Badanie aktywności przeciwutleniającej glikozydów fenyloetanoidowych z Cistanche Deserticola

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-mail:audrey.hu@wecistanche.com

LI Li i in. (Centralne Laboratorium Uniwersytetu Normalnego Changchun, Changchun, Jilin 130032)

Abstrakcyjny[Cel] Badania miały na celu systematyczne zbadanie aktywności przeciwutleniającej glikozydów fenyloetanoidowych zCistanchedeserticola. [Metoda ] Do pomiaru aktywności przeciwutleniającej ekstraktu z C. deserticola zastosowano dwa układy modelowe, test wolnego rodnika 2,2-difenylo-1-pikrylohydrazylu (DPPH' ) oraz test fotochemiluminescencji (PCL). akteozyd, izoakteozyd i echinakozyd. [Wynik] Wyniki wykazały, że całkowita zawartość fenoli (TPC) w echinakozydzie, akteozydzie, izoakteozydzie i 80 procentowym ekstrakcie etanolowym C. deserticola wynosiła 753,95, 659,94, 356,14 i 14,73 mg kwasu galusowego/g próbki. Ekstrakt z C. deserticola wykazał silną aktywność przeciwutleniającą w eksperymencie PCL, a następnie echinakozyd, akteozyd i izoakteozyd. Jednak echinakozyd wykazywał silną aktywność przeciwutleniającą w eksperymencie DPPH, a następnie akteozyd, izoakteozyd i ekstrakt z C. deserticola.

[ Wniosek ]Badania te mogą dostarczyć referencji do badań farmakologicznych i aktywności biologicznej glikozydów fenyloetanoidowych z C. deserticola.

Słowa kluczowe Cistanche deserticola ; akteozyd ; izoakteozyd ; echinakozyd ; Aktywność antyoksydacyjna ; DPPH ; PCL

Cistanche (Cistanche deserticolaYC Ma.) jest roślinąCistancherodzaj (Oro-banehaeeeae) zCistancherodzaj (Cistanche). Suszona mięsista łodyga Cistanche z łuskowatymi liśćmi. Wiele badań wykazało, że głównymi składnikami aktywnymi roślin Cistanche są związki glikozydowe alkoholu fenyloetylowego. . Związek glikozydowy fenyloetanolu należy do rodzaju związku polifenolowego, który jest szeroko rozpowszechniony w wielu rodzajach roślin. Badania farmakologiczne wykazały, że związki te mają szeroki zakres działań farmakologicznych i biologicznych, takich jak działanie przeciw hepatotoksynie, przeciwzapalne, przeciwbólowe i przeciwutleniające. Wśród nich najbardziej uderzające jest to, że związek glikozydowy fenoksyetanolu ma bardzo dobrą aktywność przeciwutleniającą. Autor przeprowadził głównie systematyczną analizę aktywności przeciwutleniającej związków glikozydowych alkoholu fenyloetylowego wCistanche, przy użyciu dwóch metod oceny przeciwutleniaczy in vitro, a mianowicie fotohemiluminescencji (PCL) i 2,2-difenylu-1-pierylo-hydroksylu (DPPH'). Do pomiaru aktywności przeciwutleniającej 80 procent ekstraktu etanolowego zCistanche, ergosterozyd, izoergozyd, orazechinakozyd.

1 Materiał i metody

1.1 Próbki i odczynniki

Cistanche (Cistanche deserticola)materiały lecznicze zakupiono w pekińskiej aptece Tongrentang.Ergosterozyd, izoergozyd,echinakozyd, Folin. Odczynnik Ciocalteu, kwas galusowy, 2,2-difenyl-1-pikrylohydrazyl (DPPH.) itp. zakupiono z SigmaChemicalCo. Firma (St. Louis, Mo). Rozpuszczalnik stosowany do analizy PCL został dostarczony przez Analytik Jena AG (Berlin, Niemcy). Inne odczynniki to wszystkie odczynniki analityczne (produkowane przez Beijing Chemical Plant). Woda jest wodą ultraczystą (18,2 nPa).

1.2 Ekstrakcja próbki

Zważyć dokładnie 2.0005gCistanchepróbka proszku, użyć 50ml 80 procent etanolu do ekstrakcji ultradźwiękowej w temperaturze pokojowej przez 0,5h, ekstrahować dwukrotnie, przefiltrować roztwór próbki, wyparka obrotowa do sucha (<40oc), use="" 100ml="" of="" distilled="" water="" dissolve,="" degrease="" twice="" with="" 100ml="" n-hexane,="" discard="" the="" n-hexane="" solution,="" extract="" the="" water="" part="" with="" 100="" ml="" of="" water-saturated="" n-butanol="" 3="" times,="" combine="" the="" n-butanol="" extracts,="" rotary="" evaporate="" to=""><40oc), and="" use="" 4ml="" for="" the="" residue="" the="" volume="" of="" absolute="" ethanol="" is="" fixed="" to="" obtain="" a="" sample="" of="">Cistanche deserticola.

1.3 Oznaczanie całkowitej zawartości polifenoli w próbce

Całkowitą zawartość fenolu w próbce określa się metodą F{{0}}lin-Ciocaheu, a wynik wyraża się w miligramach kwasu galusowego na gram ekstraktu. Weź roztwór próbki o określonym stężeniu 0.2mI (aby absorbancja spadła na krzywą standardową), dodaj 1ml odczynnika Folina-Ciocaheu o stężeniu 0.5mol/L, i następnie dodać 0.8ml roztworu węglanu sodu o stężeniu 7.5 procent, aby dobrze wymieszać, Umieścić w temperaturze pokojowej na 0.5h, a następnie zmierzyć absorbancję przy 765nm (spektrofotometr widzialny w ultrafiolecie: DU800, Beckman Couher, Inc. USA). Użyć roztworu kwasu galusowego (zakres stężeń masowych wynosi 0.02-0.20 me,/m1) do sporządzenia krzywej standardowej i wszystkie testy powtarza się dwukrotnie.

1.4 Analiza aktywności przeciwutleniającej in vitro

1.4.1 Oznaczanie metodą PCL.

W teście wykorzystano ultraszybki automatyczny analizator antyoksydacyjny i wolnorodnikowy Photochem@ (Berlin, Niemcy). Zasadą jest generowanie wolnych rodników metodą fotochemiczną i wykorzystanie metody chemiluminescencji do wykrywania wolnych rodników. W eksperymencie zastosowano fotosensybilizator z efektem wzbudzenia fotochemicznego do wzbudzenia cząsteczek reakcji, tak że pod działaniem lampy ultrafioletowej reakcja utleniania zaszła 1000 razy szybciej niż w normalnych warunkach, a wolne rodniki zostały szybko wygenerowane." Wybierz metodę PCL-ACW-Kit Zmierz aktywność przeciwutleniającą rozpuszczalnych w wodzie składników podpróbek babki płesznika. Odpipetować 1.0ml buforu reakcyjnego (w tym stężenie 0.1mmol/L sodu węglanu, wartość pH 10.5 i stężenie 0.1mmol/LNA, jeden EDTA, 1.5ml ACW- rozcieńczalnik (woda ), stężenie 1mmol/LLumino1) działa jak fotosensybilizator, który wzbudza cząsteczki reakcji, dzięki czemu szybko powstają wolne rodniki, a jednocześnie jest substancją fotochemiluminescencyjną.Zarówno próbka jak i standard mają 10"l. Mierząc różne stężenia (0,5, 1,0, 2,0 i 3,0 nmol/l) L. Równanie krzywej standardowej dla kwasu askorbinowego to Y=24.640Ox plus 2.9311, R²=0.9969. W badaniu należy rozcieńczyć próbkę lub roztwór wzorcowy tak, aby odstęp czasu opóźnienia mieścił się w liniowym zakresie krzywej wzorcowej. Photochem generuje krzywą standardową i automatycznie testuje aktywność antyoksydacyjną próbki, a aktywność antyoksydacyjna próbki jest równoważna L． Obliczany na podstawie liczby nanomoli kwasu askorbinowego.

1.4.2 Wyznaczanie metodą DPPH.

Rodnik difenylopikrylohydrazynowy [DPPH ·] jest stabilnym rodnikiem z centralnym azotem o maksymalnej absorpcji przy długości fali 515 nm. Roztwór [DPPH ·] metanolu jest fioletowy, a jego stężenie ma liniową zależność od absorbancji”. Po dodaniu przeciwutleniaczy do roztworu [DPPH ·] metanolu, przeciwutleniacze mogą łączyć się z wolnymi rodnikami [DPPH ·] lub zastępować je, tworząc [DPPH ·] ] Zmniejsza się liczba wolnych rodników, a kolor roztworu staje się jaśniejszy, co objawia się ciągłym spadkiem absorbancji przy długości fali 515 nm, aż do osiągnięcia stabilności." W teście zamiast metanolu zastosowano etanol. Dokładnie zważ [DPPH ·] i skonfiguruj stężenie na 0. [DPPH ·] roztwór etanolu 0.040 76mg/ml, otrzymuje się krzywą standardową [DPPH ·]: Y: 18.032x-0.0016 , R=0.9993. Metoda pomiaru pozostałości wolnych rodników odwołuje się do literatury [16]. Używając etanolu jako rozpuszczalnika, przygotować różne stężenia próbki i roztworu wzorcowego, pobrać odpowiednio 0,1 ml próbki lub roztworu wzorcowego i dodać 3,9 ml [DPPH·] roztworu wzorcowego o stężeniu masowym 2,5 mg/L (obecnie stosowany) ), zastąpić roztwór próbki etanolem jako ślepą próbą. Wstrząśnij wymieszanym roztworem, użyj kuwety do pomiaru absorbancji w różnym czasie przy długości fali 515 nm i przelicz ją na stężenie masowe [DPPH·] zgodnie z krzywą standardową, aby obliczyć szybkość resztkową [DPPH·]. Zgodnie z resztkową szybkością [DPPH ·] i odpowiednią ilością dodanej próbki, można wykreślić krzywą usuwania wolnych rodników [DPPH -] z próbki. Zgodnie z krzywą zależności między stężeniem masowym [DPPH ·] a absorbancją, absorbancję zmierzoną po dodaniu zmiatacza wolnych rodników można przeliczyć na stężenie masowe [DPPH ·] w celu obliczenia [DPPH ·] po dodanie zmiatacza wolnych rodników. Wzór obliczeniowy dla szybkości rezydualnej jest następujący: [DPPH ·]REM=[DPPH·]/[DPPH·]r=0×100 procent gdzie [DPPH·] jest stężeniem masowym DPPH · w pewnym momencie w procesie zmiatania wolnych rodników, [DPPH·]:. Jest pierwotnym stężeniem masowym DPPH·. Zgodnie z liczbą dodanych przeciwutleniaczy i resztkową szybkością [DPPH ·] tworzona jest krzywa zależności między nimi, a równanie regresji można uzyskać poprzez analizę regresji liniowej. Zgodnie z równaniem regresji można obliczyć dawkę przeciwutleniacza, gdy wskaźnik rezydualny [DPPH ·] wynosi 50 procent. Połowa zahamowania. Zgodnie z krzywą wychwytywania wolnych rodników [DPPH·] dla różnych stężeń próbek lub standardów, obliczyć ilość EC próbki, gdy pierwotne stężenie masowe [DPPH·] jest zmniejszone do 50 procent (stan ustalony). Im mniejsza EC, tym zdolność do wymiatania wolnych rodników Im silniejsza. Testuj równolegle 3 razy.

cistanche

2 Wyniki i analiza

2.1 Oznaczanie całkowitej zawartości polifenoli w próbce W oznaczaniu całkowitej zawartości polifenoli całkowita zawartość polifenoliechinakozydjest najwyższa i wynosi 753,95 mg kwasu galusowego/g. Następnie glikozydy ergosteroidowe, glikozydy izoergosteroidowe i surowe ekstraktyCistanche, które wynosiły odpowiednio 468,3, 356,14 i 14,73 mg kwasu galusowego/g.

2.2 Oznaczanie aktywności antyoksydacyjnej próbki

2.2.1 Wyniki wyznaczania metodą PCL-ACW. W teście antyoksydacyjnym PCL-ACW pojemność antyoksydacyjna 1txgCistanchemateriał leczniczy odpowiada zdolności antyoksydacyjnej 15,68 nmol kwasu L-askorbinowego; 1 gramechinakozydodpowiada zdolności antyoksydacyjnej 14,03nmol kwasu askorbinowego Aktywność: 1txgergosterozydodpowiada 11,44 nmolL zdolności przeciwutleniającej kwasu askorbinowego; 1Ixg izomergosterozydu odpowiada aktywności przeciwutleniającej 8,24nmol kwasu askorbinowego.

2.2.2 Wyniki pomiarów metodą DPPH. Z tabeli 1 widać, że jest wyczyszczony. Kolejność zdolności wolnych rodników toergosterozyd, echinakozyd, izoergozyd i surowy ekstrakt zCistanche, wśród których ergo side iechinakozydmają w zasadzie taką samą zdolność antyoksydacyjną w teście DPPH. Widać to z tego. Ponieważ do pomiaru próbek stosuje się różne systemy testowania przeciwutleniaczy in vitro, mechanizm działania przeciwutleniającego jest inny, a wyniki mogą być niespójne. Zostało to również zweryfikowane w teście. Dlatego konieczne jest wybranie do dalszej weryfikacji innych systemów analizy antyoksydacyjnej.

echinakozy

Bibliografia

[1] Yang Cuiping, Su Weiwei. Postęp badań zupy mięsnej[J]·Chińskie Materiały Lecznicze, 2001, 24(12): 907-909.

[2]Lei Li, Song Zhihong, Tu Pengfei Postęp badań nad chemicznymi składnikami roślin Cistanche[J].Chinese Herbal Medicine,2003,34(5):473 -476.

[3] HIROMI KOBAYASHI, HIROKO KARASAWA JOSHIO MIYASE. Badania nad składnikami Cistanchis Herba. CZEŚĆ. Izolacja i struktury nowych glikozydów fenylopropanoidowych, Cystanozydów A i B[J]. Chem. Pharm Bull, 19^,32(10):3009 -3014.

[4]LI LI, RONG TSAO, RAYMOND YANG i in. Izolacja i oczyszczanie glikozydów fenyloetanoidowych zCistanche deserticolametodą szybkiej chromatografii przeciwprądowej [ J ]. Chemia żywności,2008,1(^:702-710.

[5]LI LI, RONG TSAO, LIU ZQ, et al. Izolacja i oczyszczanie aktecydu i izoakteozydu z Plantago psyllium L. metodą szybkiej chromatografii przeciwprądowej [J]. Journal of Chromatography A,2005,1063: 161-169.

[6]RAVN H, NISHIBE S, SASAHARA M, et al. Związki fenolowe z Plantago Asiatica [J]. Fitochemia, 1990, 29: 3627-3631.

[7]TOYAMA Y, MATSUMOTO M, NISHIOKA I. Glikozydy fenolowe z chorych korzeni Rehmannia gluiinosa var. purpurea [J]. Fitochemia, 1987, 26: 983-986.

[8] Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Wu Ji J Ya i in. Całkowite glikozydy Cistanche cistanche in Vitro wymiatają wolne rodniki i chronią przed uszkodzeniami DNA indukowanymi przez OH [J]. Chiński Dziennik Farmaceutyczny, 2001, 36(1): 29-31.

[9]XIONG Q, HASE K, TEZUKA Y, et al. Hepatoprotekcyjne działanie fenyletanoidów zCistanche deserticola[J ]. Planta Med, 1998,64:120.

[10]SCHAPOVAL EES, WINTER DE VARGAS MR, CHAVES CG i in. Działanie przeciwzapalne i antynocyceptywne ekstraktów i izolowanych związków ze Stachytarpheta cayeunensis [J]. J Etnopharmacol, 1998, 60: 53.

[11] LI J, WANG PF, ZHENG RL, et al. Ochrona glikozydów fenylopropanoidowych z pedikularów przed hemolizą oksydacyjną in vitro [J]. Planta Med, 1993,59:315-317.

[12] HE ZD, LAU KM, Xu HX i in. Aktywność przeciwutleniająca glikozydów fenyloetanoidowych z raka Brandisia [J]. Etnofarmakologia, 2000, 71: 483-486.

[13]XIONG Q, KADOTA S, TANI T, et al. Działanie przeciwutleniające fenyletanoidu zCistanche deserticola[J]. Biol Pharm Bull, 1996,19: 1580-1585.

[14]TSAO R, YANG R, XIE S, et al. Jakie związki polifenolowe przyczyniają się do całkowitej aktywności przeciwutleniającej jabłka? [J]. J Agric Food Chem, 2005, 53:4989-4995.

[15] POPOV IN, LEWIN G. Hiotochemiluminescencyjne wykrywanie aktywności przeciwrodnikowej: U. testowanie nieenzymatycznych przeciwutleniaczy rozpuszczalnych w wodzie [J ]. Free Rad Biol Med, 1994, 17: 267-271.

[16]BRAND-WILLIAMS W, CUVEHER ME, BERGET C. Zastosowanie metody wolnorodnikowej do oceny aktywności przeciwutleniającej [J ]. Lebensm Wiss Technol, 1995,28:25-30.

[17] Li Chunyang, Xu Shiying, Wang Zhang. Metoda DPPH w celu określenia zdolności proantocyjanidyn z pestek winogron do zmiatania wolnych rodników [J]. Journal of Food and Biotechnology, 2006, 25(2)" 02-106.

SCHLESIER K, HARWICH M, BOHM V, et al. Ocena aktywności przeciwutleniającej za pomocą różnych metod in vitro [J ]. Free Radykalne Badania,2002,36(2):177-187.