Ochronny wpływ glikozydów Cistanche Total na toksyczność mięśnia sercowego myszy wywołaną przez adriamycynę

Więcej informacji:ali.ma@wecistanche.com

Julia Yiming

[Projekt wspierany przez Fundację Nauk Przyrodniczych Komisji ds. Nauki i Technologii Regionu Autonomicznego Xinjiang Uygur (96814)]

[Profil autorki, Eliya Yiming (1964-), kobieta (Ujgur), mistrz. Wykładowca, Kierunek badań: Farmakologia układu krążenia. ],

Wang Xiaowen', Wang Xuefei', Heiliman Yilahong 2, Xie Yaoyun 2, Du Niansheng 3

(Uniwersytet Medyczny w Xinjiang|Wydział Farmakologii, Szkoła Farmacji, Wydział Mikroskopii Elektronowej, Szkoła Podstawowych Nauk Medycznych, Wydział Chemii Leków Naturalnych, Szkoła Farmacji, Urumqi 830054, Xinjiang)

Abstrakcyjny:Aby zbadać działanie ochronne i mechanizmGlikozydy Cistanche(GCs) na uszkodzenia mięśnia sercowego wywołane przez doksorubicynę (Dox) u myszy. Fang Xie: Do określenia aktywności dysmutazy ponadtlenkowej mięśnia sercowego (SOD); aktywność peroksydazy selenowo-glutationowej (Se-GSH-Px); dialdehyd malonowy (MDA) zawiera aktywność fosfokinazy kreatynowej surowicy (CPK). Mikroskopia elektronowa bada zmiany ultrastrukturalne kardiomiocytów. Wyniki: 48 godzin po dootrzewnowym wstrzyknięciu Dox może spowodować znaczne uszkodzenie mięśnia sercowego myszy. Zmniejszyła się aktywność SOD i Se-GSH-Px mięśnia sercowego, wzrosła zawartość MDA, wzrosła aktywność CPK w surowicy i wystąpiło uszkodzenie ultrastruktury tkanki mięśnia sercowego. Glikozydy Cistanche(62,5, 125,0, 250,0 mg/kg)może zwiększać aktywność mięśnia sercowego SOD, Se-GSH-Px. Zmniejsz zawartość MDA i zmniejsz uwalnianie CPK. Zmniejsz uszkodzenia ultrastruktury mięśnia sercowego.Długość Jie: Całkowite glikozydy Cistanchemają pewien wpływ ochronny na uszkodzenia mięśnia sercowego spowodowane przez doksorubicynę. Jego mechanizm może być związany z ochroną mięśnia sercowego SOD i aktywnością Se-GSH-Px, wymiataniem wolnych rodników i zapobieganiem peroksydacji lipidów.

Słowa kluczowe: doksorubicyna; całkowity glikozyd cistanche; kardiotoksyczność; peroksydacja lipidów; kinaza kreatynowa; ultrastruktura

Doksorubicyna (Dox) jest rodzajem antybiotyku cebulowego, który ma dobry wpływ na różne nowotwory złośliwe, ale ze względu na ostrą i przewlekłą toksyczność wobec mięśnia sercowego ogranicza szerokie zastosowanie Dox w praktyce klinicznej. Wiadomo, że działanie przeciwnowotworowe Dox polega na wpływaniu na replikację DNA i syntezę RNA, a jego kardiotoksyczność związana jest z uszkodzeniem przez peroksydację lipidów indukowanym przez semi-adriamycynę. Dlatego ważne jest, aby znaleźć zmiatacze wolnych rodników i przeciwutleniacze, które antagonizują kardiotoksyczność Doxu, zachowując jego działanie przeciwnowotworowe. Sumaekstrakty z Cistancheczy składniki aktywne są ekstrahowane zCistanche. Odpowiednie badania wykazały, że Glikozydy Cistanche mają działanie antyoksydacyjne na tkanki myszy, Glikozydy Cistanchemoże znacznie zmniejszyć zawartość lipofuscyny (3), Glikozydy Cistanchemają działanie ochronne na niedokrwienie mięśnia sercowego szczura(3) i Glikozydy Cistanchedziałają przeciw peroksydacji lipidów i przeciw promieniowaniu. Aby zbadać działanie ochronne i mechanizm Glikozydy Cistanchena uszkodzenia mięśnia sercowego wywołane przez Dox u myszy.

Kliknij, aby uzyskać korzyści i efekty uboczne Cistanche tubulosa

1 Materiał i metody

1.1 Leki i odczynniki

Glikozydy Cistanchesą pobierane zZiele Cistanchew północnym Xinjiang, a głównymi składnikami są echinacea, etoksylaty sporyszu itp. (dostarczane przez Wydział Chemii Medycyny Naturalnej Wydziału Farmaceutycznego Uniwersytetu Medycznego w Xinjiang); tetrametoksypropan (TMP Sigma Company); Adriamycyna (Dox, Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co., Ltd.); Witamina E (Vit E, Shanghai Yan'an Pharmaceutical Factory); inne odczynniki są produkowane w kraju.

1.2 Sprzęt doświadczalny

spektrofotometr typu 721 (Shanghai No. 3 Analytical Instrument Factory); mikroskop OLYMPUS (wyprodukowany w Japonii); JEM-100Transmisyjny mikroskop elektronowy CXII (wyprodukowany w Japonii)? Miernik kwasowości typu PHS-250 (Shanghai Lei Magnetic Instrument Factory).

1.3 Grupowanie zwierząt i administracja

Myszy NIH są dostarczane przez Animal Experimental Center of Xinjiang Institute of Endemic Diseases. Numer świadectwa laboratorium medycznego dla zwierząt to nr {{0}}. Wyselekcjonowano 138 myszy NIH, ważących (24±2) g, pół samców i pół samic. Losowo podzielono na 6 grup (23 w każdej grupie): (1) grupa kontrolna: sól fizjologiczna (NS) 20 ml/kg; (2) Grupa z urazem Dox: NS 20 ml/kg; (3) Grupa Wit E: Wit E 100 mg/kg; (4) grupa GC i: GCs 62,5 mg/kg; (5) grupa GC i: GCs 125,0 mg/kg; (6) Grupa GCS1: GCs 25,0 mg/kg, każda z powyższych grup Wszystkie podawano dożołądkowo raz dziennie. Grupa obrażeń Dox, grupa Vit E, GCs|grupa, grupa GCs I, grupa GCs I wstrzyknięto dootrzewnowo Dox 17,5 mg/kg w 4 dniu po wstrzyknięciu NS i GCs przez 48 godzin, pobrano gałki oczne i pobrano krew, przygotowano surowicę i natychmiast zwierzęta uśmiercono w celu wyjęcia serca, przepłukano NS, osuszono bibułą filtracyjną i zważono. W warunkach kąpieli pod wodą, homogenat mięśnia sercowego przygotowano z NS, odwirowano przy 3 500 obr/min, 30 min, a supernatant pobrano do pomiaru wskaźników biochemicznych. W każdej grupie były 3 myszy, a serca pobrano, aby wykonać próbki pod mikroskopem elektronowym.

1.4 Oznaczanie wskaźników biochemicznych

Do określenia aktywności dysmutazy ponadtlenkowej mięśnia sercowego (SOD) zastosowano metodę autooksydacji pirogalolu; do oznaczenia aktywności peroksydazy selenowo-glutationowej (Se-GSH-Px) zastosowano metodę DTNB. Metodą TBA oznaczono zawartość produktu peroksydacji lipidów mięśnia sercowego – dialdehydu malonowego (MDA); Kwantyfikacja białka wykorzystuje metodę CBB-SDS zwaną metodą CPK w celu określenia aktywności fosfokinazy kreatynowej w surowicy (CPK).

1.5 Mikroskopia elektronowa tkanki mięśnia sercowego

Wierzchołek serca utrwalono 4% aldehydem glutarowym i 1% kwasem, odwodniono acetonem, osadzono w Epon 812 i obserwowano pod transmisyjnym mikroskopem elektronowym z barwieniem elektronów ołowiowo-uranu JEM-100CX I.

1.6 Przetwarzanie statystyczne

Wszystkie dane są reprezentowane przez Wang Shi. Po przetestowaniu danych eksperymentalnych pod kątem jednorodności wariancji, do przetwarzania statystycznego stosuje się test F i test q. Poziom kontroli a=0.05.

2 Wyniki

2.1 EfektGlikozydy Cistanchewskaźników biochemicznych mięśnia sercowego uszkodzonego przez Dox przedstawiono w Tabeli 1.

2. 1- 1 EfektGlikozydy Cistanchena aktywność SOD mięśnia sercowego uszkodzonego przez Dox.

W porównaniu z grupą kontrolną, grupa z urazem Dox zmniejszyła aktywność SOD mięśnia sercowego o 41,1 procent (PV00,01). W porównaniu z grupą kontuzjowaną Dox wzrosła o 30,9 procent, 33,2 procent, 36,5 procent i 34,9 procent (wszystkie P<0.01), the="" gcs1="" group="" was="" close="" to="" the="" control="" group="" (p="">0.05), a pozostałe grupy były niższe niż grupa kontrolna.

2.1.2 Wpływ GC na aktywność Se-GSH-Px mięśnia sercowego uszkodzonego przez Dox.

W porównaniu z grupą kontrolną, grupa z urazem Dox ma 26,2% zmniejszenie aktywności Se-GSH-Px mięśnia sercowego (P<0.01), gcs,="" gcs,="" compared="" with="" the="" dox="" injury="" group,="" the="" gcs,="" group,="" and="" vit="" e="" group="" increased="" by="" 19.2%,="" 21.1%,="" 25.0%,="" and="" 26.1%="" respectively=""><0.01), which="" were="" all="" close="" to="" the="" control="" group="" (p="">0 . 05).

2.1.3 EfektGlikozydy Cistanche on the MDA content of the Dox-injured myocardium was reduced by 16.7%, 17.3%, 18.6%, and 17.3% respectively compared with the Dox-injured group (Fall V0.01), which were all close to the Control group (P>0.05).

2.1.4 Wpływ GC na aktywność CPK w surowicy u myszy z urazem Dox.

Aktywność CPK w surowicy w grupie z urazami Dox wzrosła o 87,3 procent (<0.01),>Glikozydy Cistanche I, Glikozydy Cistanchei Vit W porównaniu z grupą obrażeń Dox, grupa E zmniejszyła się o 26,6 procent, 33,1 procent, 37,4 procent i 36,7 procent (wszystkie F<0.01), which="" were="" higher="" than="" those="" of="" the="" control="">

2.2 Mikroskopia elektronowa mięśnia sercowego myszy

2.2.1 W grupie kontrolnej mięsak włókien mięśnia sercowego był nienaruszony, miofibryle były ułożone w sposób uporządkowany, pasma sarkomerów miały wyraźną strukturę, mitochondria były uporządkowane, struktura była prawidłowa, a struktura jądrowa była prawidłowa.

2.2.2 Grupa obrażeń Doxa

Widać wyraźne zmiany w ultrastrukturze włókien mięśnia sercowego, komórki mięśnia sercowego są spuchnięte, rośnie wewnątrzcytoplazmatyczny sarkomer, rozszerza się jasne pasmo, w niektórych obszarach pojawiają się nieprawidłowe pasma skurczu, a materiał linii Z zwiększa się. Mitochondria były obficie spuchnięte, hiperplastyczne, słabo ułożone, złamane i wakuolizowane. Retikulum sarkoplazmatyczne rozszerza się, lizosomy wtórne zwiększają się i można zaobserwować ogniskową degenerację. Zwiększa się objętość jądra i rozszerza się przestrzeń okołojądrowa.

2. 2.3 Obrzęk włókien mięśnia sercowego w Glikozydy CistancheI grupa została zmniejszona.

Struktura sarkomerów jest w zasadzie normalna, ale sarkomery są nadal szersze niż grupa kontrolna. Zmniejszono obrzęk mitochondriów, zwiększono gęstość macierzy, wzrosła gęstość mitochondriów, a poszczególne mitochondria nadal się zmieniały. Zwiększone wtórne lizosomy w cytoplazmie.

2.2.4 Struktura włókien mięśnia sercowego Glikozydy CistancheJa, grupuję w zasadzie wyzdrowiał do normy.

Miofibryle są uporządkowane, struktura sarkomerów jest prawidłowa, a struktura mitochondriów wraca do normy.

3 Dyskusja

Dox to rodzaj antybiotyku cebulowego, który ma właściwości szerokiego spektrum przeciwnowotworowego i silnego działania. Jednak Dox może powodować ciężką toksyczność mięśnia sercowego, taką jak różne arytmie we wczesnym stadium leczenia, zależną od dawki i zastoinową niewydolność serca w późnym stadium, co ogranicza jego zastosowanie kliniczne. Głównym mechanizmem Dox powodującym zatrucie mięśnia sercowego jest wytwarzanie nadmiernej ilości reaktywnych wolnych rodników tlenowych, które powodują uszkodzenie mięśnia sercowego. Powinowactwo Dox do tkanki mięśnia sercowego jest znacznie wyższe niż do innych tkanek. Po wejściu do komórek mięśnia sercowego Dox przekształca się w semi-dox, który oddziałując na cząsteczki tlenu przekształca je w wolne rodniki anionu ponadtlenkowego (Oxid), czemu towarzyszy produkcja nadtlenku wodoru (H2O2). Zawartość MDA Ol i H2O2 w grupie z urazem Habera-Weissa Doxa wzrosła o 25,8 procent w porównaniu z grupą kontrolną (P<0.01), and="" the="">Glikozydy Cistanche |, Glikozydy Cistanche 1, Glikozydy Cistanche group, and Vit E group were reduced by 16.7% compared with the Dox injury group. , 17. 3%, 18. 6% and 17. 3% (Fall V0.01), which are all close to the control group (P>{{0}}.05). Reakcja lub reakcja Fentona wytwarza rodniki hydroksylowe (OH • ). 0$ i OH • Duża ilość akumulacji może powodować peroksydację lipidów w tkankach i błonach komórkowych oraz powodować uszkodzenia makrocząsteczek biologicznych.

W eksperymencie zaobserwowano, że po 48 godzinach dootrzewnowego wstrzyknięcia myszom Dox (17,5 mg/kg) aktywność SOD i Se-GSH-Px w mięśniu sercowym myszy uległa znacznemu zmniejszeniu, a zawartość produktu peroksydacji lipidów MDA został znacznie zwiększony. Wysoka, wzrasta aktywność CPK w surowicy. Pod mikroskopem elektronowym ultrastruktura mięśnia sercowego została uszkodzona, objawiając się wyraźnym obrzękiem mitochondriów, pęknięciem mitochondriów, degeneracją wakuoli, zmniejszeniem gęstości macierzy i rozszerzeniem siateczki sarkoplazmatycznej.

Wszystkie grupy dawkowania GC mogą znacząco zwiększyć aktywność enzymów wychwytujących wolne rodniki SOD i Se-GSH-Px w mięśniu sercowym myszy po urazie Dox, zmniejszyć zawartość MDA i zmniejszyć uwalnianie CPK. Sugeruje się, abyGlikozydy Cistanche może zmniejszyć uszkodzenia spowodowane peroksydacją lipidów wywołane przez Dox poprzez zwiększenie aktywności enzymów wymiatających wolne rodniki w organizmie. Glikozydy Cistanche, grupy znacząco chronią ultrastrukturę włókien mięśnia sercowego przed uszkodzeniem przez Dox.Wykryty in vitro za pomocą nowoczesnej technologii analizy chemiluminescencji i stwierdził, żeGlikozydy Cistanchemożna skutecznie wyeliminować. Prawidłowe są tylko aktywne rodniki tlenowe, takie jak OH • i H2O2. Efekt zmiatania zwojów jest szczególnie istotny „⑵. Sugeruje się, że glikozydy Cistanche mogą usuwać OR wywołany przez semi-dox w mięśniu sercowym, przerywając w ten sposób reakcję łańcuchową wolnych rodników i działając jako bloker łańcucha peroksydacji lipidów.

W tym eksperymencie Vit E był używany jako kontrola pozytywna. Wyniki pokazały, że Vit E ma pewien ochronny wpływ na wywołane przez Dox ostre uszkodzenie mięśnia sercowego u myszy. Może zmniejszyć zawartość MDA w mięśniu sercowym i zwiększyć aktywność SOD i Se-GSH-Px. Według literatury [13] Doniesienia są zgodne.

Główny składnik Glikozydy Cistanchejest fenetylamina, a jego struktura jest podobna do Vit E, to znaczy ma fenolową grupę hydroksylową i grupę hydroksylową. Dlatego spekuluje się, że Glikozydy Cistanchemoże dostarczyć atomy wodoru na fenolowej grupie hydroksylowej swojej struktury molekularnej do rodnika lipidowego (LOO -), który zamienia go w wodoronadtlenek lipo (LOOH), który jest następnie rozkładany do nietoksycznego hydroksylu przez GSH-Px. Zapobiega peroksydacji nienasyconych kwasów tłuszczowych w biofilmie przez wolne rodniki, zmniejszając w ten sposób uszkodzenie Dox w kardiomiocytach. Mechanizm pozostaje do dogłębnego zbadania.

Bibliografia:

[1] Baza RL, Zielona MD. Powikłanie leczenia: strategie zapobiegania kardiotoksyczności antracyklin [J ]. Cancer Tread Rer, 1993,19; 57.

[2]Doroshow JH. Wpływ antybiotyków antracyklinowych na tworzenie rodników tlenowych u szczurów [J] Cancer Res, 1983,43; 460.

[3] Wang Xiaowen, Li Linlin, Mu Hu Yati i in. Działanie przeciwutleniające Roxuanrong na tkanki myszy]·Chinese Journal of Chinese Materia Medica, 1998,23(9):554-556.

[4] Mao Xinming, Wang Xiaowen, Li Linlin i in. Ochronny wpływ Rou Nu Rong Xi na niedokrwienie mięśnia sercowego u szczurów □], Chinese Herbal Medicine, 1999, 30(2): 118-120.

[5] Li Linlin, Wang Xiaowen, Wang Xuefei i in. Przeciwutlenianie lipidów i działanie przeciwpromienne pasty z popiołu mięsnego ogółem [J]. Chinese Journal of Chinese Materia Medica, 1997, 22(6): 364-367.

[6] Zou Guolin, Gui Xingfen, Zhong Xiaoling, itp. Metoda oznaczania SOD-ulepszenie metody samoutlenienia pirogalolu [J]. Postęp w Biochemii i Biofizyce, 1986, 4:17,

[7] Xia Yiming, Zhu Lianzhen. Oznaczanie aktywności peroksydazy glutationowej we krwi i tkankach. Metoda pierwsza metoda bezpośrednia DTNB [J], Hygiene Research, 1987, 16(4): 29-32.

[8] Chen Shunzhi, Jin Youyu. Porównanie trzech metod wybarwiania nadtlenku lipidów TBA. Journal of Clinical Laboratory Science. 1984, 2(4); 8-10.

[9]Macart M. Gerbaut L. Udoskonalenie metody wiązania barwnika Coomassie Blue pozwalające na dobrą wrażliwość na białka varas: zastosowanie do płynu mózgowo-rdzeniowego [J], Clin Chem Acta, 1982, 112:93.

[10] Xu Shuyun, Bian Ruyuan, Chen Xiu, Metodologia eksperymentów farmakologicznych [M]. Wydanie drugie, Pekin: Ludowe Wydawnictwo Medyczne, 1991,922.

[11]Halliwell B, Gutteridge JMC. Wolne rodniki w biologii i medycynie CM J. 2nd ed. New York Oxford University Press * 1989.543-550.

L12]Wang Xiaowen, Jiang Xiaoyan, Eliya Yiming, et al. Wymiatanie wolnych rodników i ochronny wpływ na uszkodzenia DNA powodowane przez OH-[J]. Chiński dziennik farmaceutyczny, 2001,36(1):29 -31.

[13]Wu Yuling, Xu Guangyuan. Eksperymentalne badanie ostrej kardiotoksyczności i ochronnego działania Vit E u myszy indukowanych przez adriamycynę [J]. Journal of Dalian Medical University, 1991, 13(1): 22-27.