Komórki dendrytyczne typu 1 (DC) w chorobach nerek

więcej informacji:ali.ma@wecistanche.com

Konwencjonalne komórki dendrytyczne typu 1 (cDC1) w chorobach nerek człowieka: korelacje kliniczno-patologiczne

Titi Chen, Qi Cao i in.

ABSTRAKCYJNY

Tło: Komórki dendrytyczne typu 1(cDC1) to podzbiór konwencjonalnych DC, których najbardziej rozpoznawalną funkcją jest krzyżowa prezentacja limfocytom T CD8 plus. Przeprowadziliśmy to badanie, aby zbadać liczbę i lokalizacjęKomórki dendrytyczne typu 1(cDC1s) u różnych ludzichoroby nerekjak również ich korelację z cechami kliniczno-patologicznymi i limfocytami T CD8.

Metody: Przeanalizowaliśmy 135nerkapróbki biopsyjne.Choroby nerekw tym: ostra martwica kanalików nerkowych (ATN), ostre śródmiąższowe zapalenie nerek (AIN), proliferacyjne kłębuszkowe zapalenie nerek (GN) (nefropatia IgA, toczniowe zapalenie nerek, uodpornione GN, choroba anty-GBM), nieproliferacyjne GN (choroba minimalnych zmian, nefropatia błoniasta) ) i nefropatia cukrzycowa. Do ilościowego oznaczenia cDC1s zastosowano pośrednie barwienie immunofluorescencyjne (Komórki dendrytyczne typu 1), DC CD1ct i limfocyty T CD8 plus.

Wyniki:Komórki dendrytyczne typu 1(cDC1s) były rzadko obecne w normienerki. Ich liczba znacznie wzrosła w ATN i proliferacyjnym GN, proporcjonalnie znacznie więcej niż DC1ct. cDC1s (Komórki dendrytyczne typu 1)zostały znalezione głównie w śródmiąższu, z wyjątkiem toczniowego zapalenia nerek, GN odporną na pauci i choroby anty-GBM, gdzie były widoczne w kłębuszkach i obszarach okołokłębuszkowych. Liczba cDC1s (Komórki dendrytyczne typu 1)korelowało z nasileniem choroby w ATN, liczbą półksiężyców w GN uodpornionym na ubytki, zwłóknieniem śródmiąższowym w nefropatii IgA i toczniowym zapaleniem nerek, a także rokowaniem w nefropatii IgA. Liczba limfocytów T CD8 plus również znacznie wzrosła w tych warunkach, a cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)liczba skorelowana z CD8 plus liczbą komórek T w toczniowym zapaleniu nerek i GN uodpornionym na pauci, z wieloma z nich blisko tej samej lokalizacji. Wnioski: cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)liczba skorelowana z różnymi cechami kliniczno-patologicznymi i rokowaniem odzwierciedlającym możliwą rolę w tych stanach. Ich związek z limfocytami T CD8 plus sugeruje połączony mechanizm zgodny z wynikami uzyskanymi w modelach zwierzęcych.

WPROWADZANIE

Komórki dendrytyczne(DC) są głównymi koordynatorami skutecznej odporności. Komórki te są heterogeniczne i można je podzielić na odrębne podzbiory na podstawie ich fenotypu i funkcji. Komórki dendrytyczne można ogólnie podzielić na plazmocytoidalne DC (Komórki dendrytyczne)(pDC) i konwencjonalne DC (Komórki dendrytyczne)(cDC).cDC składa się z dwóch głównych podzbiorów: cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)(CD141* DC (Komórki dendrytyczne) u ludzi i DC CD103t lub CD8ot u gryzoni) i cDC2 (DC CD1c u ludzi i DC CD1 lbt u gryzoni) (1).cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)zostały odkryte najpierw u myszy, a następnie u ludzi i charakteryzują się doskonałą zdolnością do fagocytowania nekrotycznych komórek poprzez receptor Clec9A związany z uszkodzeniem molekularnym (DAMP) oraz do krzyżowej prezentacji z limfocytami T CD8 plus. W przeciwieństwie do tego, cDC2 są skutecznymi aktywatorami komórek T CD4*, ale gorszymi pod względem aktywacji komórek T CD8t (2).

DC (Komórki dendrytyczne)zostały przebadane na ludziachchoroba nereka ich liczba wzrosła w kłębuszkowym zapaleniu nerek(GN)(3, 4). Po odkryciu cDCl, gromadzące się badania na zwierzętach wykazały, że odgrywają one kluczową rolę w:choroby nerek, tak jak w nefropatii adriamycyny i półksiężycowej GN, poprzez interakcję z limfocytami T (5-8). Jednak takich badań brakuje na ludziachchoroba nerek, z tylko jednym badaniem wykazującym zwiększoną liczbę cDC (StandardowyKomórki dendrytyczne)w GN (9). Przeprowadziliśmy to badanie, aby przeprowadzić analizę kluczowych podzbiorów cDC, cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1), i cDC2 w szerokim zakresie ludzichoroby nerekw tym choroby niekłębuszkowe [ostra martwica kanalików nerkowych (ATN), ostre śródmiąższowe zapalenie nerek (AIN)], proliferacyjne GN (nefropatia IgA, toczniowe zapalenie nerek, nieproliferacyjna GN, choroba anty-GBM), nieproliferacyjna GN (choroba minimalnych zmian () MCD), nefropatia błoniasta) i nefropatia cukrzycowa. Odkryliśmy, że cDC jest istotnie skorelowane z cechami patologicznymi, w tym ciężkością ATN, tworzeniem sierpów w GN uodpornionej na limfę oraz zwłóknieniem śródmiąższowym w GN o podłożu immunologicznym. modeli, wykazaliśmy również ich korelację z limfocytami T CD8t w tych próbkach. Te odkrycia dostarczają impulsu do odkrywania nowych celów terapeutycznych, które manipulują tymi komórkami w celu leczenia:nerkachoroby.

Kliknij, aby uzyskać łodygę Cistanche na chorobę nerek

MATERIAŁ I METODY

Pacjenci i próbki tkanek

Badanie zostało przeprowadzone zgodnie z zasadami Deklaracji Helsińskiej i zostało zatwierdzone przez Komitet Etyki Badań na Ludziach Lokalnego Okręgu Zdrowia Zachodniego Sydney. Uzyskano świadomą zgodę pacjenta. Przeanalizowaliśmy 176 zamrożonej diagnostykinerkabiopsy samples taken from non-pregnant adult patients(>18 lat) w okresie od 18 czerwca 2016 r. do 30* czerwca 2017 r. w szpitalu Westmead w Sydney w Australii.NerkaTkanki szybko zamrożono w OCTcompound (Tissue-Tek Sakura, USA) i przechowywano w -80 stopniu. Czterdzieści jeden (41) próbek miało niską jakość tkanki i zostały wykluczone z badania. W momencienerkabiopsja.eGFR obliczono ze wzoru CKD-EPI. Rozpoznanie postawił nefrolog na podstawie mikroskopii świetlnej, immunofluorescencyjnej (IF) i elektronowej oraz wywiadu klinicznego.

Przeanalizowano różne choroby, w tym choroby niekłębuszkowe (ATN, AIN), proliferacyjne GN (nefropatia IgA, toczniowe zapalenie nerek, GN uodpornione na pauci, choroba anty-GBM), nieproliferacyjne GN (MCD, nefropatia błoniasta) i cukrzycowe. nefropatia. W przypadku ATN uwzględniliśmy tylko przypadki nieseptyczne, ponieważ septyczna ATN ma inną patofizjologię. ATN została dalej podzielona na łagodną lub umiarkowaną chorobę (zdefiniowaną jako<50%cortical tubules="" showing="" injury)and="" severe="" disease="" (="">=50 procent kanalików korowych wykazujących uraz). Nefropatia IgA została sklasyfikowana na podstawie skali Oxford MEST (M mezangialna hiperkomórkowość, E endokapilarna hiperkomórkowość, odcinkowe stwardnienie kłębuszków nerkowych S, atrofia kanalików T/zwłóknienie śródmiąższowe). Przeanalizowaliśmy również korelację między cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1) number and prognosis (defined a priori as >20% reduction in eGFR on or before 31t December 2019)in IgA nephropathy by dividing patients into 2 groups according to cDC number with a cut-off point at the upper quartile(>=15). Toczniowe zapalenie nerek zostało dalej podzielone na 2 grupy w zależności od poziomu zwłóknienia śródmiąższowego (<25%,>=25 procent zaangażowania w korę śródmiąższową). Pauci-odporny GN został sklasyfikowany na 2 grupy według odsetka kłębuszków z półksiężycami (<40%,>=40 procent).

Jak normalnienerkakontrole, użyliśmy 5 normalnych kory nerki z próbek nefrektomii oraz 2 dawcynerkinie nadaje się do przeszczepu. W przypadku nefrektomii guza próbki pobrano z bieguna przeciwległego do guza i co najmniej 5 cm od marginesu guza. Tkanki te miały normalny wygląd makroskopowy. Pod mikroskopem żaden z nichnerkapróbki wykazywały oznaki istotnego zapalenia lub uszkodzenia kłębuszkowego lub cewkowo-śródmiąższowego. Użyliśmy normalnej tkanki śledziony dorosłego dawcy jako kontroli pozytywnej do testowania przeciwciał.

Barwienie immunofluorescencyjne

Seryjne skrawki kriostatu pocięto na 5 μm i umieszczono na szkiełkach Superfrost Ultra Plus (Thermo Scientific, USA). Slajdy były przechowywane w -80 stopniu . Skrawki tkankowe utrwalano 100 procentowym metanolem w stopniu -20 przez 10 minut, a następnie suszono na powietrzu. Pośrednie barwienie immunofluorescencyjne przeprowadzono stosując następującą metodę: skrawki tkanek płukano w DPBS (Lonza, USA) i blokowano 2% albuminą surowicy bydlęcej (Sigma-Aldrich, USA) przez 15 minut; następnie barwiono je pierwszorzędowym przeciwciałem w 4 stopniach przez noc, a następnie drugorzędowymi przeciwciałami przez 40 minut w temperaturze pokojowej. Tabela 1 zawiera listę użytych przeciwciał pierwotnych i wtórnych oraz ich rozcieńczenia. Jądra wybarwiono DAPI (1:250, 000, ThermoFisher, USA) przed umieszczeniem próbek na szkiełkach nakrywkowych z fluorescencyjną pożywką do montowania (Dako, USA). Nieswoiste barwienie i reaktywność krzyżowa między różnymi przeciwciałami pierwszorzędowymi i drugorzędowymi zostały sprawdzone i wykluczone.

TABELA 1|Zastosowane w badaniu przeciwciała pierwotne i wtórne

cDCI zidentyfikowano przez barwienie markera Clec9A. U ludzi ekspresja Clec9A jest silnie ograniczona do cDC1 we krwi i tkankach(10, 11). Aby to potwierdzić wnerki, wykonaliśmy podwójne barwienie Clec9A i HLA-DRB1 oraz Clec9A i CD1lc w wybranych stanach normalnych i chorobowych. Większość, jeśli nie wszystkie Clec9A pokrywały się z HLA-DRB1 (rysunek uzupełniający 1) i CD1lc (rysunek uzupełniający 2).

RYSUNEK 1|Prawidłowa nerka cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1), cDC2 i limfocyty T CD8 plus.

DC (Komórki dendrytyczne)rzadko były obecne w normienerkia liczby cDC2 były około 7 razy większe od liczby cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1). (Pasek=100 mm).

WYNIKI

Podstawowa charakterystyka pacjenta.Wyjściową charakterystykę pacjentów w kohortach kontrolnych i chorobowych podsumowano w Tabeli 2. Do badania włączono ogółem 135 pacjentów.nerkachorobyzostały przeanalizowane, w tym choroby niekłębuszkowe [ATN (22), AIN (10)], proliferacyjna nefropatia GN[gA (44), toczniowe zapalenie nerek (12), GN(12), choroba anty-GBM (4)] , nieproliferacyjna GN[MCD(5), nefropatia błoniasta(5)] i nefropatia cukrzycowa (21). W grupie z toczniowym zapaleniem nerek było więcej kobiet, a ich wiek był zwykle młodszy w porównaniu z innymi osobaminerkachoroby, co jest zgodne z literaturą (12). Najniższy eGFR mieli pacjenci z pauci-immunizowaną GN i chorobą anty-GBM. Poziom białkomoczu był najwyższy w nefropatii MCD i błoniastej.

TABELA 2|Charakterystyki poziomu bazowego.

Liczba i lokalizacja DC (Komórki dendrytyczne)w kontroli i chorobie.cDCl rzadko były obecne w normienerki(Rysunek 1) i liczby cDC2 były około 7 razy większe niż liczba cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1).Liczba cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)wzrosła znacząco w ATN i proliferacyjnym GN (Figura 2A), podczas gdy ich liczba pozostała niezmieniona w porównaniu z kontrolą w AIN, nefropatii błoniastej, MCD i nefropatii cukrzycowej (Figura uzupełniająca 3). Liczba cDC2 również znacznie wzrosła w ATN i proliferacyjnym GN (Figura 2B). Nastąpiła redukcja cDC2 (Komórki dendrytyczne typu 2)/cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)stosunek wskazujący cDCI (Komórki dendrytyczne typu 1)wzrosła proporcjonalnie bardziej niż cDC2 (rysunek 2C).

RYSUNEK 2|Liczba cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)oraz stosunek cDC2, cDC2/cDC1 i limfocyty T CD8 plus w kontroli i wybranych chorobach.

Wartość P oblicza się dla każdej choroby w porównaniu z kontrolą. Oba cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)i cDC2 znacząco wzrosło w ATN, IgA, toczniowym zapaleniu nerek, pauci-odpornym GN i chorobie anty-GBM (A, B)

z cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)wzrosła proporcjonalnie bardziej niż cDC2 w ATN, toczniowym zapaleniu nerek, GN uodpornionym na pauci i chorobie anty-GBM (C).

CD8 plus limfocyty T były znacząco zwiększone w ATN, IgA, toczniowym zapaleniu nerek, GN uodpornionym na pauci i chorobie anty-GBM (D).

Większość cDCl była zlokalizowana w śródmiąższu, z wyjątkiem toczniowego zapalenia nerek, GN uodpornionego na pauci i choroby anty-GBM, gdzie znaleziono je również w obszarach okołokłębuszkowych i wewnątrzkłębuszkowych (ryc. 3A). liczba limfocytów T CD8t w obszarach okołokłębuszkowych i wewnątrz kłębuszków (ryc. 3A), a wiele z nich znajduje się w tej samej lokalizacji co cDC1 (ryc. 3B). minimalna kolokalizacja z limfocytami T CD8 plus.

RYSUNEK 3|(A) cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)oraz limfocyty T CD8 plus w regionach wewnątrz kłębuszków nerkowych. (B) kolokalizacja cDC1 z limfocytami T CD8 plus. (Pręt=100 mm). * P < 0.05,="" **="" p=""><>

Powiązanie między cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)Z cechami kliniczno-patologicznymi i limfocytami T CD8 plus Przeanalizowaliśmy korelację między cDCl (Komórki dendrytyczne typu 1)oraz cechy kliniczno-patologiczne, jak również limfocyty T CD8 plus. Stwierdzono 22 przypadki ATN (łagodna choroba n=12, ciężka choroba n=10). Cięższa choroba była związana z większą liczbą cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)(p=0.032), ale nie cDC2(Rysunek 4A).cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)wzrosła proporcjonalnie bardziej niż cDC2 (stosunek cDC2/cDC1 2,5, p=00,019). Liczba limfocytów T CD8 plus również znacznie wzrosła w ATN (p=00,05) (Tabela 3, Rysunek 2D). Liczba cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)nie korelowały z liczbą limfocytów T CD8* w ATN.

TABELA 3|CD8 plus liczba komórek T i współczynnik korelacji między cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)oraz liczby komórek T CD8 plus w nerkach kontrolnych i chorych.

Przeanalizowano czterdzieści cztery przypadki nefropatii IgA. Stosując wynik MEST klasyfikacji Oxford (M mezangialna hiperkomórkowość, E nadmierna komórkowość naczyń włosowatych, S odcinkowe stwardnienie kłębuszków nerkowych, zanik kanalików T/zwłóknienie śródmiąższowe), wyższa liczba cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)był związany z wyższym wynikiem T (p=00,008), ale nie z wynikami MES (ryc. 4B). Było 7 przypadków z półksiężycami, a liczba cCD1 nie była związana z liczbą półksiężyców. LiczbanerkaLimfocyty T CD8* były istotnie wyższe w nefropatii IgA niż w grupie kontrolnej (p<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d).="" there="" was="" no="" correlation="" between=""> (Komórki dendrytyczne typu 1) and CD8+ T cell numbers. Thirty-five(35)patients had follow-up data on or before 31sf December 2019, of whom9experienced>20% redukcja eGFR. Podział pacjentów na 2 grupy według cDCl (Komórki dendrytyczne typu 1) number with a cut-off point at the upper quartile(>=15), tym wyższy cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)grupa liczbowa wiązała się z gorszymi wynikami (ryc. 4E).

RYSUNEK 4|Korelacja między cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1), cDC2 i CD8 plus liczba limfocytów T i ciężkość choroby (A-D).

Krzywa Kaplana-Meiera przeżycia nefropatii IgA (E). Wynik T 0 odnosi się do odsetka obszaru wykazującego atrofię kanalików/zwłóknienie śródmiąższowe <=25 procent="">

Punktacja T 1 odnosi się do procentu obszaru wykazującego atrofię kanalików/zwłóknienie śródmiąższowe 26 - 50 procent , punktacja T 2 odnosi się do procentu obszaru wykazującego atrofię kanalików/zwłóknienie śródmiąższowe > 50 procent .

Przeżycie zdefiniowano jako >20-procentowe zmniejszenie eGFR do 31 grudnia 2019 r. lub wcześniej. NS, nieistotne.

Było 12 przypadków toczniowego zapalenia nerek. Podobnie jak w przypadku nefropatii IgA, wyższa liczba cDCI była związana z cięższym zwłóknieniem (p=00,020) (ryc. 4C). Ponadto liczba limfocytów T CD8 plus również znacznie wzrosła (p<0.001) (table="" 3,="" figure="" 2d)="" and="" this="" correlated="" with="" the="" number="" of="" cdcl="" cells="" (r="0.614," p="0.034)" (table="" 3).a="" significant="" number="" of=""> (Komórki dendrytyczne typu 1)a limfocyty T CD8t znaleziono w okołokłębuszkowych, jak również wewnątrz kłębuszkowych, co wskazuje, że mogą odgrywać rolę w tym stanie. Po drugie, w chorobie o podłożu immunologicznym związanym z włóknieniem śródmiąższowym (nefropatia IgA i toczniowe zapalenie nerek) odkryliśmy, że cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)liczba ta korelowała z nasileniem zwłóknienia, a także rokowaniem w nefropatii IgA, podczas gdy nie stwierdzono takiej korelacji w chorobie zwłóknienia o podłożu nieimmunologicznym (nefropatia cukrzycowa). Po trzecie, istniała silna korelacja między liczbą cDCI a tworzeniem sierpów w uodpornionej GN, a cDCI były obecne w dużej liczbie w regionach okołokłębuszkowych i wewnątrz kłębuszków, co wskazuje na ich możliwą rolę w tworzeniu sierpów. Po czwarte, liczba cDC1 korelowała z liczbą limfocytów T CD8 plus w toczniowym zapaleniu nerek i GN uodpornionym na pauci, przy czym liczne cDC1 kolokalizują się z limfocytami T CD8 plus, co sugeruje ich możliwą interakcję. Jest to zgodne z naszymi odkryciami w modelach zwierzęcychnerkachorobaktóre wykazują mysie homologi cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)komórki preferencyjnie aktywują limfocyty T CD8t. Podsumowując, odkrycia te sugerują, że cDCl odgrywa ważną rolę w wielunerkachorobyw tym ATN, zwłóknienie śródmiąższowe w chorobie o podłożu immunologicznym oraz tworzenie się półksiężyców i że mogą one potencjalnie działać poprzez aktywację limfocytów T CD8t.

cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)Liczba skorelowana z ciężkością choroby w ATN. W nieseptycznym ATN po raz pierwszy wykazaliśmy znacznie zwiększoną liczbę DC (Komórki dendrytyczne), zwłaszcza cDCl w porównaniu z cDC2. Co ważne, cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)liczba skorelowana z nasileniem choroby. Ponadto wzrosła również liczba limfocytów T CD8 plus. ATN jest zwykle powodowana przez uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne (IRI), nefrotoksyny lub posocznicę. Tradycyjnie IRI i toksyny powodują jałowe zapalenie, a wrodzona odporność, w której DC i limfocyty T są mniej ważne, uważano za odgrywającą dominującą rolę. Jednak coraz więcej dowodów z badań na zwierzętach wykazało, że zarówno limfocyty T cDCI, jak i CD8 plus są ważnymi graczami. Wcześniejsze badania nad IRI u zwierząt i nefrotoksycznością cisplatyny wykazały, że całkowita liczba komórek DC i T wzrosła (13-17). Nasze poprzednie badania wykazały, że w nefropatii adriamycyny liczba cDCl znacznie wzrosła (5). W IRI podzbiór aktywowanych komórek dendrytycznych wykazuje zwiększoną zdolność do krzyżowej prezentacji antygenu limfocytom T CD8t(18). W nefropatii adriamycyny stwierdziliśmy również, że cDCl wywoływały odpowiedź limfocytów T CD8 plus prowadzącą do urazu (5). Brak korelacji między cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)i limfocyt T CD8* w ludzkim ATN, w przeciwieństwie do ustaleń w modelach zwierzęcych, może odzwierciedlać różne nieimmunologiczne szlaki uszkodzenia w ludzkiej ATN w porównaniu z IRI w modelach mysich, w których cDC1 odgrywają istotną rolę za pośrednictwem limfocytów T CD8*. Ponadto wykazano u gryzoni, że cDCI jest rekrutowany do tkanki przez chemoatraktant XCLl wytwarzany przez komórki NK(19). Dlatego warto przestudiować to dalej wnerkachoroba.

cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)Liczba skorelowana z włóknieniem śródmiąższowym o podłożu immunologicznym. Drugim istotnym odkryciem w tym badaniu jest to, że liczba cDCl koreluje z nasileniem zwłóknienia śródmiąższowego związanego z chorobą o podłożu immunologicznym (nefropatia IgA i toczniowe zapalenie nerek), ale nie w przypadku zwłóknienia o podłożu nieimmunologicznym (nefropatia cukrzycowa). zwiększona liczba cDC1 i cDC2 w zwłóknieniu śródmiąższowym(9). Po raz pierwszy wykazaliśmy, że dotyczy to tylko chorób o podłożu immunologicznym i cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)liczba wzrosła proporcjonalnie bardziej niż cDC2. Ponadto zademonstrowaliśmy również cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)liczba skorelowana z rokowaniem, a liczba limfocytów T CD8* również znacznie wzrosła w nefropatii IgA. Potwierdzają to badania na zwierzętach pokazujące DC (Komórki dendrytyczne)bezpośrednio przyczyniają się do zwłóknienia. Na przykład amfiregulina wywodząca się z DC sprzyjała zwłóknieniu(20). Możliwe jest również, że cDC1 przyczyniły się do zwłóknienia poprzez limfocyty T CD8 plus, o których wiadomo, że przyczyniają się do zwłóknienia w innych narządach (21-23). Ponieważ zwłóknienie śródmiąższowe wiąże się z postępem przewlekłegonerkachoroba, nic dziwnego, że znaleźliśmy cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)liczba jest dobrym markerem prognostycznym w nefropatii IgA. Inne badania wykazały, że limfocyty T CD8t są skorelowane z rokowaniem nefropatii IgA (24), co może być wynikiem prezentacji krzyżowej z cDCI. W toczniowym zapaleniu nerek wykazaliśmy korelację między cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)liczba i zwłóknienie śródmiąższowe oraz liczba limfocytów T CD8t. Wcześniejsze badania również wykazały wzrostnerkacDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)w toczniowym zapaleniu nerek (25), zwłaszcza w toczniowym zapaleniu nerek klasy III i VI, z odpowiednim zmniejszeniem ich liczby w krążeniu (26). Rozszerzyliśmy te odkrycia, pokazując, że są one również skorelowane z przewlekłymi zmianami. Powszechnie wiadomo, że śródmiąższowe zapalenie, które składa się z limfocytów T, limfocytów B, komórek dendrytycznych i makrofagów, odgrywa dominującą rolę w progresji toczniowego zapalenia nerek (27). sposobów. Po pierwsze, aktywacja interferonu odgrywa kluczową rolę w patogenezie toczniowego zapalenia nerek (28-30), a cDCI są znaczącym producentem IFN-入.（31）Second, cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)może przyczynić się do progresji zapalenia nerek tocznia przez komórki T CD8t (32-37)i nasze odkrycie korelacji między cDCl a CD8 plus T dalej wspiera ich możliwą interakcję. Rola CD8 plus limfocytów T w toczniowym zapaleniu nerek została wcześniej zademonstrowana. Limfocyty T CD8 plus kontrolują odporność autoreaktywną poprzez uwalnianie cząsteczek cytotoksycznych. Stwierdzono, że limfocyty T CD8 plus w toczniowym zapaleniu nerek mają osłabioną funkcję cytotoksyczną, która może wywołać autoimmunizację (38). Ponadto komórki te mogą również generować autoantygeny toczniowe(39). Istnieje wiele dowodów na to, że limfocyty T CD8* w obunerka(32,33) i mocz (34-36) korelują z aktywnością choroby i uszkodzeniem histologicznym w toczniowym zapaleniu nerek. Ponadto wykazano, że wyczerpanie komórek T CD8* jest predyktorem korzystnego rokowania(37).

cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)Liczba skorelowana z liczbą półksiężyców w Pauci-Immune GN. W uodpornionej na pauci GN, stwierdziliśmy, że cDCl są zagregowane w regionach okołokłębuszkowych i wewnątrz kłębuszków, a ich liczba jest skorelowana z liczbą półksiężyców i limfocytów T CD8 plus. Poprzednie badania wykazały, że DC (Komórki dendrytyczne)są rzadko obecne w kłębuszku(3,4,9) lub tylko w bardzo małej liczbie(40). }). Odkryliśmy, że zarówno limfocyty T cDC1, jak i CD8* są widoczne w regionach okołokłębuszkowych i wewnątrz kłębuszków, przy czym wiele z nich jest zlokalizowanych w tej samej lokalizacji. Ponadto cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)liczba skorelowana z liczbą limfocytów T CD8 plus i półksiężycem. Wszystkie te odkrycia sugerują rolę cDCI w tworzeniu sierpów poprzez interakcję z limfocytami T CD8*. Patogeniczną rolę limfocytów T CD8t w uodpornionej na pauci GN i tworzeniu sierpów wykazano już na modelach zwierzęcych(45,46). Zgodnie z naszymi odkryciami u ludzi, w zwierzęcym półksiężycu GN, cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)limfocyty T CD8* znaleziono zwłaszcza w regionie okołokłębuszkowym (47,48). Wykazano, że torebka Bowmana zapewnia chronioną niszę immunologiczną, zapobiegając dostępowi DC i cytotoksycznych limfocytów T CD8 plus do przestrzeni Bowmana, a tym samym do podocytów (45,47). Jednakże, gdy torebka Bowmana została naruszona, te komórki zapalne uzyskały dostęp i zniszczyły podocyty, powodując szybko postępującą GN(47).

Jednym z ograniczeń tego badania jest to, że technika barwienia IF pozwala na użycie tylko ograniczonej liczby markerów. Korzystne byłoby poszerzenie naszych odkryć o technologię, taką jak cytometria przepływowa, która może łączyć wiele markerów w celu dalszej analizy fenotypu tych DC (Komórki dendrytyczne)oraz ich odpowiednie profile cytokin i chemokin. Jednak informacje o lokalizacji zostaną utracone. Inne techniki, takie jak multipleks immunohistochemia i Nanostring, mogą być również brane pod uwagę w przyszłych badaniach w celu dalszego zbadania tych komórek wnerkachoroba. Ponadto podczas barwienia cDC2 przy użyciu CD1c, HLA-DRB1 i CD1lc może występować niewielki procent komórek B, które również wyrażają te markery, co nie zostało wykluczone.

WNIOSKI

Chociaż cDC1 (Komórki dendrytyczne typu 1)obejmuje niewielki podzbiór DC (Komórki dendrytyczne)w warunkach homeostatycznych badanie to wykazuje istotną korelację między tą populacją komórek a cechami kliniczno-patologicznymi u człowiekanerkachoroba. Odzwierciedla to ich prawdopodobne znaczenie w procesach chorobowych, takich jak ATN, tworzenie sierpów w proliferacyjnym GN i śródmiąższowe zwłóknienie w GN pośredniczonym przez układ immunologiczny. Ponadto ich kolokalizacja i korelacja z limfocytami T CD8t może dostarczyć wyjaśnienia ich mechanizmu działania, potwierdzając dane z modeli zwierzęcych. Te odkrycia dostarczają impulsu do odkrywania nowych celów terapeutycznych, które manipulują tymi komórkami w celu leczenia:nerkachoroby, jak zrobiliśmy w badaniach na zwierzętach (6), oraz zbadanie ich wykorzystania jako markera prognostycznego. Potrzebne są dalsze badania zarówno na ludziach, jak i zwierzętach, aby zbadać rolę cDC1s (Komórki dendrytyczne typu 1), ich mechanizm działania i najlepsze sposoby ich terapeutycznego ukierunkowania.

BIBLIOGRAFIA

1. Pakalniskyte D, Schraml BU. Różnorodność tkankowa i funkcje konwencjonalnych komórek dendrytycznych. Adv Immunol(2017)134:89-135.doi:10.1016/bs.ai.2017.01.003

2. Merad M, Sathe P, Helft J, Miller J, Mortha A. Linia komórek dendrytycznych: ontogeneza i funkcja komórek dendrytycznych i ich podzbiorów w stanie ustalonym i stanie zapalnym. Annu Rev Immunol (2013)31:563-604.doi:10.1146/roczna immunol-020711-074950

3. Segerer S, Heller F, Lindenmeyer MT, Schmid H, Cohen CD, Draganovici D, et al. Specyficzna dla przedziału ekspresja markerów komórek dendrytycznych w ludzkim kłębuszkowym zapaleniu nerek.NerkaInt (2008)74(1):37-46.doi:10.1038/ki.2008.99

4. Woltman AM, de Fiter JW, Zuidwijk K, Vlug AG, Bajema IM, van der Kooij SW, et al. Ilościowa ocena podzbiorów komórek dendrytycznych w ludzkiej tkance nerkowej w warunkach normalnych i patologicznych.Nerkawewn. (2007)71(10):1001-8. doi: 10.1038/sj.ki.5002187

5. Cao Q, Lu J, LiQ, Wang C Wang XM, Lee VW i in. Cd103 plus komórki dendrytyczne wywołują reakcje komórek T Cd8 plus w celu przyspieszeniaNerkaUrazw nefropatii adriamycyny. J Am Soc Nephrol (2016) 27(5):1344-60.doi: 10.1681/ASN.2015030229

6. Wang R, Chen T, Wang C, Zhang Z, Wang XM, Li Q i in. Łagodzi hamowanie Flt3ChronicznyNerkaChorobaprzez tłumienie CD103 plus aktywacji komórek T za pośrednictwem komórek dendrytycznych. Przeszczep nefrolowy tarczy (2019)34(11):1853-63. DOI: 10.1093/gfy385

7. Evers BD, Engel DR, Bohner AM, Tittel AP, Krause TA, Heuser C i wsp. Cd103 plusNerkaKomórki dendrytyczne chronią przed GN półksiężyca, utrzymując Il-10-produkcję limfocytów T regulatorowych. J Am Soc Nephrol (2016)27(11):3368-82. DOI: 10.1681/ASN.2015080873

8. Kuchnia AR, Ooi JD. Nerkowe komórki dendrytyczne: długa i kręta droga. J Am Soc Nephrol (2018)29(1):4-7.doi: 10.1681/ASN.2017101145

9. Kassianos AJ, Wang X, Sampangi S, Muczynski K, Healy H, Wilkinson R. Zwiększona rekrutacja kanalikowo-śródmiąższowa ludzkich podzbiorów komórek dendrytycznych CD141(hi)CLEC9A(plus) i CD1c(plus) w zwłóknieniu nerek i BNerkaB. Am J Physiol Rener Physiol (2013)305(10): F1391-401. doi:10.1152/adrenal.00318.2013

10. Guilliams M, Dutertre CA, Scott CL, McGovern N, Sichien D, Chakaro S i in. Nienadzorowana analiza wielkowymiarowa wyrównuje komórki dendrytyczne w tkankach i gatunkach. Odporność (2016)45(3):669-84.doi: 10.1016/j.immuni.2016.08.015

11. Villani AC, Satija R, Reynolds G, Sarkizova S, Shekhar K, Fletcher J, et al. Jednokomórkowy sekwencja RNA ujawnia nowe typy ludzkich komórek dendrytycznych krwi, monocytów i komórek progenitorowych. Nauka(2017)356(6335):4-6. DOI: 10.1126/science.aah4573

12. Almaani S, Meara A, Rovin BH. Aktualizacja na toczniowym zapaleniu nerek. Clin I Am Soc Nephrol (2017)12(5):825-35.doi: 10.2215/CJIN.05780616

Notatka:powyższe nie jest pełną listą referencyjną