Czytnik RNA M6 A YTHDF2 kontroluje odporność przeciwnowotworową i przeciwwirusową komórek NK Część 6

Model czerniaka z przerzutami i wyzwanie MCMV

Komórki B16F10 (105) wstrzyknięto myszom dożylnie. 14 dni po wstrzyknięciu myszy uśmiercono w celu analizy pośmiertnej. Guzki przerzutowe w płucach analizowano makroskopowo i liczono. Linię komórkową B16F10 dostarczyła firma Hua Yu (City ofHope, Los Angeles, Kalifornia). Myszy Ythdf2ΔNK i Ythdf2WT zakażono wstrzyknięciem ip szczepu Smith MCMV (2,5 x 104 PFU), który zakupiono z American Type Culture Collection (VR-1399). Próbki krwi obwodowej pobierano poprzez nakłucie podżuchwowe w dniach 0, 4 i 7 po zakażeniu.

Guzki przerzutowe do płuc to guzki utworzone przez komórki nowotworu złośliwego z innych miejsc, które migrują do płuc przez krew lub układ limfatyczny. Dla wielu pacjentów jest to częsty objaw raka płuc.

Chociaż guzki przerzutowe do płuc stanowią zagrożenie dla zdrowia fizycznego pacjentów, nie ma bezpośredniego związku między nimi a pamięcią. Dlatego powinniśmy aktywnie stawić czoła wyzwaniom, jakim jest rak płuc i guzki przerzutowe do płuc, i nie pozwolić, aby negatywne emocje i lęk wpływały na nasze zdrowie fizyczne i psychiczne.

Jednocześnie możemy utrzymać i poprawić pamięć za pomocą pozytywnych metod. Na przykład ćwicz pamięć, np. obliczenia matematyczne, czytanie, słuchanie muzyki, granie w gry itp. Ponadto przestrzeganie dobrych nawyków życiowych, takich jak regularne ćwiczenia, wystarczająca ilość snu, zdrowe odżywianie itp. może również pomóc poprawić naszą pamięć.

Najważniejsze to zachować pozytywne nastawienie. Bez względu na trudności, przed którymi stoisz, musisz wierzyć w swoją siłę i elastyczność swojego układu nerwowego, a dzięki pozytywnym dostosowaniom i reakcjom ostatecznie skutecznie pokonasz trudności.

Krótko mówiąc, choć guzki przerzutowe w płucach stanowią zagrożenie dla zdrowia fizycznego, nie są bezpośrednio związane z pamięcią. Powinniśmy stawić temu czoła pozytywnie oraz utrzymywać i doskonalić naszą pamięć, dostosowując nasz styl życia i utrzymując dobre nastawienie. Widać, że trzeba poprawić pamięć, a Cistanche desericola potrafi znacząco poprawić pamięć, bo Cistanche desericola potrafi także regulować równowagę neuroprzekaźników, np. zwiększać poziom acetylocholiny i czynników wzrostu. Substancje te są bardzo ważne dla pamięci i uczenia się. Ponadto Cistanche desericola może również poprawić przepływ krwi i promować dostarczanie tlenu, co może zapewnić mózgowi odpowiednią ilość składników odżywczych i energii, poprawiając w ten sposób witalność i wytrzymałość mózgu. Widać, że trzeba poprawić pamięć, a Cistanche desericola potrafi znacząco poprawić pamięć, bo Cistanche desericola potrafi także regulować równowagę neuroprzekaźników, np. zwiększać poziom acetylocholiny i czynników wzrostu. Substancje te są bardzo ważne dla pamięci i uczenia się. Ponadto Cistanche desericola może również poprawić przepływ krwi i promować dostarczanie tlenu, co może zapewnić mózgowi odpowiednią ilość składników odżywczych i energii, poprawiając w ten sposób witalność i wytrzymałość mózgu.

Kliknij Poznaj suplementy, aby zwiększyć pamięć

Aby zmierzyć miano wirusa we krwi obwodowej, śledzionie i wątrobie, DNA wyizolowano przy użyciu zestawu QIAGEN DNeasy Blood and Tissue Kit do analizy qPCR. Zastosowano następujące startery: MCMV-IE1,59-AGCCACCAACATTGACCACGCAC-39 (do przodu) i MCMVIE1, ​​59-GCCCCAACCAGGACACACAACTC-39 (do tyłu).

Leczenie myszy in vivo IL-15

W celu leczenia myszy in vivo IL-15, myszom Ythdf2ΔNK i Ythdf2WT wstrzyknięto 2 µg ip rekombinowanej ludzkiej IL-15 (nr kat. 745101; National Cancer Institute) przez 5 dni. Myszy leczone i kontrolne poddano następnie eutanazji w celu analizy metodą cytometrii przepływowej.

Cytometrii przepływowej

Zawiesiny pojedynczych komórek przygotowano z BM, krwi, śledziony, wątroby i płuc myszy Ythdf2ΔNK i Ythdf2WT, jak opisano wcześniej (Wang i in., 2018b). Analizę metodą cytometrii przepływowej i sortowanie komórek przeprowadzono odpowiednio na cytometrze przepływowym LSRFortessa X-20 i FACSAriaFusion (BD Biosciences).

Dane analizowano przy użyciu oprogramowania NovoExpress (Agilent Technologies).

Zastosowano następujące przeciwciała znakowane barwnikiem fluorescencyjnym z firm BD Biosciences, BioLegend, Invitrogen lub Cell Signaling Technology: CD3ε (145-2C11), CD19 (1D3), Gr-1 (RB6-8C5 ),TER-119 (TER-119), CD11c (N418), CD4 (GK1.5), CD8 (53-6.7),CD122 (5H4), CD132 (TUGm2), NK1.1 (PK136), CD11b (M1/70), CD27 (LG.3A10), CD117 (2B8), CD127 (SB/199), CD135 (A2F10.1),KLRG1 (2F1), CD45 ({{46 }}F11), CD45.1 (A20), CD45.2 (104), IFN- (XMG1.2), 2B4 (m2B4), granzym B (QA16A02), perforyna (S16009A), Ly49H (3D10), Ly49D ( 4e5), CD69 (H1.2F3), CD226(TX42.1), NKG2D (CX5), NKG2A (16A11), NKp46 (29A1.4), TIGIT(1G9), PD-1 (J43), aneksyna V, Ki67 (b56), Tbet (4b10) i Eomes (WD1928), fosfo-p44/42 Erk1/2 (Thr202/Tyr204, #9101), fosfo-Akt (Ser473, #5315), białko rybosomalne fosfo-S6 ,fosfo-Stat3 (Tyr705, #9145) i fosfo-Stat5 (Tyr694, #9539).

W celu oceny proliferacji komórek NK, komórki znakowano 5 µM CTV (Invitrogen) zgodnie z protokołem producenta przed przeniesieniem ich do myszy biorców. Barwienie wewnątrzkomórkowe Ki67, Tbet i Eomes przeprowadzono poprzez utrwalenie i permeabilizację za pomocą zestawu do barwienia Foxp3/Transscription Factor Staining Kit (eBioscience).

W celu wykrycia fosforylowanych białek oczyszczone komórki NK śledziony traktowano wstępnie rekombinowaną ludzką IL-15 (50 ng/ml) przez 1 godzinę, a następnie utrwalono buforem Phosflow Fix Buffer I, a następnie poddano permeabilizacji buforem Phosflow Perm Buffer III (BD Biosciences) i barwiono przeciwciała.

Adopcyjny transfer komórek

W celu oceny wpływu niedoboru Ythdf2 na dojrzewanie komórek NK, mieszaninę 5 x 106 komórek BM w stosunku 1: 1 z myszy CD45.1 lub Ythdf2ΔNK CD45.2 przeniesiono do myszy Rag2-/-Il2rg-/-. Rekonstytucję biorców oceniano za pomocą cytometrii przepływowej 8 tygodni po przeszczepieniu.

Do eksperymentów z proliferacją homeostatyczną indukowaną limfopenią, równe liczby oczyszczonych komórek NK śledziony z myszy CD45.1 lub Ythdf2ΔNK CD45.2 przeniesiono do myszy Rag2-/-Il2rg-/-, a następnie oszacowano względny procent przeniesionych komórek NK WT i Ythdf2ΔNK w śledzionach biorców Rag2−/−Il2rg−/− metodą cytometrii przepływowej we wskazanych punktach czasowych.

W przypadku modelu czerniaka z przerzutami, 106 komórek NK z ekspandowaną IL-2 z myszy Ythdf2ΔNK lub Ythdf2WT wstrzyknięto dożylnie myszom Rag2-/-Il2rg-/-. 1 dzień później myszom wstrzyknięto dożylnie komórki B16F10 (105). 14 dni po wstrzyknięciu myszy uśmiercono w celu analizy pośmiertnej. W niektórych eksperymentach komórki znakowano CTV (5 µM, Invitrogen) w celu prześledzenia proliferacji komórek przed przeniesieniem.

Test handlu ludźmi in vivo

W celu wykrycia przemieszczania się komórek NK z BM do krwi obwodowej, myszom C57BL/6 wstrzyknięto 1 µg iv przeciwciała anty-CD45 znakowanego APC. Dwie minuty po wstrzyknięciu przeciwciała myszy natychmiast uśmiercono, a komórki BM zebrano do cytometrii przepływowej po wybarwieniu komórek przeciwciałami CD3 i NK1.1. Miąższowe komórki NK identyfikowano na podstawie braku barwienia CD45, podczas gdy sinusoidalne komórki NK identyfikowano na podstawie obecności znakowania CD45. Zatem stosunek komórek NK w sinusoidach (CD45+) do komórek NK w obszarach miąższowych (CD45−) wskazuje na przemieszczanie się komórek NK z krwi BM do krwi obwodowej w stanie ustalonym.

RT-qPCR w czasie rzeczywistym i immunoblot

RNA wyizolowano przy użyciu zestawu RNeasy Mini Kit (QIAGEN), a następnie poddano odwrotnej transkrypcji do cDNA przy użyciu zestawu odczynników PrimeScript RT z gumką gDNA (Takara Bio) zgodnie z instrukcjami producenta. Poziomy ekspresji mRNA analizowano przy użyciu SYBRGreen PCR Master Mix i QuantStudio 12K Flex Real-TimePCR System (oba firmy Thermo Fisher Scientific). Sekwencje starterów wymieniono w Tabeli S1.

Immunoblotting przeprowadzono zgodnie ze standardowymi procedurami, jak opisano wcześniej (Denget in., 2015; Yu i in., 2006). Zastosowano następujące przeciwciała: METTL3 (nr kat. 15073-1-AP; Proteintech), METTL14 (nr kat.26158-1-AP; Proteintech), YTHDF1 (nr kat. 17479-1-AP ; Proteintech), YTHDF2 (nr kat. RN123PW; MBL), YTHDF3 (nr kat.25537-1-AP; Proteintech), ALKBH5 (nr kat. ab195377; Abcam), FTO (nr kat. ab124892; Abcam), MDM2 (nr kat. 33-7100; Invitrogen), TDP-43 (nr kat. PA5-29949; Invitrogen) i -aktyna (nr kat. {{20 }}Ig; Proteintech).

Test knockdown siRNA

IL-2–expanded NK cells were transfected with Accell mouse Tardbp siRNA (cat. no. E-040078-00-0005; Dharmacon) or Mdm2 siRNA (cat. no. E-041098-00-0005; Dharmacon) using Accell delivery media (Dharmacon) according to the manufacturer's instructions in the presence of IL-15 (50 ng/ml). The Accell eGFP control pool was used as siRNA control. The transfection efficiency was >90%, jak zmierzono metodą cytometrii przepływowej. Skuteczność Geneknockdown określono za pomocą qPCR i immunoblottingu. 3 dni po transfekcji apoptozę i proliferację komórek analizowano metodą cytometrii przepływowej, jak opisano powyżej.

Test reporterowy lucyferazy

Region promotora Ythdf2 w zakresie od –2,000 pz do +100 pz TSS amplifikowano z mysich komórek NK i klonowano do4-podstawowego wektora reporterowego lucyferazy (Promega) w celu wygenerowania apGL{ {5}}Plazmid reporterowy Ythdf2. Komórki HEK293T zakupione od ATCC kotransfekowano plazmidami reporterowymi pGL4-Ythdf2, jak również plazmidami nadekspresyjnymi STAT5a lub STAT5b lub pustym wektorem, razem z plazmidem reporterowym pRL-TK Renilla (Promega) w celu normalizacji wydajności transfekcji. Komórki zebrano do lizy 24 godziny po transfekcji, a aktywność lucyferazy oznaczono ilościowo fluorymetrycznie za pomocą systemu Dual-Luciferase System (Promega). Sekwencje starterów do klonowania promotora Ythdf2 oraz plazmidów z nadekspresją STAT5a i STAT5b wymieniono w Tabeli S1.

Testy ChiP

Testy ChIP przeprowadzono przy użyciu zestawu Pierce Magnetic ChIP Kit (nr kat. 26157; Thermo Fisher Scientific) zgodnie z instrukcjami producenta. W skrócie, taką samą ilość anty-anty-fosfo-Stat5 (Tyr694, nr kat. 9351; Cell Signaling Technologies) lub odpowiednią kontrolną normalną króliczą IgG zastosowano oddzielnie do wytrącenia usieciowanych kompleksów DNA-białko pochodzących z 5 x 106 oczyszczonych pierwotnych mysich komórek NK, które wstępnie traktowano IL-15 (50 ng/ml) przez 1 godzinę. Po odwróceniu sieciowania, DNA wytrącony metodą immunoprecypitacji przez wskazane przeciwciało zbadano metodą qPCR. Sekwencje wszystkich starterów wymieniono w Tabeli S1.

Test cytotoksyczności ex vivo

Cytotoksyczność ex vivo komórek NK oceniano za pomocą standardowych testów 51Crrelease. W astarget wykorzystano linie komórkowe mysiego chłoniaka RMA-S (niedostateczna klasa MHC) i RMA (wystarczająca klasa MHC I), będące darem Andre'Veillette'a (Uniwersytet McGill, Montreal, Kanada). Myszom podano ip wstrzyknięcie kwasu poliinozynowego:policytydylowego [poli(I:C); 200 µg/mysz] przez 18 godzin. Komórki NK aktywowane poli(I:C) wyizolowano ze śledziony przy użyciu zestawu do izolacji komórek EasySepMouse NK Cell Isolation Kit (STEMCELL Technologies). Oczyszczone komórki NK hodowano wspólnie z komórkami docelowymi w stosunku 5:1, 2,5:1 i 1,25:1 w obecności IL-2 (50 U/ml).

m6A-sek

Oczyszczone komórki NK śledziony namnożono za pomocą IL-2 (1,000 U/ml, nr kat. Bulk Ro 23-6019; National Cancer Institute) in vitro przez 7 dni. Całkowity RNA wyizolowano za pomocą odczynnika TRIzol (Thermo FisherScientific) z 50 milionów komórek NK ekspandowanych IL-2. Poliadenylowany RNA dodatkowo wzbogacono z całkowitego RNA przy użyciu zestawu Dynabeads mRNA Purification Kit (Invitrogen). Próbki mRNA pofragmentowano na 100--długie fragmenty za pomocą odczynników do fragmentacji RNA (Invitrogen).

Fragmentowany mRNA (5 µgmRNA) zastosowano do immunoprecypitacji m6A przy użyciu przeciwciała m6A (202003; Synaptic) zgodnie ze standardowym protokołem zestawu Magna MeRIP m6A Kit (Merck Millipore). RNA wzbogacono za pomocą RNA Clean & Concentrator-5 (Zymo Research) w celu wygenerowania biblioteki za pomocą zestawu KAPA RNA HyperPrep Kit (Roche). Sekwencjonowanie przeprowadzono w ośrodku genomiki City of Hope na maszynie Illumina HiSeq 2500 z trybem pojedynczego odczytu 50-bp. Odczyty sekwencjonowania zmapowano na genom myszy przy użyciu oprogramowania HISAT2 v101 (Kim i in., 2015).

Mapowane odczyty bibliotek immunoprecypitacyjnych i wejściowych dostarczono przy użyciu pakietu R exomePeak (Meng i in., 2014). m6Apeaks wizualizowano przy użyciu oprogramowania Integrative Genomics Viewer (http://www.igv.org). Motyw wiążący m6A został przeanalizowany przez MEME (https://meme-suite.org) i HOMER (http://homer.ucsd.edu/homer/motif). Nazywane piki oznaczono poprzez przecięcie z architekturą genu przy użyciu Rpackage ChIPseeker (Yu i in., 2015).

StringTie was used to assess expression levels for mRNAs from input libraries by calculating the total exon fragments/mapped reads in millions × exon length in kb (Pertea et al., 2015). The differentially expressed mRNAs were selected with log2(fold change) >1 orlog2 (krotna zmiana)<−1 and P < 0.05 using the R package edgeR (Robinson et al., 2010).

YTHDF2 RIP-sekw

Zebrano 50 milionów komórek NK ekspandowanych IL-2 i przemyto dwukrotnie zimnym PBS, a osad komórkowy poddano lizie 2 objętościami buforu do lizy (10 mM Hepes, pH 7,6, 150 mM KCl, 2 mM EDTA, 0,5% NP-40, 0,5 mM ditiotreitol, koktajl inhibitora proteazy 1:100 [Thermo Fisher Scientific] i 400 U/ml inhibitora RNazy SUPERazy [Thermo Fisher Scientific]).

Lizat inkubowano na lodzie przez 5 minut i wirowano przez 15 minut w celu oczyszczenia lizatu. Jako dane wejściowe zapisano jedną dziesiątą objętości lizatu komórkowego. Pozostałą część lizatu komórkowego inkubowano z 5 µg anty-YTHDF2 (nr kat. RN123PW; MBL) sprzężonym z kulkami magnetycznymi białka A (nr kat. 10001D; Invitrogen) w temperaturze 4 stopni przez 2 godziny, delikatnie obracając. Następnie perełki przemyto pięciokrotnie 1 ml lodowatego buforu do przemywania (50 mM HEPES, pH 7,6200 mM NaCl, 2 mM EDTA, 0,05% NP-40, 0,5 mM ditiotreitolu i 200 U/ml RNazy inhibitor).

Immunoprecypitowane próbki poddano trawieniu proteinazą K w buforze do przemywania uzupełnionym 1% SDS i 2 mg/ml proteinazą K (ThermoFisher Scientific), inkubowano z wytrząsaniem przy 1200 obr./min w temperaturze 55 stopni przez 1 godzinę. Całkowity RNA ekstrahowano zarówno z wejściowego, jak i poddanego immunoprecypitacji RNA, dodając 5 obj. odczynnika TRIzol, a następnie Direct-zol RNA Miniprep (Zymo Research).

Bibliotekę cDNA wygenerowano za pomocą zestawu KAPA RNA HyperPrep Kit (Roche) i zsekwencjonowano na platformie Illumina HiSeq 2500. Szczytowe wyniki wywoływania za pomocą immunoprecypitacji i bibliotek wejściowych wygenerowano za pomocą pakietu R RIPSeeker (Li i in., 2013). Do znalezienia motywów rozkładu danych w regionach pików wykorzystano program HOMER. Wywołane piki opatrzono adnotacjami poprzez przecięcie z architekturą genu i transkryptu przy użyciu ChIPpeakAnno (Zhu i in., 2010).

Test stabilności mRNA

Oczyszczone komórki NK śledziony od myszy Ythdf2ΔNK i Ythdf2WT hodowano z IL-15 (50 ng/ml). 3 dni po hodowli komórki traktowano aktynomycyną D (5 µg/ml, nr kat. A9415; Sigma) przez wskazany czas. Komórki nietraktowane zastosowano w godzinie 0. Komórki zebrano we wskazanym czasie i z komórek wyekstrahowano całkowity RNA do qPCR. Okres półtrwania mRNA obliczono metodą opisaną wcześniej przez Wenga i wsp. (2018). Sekwencje starterów wymieniono w Tabeli S1.

Analiza baz danych w Internecie

Wykorzystaliśmy zasoby internetowe BioGPS (http://biogps.org) do analizy specyficznej tkankowo ekspresji genu Ythdf2. Zestawy danych seqdata RNA pochodziły z GEO pod numerami dostępu. GSE106138, GSE113214 i GSE25672. Wyeksportowano znormalizowane dane z analiz seq RNA i zwizualizowano ekspresję genu z-score za pomocą funkcji Heatmap.2 w bibliotece gplots Rlibrary

Statystyka

Niesparowane testy t-Studenta (dwustronne) przeprowadzono przy użyciu oprogramowania GraphPad Prism. Przeprowadzono jednokierunkową lub dwukierunkową ANOVA, gdy porównano trzy lub więcej niezależnych grup. Wartości P dostosowano do wielokrotnych porównań, stosując procedurę Holma-Sıdaka. P < 0.05 uznano za istotne. *, P < {{1{12}}}},05; **, P < 0,01; i ***, P < 0,001.

Materiał uzupełniający w Internecie

Ryc. S1 przedstawia poziomy białka YTHDF2 w komórkach odpornościowych, w tym komórkach NK, w odpowiedzi na stymulację IL-15, infekcję MCMV i progresję nowotworu; pokolenie myszy ze specyficzną dla komórek NK delecją Ythdf2. Fig. S2 przedstawia miana wirusa w śledzionie i wątrobie myszy zakażonych MCMV oraz procent i liczbę bezwzględną komórek NK Ly49H+ i/lub Ly49D+ u myszy zakażonych MCMV. Ryc. S3 przedstawia proliferację, przeżycie, dojrzewanie i ekspresję aktywujących i hamujących receptorów komórek NK od myszy Ythdf2WT i Ythdf2ΔNK. Ryc.S4 przedstawia regulację ekspresji YTHDF2 przez sygnalizację IL-15-STAT5 oraz ekspresję składników receptorów IL-15, szlak PI3K–AKT i szlak MEK–ERK w komórkach NK z Ythdf2WT i Ythdf2ΔNK myszy. Ryc. S5 przedstawia testy seq RNA, m6A-seq i RIP-seq obejmujące cały transkryptom w komórkach NK. Tabela S1 zawiera listę starterów zastosowanych w badaniu.

Dostępność danych

Dane RNA-seq, m6A-seq i RIP-seq zdeponowano w Narodowym Centrum Informacji Biotechnologicznej GEO pod numerem dostępu. GSE174027. Pozostałe dane potwierdzające wnioski z tego badania są dostępne na żądanie u odpowiednich autorów.

Podziękowanie

Prace te były wspierane przez National Institutes of Health (NS106170, AI129582, CA247550, CA163205, CA223400, CA068458 i CA210087), Towarzystwo Białaczki i Chłoniaka (1364-19), Kalifornijski Instytut Medycyny Regeneracyjnej (DISC2COVID{{ 9}}) oraz Wyjątkowa Nagroda Projektu Breast Cancer Alliance 2021. Ta praca została również częściowo wsparta nagrodą USDAaward (USDA/NIFA 2020-67017-30843).

Wkład autorów: S. Ma, J. Yu i MA Caligiuri wymyślili i zaprojektowali projekt. S. Ma, J. Yan, J. Zhang i J. Yu przeprowadził eksperymenty i/lub analizy danych. Z. Chen, L.-S.Wang, JC Sun i J. Chen wnieśli wkład w odczynniki i wsparcie materiałowe. S. Ma, J. Yu, J. Chen i MA Caligiuri napisali, zrecenzowali i/lub poprawili tę pracę. Wszyscy autorzy omówili wyniki i skomentowali manuskrypt.

Ujawnienia: J. Chen zgłosił „inne” z Genovel BiotechCorp. poza zgłoszoną pracą i jest założycielem naukowym Genovel Biotech Corp. oraz doradcą naukowym onkologii rasowej. Nie zgłoszono żadnych innych ujawnień.

Bibliografia

1. Arase, H., ES Mocarski, AE Campbell, AB Hill i LL Lanier. 2002.Bezpośrednie rozpoznawanie wirusa cytomegalii poprzez aktywację i hamowanie receptorów komórek NK. Nauka. 296:1323–1326.

2.Ayala, YM, T. Misteli i FE Baralle. 2008. TDP-43 reguluje fosforylację białek siatkówczaka poprzez tłumienie ekspresji kinazy 6 zależnej od cykliny. Proc. Natl. Acad. Nauka. USA. 105:3785–3789.

3.Barbieri, I., K. Tzelepis, L. Pandolfini, J. Shi, G. Millan-Zambrano, SC Robson, „D. Aspris, V. Migliori, AJ Bannister, N. Han i in. 2017. Związany z promotorem METTL3 utrzymuje białaczkę szpikową poprzez kontrolę translacji zależną od m6A. Natura. 552:126–131.

4.Becknell, B. i MA Caligiuri. 2005. Interleukina-2, interleukina-15 i ich rola w ludzkich komórkach NK. Adw. Immunol. 86:209–239.

5. Bertoli, C., JM Skotheim i RA de Bruin. 2013. Kontrola transkrypcji cyklu komórkowego w fazach G1 i S. Nat. Wielebny Mol. Biol Komórkowy. 14:518–528.

6. Bezman, NA, CC Kim, JC Sun, G. Min-Oo, DW Hendricks, Y. Kamimura, JA Best, AW Goldrath i LL Lanier. Konsorcjum projektu genomu immunologicznego. 2012. Molekularna definicja tożsamości i aktywacji komórek NK. Nat. Immunol. 13:1000–1009.

7.Carson, WE, JG Giri, MJ Lindemann, ML Linett, M. Ahdieh, R. Paxton, D.Anderson, J. Eisenmann, K. Grabstein i MA Caligiuri. 1994. Interleukina (IL) 15 to nowa cytokina, która aktywuje ludzkie komórki NK poprzez składniki receptora IL-2. J. Exp. Med. 180:1395–1403.

8.Carson, WE, TA Fehniger, S. Haldar, K. Eckhert, MJ Lindemann, CF Lai, CM Croce, H. Baumann i MA Caligiuri. 1997. Potencjalna rola interleukiny-15 w regulacji przeżycia ludzkich komórek NK.J. Clin. Inwestować. 99:937–943.

9.Chan, CJ, MJ Smyth i L. Martinet. 2014. Molekularne mechanizmy aktywacji komórek NK w odpowiedzi na stres komórkowy. Śmierć komórkowa różni się. 21:5–14.

10.Chen, X., J. Han, J. Chu, L. Zhang, J. Zhang, C. Chen, L. Chen, Y. Wang, H.Wang, L. Yi i in. 2016. Terapia skojarzona komórkami NK EGFR-CAR i onkolitycznym wirusem opryszczki pospolitej 1 w leczeniu przerzutów raka piersi do mózgu.Oncotarget. 7:27764–27777.

For more information:1950477648nn@gmail.com