Wpływ Cistanche Shenqiwan na uszkodzenie nerek, GRP78 i czynniki związane z autofagią u tłustych szczurów Zucker z cukrzycą typu 2

ilość zwykłej soli fizjologicznej. Szczurom podawano w sposób ciągły przez 4 tygodnie. Regularnie obserwowano ogólny stan szczurów. Zmierzono poziom glukozy we krwi na czczo (FBG) i 24-godzinny poziom mikroalbuminy w moczu (24 h U-mAlb). Tkankę nerkową barwiono i obserwowano morfologię. Ultra-mikrostrukturę obserwowano za pomocą transmisyjnej mikroskopii elektronowej. Poziomy mRNA GRP78, Beclin{6}} i LC3 w tkance nerki szczura zbadano metodą PCR w czasie rzeczywistym, a poziomy białka zbadano metodą Western blotting. Wyniki W porównaniu z grupą modelową, szczury z grupy Shenqiwan wykazały

lepszy połysk futra, większy przyrost wagi i większa aktywność; zarówno poziomy FBG, jak i U-mAlb po 24 godzinach były obniżone (P <{2}},05). Thenerkirozszerzone naczynia włosowate kłębuszków nerkowych, nieregularnie pogrubione błony podstawne, poszerzone obszary mezangium i stwardnienie segmentalne; w tych nerkach obserwowano również zanik kanalików nerkowych i śródmiąższową tkankę włóknistą nerki. Te patologiczne zmiany zostały złagodzone w grupie Shenqiwan. W porównaniu z grupą modelową, poziom zarówno genu, jak i białka GRP78 był obniżony (P <{1}}, 05) w grupie Shenqiwan; poziom białka w Beclin-1

zmniejszyła się (P <{0}}},05); a poziom białka LC3 był zwiększony (P <0,05). Wniosek Shenqiwan może złagodzić uszkodzenie nerek u szczurów ZDF i opóźnić postęp cukrzycowej choroby nerek poprzez zmniejszenie stresu retikulum endoplazmatycznego i zwiększenie autofagii.

 

Słowo kluczowe: Shenqiwan;cukrzyca typu 2; cukrzycowa choroba nerek; stres retikulum endoplazmatycznego;autofagia; GRP78; Cukrzycowe tłuste szczury Zuckera

Kliknij tutaj, aby dowiedzieć się więcej o produktach Cistanche do leczenia cukrzycowej choroby nerek

ZAPYTAJ O WIĘCEJ SZCZEGÓŁÓW:

wallence.suen@wecistanche.com 0015292862950

 

 

Cukrzycowa choroba nerek(DKD) jest ważnym powikłaniem mikronaczyniowymcukrzycai główną przyczynąschyłkową niewydolnością nerek[1]. DKD jest ważnymikronaczyniowe powikłanie cukrzycyIgłówną przyczyną schyłkowej niewydolności nerek[1]. U pacjentów z DKD może występować uporczywy białkomocz i uporczywe zmniejszeniewspółczynnik filtracji kłębuszkowej[2]. ThePatogeneza DKDjest złożona, a ostatnie badania wykazały, że stres retikulum endoplazmatycznego (ERS) w nerkach jest najczęstszą przyczyną schyłkowej niewydolności nerek. （Stres retikulum endoplazmatycznego (ERS) i autofagia są również ściśle związane z DKD, a badanie ich patogenezy może być ważne w leczeniu DKD. DKD jest bardziej zbliżona do „dolnego wyginięcia” w kategorii zaburzeń pragnienia w medycynie chińskiej.
Typowe objawy pragnienia, nadmiernego picia i oddawania moczu są odnotowane w Jin Kui Yao (Podstawy Złotego Horoskopu), aPigułka Qi na nerkijest proponowana jako główna formuła terapeutyczna. Jin Kui Yao (金匮要略) odnotował typowe objawy pragnienia i nadmiernego oddawania moczu i zaproponowałPigułka Qi na nerkijako główna formuła kuracji. Leczenie DKD za pomocą TCM może rzeczywiście skutecznie chronić czynność nerek i ma bezpieczną i niezawodną charakterystykę [5-6]. Leczenie DKD medycyną chińską może skutecznie chronić czynność nerek i ma bezpieczne i niezawodne właściwości [5-6]. Skuteczność Kidney Qi Pill w tonizowaniu nerek i pomaganiu Yang została potwierdzona w powiązanych badaniach [7]. Nasze poprzednie badanie również Nasze poprzednie badanie wykazało również, że pigułki Qi nerek mają dobre działanie ochronne na strukturę i funkcję tkanek nerek u myszy z cukrzycą [8]. W niniejszym badaniu zaobserwowaliśmy wpływ pigułek nerkowych qi na W niniejszym badaniu zaobserwowaliśmy wpływ pigułek nerkowych qi na uszkodzenie tkanki nerek, ERS i czynniki związane z autofagią u szczura cukrzycowego Zucker (ZDF). W tym badaniu zbadaliśmy możliwe mechanizmy uszkodzenia nerek u szczurów ZDF, obserwując wpływ pigułek nerkowych qi nauszkodzenie tkanki nerek, ERS i czynniki związane z autofagią, w których pośredniczą pigułki nerkowe qi.

1 Materiały
1.1 Zwierzęta doświadczalne
Dwadzieścia 12-tygodniowe samce szczurów SPF ZDF (masa ciała 390-410 g, karmione wysokiej jakości karmą dla gryzoni 5C08 przez 4 tygodnie do całkowitego wywołania cukrzycy typu 2) i siedem 12-tygodni stare samce szczurów Zucker Lean (ZL) SPF (masa ciała 350-380} g) zakupiono od Beijing Viton Lehua Laboratory Animal Technology Co. Wszystkie szczury trzymano w środowisku barierowym Instytutu Medycyny Klinicznej, Szpitala Przyjaźni Chiny-Japonia , numer licencji: SYXK (Pekin) 2016-0043, a platforma zapewniła niezależny system wentylacji wewnątrz bariery, utrzymujący 12-h naprzemienne światło i ciemność, temperaturę pokojową 23-25 stopni , a wilgotność względna w pomieszczeniu wynosi 50 procent -60 procent . Wszystkim szczurom pozwolono swobodnie pić i karmić się podczas okresu karmienia.

1.2 Ocena etyczna
Doświadczenia na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Podkomisję ds. Etyki Zwierząt Doświadczalnych Komitetu Akademickiego Pekińskiego Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej (BUCM) z numerem zatwierdzenia BUCM-4-2021102801-4034.
1.3 Główne leki i odczynniki
Tabliczki (Shu Di Huang, Shan Yu Fei, Shan Yao, Mudan Pi, Fu Ling,Cistanche, Ze Xie, Gunner's Fructus, Gui Zhi) do wywaruQi nerekPigułki zakupiono od Beijing Tong Ren Tang Co. Fizjologiczny roztwór soli, specyfikacja: 500 ml, dostarczony przez Shandong Hualu Pharmaceutical Co. Silver Staining Solution (Beijing Regen Biotechnology Co., Ltd., Part No. DG0090), Magic SYBR Mixture (Jiangsu Kangwei) Century Biotechnology Co., Ltd.), zestaw do odwrotnej transkrypcji mRNA (Thermo Fisher Scientific, Inc.), odczynnik RNA TRIzol (odczynnik RNA TRIzol), odczynnik RNA TRIzol (odczynnik RNA TRIzol). Odczynnik RNA TRIzol (Beijing Solabao Technology Co., Ltd.), zestaw ELISA mikroalbuminy moczu szczura (Jiangsu Kote Biotechnology Co., Ltd., seria nr KT{2}}A), przeciwciało GRP78 BiP, przeciwciało LC3B i Beclin{ {5}} Przeciwciało (Abcam, Wielka Brytania) (numery serii: ab108613, ab192890, ab207612), królicze przeciwciało poliklonalne anty-GAPDH (Proteintech, USA), kozie anty-królicze IgG(H&L)-HRP (Beijing Baiao Yijie Technology Co. Sp. z o.o.).

 

Glukometr, paski testowe do pomiaru glukozy we krwi (Shanghai Roche Diagnostic Products Co. Ltd.), wirówka niskotemperaturowa o dużej prędkości (Eppendorf, Niemcy), przyrząd do ilościowej fluorescencji PCR, przyrząd do podwójnej pionowej elektroforezy i przyrząd do elektroforezy transferowej (Burroughs Life Medical Products Co. Ltd.), aparat do obrazowania żelu (Protein Simple, USA), mikroskop świetlny (Leica, Niemcy), transmisyjny mikroskop elektronowy (Leica, Niemcy) i aparat do obrazowania żelu. (Leica, Niemcy), transmisyjny mikroskop elektronowy (Hitachi, Japonia).

2 metody
2.1 Przygotowanie leków eksperymentalnych
Odwar zPigułka Qi na nerkizostał przygotowany przez przeliczenie dawki Kidney-Qi Pill w Jin Kui Yao [9] zgodnie ze starożytnymi i współczesnymi proporcjami systemu metrologii Han w pierwszym wydaniu „Study on the Dose and Proportion of Tyfus Recept” [2015 ], a dawka wywaru potrzebna do przeprowadzenia eksperymentu była następująca: Shu Di Huang 24 g, Shan Yu Fei 12 g,Cistanche10 g, Shan Yao 12 g, Mudan Pi 9 g, Fu Ling 9 g, Ze Xie 9 g, Gunnera 3 g i Gui Zhi 3 g. Leki moczono w wodzie destylowanej przez 2 godziny. Odwar następnie zatężono przez 30 minut i przesączono przez sterylną gazę. Zioła odparowywać przez 30 min, następnie dodać pozostałe leki i odwarzać przez 1 godz. Po obniżeniu temperatury roztworu do temperatury pokojowej, roztwór zatęża się i przesącza przez sterylną gazę, a przesącz pakuje i przechowuje w -20 stopniach. Lek należy przechowywać nie dłużej niż 1 tydzień, a roztwór przed podaniem doprowadzić do temperatury pokojowej.

2.2 Tworzenie i grupowanie modeli zwierzęcych
Szczury ZDF indukowano dietą wysokotłuszczową 5C08 przez 4 tygodnie, a poziom glukozy we krwi mierzono przez pobieranie krwi z końcówki ogona w wieku 12 tygodni. Szczurom z grupy pigułek qi nerki podano wodny wywar z pigułki qi nerki, a dzienną dawkę 8,12 g/kg na szczura obliczono zgodnie ze wzorem w „Modele choroby u zwierząt doświadczalnych” [10], a stężenie dawkowania wynosiła 0,812 g/ml, a szczurom z grupy modelowej i kontrolnej podawano sól fizjologiczną w odpowiedniej objętości przez 4 tygodnie.

2.3. Stan ogólny i badanie stężenia glukozy we krwi na czczo (FBG) u szczurów
Codziennie obserwowano i rejestrowano stan ogólny szczurów, a masy ciała regularnie ważono. Pod koniec 12 tygodnia i 16 tygodnia życia pobrano krew z końcówki ogona szczurów po 8 godzinach postu i zmierzono FBG za pomocą glukometru firmy Roche i pasków testowych. 2.4 Zmierzono 24-h mikroalbuminy w moczu (24-h U-mAlb) pod koniec 16 tygodnia życia, a stężenie 24-h U-mAlb zmierzono zgodnie z instrukcją zestawu LISA.

2.5 Pobieranie próbek tkanki nerki
Pod koniec 16 tygodnia życia wszystkie szczury pościły przez 8 godzin. Po znieczuleniu otworzono jamę brzuszną i odsłonięto nerki obustronne oraz usunięto otrzewną w stanie nienaruszonym i złuszczono. Korę nerki oddzielono i częściowo utrwalono w 4% paraformaldehydzie w celu przygotowania skrawków parafinowych o grubości 3 μm; częściowo pocięte na 1 mm3 bloki tkankowe i utrwalone w 2,5% aldehydzie glutarowym w celu przygotowania ultracienkich skrawków. Pozostałe tkanki nerki przechowywano w -80 stopniach do testów Realtime PCR i Western blotting.

 

2.6 Zastosowanie obserwacji morfologicznej tkanek nerek
Barwienie PAS, barwienie Massona i barwienie srebrem hematoksyliną-eozyną heksaamoniową zastosowanozmiany histopatologiczne nerekpod mikroskopem świetlnym i uzyskać obrazy. Zastosowano transmisyjną mikroskopię elektronową do obserwacji ultrastrukturalnych zmian w tkankach nerki i zebrano obrazy.

 

2.7 Test PCR w czasie rzeczywistym
Mrożonytkanki nerekzmielono na lodzie i dodano odczynnik TRIzol w celu ekstrakcji całkowitego RNA i odwirowano w 4 stopniach z promieniem 9,5 cm. Supernatant ekstrahowano przez wirowanie przy 12 000 r/min przez 10 min, a następnie wirowano przez 15 min z chloroformem. Supernatant wirowano ponownie przez 15 minut w temperaturze pokojowej przez 10 minut i supernatant przemyto 75 procentowym etanolem. ekspresja na poziomie mRNA. Startery zaprojektowano przy użyciu oprogramowania Primer Premier 5.0 i zsyntetyzowano przez Shanghai Bioengineering Co. Ltd. Sekwencje starterów są następujące.