Działania przeciwdepresyjne i poprawiające funkcje poznawcze tradycyjnego chińskiego zioła Cistanche Ⅰ
Jun 23, 2022
Abstrakcyjny
Ponad dziesięć procent ludzi cierpi na co najmniej jeden epizod depresji i pokrewnych zaburzeń psychicznych w życiu, a depresja i pokrewne zaburzenia psychiczne są jednym z największych problemów zdrowia publicznego na świecie. Teoria wielu systemów utrzymuje, że rozregulowanie wielu systemów leży u podstaw patogenezy depresji i związanych z nią zaburzeń psychicznych, a nowe terapie oparte na teorii rozregulowania wielu systemów są pilnie potrzebne. W tym badaniu działanie przeciwdepresyjne wywaru z ziółCistanche deserticolaYCMa iCistanche tubulosaBył egzaminowany. ZieleCistanchewywar znacznie skrócił okres bezruchu w teście zawieszenia ogona myszy. W teście labiryntu wodnego Morrisa myszy traktowane wywarami z ziół wykazały lepszą zdolność uczenia się przestrzennego i zapamiętywania. Grupy leczone wywarami ziołowymi wykazywały obniżoną aktywność oksydazy monoaminowej (MAO); stężenie dopaminy (DA) w mózgu było podwyższone, co wskazuje na ziołoCistanchewywar poprawił pobudliwość nerwów; stężenie kortykosteronu w surowicy (CORT) było obniżone, co pokazuje, że myszy odniosły korzyści ze zmniejszonego poziomu stresu. Stąd skuteczność i mechanizm działania przeciwdepresyjnegotradycyjne chińskie ziołoCistanchezostały zbadane w tym badaniu. ZieleCistanchewykazał potencjał do rozwinięcia jako uzupełniającej i alternatywnej terapii depresji.
1. Wstęp
Depresja i związane z nią zaburzenia nastroju, szacuje się, że 12-17% populacji doświadcza co najmniej jednego epizodu w życiu, należą do głównych przyczyn niepełnosprawności umysłowej i są uważane za jeden z głównych problemów zdrowia publicznego na świecie. Co szczególnie istotne, znaczna część pacjentów z depresją cierpi na utratę pamięci, problemy z koncentracją, zmniejszoną energię lub zmęczenie, utratę zainteresowania lub przyjemności z hobby i aktywności oraz trudności ze snem, przebudzeniem się wcześnie rano lub zasypianiem. Chociaż substraty neuronalne nieprawidłowości w depresji i powiązanych zespołach są niejasne, ogólnie przyjmuje się, że upośledzenie neuroplastyczności i odporności komórkowej powoduje patofizjologię depresji, a skuteczne leczenie może zależeć od interwencji poziomu neuroprzekaźników. Podejście do leków na depresję opiera się zasadniczo na klasycznej hipotezie układu monoaminowego, która głosi, że rozregulowanie monoamin, zwłaszcza serotoniny (5-HT) i norepinefryny (NE) przyczynia się do patogenezy depresji i interwencji układu neuroprzekaźników za pomocą dopaminy agoniści i modulatory dopaminowo-noradrenergiczne łagodzą objawy poważnego zaburzenia depresyjnego. Chociaż powszechnie przepisywane, skuteczność lecznicza leków przeciwdepresyjnych jest wątpliwa, a efektu ubocznego nie można zignorować, ponieważ znaczna część pacjentów nie reaguje na manipulację układem monoaminowym. Ostatnio nowe teorie patogenezy depresji wskazują, że wiele systemów, w tym szlaki zapalne, szlak stresu oksydacyjnego, oś podwzgórze-przysadka-nadnercza (HPA), system metaboliczny i bioenergetyczny, szlaki neurotroficzne, system glutaminianowy, system opioidowy i układu cholinergicznego są ściśle związane z wystąpieniem depresji. Dowody pokazują, że interwencja z wieloma celami przyniosła lepszą skuteczność niż interwencja z jednym celem. Pilnie potrzebne są nowe terapie oparte na teorii wielosystemowej dysregulacji.
Wyszukiwanie więcej szczegółów na temat korzyści Cistanche
Podobno produkty ziołowe spożywały ponad połowę populacji USA; Na całym świecie rośnie zainteresowanie i zapotrzebowanie na zioła lub produkty ziołowe jako uzupełniający sposób leczenia depresji. Stwierdzono, że wiele roślin leczniczych wykazuje korzystne działanie łagodzące depresję. Zioła, które mają działanie hamujące depresję i poprawiające funkcje poznawcze, obejmują rokitnik zwyczajny,Miłorząb dwuklapowy,Piper nigrum,Hypericum perforatum,Griffonia simplicifolia. Podawanie skojarzone kwasu ferulowego i piperyny wykazało u myszy synergiczne działanie przeciwdepresyjne poprzez manipulowanie układem monoaminergicznym. Albiflorin charakteryzował się wysokim selektywnym powinowactwem do receptorów i transporterów neuroprzekaźników oraz znacznie zwiększonym zewnątrzkomórkowym stężeniem 5-HT i NE w podwzgórzu swobodnie poruszających się szczurów. Zioło medyczneMelissa officinalisL. łagodził depresyjne zachowania myszy, wywierając wpływ na poziom neuroprzekaźników serotoninergicznych. Te zioła lub wywary, opracowane jako alternatywne lekarstwa na depresję, pomagają złagodzić objawy depresji i stanowią nowe źródło dla rozwijającego się leku przeciwdepresyjnego. ZieleCistancheGatunki, rozpowszechnione na suchych ziemiach i pustyniach w północnej części Chin, są tradycyjnymi ziołami medycyny chińskiej i są szeroko stosowane w leczeniu różnych chorób od ponad 1000 roku w Chinach. Wielokrotna skuteczność ziołaCistanchewywar waha się między afrodyzjakiem [14], wzmacniające odporność [15], przeciwutleniający [16] i hepatoprotekcyjne [17] nieruchomości.C. deserticolawywary indukują jądrowe enzymy steroidogenne [18], promują odpowiedź erekcji penisa i skracają okres utajenia reakcji erekcji u wykastrowanych szczurów [19]. ZieleCistanchedoniesiono, że hamuje aktywność neuronów dopaminergicznych poprzez regulację genów hamujących apoptozę i czynników neurotroficznych [20].C. tubulosawywary poprawiły dysfunkcję poznawczą powodowaną przez A 1-42 poprzez blokowanie odkładania się amyloidu i przywrócenie cholinergicznej i hipokampa funkcji neuronów dopaminergicznych [21]. Neuroprotekcyjne właściwości ziółCistancheimplikuje potencjał terapeutyczny w chorobach poznawczych. Depresja jest powszechnym mieszanym trybem reakcji emocjonalnych, którego częstymi objawami są zapominanie i pogorszenie funkcji poznawczych [22]. ZieleCistanchebył powszechnie stosowany jako tradycyjna medycyna chińska w leczeniu zapomnienia; co więcej, niedawny raport pokazuje, że podawanie mąki kukurydzianej u wczesnej osoby dorosłej uzupełnionejC. tubulosama korzystny wpływ na promocję długowieczności oraz poprawę uczenia się i pamięci związanej z węchami u osób bezkręgowychDrosophilaModel [23]. Te fakty wskazują na poprawiające funkcje poznawcze właściwości ziołaCistanche; W tym badaniu po raz pierwszy scharakteryzowaliśmy właściwości przeciwdepresyjne i ich związek z czynnościami poprawiającymi funkcje poznawcze w modelu ssaków poprzez regulację układu monoaminowego i osi HPA. Rozświetlanie właściwości przeciwdepresyjnych i wstępnego mechanizmu działania ziołaCistanchemoże rozszerzyć spektrum zastosowań ziółCistanche, który mógłby zostać opracowany jako alternatywny lek na depresję.
2. Materiały i metody antydepresyjnej funkcji Cistanche
2.1. Przygotowanie materiału roślinnego i wywaru Cistanche
C. deserticolaYCMa uzyskano z Regionu Autonomicznego Nei Mongol w Chinach;C. tubulosazostał uzyskany z Regionu Autonomicznego Xinjiang Uygur w Chinach. Przed wywar, zioło (C. deserticolaYCMa lubC. tubulosa) poddano kontroli w celu wykrycia zawartości echinakozydu i werbaskozydu metodą HPLC (wysokosprawna chromatografia cieczowa) (Milford, MA, Waters, USA), a kwalifikujący się produkt (zgodnie z Farmakopeą Chińskiej Republiki Ludowej) zastosowano w doświadczeniach na zwierzętach . Wywar uzyskano w oparciu o metodę waporyzacji opracowaną przez Centrum Badań Inżynierii Żywności i Zdrowia Ministerstwa Edukacji Państwowej Uniwersytetu Sun Yat-sena. WysuszonyCistanche deserticolaYCMa 125 g zmiażdżono i przesiano przez sito 120-mesh, a następnie proszek rozpuszczono w 3 l ultraczystej wody, ogrzewano w 100 stopniach przez 2 godziny, a następnie schłodzono do temperatury pokojowej i przesiano ; supernatant zawracano. Osad następnie rozpuszczono w 2 l ultraczystej wody, a następnie ogrzewano przez 1,5 godziny i schłodzono, jak wspomniano powyżej, w celu zawrócenia supernatantu; osad użyto następnie do recyklingu supernatantu. Zawartość całego supernatantu została wzbogacona przez obrotowe wyparki próżniowe w temperaturze 60 stopni; ostatecznie stężenie surowego leku ustalono na 0,5 g/ml i produkt przechowywano w temperaturze -20 stopni.
2.2. Test echinakozydu i werbaskozydu metodą analizy HPLC
Do pomiaru jakościowego i ilościowego oznaczenia echinakozydu i werbaskozydu zastosowano HPLC (wysokosprawna chromatografia cieczowa); werbaskozyd (czystość > 93 procent) i echinakozyd (czystość > 93 procent) zakupiono z National Institutes for Food and Drug Control (Pekin, Chiny) i zastosowano jako standardową kontrolę.
2.3. Opieka nad zwierzętami i prowadzenie eksperymentów na Cistanche
Osobnikami były samce myszy Kunming SPF (wolne od specyficznych patogenów) o wadze 21-25 gramów, dostarczone przez Medical Experimental Animal Center z prowincji Guangdong. Zwierzęta trzymano w plastikowych klatkach (dziesięć na klatkę); warunki otoczenia zostały ustawione w następujący sposób: wilgotność 40~70 procent , temperatura pokojowa 21 ± 1 stopień , oraz 12h : 12h okres światło-ciemność. Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komisję Etyki Zwierząt Uniwersytetu Sun Yat-sen.
2.4. Test zawieszenia tylnego na Cistanche
Test zawieszenia ogona przeprowadzono zgodnie z protokołem opisanym przez Cryan et al. [24] ze skromnymi zmianami. Krótko, w dniu 21 myszy zawieszono za ogon na metalowej szubienicy uwiązanej nylonowym cewnikiem, z głową na wysokości 50 mm od podłogi. Myszy zawieszono na haczyku na taśmach samoprzylepnych 10~20 mm od końca ogona i izolowano akustycznie i wizualnie za pomocą klap. Rejestrowano ruchy ciała myszy, a ruchy oddechowe ignorowano. Przed dniem eksperymentu myszy zawieszono na 8 minut w celu adaptacji.
2.5. Test labiryntu wodnego Morrisa na Cistanche
Test labiryntu wodnego wykonano zgodnie z opisem Vorhees et al. [25–27] za pomocą urządzenia opracowanego przez Chińską Akademię Nauk Medycznych. Zastosowano okrągły basen (średnica 150 cm) wypełniony wodą (26 ± 1 stopień; wysokość obrzeża (odległość powierzchni wody do obrzeża ściany): 10 cm), okrągła platforma ratownicza (średnica: 11 cm; odległość między punktem centralnym platformy a basenem ściana: 27 cm) została zanurzona na 1–1,5 cm poniżej powierzchni wody, a obszar badania oświetlono światłem pośrednim (50 ± 10 luksów), aby uniknąć odbić. Wykorzystano cztery lokalizacje początkowe, N, S, E i W. W teście uczenia przestrzennego zwierzęta trenowano codziennie w dniach 9-11 w stałej lokalizacji początkowej. Okres latencji ucieczki jest mierzony w celu wyświetlenia pamięci przestrzennej i zdolności uczenia się myszy. Gdyby myszy nie mogły znaleźć lub wspiąć się na platformę, myszy byłyby prowadzone na platformę i pozostawały przez 10 sekund. Po 60 s odpoczynku rozpoczynała się kolejna sesja treningu. Jako wartość bazową dla formowania wykorzystano dane uzyskane z ostatniego testu uczenia przestrzennego. W dniach 23-28 wykonano test nawigacyjny miejsca i sondę przestrzenną. Test nawigacji po miejscu trwał 6 dni i został przeprowadzony o godzinie 13:00, zwierzęta umieszczono w wodzie z głową skierowaną w stronę ściany basenu zgodnie z ruchem wskazówek zegara i rejestrowano okres utajenia (w ciągu 2 min). Po wykonaniu testu nawigacji po miejscu platforma została usunięta. Myszy umieszczono w wodzie z głową skierowaną w stronę ściany basenu w losowym miejscu i rejestrowano ślad ruchu i częstotliwość, przez którą myszy pływały w miejscu, w którym znajdowała się platforma w ciągu 2 minut. Ślad ruchu został zarejestrowany przez wielofunkcyjny autonomiczny rejestrator ruchu myszy (YLS-1A, Yiyan Technology, Jinan, Chiny).
2.6. Wykrywanie działalności MAO
Aktywność MAO mierzono za pomocą zestawu do wykrywania MAO (A034, Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Chiny), a wykrywanie przeprowadzono zgodnie z protokołem producenta. Uzyskano homogenat z tkanki mózgowej; 500μbyłem zmieszany z 300μl Agenta 1 i 300μl środka 2, inkubowano przez 3 godziny w temperaturze 37 stopni, a następnie kolejno dodawano 300μl środka 3, 3 ml środka 4 i worteksować przez 2 min. Mieszaninę reakcyjną odwirowywano 3,000 obr/min przez 10 min, a gęstość optyczną supernatantu określano za pomocą spektrofotometru widma ultrafioletowego i widzialnego (Lambda 25, PerkinElmer, USA) stosując światło wzbudzające 242 nm.
2.7. Enzymatyczny test immunosorpcji neuroprzekaźników oraz ACTH i CORT
Enzyme Linked Immunosorbent Assay (ELISA) do wykrywania dopaminy (DA), norepinefryny (NE) i 5-hydroksytryptaminy (5-HT) został zakupiony w firmie BLUE GENE w Szanghaju. Zestawy do wykrywania ELISA zakupiono od Qiyun Biotech, Guangzhou.
Procedury są następujące: eksperyment przeprowadzono w temperaturze pokojowej. Pokryć dołki płytki do mikromiareczkowania PVC przeciwciałem wychwytującym w 1–10μStężenie g/ml w buforze węglanowym/wodorowęglanowym (pH 9,6). Zamknąć płytkę i inkubować przez noc 4 stopnie; przemyć płytkę 3 razy PBS/tween i niespecyficzne miejsca wiązania są blokowane przez Block Solution; następnie przemyj płytkę 3 razy PBS/tween. Wzorce i próbki są rozcieńczane w roztworze blokującym i 100μ1 dodaje się do studzienki płytki, płytkę zamyka się szczelnie i inkubuje w temperaturze 37 stopni przez 1 godzinę. Dodaj 100μl rozcieńczyć przeciwciało detekcyjne i inkubować płytkę w temperaturze 37 stopni przez 1 godzinę; przemyj płytkę 3 razy PBS/Tween. Dodaj 50μl roztwór do wywoływania koloru i trzymaj płytkę z dala od światła i inkubuj ją w temperaturze pokojowej przez 15 min; 50μW celu zatrzymania reakcji dodaje się 1 bufor zatrzymujący. Zmierzyć gęstość optyczną (OD) dla każdego dołka za pomocą czytnika mikropłytek ustawionego na 405 nm w ciągu 30 minut.
2.8. Analiza statystyczna
Wszystkie dane przedstawiono jako średnią ± SEM (błąd standardowy średniej), istotną różnicę analizowano za pomocą t-test lub jednoczynnikowa ANOVA, a następnie test wielu zakresów Duncana przy użyciu SPSS 16.0 oraz różnice między grupami zP< 0.05 uznano za statystycznie istotne.
