przed eksperymentem oceniającym transformowaliśmy AEE plazmidem wyrażającym lucyferazę do wizualizacji in vivo. jak zaszczepiano doustnie myszom na czczo i zbierano kał co kilka dni. Liczba żywychAEEoszacowano, mierząc CFU z zebranego kału.

W rezultacie, w porównaniu ze szczepem kontrolnym, AEE były bardziej obfite w kale przez ponad tydzień, co wskazuje na zwiększoną kolonizację w przewodzie pokarmowym. Obserwując lokalizację luminescencji lucyferazy za pomocą nieinwazyjnego obrazowania przy użyciu IVIS, stwierdzono również, że AEE mają tendencję do kolonizacji w jelicie ślepym i okrężnicy.

[Cel] Obecnie [Pasteurella]pneumotropikazostał przeklasyfikowany jako nowy rodzaj Rodentibacter. Spośród nich R. pneumotropicus i R. Healy są głównymi celami monitorowania mikrobiologicznego u gryzoni. Wyizolowaliśmy szereg Rodentibacter sp. z o.o. których nie można było zidentyfikować jako gatunku z gryzoni. W tym badaniu analizujemy cechy Rodentibacter sp. izolować, koncentrując się na zjadliwości bakterii. [Metody] Rodentibacter sp. do badania użyto wyizolowanego z tchawicy szczura. Sekwencjonowanie szkicu genomu przeprowadzono na sekwenatorze nowej generacji, a następnie przewidziano geny związane z wirulencją. W doświadczeniach na zwierzętach myszy Rag2 wykorzystano dla Rodentibacter sp. infekcja.|Wyniki| Poprzez wstępne sekwencjonowanie genomu zidentyfikowano unikalny gen kodujący toksynę RTX u Rodentibacter sp. Sekwencja białkowa toksyny RTX była bardziej homologiczna do tych wytwarzanych przez Enterobacteriaceae niż przez Pasteurellaceae. W eksperymencie na zwierzętach u prawie wszystkich zakażonych myszy Rag 2 potwierdzono śmiertelne zapalenie płuc lub posocznicę. Chociaż izolatu nie można było zidentyfikować jako R. pneumotropicus i R. heylii, ten blisko spokrewniony gatunek może być śmiertelny dla zwierząt z obniżoną odpornością w obecności czynników zjadliwości, takich jak toksyna RTX.

W programie NBRP Basic Technology Development Program (2018-2019) zsekwencjonowaliśmy genomy mysich oportunistycznych bakterii chorobotwórczych i przeprowadziliśmyRNAseqpierwotniaków u myszy, w celu opracowania testów PCR dla tych organizmów. Wykorzystaliśmy te wyniki do analizy Rodentibacter spp. oraz pierwotniaki u szczurów we współpracy z Uniwersytetem w Kioto (NBRP Rat). Tutaj przedstawiamy wyniki testów na próbkach szczurów. [Metody] Sekwencje genów 16S rRNA o wielkości około 1,5 kpz odczytano metodą PCR dla sześciu szczurzych izolatów Rodentibacter spp., a szkicową sekwencję genomu jednego izolatu (#25) określono przy użyciu Illumina HiSeq 2500. PCR zawartości jelita ślepego szczura przeprowadzone na podstawie wyników RNAseq mysich pierwotniaków. [Wyniki] Sekwencje genów 16S rRNA wszystkich izolatów były identyczne i zostały zidentyfikowane jako Rodentibacter Ratti przez analizę OTU. Ponowne sekwencjonowanie izolatu #25 również wykazało, że ten szczep był R. Ratti. PCR dla mysich pierwotniaków dał pozytywne wyniki dla szczurzej ameby. Nie uzyskano pozytywnych wyników dla TrichomonasPCRna okazach szczurów. [Dyskusja] Szczurze izolaty Rodentibacter spp. w tym raporcie badani byli wszyscy R. Ratti. Ważne jest, aby być świadomym obecności R. Ratti podczas wykonywania testów na obecność Rodentibacter na szczurach. Niektóre próbki kału szczura dały wynik pozytywny dla mysiej ameby PCR. Jest to pierwszy krok w rozwoju PCR do wykrywania pierwotniaków u szczurów.

Drobnoustroje gryzoni „Pasteurella pneumotropica” są oportunistyczną bakterią patogenną, która powoduje choroby układu oddechowego u myszy i szczurów. Były one wcześniej klasyfikowane w rodzaju Pasteurella, a kilka szczepów zostało wstępnie zaproponowanych jako biotypy. W 2017 roku zostały wspólnie zreorganizowane w rodzaj Rodentibacter. Szczepy MaM i MaR wyizolowano odpowiednio z myszy i szczurów około lat 80. XX wieku. W tym badaniu określiliśmy sekwencje genomów obu szczepów i porównaliśmy je z sekwencjami z rodzaju Rodentibacter, materiały i metody Szczepy MaM i MaR uzyskano z Narodowego Instytutu Chorób Zakaźnych (NIAID)

(Manabu Saito --> Yasushi Ami -->Fumio Ike'a). Oba szczepy hodowano w płynnej hodowli w celu ekstrakcji genomowego DNA, a sekwencje genomowe określono przy użyciu Illumina Hiseq 2500 i PacBio Sequel. [Wyniki] W oparciu o sekwencję genu 16S rRNA, szczep MaM został zidentyfikowany jako R.pneumotropicus, a szczep MaR jako R. Ratti. Ponadto określono pełną sekwencję genomu (2213 961 pz) szczepu MaR (liczba operonów rRNA wynosiła 6, a liczba genów została oszacowana na 2063). [Dyskusjal Szczepy MaM i MaR zostały użyte jako wzorce do identyfikacji „Pasteurella pneumotropica” w Japonii. Na podstawie tej analizy określiliśmy gatunki obu szczepów w następujący sposób: szczep MaM to R.pneumotropicus, a szczep MaR to R.ratti. Co ciekawe, wyniki te pokazują, że R. Ratti można wyizolować ze szczurów w Japonii.

Clostridium pili for me(CP) jest podatna na zakażenie u różnych zwierząt laboratoryjnych, w tym szczurów i myszy, i wykazuje bezobjawową infekcję, z wyjątkiem zwierząt z obniżoną odpornością. Jest uważany za główną diagnostykę różnicową w utrzymaniu obiektów dla zwierząt i jest dobrze znany z tego, że wpływa na dane eksperymentalne z badań na zwierzętach. Serodiagnostyka (ELISA, IFA) i PCR są powszechnie stosowane do diagnozowania CP, ponieważ izolacja w sztucznej pożywce jest trudna dla CP. Jednakże donoszono o istnieniu nieswoistego przeciwciała wskazującego na reaktywność krzyżową z CP przy użyciu serodiagnostyki i często jest ono rozpoznawane w naszych ośrodkach w podobnym przypadku. Ponadto metoda PCR ma ograniczenia jako wiarygodna metoda diagnostyczna z okresowym monitorowaniem, ponieważ CP jest niewykrywalna w kale po wzroście miana przeciwciał. Ostatnio zbadaliśmy inne podejście, zachowując co miesiąc odchody zwierząt. Przyjęliśmy test PCR dla CP, na który nie ma wpływu przeciwciała, jako bardziej wiarygodną diagnostykę przy użyciu stale konserwowanego kału. W tym raporcie pokazujemy niedawny przypadek. (przeciwciało nieswoiste) w celu przeprowadzenia kontroli przepływu rozwijającego się w naszej firmie.