Synergistyczne działanie przeciw pigmentacji przeciw skóry glikozydów fenyloetanoidów i glabrydyny
Jan 14, 2025
Streszczenie do zbadania synergistykiEfekt CistancheStrona fenylo etanolu (PHGS) i glabrydyna (GLA) przeciwko pigmentacji skóry, stosunek masowy PHG i GLA przesiewano in vitro tyropinazę, 1, 1- difenylo -2- trinitrofenylohydrazyna (DPPH) i 2, 2- diazo-bis (3- etyl-benzotiazol -6- Katowanie kwasu sulfonowego (ABTS+) Wolne rodniki usuwania eksperymentów z zawartością TyRos ASIROS AS TERONS AS TERIN AS AS TERATA AS METERIN AS METERIN AS METERIN AS METERIN AS METERIN AS METERIN AS METERIN AS METERIN AS METERIN AS METERIN AS METERIN AS METERIN AS METERIN AS METERIN ASION AS METERIN ASION AS METIN ASININ ASION AS METIN ASININ. indeksy.
.zapalnyUstalono model komórek HACAT indukowanych przez lipopolisacharyd (LPS), a działanie przeciwzapalne leku oceniono przez hamowanie uwalniania interleukiny -6 (IL -6) i czynnika martwicy nowotworów- (TNF-). Model stresu oksydacyjnego komórek HACAT indukowanych przez azodiisobuamidyny chlorowodorek (AAPH) został dodatkowo ustalony i zastosowano zwiększoną aktywność dysmutazy ponadtlenkowej (SOD) i katalazy (CAT) w celu oceny działania przeciwutleniającego leku. Optymalny stosunek masy PHG i GLA został określony przez powyższe trzy modele komórkowe. Wyniki pokazały, że wodne roztwory PHG/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) i PHGS/GLA (10∶1) przygotowane z M (PHGS) ∶M (GLA) =1 ∶1, 5∶1, 10∶1 wykazywały dobre skutki hamujące i synergistyczne na działanie tyrozynazy i aktywność antytixidant. Wskaźniki hamowania PHG/GLA (1∶1),
PHGS/GLA (5∶1) i PHGS/GLA (1 0 ∶1) roztwory wodne odpowiednio 94,37%, 92,93%i 88,06%. Wskaźniki wymiatania wolnych rodników DPPH wyniosły odpowiednio 89,44%, 88,72,%i 88,10%.
Wskaźniki wymiatania ABT+ wolne rodniki wyniosły odpowiednio 1 0 0,13%, 100,0,1%i 99,87%. Gdy stężenie masy PHG/GLA wynosiło 25 ug/ml, PHGS/GLA (1∶1), PHGS/GLA (5∶1) i PHGS/GLA (10∶1) roztwory wodne nie wykazywały cytotoksyczności w komórkach B16F10 i HACAT. Hamowanie aktywności tyrozynazy w roztworze wodnym PHG/GLA (1 ∶1) było silniejsze (aktywność tyrozynazy 23,80%), a zawartość melaniny (30,90%) była znacznie zmniejszona. Roztwór wodny PHGS/GLA (1∶1) wykazał najlepszy efekt hamowania na IL -6 i TNF- Uwolnienie oraz zdolność do zwiększenia aktywności SOD i CAT. Połączenie PHG i GLA wykazało dobrą wydajność synergistyczną, lepszą od pojedynczego leku i wyższą niż PHG/ GLA (5∶1) i PHGS/ GLA (10∶1) roztworu. Połączenie PHG i GLA odegrało synergistyczną rolę w poprawie pigmentacji skóry poprzez hamowanie produkcji melaniny oraz działanie przeciwzapalne i przeciwutleniające.
Słowa kluczowe Cistanche fenyloetanoidowe glikozydy; glabrydyna; efekty synergistyczne; pigmentacja przeciw skóry; anty-utlenianie; przeciwzapalny; materiały narkotykowe
Cistanche fenylo etanol do wybielania
Wspierająca obsługa Wecistanche-największy eksporter Cistanche w Chinach:
E -mail: wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/tel: +86 15292862950
Aby uzyskać więcej informacji na temat potencjalnych rabatów, nie wahaj się skontaktować z naszym zespołem obsługi klienta. Z przyjemnością Ci pomogą!
Pigmentacja skóry jest chorobą skóry spowodowaną takimi czynnikami, jak obrażenia, zapalenie skóry i promieniowanie ultrafioletowe [1-2]. Czynniki te mogą prowadzić do nieprawidłowego wzrostu melaniny, co z kolei powoduje problemy, takie jak chloasma, piegi i postinapalna przekładnia (PIH) [{2}}], wpływające na stan psychiczny i jakość życia ludzi. Obecnie leczenie pigmentacji skóry koncentruje się głównie na hamowaniu tyrozynazy, kluczowego enzymu w tworzeniu melaniny [{3}}].
Najnowsze badania [7-8] pokazują, że pigmentacja skóry zależy od ścisłego związku między keratynocytami i melanocytami w naskórku. Gdy wolne rodniki i czynniki zapalne uwalniane przez keratynocyty mają kontakt z melanocytami, indukują wzrost aktywności tyrozynazy, co prowadzi do wzrostu zawartości melaniny. Będą również przyspieszyć transport melaniny i spowodują osłabienie melaniny na powierzchni skóry. Dlatego leczenie pigmentacji skóry wymaga różnych miar, takich jak hamowanie produkcji melaniny, przeciwzapalne i przeciwutleniające.
Obecnie, chociaż tradycyjne preparaty leków, takie jak hydrochinon i hydrochinon, mają pewne skutki w leczeniu pigmentacji skóry, ich tryby działania są stosunkowo pojedyncze i mogą powodować reakcje niepożądane [9-10]. Dla porównania, naturalne leki są naturalne i łagodne w efekcie i są coraz bardziej rozpoznawane i chwalone przez konsumentów [11-12]. W szczególności połączenie wielu ekstraktów roślinnych [13-14] może nie tylko hamować produkcję melaniny, ale także ma wiele efektów, takich jak działanie przeciwzapalne i przeciwutleniające, zapewniając nowe pomysły i metody leczenia pigmentacji skóry.
Cistanche Deserticola MA ma unikalną wartość leczniczą i jest znana jako „Desert Inteng”. Badania wykazały, że charakterystyczny składnik glikozydu fenyloetanoidalnego zawarty w cistanche ma dobrą aktywność przeciwutleniającą [15] i działanie przeciwzapalne [16], a także ma pewne działanie hamujące tyrozynazę [17]. Glicyrrhizyna jest składnikiem flawonoidalnym w glicyrrhiza glabra L., który ma silny efekt wybielania i jest znany jako „wybielanie złota” [18]. Tradycyjne chińskie leczenie pigmentacji skóry zwykle zaczyna FBYSTRENGNE Śledzionkę i nerkę, usuwając ciepło i detoksykację oraz uzupełniając Qi i krew [19].
Glikozydy fenyloetanolowe Cistanche Deserticola mogą uzupełniać nerek Yang i korzystać z esencji i krwi, podczas gdy glicyrrhiza glabra może uzupełniać śledzionę i Qi, usunąć ciepło i detoksykację. Obaj mogą współpracować, aby oprzeć się pigmentacji. Połączenie glikozydów fenyloetanoidalnych Cistanche Deserticola i glabrydyny może oprzeć się pigmentacji skóry z wielu wymiarów i celów, chronić przed promieniami ultrafioletowymi w całym pasmach, synergistycznie hamują aktywność tyrozynazy oraz zmniejszać produkcję melaniny, a także może zmniejszyć wolne radykalne i może zmniejszyć wolne radykalne i może zmniejszać czynniki wolne i regulują stres i reguluje melozynę. Istnieje jednak niewiele doniesień na temat synergistycznego hamowania pigmentacji skóry przez glikozydy fenyloetanoidowe Cistanche Deserticola i glabrydyny.
Niniejszy artykuł zamierza zbadać, czy istnieje synergistyczny efekt między pfenyloetanoloidoglikozydami z pustyni Cistanche (PHGS) i glabrydyny (GLA) poprzez eksperymenty biochemiczne in vitro a ustaleniem 3 modeli komórek, ND uzyskuje optymalny stosunek masy związku dla efektu synergistycznego. Oczekuje się, że zapewni teoretyczne wsparcie i praktyczne wskazówki dotyczące rozwoju naturalnych produktów do pielęgnacji skóry roślin oraz pomoże promować przemysł pielęgnacyjny skóry w bardziej naturalnym, zdrowym i wydajnym kierunku.
Gdzie: reakcja jest absorbancją roztworu próbki, roztworu L-tyrozyny, PBS i roztworu tyrozynazy; Kontrola reakcji to absorbancja roztworu próbki, roztworu L-tyrozyny, roztworu N i PBS; Pusta to absorbancja roztworu L-tyrozyny, roztworu PBS i roztworu tyrozynazy; Kontrola pustej jest absorbancja roztworów L-tyrozyny i PBS.
'
1.3.2 Określenie zdolności do usuwania wolnego rodnika DPPH
Po pierwsze, dokładnie zważyć {{0}}. 0 197 g (0. 0 5 mmol) DPPH i rozpuszcza go w 25 0 ml anhydrous ethanol do przygotowania rozwiązania DPPH z stężeniem 0. mmol/l. Następnie PHGS i GLA przygotowano do roztworu etanolowego PHGS i roztworu etanolowego GLA o stężeniach masy 0. 0 01, 0,01, 0,1, 0,4, 0,8, 1,2, 1,6, 2,0 mg/ml odpowiednio przy użyciu 50% etanolowej objętości i VC Ethanol zostało przygotowane w ten sam sposób. Następnie roztwór etanolowy PHGS i roztwór etanolowy GLA zmieszano równomiernie w M (roztwór PHGS) ∶ M (rozwiązanie GLA)=40 ∶1, 20∶1, 10∶1, 5∶1, 1∶1, 1∶5, 1∶10, 1∶20, 1∶40 w celu uzyskania 9 rodzajów PHG/GLA roztworów etanolowych z różnymi rakami masowymi, które zostały zapisane jako Phgs/GLA/GLA. (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Rozwiązania etanolu. Na koniec dodaj 100 μl różnych roztworów próbki i 100 μl działającego roztworu DPPH do płytki studzienkowej 96-, dobrze wymieszaj i trzymaj się z dala od światła w temperaturze pokojowej przez 30 minut. Zmierz absorbancję przy 517 nm za pomocą markera enzymu. VC zastosowano jako kontrolę pozytywną, a każdy eksperyment powtórzono 3 razy. Oblicz wskaźnik wymiatania wolnego rodnika DPPH (%) zgodnie ze wzorem (2).
DPPH Szybkość zmiatania wolnego rodnika/%=(1 −𝐴1 -𝐴3𝐴2) × 100 (2) gdzie: a1 jest absorbancją roztworu próbki + roztworu roboczego DPPH; A2 jest absorbancją 50% etanolu według objętości + roztworu roboczego DPPH; A3 jest absorbancją rozwiązania próbki + 50% etanolu według objętości.
1.3.3 Określenie ABTS+ zdolność do oczyszczania wolnego rodnika
Po pierwsze, ważyć 1 g (1,82 mmol) ABT i rozpuść go w wodzie dejonizowanej, aby przygotować roztwór roboczy ABTS o końcowym stężeniu 7,4 mmol/l; Ważyć 0. 5 g persulfate potasu i rozpuść go w wodzie dejonizowanej, aby przygotować roztwór roboczy potasu o końcowym stężeniu 2,6 mmol/l; Wymieszaj roztwór roboczy ABTS i roztwór roboczy potasu w równych objętościach i reaguj przez 12 godzin w ciemności, aby przygotować roztwór roboczy ABT+. Następnie, zgodnie z metodą w rozdziale 1.3.2, przygotuj roztwór etanolu PHGS, roztwór etanolu GLA, roztwór etanolu N i VC, a także PHGS/GLA (40∶1) ~ PHGS/GLA (1∶40) Roztwór etanolu.
Na koniec dodaj 40 μl różnych roztworów próbki i 160 μl roztworu ABTS+ działającego roztworu do studzienki 96-, dobrze wymieszaj, reaguj w temperaturze pokojowej w ciemności przez 6 minut i zmierz absorbancję roztworu przy 734 nm za pomocą czytnika ELISA. Oblicz wskaźnik zmiatania Rodnika ABT+ wolnego rodnika (%) zgodnie ze wzorem (3).
Gdzie: A1 jest absorbancją roztworu próbki + ABTS + rozwiązania roboczego; A2 jest absorbancją dejonizowanej wody + ABTS + Rozwiązanie robocze; A3 jest absorbancją roztworu próbki + wody dejonizowanej.
1.4 Eksperyment komórkowy
1.4.1 Kultura komórkowa
Po ożywieniu komórek B16F10 i HACAT są one zaszczepione do pożywki wysokiej glukozy DMEM (zawierającej mieszaninę 10% płodowej surowicy bydlęcej i 1% penicylinowej streptomycyny przez frakcję masową) i hodowane w inkubatorze przy 37 stopni, 5% frakcjonowaniu objętości CO2 i 70% przylocie przez 24 h. Status wzrostu komórek obserwuje się pod mikroskopem, a pożywkę jest zastępowana lub subkulcjonowana zgodnie ze statusem wzrostu komórki.
1.4.2 Grupa eksperymentalna
Komórki B16F10 i HACAT w logarytmicznej fazie wzrostu są zaszczepione w płytkach studzienkowych 96- z odpowiednimi liczbami komórek i hodowane przez 24 godziny, aby umożliwić przyleganie komórek do ściany. Roztwory próbki o różnych stężeniach masy są przygotowywane przy użyciu pożywki hodowlanej DMEM. Grupa grupy normalnej grupy, grupy modelowej, grupa PHG (125 ug/ml), średniej dawki PHG (250 ug/ml), grupa PHGS (500 ug/ml), grupa GLA o niskiej dawce (6,25 ug/ml), średniej dawki GLA (12,5 ug/ml), wysokie dawki (25 UG/ml) i PHG/GLA/GLA. (1∶1) Grupa PHGS/GLA (5∶1) i PHG/GLA (10∶1) Grupa hodowlaną.
W indukowanym UVB modelu pigmentacji B16F10 dodano komórki grupy modelowej z 30 μl PBS (pH =7. 4) i umieszczono 3 cm bezpośrednio poniżej napromieniowania UVB przez 110 s; Grupę eksperymentalną wstępnie traktowano 100 μl roztworów próbek o różnych stężeniach masy przez 1 godzinę, a następnie dodano z 30 μl PBS i umieszczono 3 cm bezpośrednio poniżej napromieniowania UVB przez 110 s; Normalna grupa zawsze stosowała pożywkę hodowlaną DMEM o wysokiej glukozie; Grupa pusta nie została zaszczepiona komórkami, ale zamiast tego równą ilością pożywki hodowlanej.
W indukowanym przez LPS modelu zapalenia komórek HACAT grupa modelu hodowano roztworem PBS LPS w stężeniu 20 ug/ml przez 24 godziny; Grupę eksperymentalną wstępnie traktowano 100 μl roztworów próbki o różnych stężeniach masy przez 24 godziny, a następnie dodano z roztworem LPS 20 ug/ml przez 24 godziny; Normalna grupa zawsze stosowała średnim podłoże DMEM o wysokiej glukozie; Grupa pusta nie została zaszczepiona komórkami, ale równą ilością pożywki hodowlanej.
W modelu stresu oksydacyjnego komórek HACAT indukowanego przez AAPH grupa modelowa hodowano za pomocą 100 ml AAPH (2,5 mmol) w stężeniu 25 mmol/L przez 24 godziny; Grupę eksperymentalną wstępnie traktowano 100 μl roztworów próbki o różnych stężeniach masy przez 24 godziny, a następnie dodano roztworem AAPH w stężeniu 25 mmol/l przez 24 godziny; Normalna grupa zawsze stosowała średnim podłoże DMEM o wysokiej glukozie; Grupa pusta nie została zaszczepiona komórkami, ale równą ilością pożywki hodowlanej.
Każda grupa została skonfigurowana z 3 powtórzonymi studzienkami i hodowano w inkubatorze przy 37 stopni, 5% frakcji objętościowej CO2 i 70% wilgotności.
1.4.3 Test cytotoksyczności
Metodę CCK8 zastosowano do określenia cytotoksyczności. Komórki B16f1 0 w logarytmicznej fazie wzrostu strawiono 0,25% trypsyną przez 3 min. Po zakończeniu trawienia pożywkę hodowlaną wielokrotnie wysadzono, aby wykonać zawiesinę komórkową o gęstości 1 × 104 komórek/ml. Komórki równomiernie zaszczepiono w płytce studzienkowej 96-, 100 μl na studzienkę, a PBS dodano do studni wokół komórek. Po przyleganiu komórek do ściany dodano różne stężenia masy roztworu próbki, 3 powtórzone studzienki na grupę i hodowane w inkubatorze przy 37 stopni, 5% frakcji objętościowej CO2 i 70% wilgotności dla 24, 48 i 72 godzin, a następnie roztwór został odrzucony. Wszystkie grupy dodano ze 100 μl pełnego pożywki hodowlanej zawierającej 10% frakcji objętościowej CCK8 i inkubowano przez 60 minut. Absorbancję roztworu przy 450 nm zmierzono za pomocą czytnika ELISA. Żywotność komórek (%) obliczono zgodnie z wzorem (4).
Gdzie: grupa eksperymentalna to absorbancja studzienek zawierających komórki i roztwór próbki w ramach napromieniowania UVB; Normalna grupa to absorbancja studzienek zawierających komórki i roztwór próbki bez napromieniowania UVB; Grupa pusta to absorbancja studni zawierających pożywkę hodowlaną, ale bez komórek.
1.4.5 Określenie treści melaniny
Zawartość melaniny określono metodą lizy NaOH. Po traktowaniu komórek przez 72 godziny zgodnie z metodą w rozdziale 1.4.2, supernatant odrzucono i przemyto dwukrotnie PBS i dodano 100 μl roztworu wodnego NaOH zawierającego 10% DMSO (stężenie 1 mol/l). Po umieszczeniu w piekarniku 90 stopni przez 1 godzinę, absorbancję roztworu przy 490 nm określono za pomocą markera enzymatycznego. Eksperyment powtórzono 3 razy. Zawartość melaniny (%) obliczono zgodnie z wzorem (5).
1.5 Oznaczanie zawartości czynnika zapalnego i wskaźnika stresu oksydacyjnego
Po traktowaniu komórek przez 48 godzin zgodnie z metodą w rozdziale 1.4.2 komórki HACAT w każdej grupie zebrano za pomocą skrobaka komórkowego, odwirowano i zebrano supernatant. Treść IL -6 i tnf- została określona zgodnie z instrukcjami zestawu ELISA.
Po leczeniu komórek przez 48 godzin zgodnie z metodą w rozdziale 1.4.2 komórki Hacat w każdej grupie zebrano za pomocą skrobaka komórkowego, a komórki rozbito przez powtarzające się zamrażanie i rozmrażanie. Komórki wirowano przy 12000 r/min przy 4 stopniach przez 10 minut i zebrano supernatant. Aktywność SOD i zawartość CAT określono zgodnie z instrukcjami zestawu ELISA.
1.6 Określenie połączonego wskaźnika
Metodę połączoną wskaźnika (CI) [20] zastosowano do ustalenia, czy PHG i GLA w różnych stosunkach masy miały synergistyczny działanie w hamowaniu aktywności tyrozynazy i anty-utleniania. Wskaźnik kombinacji obliczono zgodnie z wzorem (6):
Wherein: D1 and D2 are the mass concentrations (mg/mL) of the two drugs when the activity reaches x% in the combined treatment; DX is the mass concentration (mg/mL) required for the activity to reach x% when the two substances are used alone. Compusyn software was used for calculation. CI>1 Wskazuje efekt antagonistyczny, CI =1 wskazuje na efekt addytywny i CI<1 indicates a synergistic effect.
1.7 Analiza danych
Wszystkie dane są wyrażone jako „średnia arytmetyczna ± odchylenie standardowe (𝑥̅ ± 𝑠)”. Graph Prism 9.5. 0 zostało użyte do analizy statystycznej. Do porównania wielu grup zastosowano jednokierunkową analizę wariancji. P<0.05 was considered statistically significant.
