Efekt terapeutyczny i mechanizm ekstrakcji Ligusticum Wallichii i recepta na indukowany testosteronem 57 włosówL/6 B Cin C

ABSTRAKCYJNY:

CEL Obserwacja efektów miejscowego stosowania ekstraktu Ligusticum wallichii i jego złożonego ekstraktu (w tym Ligusticum wallichii,Cistanche, imbir, Platycladus orientalis, żeń-szeń, Salvia miltiorrhiza, Polygonum multiflor/6 na modelu C57Llorum) myszy modelowych łysienia łojotokowego, a następnie zbadać związane z tym mechanizmy.

METODY Model łysienia łojotokowego myszy C57BL/6 został wprowadzony przez zastosowanietestosteronrozwiązanie z tyłu przez 21 dni. Po leczeniu różnicowych koncepcji ekstraktu Ligusticum wallichii i jego ekstraktu kontraktowego oceniono długość i pokrycie nowych włosów u myszy. hair gtr Skóra Nawilżenie, olej i zmiany temperatury mierzono testem skórnym. Zmiany histologiczne, takie jak grubość skóry, kształt mieszka włosowego i wielkość myszy w każdej grupie mierzono mikroskopem. Poziomy -MSN, TGF- 1 i VEGF w skórze myszy po

Podawanie zostało wykryte przez ELISA.

WYNIKI Alkoholowy ekstrakt z Ligusticum wallichii promował wzrost włosów myszy z łysieniem, a efekt w grupie z niską dawką był lepszy niż w grupie z wysoką dawką i grupie z formułą złożoną. Wyniki wartości wilgotności, oleju i temperatury wykazały, że wilgotność skóry myszy modelowych uległa zmniejszeniu, zawartość oleju wzrosła, skroń nieznacznie wzrosła. Po zabiegu zawartość wody, zawartość oleju i temperatura myszy powróciły do ​​normalnych wartości. Wyniki histologiczne wykazały, że Ligusticum wallichii i jego złożona forma mogą zwiększać grubość i drętwienie skóry

mieszki włosowe w fazie wzrostu myszy. Co więcej, wysokie i niskie dawki Ligusticum wallichii oraz formuła związku mogą w różnym stopniu promować zawartość -MSN, TGF- 1 i VEGF w skórze myszy.

WNIOSEK Miejscowe zastosowanietradycyjna chińska MedycynaLigusticum wallichii może promować wzrost włosów u myszy z łysieniem androgenowym poprzez przywrócenie moi i temperatury u myszy modelowych z łysieniem oraz zwiększenie VEGF, -MSN i TGF skóry- 1.

SŁOWA KLUCZOWE: Ligusticum wallichii; C57BL/6 myszy; łysienie łojotokowe;testosteron

Tradycyjna chińska Medycynauważa, że ​​powstawanie wypadania włosów jest związane zniedobór wątroby i nerekiosłabienie qi . krwi. Wiele tradycyjnych chińskich leków ma funkcjeodżywia wątrobę i nerki, odżywcza esencja i krew, chłodzenie krwi i wspomaganie krążenia krwi, i są często stosowane w przypadku łysienia i leukoplakii. Chuanxiong ma cechy ciepłego charakteru, ostry i lekko gorzki smak. Została po raz pierwszy odnotowana w „Shen Nong's Materia Medica” i może być stosowana w połączeniu z innymi lekami w celu pobudzenia krążenia krwi, pobudzenia qi, wydalenia wiatru i złagodzenia bólu [7]. Inne tradycyjne chińskie leki, takie jak imbir, mają za zadanie łagodzić objawy zewnętrzne i przeziębienia, rozgrzewać środek i łagodzić wymioty, rozgrzewać płuca i łagodzić kaszel [8]; Polygonum multiflorum odżywia krew i uzupełnia esencję [9]

Żywotnik pozostawia chłodną krew i czarne włosy [9-10]; Salvia miltiorrhiza wspomaga krążenie krwi, usuwa zastoje krwi i łagodzi ból[11];

. Współczesne badania wykazały, że wieletradycyjna chińska Medycynazwiązki lub pojedyncze recepty mogą promować wzrost mieszków włosowych i włosów oraz mieć znaczący wpływ na wypadanie włosów. Niektóretradycyjne chińskie lekimogą hamować aktywność 5 -reduktazy, mieć działanie przeciwzapalne, przeciwbakteryjne, przeciwutleniające i inne fizjologiczne, które pomagają zapobiegać wypadaniu włosów. Ponieważ aktywne składniki tradycyjnej medycyny chińskiej mają łagodne działanie i mają zarówno odżywcze, jak i lecznicze działanie, w ostatnich latach są one coraz częściej stosowane w kosmetyce na porost włosów [13].

Cistanche przeciwstarzeniowy

W tym eksperymencie ustalono model AGA na myszach C57BL/6 poprzez zastosowanietestosteronna grzbiecie oraz zbadano wpływ ekstraktu Chuanxiong i formuły złożonej (m.in. Chuanxiong, imbir, liść orientalis, żeń-szeń, Salvia miltiorrhiza, Polygonum multiflorum) i jego działanie. mechanizm w celu dostarczenia nowych pomysłów na rozwój nowych preparatów i nowych formulacji zapobiegających wypadaniu włosów.

1 Materiały

1.1 Odczynniki i leki

Chuanxiong, Ginger, Cistanche, Arborvitae, Panax ginseng, Salvia miltiorrhiza i Polygonum multiflorum zostały zakupione od CHENGDU WECISTANCHE BIOTECH; Testosteron (partia: 58-22-0) został zakupiony od Ron Reagent Company; Nalewkę Minoksydyl (Seria: 20210615) zakupiono od Zhejiang Wansheng Pharmaceutical Co., Ltd.; bezwodny etanol (numer partii: 2021-12-1) zakupiono z Jindong Tianzheng Fine Chemical Reagent Factory; hydrat chloralu (numer partii: 302-17-0) zakupiono od McLean Reagent Company; - Zestaw hormonu stymulującego melanocyty (-MSH) zakupiono od CUSABIO Reagent Company (numer serii: N20016218); Zestaw transformującego czynnika wzrostu- 1 (TGF- 1) zakupiono od Signalway Antibody Reagent Company (numer serii: 211230); Zestaw czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF) zakupiono od Signalway Anti-body Reagent Company (numer serii: 211230).

Przekąska Cistanche

1.2 Instrumenty

Czytnik mikropłytek (Thermo Fisher Scientific), maszyna do osadzania EG1160 (Leica, Niemcy); automatyczna zamykarka typu zamkniętego Tissue-Tek® GlasTM 6410 (Sakura, Japonia); rozrzutnik YD-AB (Jinhua Yidi Medical Equipment Co., Ltd.); 1/100,000waga analityczna (sartorius, MSX), myjka ultradźwiękowa (typ KQ-100), tester skóry (Fuxi), płaszcz grzewczy (PTHW HEAT-ER), mikroskop optyczny (BX53) , Olympus), wyparka obrotowa, homogenizator tkanek (KFBIO), wirówka (Cence, H1650R).

1.3 Zwierzęta

Myszy C57BL/6 (klasa SPF), samce, 5-6 tygodni, fizyczne

Ilość 18-22 g została dostarczona przez Centrum Doświadczalne Zwierząt Południowego Uniwersytetu Medycznego, numer licencji: SCXK (Guangdong) 2016-0041.

2 Metoda eksperymentalna

2.1 Przygotowanie roztworu leczniczego

W celu uzyskania ekstraktu z Chuanxiong (pojedynczy lek) zważ substancje lecznicze Chuanxiong, dodaj 4-krotność 75-procentowego etanolu (v/v) i ogrzewaj pod chłodnicą zwrotną w celu ekstrakcji przez 4 godziny. W celu uzyskania ekstraktu złożonego zważyć Chuanxiong, imbir, liście tui, żeń-szeń, szałwię i Polygonum multiflorum (w proporcji 1:1:1:1:1:1) i dodać 4-krotność 75-procentowego etanolu (v/v) do wrzenia w celu ekstrakcji 4 godziny. Ekstrakty pojedynczego leku i związku przesączono przez gazę w celu usunięcia pozostałości leku i zatężono w wyparce obrotowej. Ekstrakt Chuanxiong został skoncentrowany do 1 g·mL-1 (wliczając surowy lek), jako grupa wysokodawkowa Chuanxiong; przed użyciem, grupa z wysoką dawką została rozcieńczona do 0.5 mg·mL-1 jak grupa z niską dawką Chuanxiong. Do grupy związków Chuanxiong, Ginger, Arborvitae, Panax ginseng, Danshen i Polygonum multiflorum, skoncentrowany do 1 g·mL

-1 (w tym łączna ilość surowych leków). Przygotowany ekstrakt przechowywać w lodówce w temperaturze 4 stopni.

Cistanche poprawia testosteron

2.2 Modelowanie

Z wyjątkiem grupy ślepej, myszy C57BL/6 w innych grupach znieczulono przez dootrzewnowe wstrzyknięcie wodzianu chloralu (4% wag./obj.), a owłosienie pleców usunięto kremem do depilacji w dawce 10 mg·kg.

-1 dawkę testosteronu rozsmarowywano na grzbiecie myszy przez 21 dni. Po 21 dniach, kiedy grzbiet myszy był gładki i różowy, a włosy przestały rosnąć, modelowanie uznano za udane.

2.3 Grupowanie zwierząt i administracja

Samce myszy C57BL/6 (klasa SPF) zostały losowo podzielone na 6 grup, po 6 myszy w każdej grupie, które były przechowywane w oddzielnych klatkach i ponumerowane [grupa pusta, grupa modelowa, grupa minoksydyl-dodatnia, grupa chuanxiong o niskiej dawce i grupa o wysokiej -dawkowa grupa chuanxiong. , Grupa złożona (Chuanxiong: Imbir: Żywotnikowate: Żeń-szeń: Salvia: Polygonum multiflorum=: 1: 1: 1: 1: 1)].

Po udanym modelowaniu myszom w grupie modelowej nie podano podawania; pozostałe grupy myszy zostały posmarowane 0.3 ml roztworu minoksydylu (2 procent), odpowiednio wysokimi i niskimi dawkami ekstraktu Chuanxiong i preparatami złożonymi na plecach. Przez 12 dni, raz dziennie. Po podaniu grzbiety myszy przykryto folią o odpowiedniej wielkości, aby zapobiec utracie roztworu leku z grzbietu. W okresie podawania codziennie obserwowano i odnotowywano wzrost włosów na grzbiecie myszy w każdej grupie.

2.4 Określenie nowej długości i pokrycia włosów

W ósmym, dziesiątym i dwunastym dniu podawania z każdej myszy losowo wyjęto 10 włosów i zmierzono długość włosa (mm) linijką. Efekt promocji EE1 (Efekt wzmocnienia) oblicza się według następującego wzoru:

efekt wzmocnienia (długość włosów) =

Długość włosów (grupa podawana)

Długość włosów (zestaw modeli)

Formuła 1)

We wzorze (1) długość włosów (grupa podawania) jest średnią wartością długości włosów nowo narodzonych myszy w każdej grupie leków (n=6); długość włosów (grupa modelowa) jest średnią wartością długości włosów nowo narodzonych myszy w grupie kontrolnej (modelowej) ( n=6).

W 4, 8 i 12 dniu podawania obszar pokryty nowo narodzonym włosem na grzbiecie myszy obliczono za pomocą oprogramowania imageJ, a pokrycie włosa (w procentach) i efekt promocji EE2 obliczono zgodnie z następującym wzorem :

Pokrycie włosów ( procent )=Obszar włosów Obszar depilacji pleców

Formuła (2)

Efekt promocji (wskaźnik pokrycia włosów)=wskaźnik pokrycia włosów (grupa administracyjna) wskaźnik pokrycia włosów (grupa modelowa)

We wzorze (3) obszar włosów we wzorze (2) to obszar pokryty nowo narodzonymi włosami na grzbiecie myszy, a obszar depilowany na grzbiecie to obszar całego ogolonego obszaru na grzbiecie myszy mysz; we wzorze (3) pokrycie włosów (grupa administracyjna) to obszar każdego Średni procent pokrycia nowych włosów w grupie administracyjnej (n=6), a pokrycie włosów (grupa kontrolna) było wartością średnią odsetka nowych włosów w grupie kontrolnej (modelowej) (n=6).

2.5 Oznaczanie nawilżenia, natłuszczenia i temperatury skóry

Po 12-dniowym leczeniu myszy zastosowano tester skórny (Fuxi) do pomiaru i rejestrowania wartości wilgotności, natłuszczenia i temperatury skóry grzbietu myszy, aby zbadać różne efekty testosteronu i leków na te wskaźników skórnych oraz do oceny wpływu leków na myszy modelu AGA. efekt terapeutyczny.

2.6 Histologiczna obserwacja skóry myszy

Po 12 dniach leczenia myszy uśmiercono, natychmiast usunięto skórę grzbietu, utrwalono 4% roztworem paraformaldehydu, odwodniono, zatopiono w parafinie, pocięto na skrawki, zabarwiono hematoksyliną-eozyną (HE), a zabarwione plastry umieszczono w w pełni automatyczny Strukturę skóry, zmiany grubości i wzrost mieszków włosowych myszy w różnych grupach obserwowano za pomocą skanera slajdów (KFBIO).

2.7 Oznaczanie czynników -MSH, TGF- 1 i VEGF w skórze myszy

Czynniki -MSH, TGF- 1 i VEGF operowano zgodnie z odpowiednimi instrukcjami odpowiednio zestawu Mouse-MSH, zestawu Mysiego TGF- 1 i zestawu Mysiego VEGF.

2.8 Metoda przetwarzania statystycznego

Do analizy statystycznej zastosowano oprogramowanie statystyczne SPSS 21.0, a dane eksperymentalne wyrażono jako średnią ± odchylenie standardowe (x ± s).

Wspierać się:

wallence.suen@wecistanche.com