Kompleksowe spojrzenie na cykl odporności na raka (CIC) w raku szyjki macicy wywołanym przez HPV i perspektywy pojawiających się możliwości terapeutycznych, część 2

2.2. Wychwytywanie i przetwarzanie antygenu (krok 2)

Komórki prezentujące antygen (APC) charakteryzują się posiadaniem receptorów rozpoznawania wzorców (PRR) na zewnętrznej powierzchni ich błony, które mają zdolność rozpoznawania szerokiego zakresu egzogennych (wzorce molekularne związane z patogenami – PAMP) i endogennych antygenów (uszkodzenia -związane wzorce molekularne — DAMP) [68]. Wiązanie antygenu z PRR uruchamia szlaki sygnałowe, które umożliwiają internalizację, przetwarzanie i późniejszą prezentację adaptacyjnym komórkom odpornościowym (CIC-etap 2) [68]. Zmiany w tych mechanizmach zaobserwowano również podczas rozwoju CC. Badania wykazały, że jedną z głównych przyczyn utrzymywania się zakażenia HPV jest zdolność wirusa do zakłócania receptorów i sensorów wrodzonej odporności, a tym samym unikania układu odpornościowego gospodarza.

W świetle tego stwierdzono, że receptor toll-like (TLR) 9 odgrywa kluczową rolę w systemie odpowiedzi immunologicznej przeciwko zakażeniu HPV i nowotworom szyjki macicy [69]. Badania in vitro i in vivo wykazały, że zmieniona ekspresja TLR9 jest związana z mikrośrodowiskiem guza w raku szyjki macicy związanym z HPV [69–73]. Inne badania ekspresji genów wykazały jedynie znaczny spadek TLR1 i wzrost TLR3 z komórek nabłonkowych w raku szyjki macicy [74]. Ponadto obecność receptora TLR4 została dodatnio skorelowana ze stanem niedotlenienia mikrośrodowiska guza i scharakteryzowania tych zmian w sposób odpowiadający różnym etapom i podtypom CC, a tym samym umożliwienia wyraźniejszego rozróżnienia ich funkcji w przeciwnowotworowej odpowiedzi immunologicznej.

W wyniku interakcji między APC a mikrośrodowiskiem guza może dojść do zmniejszenia liczby APC i zmiany ich funkcji [76,77]. Spadek liczby APC wynika zarówno z redukcji APC rezydentów, jak i migrujących. Na wstępie należy zauważyć, że cykl infekcyjny HPV sam w sobie jest mechanizmem unikającym układu odpornościowego gospodarza, ponieważ replikacja wirusa i uwalnianie nowych cząstek wirusowych nie powoduje lizy komórek, ponieważ śmierć keratynocytów jest zaprogramowana. Występuje zatem albo zmniejszenie, albo całkowity brak cytokin prozapalnych, które aktywują migrację APC [78]. W rzeczywistości stwierdzono zmiany w ekspresji niektórych cytokin, które stymulują migrację APC do guza. Na przykład w komórkach CC zmniejszona migracja APC do nabłonka szyjki macicy w celu wychwytu antygenu jest spowodowana obniżeniem poziomu chemokinowego ligandu motywu CC (CCL) 2, CCL20 i ligandu chemokiny (motyw CXC) (CXCL) 14 [79– 81]. Ponadto badania in vitro i in vivo CC wykazały obniżenie poziomu markerów CD11b i CD207 w LC, co wpłynęło na wychwyt antygenu i zmniejszyło różnicowanie i dojrzewanie komórek dendrytycznych (DC) [79-81]. Istnieją dowody na to, że docelowy CCL20 HPV jest przyciągającą komórki chemokiną komórek Langerhansa (LC), która zakłóca szlak NF-κB [79]. Szlak ten reguluje ekspresję wielu genów zaangażowanych w procesy pro- i przeciwzapalne, takich jak chemokiny, cytokiny i cząsteczki adhezyjne [82]. Inne strategie unikania odpowiedzi immunologicznej stosowane przez HPV w celu zahamowania szlaku NF-κB obejmują interakcję wirusowych onkoprotein z czynnikiem związanym z P300/CBP (PCAF) oraz regulację w górę UCHL1 [83-85].

Ponadto badania wykazały, że onkoproteiny HPV zakłócają interakcję między keratynocytem a LC poprzez cząsteczki adhezyjne. Niewielkie ilości LC wynikają ze zmniejszonej ekspresji kadheryny i białek adhezyjnych występujących w CC [77, 86]. Jednak niedawne badanie, w którym wykorzystano modele in vivo, wykazało, że chociaż spadek E-kadheryny zmienił morfologię LC, nie było konieczne zapewnienie ich pozostania w nabłonku [87]. Dodatkowo, onkoproteina E5 HPV obniża poziom głównego kompleksu zgodności tkankowej (MHC) klasy I na powierzchni komórki, zakłócając prezentację antygenu, a tym samym rozpoznawanie komórek zakażonych HPV przez cytotoksyczne limfocyty T [88,89]. Jednak nadal potrzebne są dalsze badania w celu zbadania zmian zgłaszanych w wewnętrznych mechanizmach przetwarzania antygenu w APC, w tym czynników, takich jak interakcja z różnymi szczepami HPV, cechami histologicznymi, bodźcami mikrośrodowiska i stadium klinicznym, oraz w celu określenia, w jakim stopniu sposób może to znacząco wpłynąć na przeciwnowotworową odpowiedź immunologiczną.

Zmiany genetyczne, takie jak polimorfizmy, mogą wpływać na różne aspekty układu odpornościowego, w tym na wychwytywanie i przetwarzanie antygenów. Funkcjonalne implikacje tych zmian genetycznych zależą od formy i pozycji zmian w genomie i mogą wahać się od nieistotnych do znacznych zmian w funkcji genów. Analiza bioinformatyczna w obszarze receptorów TLR wykazała, że ​​polimorfizmy mogą potencjalnie wpływać na miejsca wiązania czynników transkrypcyjnych i zakłócać aktywację szlaków sygnałowych TLR.

Jednak możliwości wnioskowania funkcjonalnego tych narzędzi są ograniczone i konieczne są dodatkowe badania, aby w pełni zrozumieć mechanizmy molekularne stojące za tymi zmianami [90]. W międzyczasie przeprowadzono metaanalizę mającą na celu zbadanie wpływu dominujących odmian genów TLR9 i TLR2 (TLR9 1486 T/C, TLR9 G2848A, TLR2–196 do –174 del/ins) na częstość występowania CC. Analiza wykazała, że ​​polimorfizm TLR9-1486T/C (rs187084) był związany ze zwiększonym ryzykiem CC, podczas gdy nie znaleziono związku z wariantem TLR2-196 do -174 del/ins [72,73]. Podobnie inne badanie wykazało, że warianty IL-12B rs3212227 i TLR9 rs352140 nie zwiększały w żaden sposób prawdopodobieństwa CC. Odwrotnie, odmiany genetyczne XRCC3 RS861539, TNF-rs1800629 i IL{26}} rs1800795 były skorelowane [91]. Kolejna analiza polimorfizmu genów wykazała, że ​​genotyp GG SNP rs311678 w genie cyklicznego GMP-AMP (cGAMP) szlaku STING (stymulator genów interferonu) był związany ze znacznie zmniejszonym ryzykiem zmian przedrakowych szyjki macicy. Co więcej, to samo badanie wykazało również istotną antagonistyczną interakcję między zakażeniem HPV a polimorfizmem rs311678 w skali addytywnej przy użyciu modelu interakcji trzech locus, obejmującego infekcję HPV, przedział wiekowy pierwszej miesiączki i SNP rs311678 w cGAS [92]. Polimorfizmy mogą również wpływać na geny odpowiedzialne za podjednostki proteasomu w obrębie MHC-I, potencjalnie wpływając na prezentację antygenu. Stwierdzono, że polimorfizm rs2071543 jest związany z podwyższonym ryzykiem CC związanego z HPV, gdy występuje jako genotypy T/T i T/G podjednostki beta proteasomu 8 oraz genotypy A/A i A/G podjednostki 9 [93]. ].

Niedawno przeprowadzona metaanaliza zbadała związek między niekodującymi SNP a zmianami przedrakowymi i CC. W badaniu zbadano 48 polimorfizmów i wykryto 16 SNP (związanych z białkami odpornościowymi, w tym interleukinami, interferonem, TLR, TNF, CTLA i metaloproteinazami), które były ściśle powiązane ze zwiększonym ryzykiem CC [94]. Na tej podstawie można postawić hipotezę, że polimorfizmy są szeroko obserwowane w genach związanych z układem odpowiedzi immunologicznej przeciwko CC związanemu z HPV i mogą stanowić ewoluującą adaptację do dynamicznego środowiska. Jednak wyniki badań polimorfizmu mogą się różnić w zależności od populacji i grupy etnicznej. Istnieją również pewne ograniczenia tych badań, w tym: (a) rozbieżności w badaniach włączonych do metaanalizy, (b) niewielka liczba badań analizujących niektóre polimorfizmy oraz (c) możliwość stronniczości publikacji. Niemniej jednak przeprowadzenie eksperymentalnej walidacji różnic funkcjonalnych między polimorfizmami genetycznymi związanymi z kancerogenezą indukowaną przez HPV może pomóc w opracowaniu ukierunkowanych immunoterapii dla określonych populacji.

2.3. Przygotowanie i aktywacja komórek odpornościowych (krok 3)

Po wychwyceniu i przetworzeniu antygenów następuje priming i aktywacja komórek T z naiwnych komórek T (etap 3) (ryc. 1). Wymaga to migracji APC do węzłów chłonnych. Jednak zmniejszoną zdolność migracji związaną z niską ekspresją CCR7, receptora wymaganego do wyjścia komórek T z tkanek obwodowych i wejścia do węzłów chłonnych, zaobserwowano w DC naciekających guz [95]. Wśród zaangażowanych mechanizmów były dowody na to, że białka E6 i E7 z HPV obniżają poziom CCR7 poprzez zwiększanie poziomu IL-6 w liniach komórkowych raka szyjki macicy [96,97]. Z drugiej strony, modele in vitro wykazały, że LC z CC stymulowane przez s-Poly-I:C wyrażają CCR7 i zwiększają migrację do ich ligandu (CCL21), co podkreśla znaczenie ich ekspresji dla migracji LC do węzły chłonne do primingu komórek T [98,99].

Gdy APC przenikną do węzłów chłonnych, napotykają naiwne komórki T, gdzie rozpoczynają swoją primację i aktywację. W tej fazie zaobserwowano podczas badań CC in vivo, że istnieją komórki LC pierwotne CD8 plus z umiarkowaną aktywnością proliferacyjną, niską produkcją IFN- i wysokimi poziomami IL-10 [100] i IL{6}}A [101]. W konkretnym przypadku IL{8}} (cytokiny przeciwzapalnej) należy zauważyć, że w CC keratynocyty, makrofagi i LC również mają zwiększoną produkcję IL-10 [102] i w jednym badaniu zaobserwowano że komórki Treg, in vitro, poprzez wpływ IL{11}}, zmniejszają zdolność aktywacji naiwnych komórek T, co można interpretować jako mechanizm sprzężenia zwrotnego odpowiedzi immunologicznej [102,103]. Wykazano, że spadek poziomu ekspresji miR-155 może być związany z infekcją HPV i tworzy korzystne mikrośrodowisko dla karcynogenezy poprzez zmniejszenie ekspresji IFN i zwiększenie ekspresji IL-10 [104,105]. Ponadto, modele in vivo wykorzystujące myszy K14E7 wykazujące ekspresję białka E7 HPV{22}} wykazały spadek pobudzenia limfocytów T CD8 plus przez LC [106], zmniejszoną liczbę komórek Th1 pobudzonych przez DC, przewagę primingu komórek T z fenotypem Foxp3 plus oraz wysoką ekspresją CD73 i receptora folianu 4 z CD4 plus naiwnych komórek T [107]. Jednak nieoczekiwanie w innym badaniu, w którym wykorzystano model myszy in vivo z ekspresją białka E7 HPV{35}}, pomimo uzyskania zmniejszenia liczby i markerów aktywacji LC; ponadto spadek pobudzenia CD8 plus cytotoksycznych komórek T był niezależny od LC [108].

Ta ostatnia obserwacja może być związana z faktem, że istnieje kilka podtypów APC, a te z kolei wykazują różne stadia dojrzewania. Na poparcie tego badania in vitro dostarczyły dowodów na to, że limfocyty T CD8 plus podtypu Langerin-DC mają podwyższoną aktywność proliferacyjną, wysoką produkcję IFN- i niski poziom IL-10 [109]. Konieczne są jednak dalsze badania, w których podtypy APC są bezpośrednio zaangażowane w pobudzanie i aktywację każdego podtypu komórek T, w zależności od podtypu CC. Tak więc, na przykład, gdy porównano podtypy komórek T w węzłach chłonnych drenujących guz z gruczolakoraka szyjki macicy (ADC), była większa obecność komórek T, z przewagą komórek Treg, CD8 plus komórki T z wyższym profil „wyczerpania”, wyższe poziomy CD8 plus centralne komórki T pamięci (TMC CD27 plus CD45RA-) i CD8 plus efektorowe komórki T pamięci (TEM CD27-CD45RA-) niż w przypadku raka płaskonabłonkowego szyjki macicy (SCC) [110]. Zatem istnieją różnice (z punktu widzenia primowania i aktywacji komórek T) między histologicznymi podtypami CC, które należy zbadać.

2.4. Migracja komórek odpornościowych do guza (krok 4)

Następnie pobudzone i aktywowane komórki T przez APC muszą migrować do guza (krok 4). Jak zaobserwowano w poprzednich krokach, wykryto kilka nieprawidłowości. Zatem obecność pewnych chemokin okazała się szczególnie ważna. Na przykład komórki CC zwiększyły wytwarzanie IL-6, która stymuluje fibroblasty zrębu do wytwarzania cytokiny CCL20 poprzez szlak sygnałowy CCAAT/białko wiążące wzmacniacz (C/EBP), co z kolei jest związane ze zwiększonym guzem rekrutacja komórek pronowotworowych CD4/IL17/CCR6 plus Th17 [41,101]. Ponadto modele in vivo i in vitro wykazały, że onkoproteina E7 HPV obniża ekspresję CXCL14 poprzez hipermetylację promotora CXCL14. W ten sposób wymuszona ekspresja tej chemokiny w CC przyspiesza migrację komórek NK, komórek T CD4 plus i limfocytów T CD8 plus do lokalnego środowiska [111, 112]. Podobnie wykazano, że niska ekspresja XCR1 w DC jest ważna, ponieważ zmniejsza bezpośrednią migrację komórek T CD8 plus poprzez interakcję chemokiny Ligand CXCL1, jak również jego własną aktywację i aktywację komórek NK [113, 114]. Ponadto, in vitro, rozszczepienie ligandów receptora chemokin CXCL9, CXCL10 i CXCL11 przez białko metalopeptydazy macierzy 9 (MMP{31}}) doprowadziło do zmniejszenia migracji limfocytów T; zgodnie z wcześniejszymi ustaleniami, hamowanie MMP9 wykazało zwiększoną ekspresję CXCL10, IL-12p70 i IL18 [115].

Niektóre badania wykazały, że zmiany mogą się różnić w zależności od histologicznego podtypu CC. Zatem migracja komórek T w ADC jest niższa niż w SCC; ta pojedyncza cecha została powiązana z niską ekspresją CXCL9, CXCL10 i CXCL11 w ADC w porównaniu z SCC i uważa się, że można to przypisać większej obecności konwencjonalnych DC typu 1 (cDC1) w SCC niż w ADC, co wiąże się z większą produkcją cytokin stymulujących migrację cytotoksycznych limfocytów T CD8 plus do guza [110]. Dodatkowo stwierdzono niską ekspresję CCL4 i -kateniny oraz dodatnią korelację między jej poziomami a cDC1 naciekającym nowotwór [110]. Zatem zmienność profilu chemoatrakcji cytokin komórek T może częściowo wyjaśniać heterogeniczność obserwowaną w defektach migracji komórek odpornościowych w CC.

2.5. Infiltracja komórek odpornościowych do guza (krok 5)

Po przygotowaniu i aktywacji komórki T naciekają tkankę nowotworową (krok 5). Na tym etapie komórki T CD4 plus Th17 i komórki T Foxp3 plus mają wyższe wskaźniki infiltracji niż te występujące w normalnej tkance. Uważa się, że te dwa podtypy komórek przyczyniają się do progresji nowotworu poprzez wzrost IL{7}}, IL{8}} i transformującego czynnika wzrostu (TGF-) [101,116]. Ponadto w jednym badaniu immunohistochemicznym zbadano związek między poziomami STING, naciekiem limfocytów T CD103 plus i rokowaniem w raku szyjki macicy. Badanie to wykazało, że połączenie wysokiego poziomu STING i wysokiego naciekania limfocytów T CD103 plus jest sposobem na osiągnięcie lepszego rokowania w raku szyjki macicy. Należy jednak zauważyć, że potrzebne są dodatkowe badania, aby w pełni zrozumieć mechanizmy leżące u podstaw tych powiązań i określić dokładny potencjał naciekania STING i CD103 plus komórek T, jako celów terapeutycznych w raku szyjki macicy [117]. Co więcej, dowody potwierdzają pogląd, że zmiany w macierzy pozakomórkowej wytwarzane przez rozwój i progresję komórek nowotworowych odgrywają ważną rolę w regulowaniu naciekania komórek odpornościowych. Tak więc, na przykład, komórki nowotworowe stymulują syntezę składników macierzy przez fibroblasty, tworząc gęstsze struktury, które utrudniają naciekanie komórek odpornościowych, takich jak CD8 plus komórki T [118]. Wśród dowodów na mechanizmy, które ułatwiają wzrost guza i przerzuty przy zmniejszonym nacieku komórek T, jest przebudowa macierzy pozakomórkowej i bodziec przez czynniki wzrostu i cytokiny [115, 119].

W związku z tym w przewlekłych stanach zapalnych i nowotworowych szyjki macicy obserwuje się zwiększoną produkcję białek macierzy zewnątrzkomórkowej, takich jak fibronektyna 1 (FN1), MMP1 i MMP9 [51,119-122]. Oprócz tego autorzy wykryli dodatnią korelację między ich poziomami ekspresji a wzrostem przewlekłych procesów zapalnych, progresją kliniczną, inwazją i przerzutami nowotworu [119,120,122]. Z tego powodu w diagnostyce CC zaleca się łączne stosowanie MMP9 z innymi markerami nowotworowymi, takimi jak CA{11}} [121]. Przeprowadzono badania in vitro z komórkami SiHa, HeLa i C-33A, aby przeanalizować migrację tych komórek i stwierdzono, że kwas fenylomlekowy (PLA) często wytwarzany przez bakterie kwasu mlekowego zwiększa migrację komórek i ekspresję MMP9 [123,124]. Sugerowano, że powinien nastąpić wzrost translokacji jądrowej czynnika IκB i p65 przez bodziec PLA poprzez aktywację szlaku sygnałowego NF-kB [124]. Wśród mechanizmów sugerowanych w regulacji ekspresji MMP9 znalazł się wzrost produkcji IL-6 przez komórki nowotworowe raka szyjki macicy [95]

Proces nieprawidłowej neowaskularyzacji w raku szyjki macicy wykazał, że jest on związany nie tylko z ukrwieniem komórek nowotworowych; przyczynia się również do tworzenia środowiska immunosupresyjnego guza. Dzieje się tak dlatego, że angiogeneza zachodzi w sposób nieprawidłowy i prowadzi do różnicowania się komórek immunosupresyjnych oraz zmniejszenia zdolności do infiltracji i funkcji cytotoksycznych komórek odpornościowych [125]. Kiedy zastosowano techniki immunohistochemiczne w raku płaskonabłonkowym szyjki macicy, stwierdzono, że czynnik indukowany niedotlenieniem -1 (HIF-1) (a) był regulowany w górę, (b) prowadził do gorszego rokowania [126], oraz (c) został zidentyfikowany jako możliwe białko zaangażowane w ten proces. Uważa się, że niedotlenienie generowane przez mikrośrodowisko guza stymuluje ekspresję HIF{5}} i czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF), jednocześnie powodując nieprawidłową angiogenezę i zmieniając ekspresję niektórych cząsteczek adhezji międzykomórkowej (ICAM) oraz adhezję komórek naczyniowych cząsteczki (VCAM) [127].

Porównując różne linie komórkowe raka szyjki macicy zakażone różnymi typami HPV, zaobserwowano, że w zależności od linii istnieją różnice w naciekaniu komórek odpornościowych. Na przykład, in vivo i przy użyciu nagich myszy i modeli RAG1-/-, komórki SiHa (HPV16 plus) i Hela (HPV18 plus) wykazały większy naciek komórek zapalnych niż komórki C33A (HPV-) [128]. Ponadto we wszystkich komórkach zaobserwowano wysoki poziom czynnika hamującego migrację makrofagów (MIF) i CCL5; jednak tylko komórki SiHa i HeLa zmniejszają ekspresję ICAM, a inhibitor aktywatora plazminogenu -1 (PAI{7}}) był regulowany w górę przez komórki C33A i regulowany w dół przez komórki SiHa i HeLa [128]. Dlatego zaleca się uwzględnienie różnych typów HPV przewlekle infekujących szyjkę macicy w celu wyjaśnienia różnic obserwowanych w naciekaniu komórek odpornościowych w guzach raka szyjki macicy.

2.6. Rozpoznawanie komórek nowotworowych przez komórki odpornościowe (krok 6)

Następnie limfocyty T infiltrują tkankę nowotworową, co powinno umożliwić im rozpoznanie komórek nowotworowych. Istnieją jednak dowody na to, że komórki nowotworowe raka szyjki macicy mają obniżoną regulację kilku genów MHC, co skutkuje zmniejszonym rozpoznawaniem komórek nowotworowych przez cytotoksyczne komórki T i komórki NK [129,130]. Wśród genów MHC-I o obniżonej regulacji, które wykryto w raku szyjki macicy, znajdują się ludzki antygen leukocytarny (HLA) A, HLAB, HLA-C, HLA-E i HLA g [131]. Dostarczono dowodów na raka głowy i szyi w celu zidentyfikowania zaangażowanych mechanizmów regulacji w dół, jak również regulacji w dół ekspresji CXCL14 spowodowanej przez przewlekłą infekcję HPV, a tym samym w dół regulacji genów MHC-I [112]. Uważa się, że podobnie może się to dziać w raku szyjki macicy [112]. W związku z tym przeprowadzono testy in vivo i in vitro w celu dostarczenia dowodów na to, że kolisty RNA circEYA1 jest regulowany w dół w gruczolakoraku szyjki macicy i ma zdolność wychwytywania miR-582-3p regulującego w górę CXCL14 [132]. Dodatkowo badania metylomu z użyciem unieśmiertelnionych keratynocytów wykazały, że dystalny element promotorowy (CGI) genu HLA-E wykazuje hipermetylację przez onkoproteinę HPV E7 i jest związany z jego regulacją w dół [131]. Konieczne jest jednak przeprowadzenie większej liczby badań epigenetycznych w celu zrozumienia specyficznych mechanizmów immunologicznego rozpoznawania komórek nowotworowych przez limfocyty T

Geny kompleksu MHC-II były również celem zmian w ich ekspresji. Tak więc modele in vivo z wykorzystaniem myszy K14.E7 wykazały obniżenie poziomu MHC-II w infiltrujących LC naskórka oraz zwiększenie poziomu genów związanych ze zmniejszoną odpowiedzią immunologiczną, takich jak -2-3-dioksygenaza indoelaminy (IDO) 1, Arginaza 1, IL-12/23p40 i IL-6 [106]. Ponadto w raku szyjki macicy stwierdzono, że komórki Foxp3 plus Treg, regulacja in vitro związanej z błoną ligazy ubikwityny E3 RING-CH (MARZEC) 1 i ligazy ubikwityny E3. Białka te degradują CD86 i MHC-II DC, w których pośredniczy IL-10 wytwarzana przez komórki Foxp3 plus Treg [103]. Białka obecne w macierzy pozakomórkowej również wydają się odgrywać ważną rolę w mechanizmach rozpoznawania komórek nowotworowych. W świetle tego znaleziono dowody, że białko galektyny (Gal) 3 zapobiega interakcji między receptorami TCR i CD8, powodując inaktywację i indukując aktywność immunosupresyjną [133]. Zatem rozpoznawanie komórek nowotworowych przez komórki odpornościowe może być zmienione globalnie, a nie tylko przez złożony szlak MHC-I.

2.7. Zniszczenie komórek nowotworowych (krok 7)

Wreszcie, po rozpoznaniu komórek nowotworowych przez limfocyty T, należy uruchomić mechanizmy prowadzące do zniszczenia komórek nowotworowych (krok 7). Oznaki defektów, które ujawniają się na tym etapie, obejmują regulację w górę cząsteczek współhamujących, takich jak indukowalny ligand kostymulatora komórek T (ICOSLG), CD276, inhibitor aktywacji komórek T zawierający domenę V (VTCN) i ligand białka programowanej śmierci komórkowej (PD-L), który, jak wykazano, jest jednym z głównych mechanizmów hamujących przeciwnowotworową odpowiedź immunologiczną [134, 135]. W raku szyjki macicy związanym z HPV obserwowano wysokie poziomy ekspresji PD-L1 i receptora indukowanego interferonem 16 (IFI16), a ekspresja ta była związana z progresją nowotworu. Ponadto wykazano, że IFI16 może stymulować ekspresję PD-L1 poprzez szlak STING-TBK{22}}NF-kB [136].

Niedawno przeprowadzone badania wykazały, że limfocyty T pacjentek z rakiem szyjki macicy wykazują zwiększoną ekspresję PD-1, co prowadzi do większej produkcji TGF- i IL-10, obniżonego poziomu IFN- i upośledzenia Proliferacja komórek T, ustanawiając w ten sposób tolerancję immunologiczną i ułatwiając wzrost guza [135, 137]. Potwierdzając to, testy in vitro wykazały, że hamowanie ekspresji PD-L1 w komórkach CaSki było związane ze zwiększoną proliferacją i aktywnością cytotoksyczną komórek T CD8 plus [138,139]. Dodatkowo, oprócz podwyższonego poziomu ekspresji PD-1, CD8 plus naciekające komórki T w raku płaskonabłonkowym mają wyższy profil „wyczerpania” i regulację w górę immunoglobuliny komórek T i domeny zawierającej mucynę (TIM) 3 oraz gen aktywacji limfocytów (LAG) 3 [110]. W testach in vitro stwierdzono, że białko E2 wirusa HPV wysokiego ryzyka obniża poziom STING, czujnika wrodzonej odpowiedzi immunologicznej nowotworów, który pomaga w produkcji IFN typu I [139].

Dokładne zmiany w funkcji STING w CC związanych z HPV nie zostały jeszcze w pełni wyjaśnione. Jednak badanie in vitro wykazało, że białko E7 HPV16 może wchodzić w interakcje z NLRX1 i zwiększać obrót czujnika STING, prowadząc do zmniejszenia odpowiedzi na interferon oraz rozwoju i progresji raka płaskonabłonkowego głowy i szyi (HNSCC). Interakcja między białkiem HPV16 E7, NLRX1 i STING stwierdzona w HNSCC może sugerować, że istnieje podobny mechanizm regulacyjny dla układu odpowiedzi immunologicznej gospodarza w CC [140]. Ponadto doniesiono, że białko E7 HPV może tłumić ekspresję STING poprzez mechanizmy epigenetyczne [141]. W rezultacie zasugerowano, że szlak sygnałowy STING może działać jako kluczowy kontroler CIC, nie tylko odgrywając rolę w niszczeniu komórek nowotworowych, ale także aktywując DC, wzmacniając prezentację antygenu, aktywując i różnicując wzrost T stymulując naciek cytotoksycznych limfocytów T (CTL) i hamując naciek immunosupresyjnych regulatorowych limfocytów T [20].

W odniesieniu do cytotoksyczności limfocytów T CD8 plus stwierdzono obniżoną ekspresję E-kadheryny, co wiązało się z gorszym rokowaniem w raku szyjki macicy [142,143]. Wykazano, że e-kadheryna jest ważna dla polaryzacji i uwalniania cytotoksycznych granulek wykorzystywanych przez komórki T CD8 plus cytotoksyczne do zabijania komórek nowotworowych, które są stymulowane przez interakcję między integryną E (CD103) komórek T naciekających guz i E-kadheryna komórek nowotworowych [144–148].

Zbadano również wpływ niektórych metabolitów na komórkową odpowiedź immunologiczną. Stwierdzono zatem dodatnią korelację między stężeniem metabolitów tryptofanu wytwarzanych przez komórki nowotworowe a progresją nowotworu i przerzutami do węzłów chłonnych w raku płaskonabłonkowym szyjki macicy [149]. Wśród badanych metabolitów jest chinurenina, podczas gdy stosunek chinuneryna/tryptofan wzrósł w raku szyjki macicy [150]. Badanie in vitro z wykorzystaniem różnych linii raka szyjki macicy wykazało podwyższenie poziomu enzymu IDO1 rozkładającego tryptofan; jednak jego obniżenie in vitro nie wykazało różnic we wzroście komórek nowotworowych [151]. Niemniej jednak, badania z wykorzystaniem modeli myszy BALB/c nude i K14.E7 (z ekspresją genu E7 HPV) in vivo wykazały, że regulacja w dół IDO1 była istotnie związana ze zwiększoną liczbą naciekających komórek NK i zmniejszonym wzrostem guza [151, 152]. Mechanizmy zaangażowane w modelach myszy K14.E7 zidentyfikowano, zauważając, że regulacja w górę IDO1 jest związana z lokalnym wydzielaniem IFN i supresją limfocytów T CD8 plus [152].

Na tym etapie regulacja odpowiedzi immunologicznej przez limfocyty T CD4 plus również wydaje się być szczególnie ważna. Dowody wskazują na częstsze występowanie raka szyjki macicy u pacjentek z immunosupresją spowodowaną zakażeniem ludzkim wirusem upośledzenia odporności (HIV) [153, 154]. Zaobserwowano, że zwiększona liczba krążących limfocytów T CD4 plus NKG2D plus i niska ekspresja receptorów kostymulujących CD28 u pacjentek z rakiem szyjki macicy jest związana ze zmniejszoną częstością markerów cytotoksycznych i zmniejszoną produkcją cytokin prozapalnych [155]. Ponadto istnieją dowody na to, że białko galektyny -1 (Gal -1) indukuje klirens komórek CD4 plus Th17 i Th1 oraz indukuje proliferację komórek Treg [133].

Interakcja między różnymi podtypami komórek odpornościowych może również wpływać na niszczenie komórek nowotworowych. W związku z tym modele badań in vitro wykazały, że LC raka szyjki macicy stymulowane s-Poly-I:C mają zwiększoną ekspresję markerów dojrzewania komórek (CD40, CD80, CD83, CD{5}}, CCR7, MHC1 i MHCII), poprawiona migracja i zwiększona produkcja cytokin prozapalnych związanych ze stymulacją [komórkowej odpowiedzi cytotoksycznej komórek CD8 plus (IL-1beta, IL-6, IL-12p70, IP-10, TNF-alfa, IFNalfa, MCP{17}}, MIP-1alfa, MIP-1beta i RANTES) [99]. Jednak eksperymenty in vivo na myszach wykazały, że wyczerpanie LC zwiększa aktywność cytotoksyczną limfocytów T [109]. W ostatnich latach zaobserwowano, że komórki T CD4 plus można różnicować w podtyp o niejasnych lub kontrowersyjnych funkcjach, taki jak komórki Th17 [156, 157]. Badania, w których analizowano raka szyjki macicy jako całość, wykazały, że obecność komórek Th17 wiąże się z dobrym rokowaniem [158]. Jednak analizy obejmujące tylko ADC wykazały, że przewaga komórek Th17 indukuje progresję nowotworu [159]. Ostatnio w raku szyjki macicy stwierdzono większą liczbę komórek T PU.1 plus w porównaniu z prawidłową tkanką szyjki macicy, ale ich funkcja jest nadal nieznana [160]. Do tej pory, kiedy modele in vivo były stosowane z myszami CH3, wykazano, że komórki te skutecznie hamują wzrost raka płaskonabłonkowego jamy ustnej i indukują apoptozę poprzez stymulację produkcji IL -9 w komórkach nowotworowych [ 161]. Jednak nadal konieczne jest wyjaśnienie ich funkcji w raku szyjki macicy.

Wśród innych badanych mechanizmów związanych z zabijaniem komórek nowotworowych jest metabolizm reaktywnych form tlenu. Tak więc w SCC istnieją dowody na regulację w górę genów podwójnej oksygenazy 1 (DUOX1), podwójnej oksygenazy 2 (DUOX2) i oksydazy NADPH 2 (NOX2). Stwierdzono związek ze wzrostem przeżycia wolnego od choroby, prawdopodobnie poprzez mechanizmy obejmujące wytwarzanie interferonu gamma (IFN-), interferonu alfa (IFN-) i aktywację szlaków sygnałowych komórek NK [162]. Tabela 1 pokazuje każdy krok CIC i ich zmiany dla rozregulowanych celów w raku szyjki macicy.

3. Immunoterapie ukierunkowane na CIC w raku szyjki macicy

3.1. Szczepionki DNA

Na podstawie zmian stwierdzonych w uwalnianiu antygenów (faza 1) przeprowadzono badania alternatywnych metod wprowadzania różnych cząsteczek, które mogą aktywować odpowiedź immunologiczną. Wśród nich są terapeutyczne szczepionki oparte na epitopach; jednak niemożność wytworzenia przez małe peptydy silnej odpowiedzi immunologicznej stanowi wyzwanie dla rozwoju tego typu szczepionek [163]. Stąd w niektórych badaniach stosowano epitopy E6 i E7 HPV związane z adiuwantami, ale wyniki są jeszcze na etapie wstępnym [164]. Udokumentowano, że immunizacja genetyczna jest skuteczną strategią wywoływania odporności humoralnej i komórkowej w wielu modelach zwierzęcych [165,166]. Jednak niektóre badania wykazują niską immunogenność, co można wytłumaczyć wprowadzeniem materiału genetycznego do niespecyficznych komórek oraz jego niezdolnością do replikacji lub rozprzestrzeniania się przez sąsiednie komórki in vivo [167, 168]. W związku z tym istnieje wiele badań naukowych, które mają na celu wzmocnienie terapeutycznych szczepionek DNA, takich jak optymalizacja systemów dostarczania DNA do komórek, za pomocą środków fizycznych (elektroporacja, biobalistyka, tatuaż itp.) peptydy itp.) [169–175]. Podejmowano próby poprawy samej sekwencji genów: adaptacji kodonów do ekspresji u ssaków [176]; fuzja z innymi białkami faworyzującymi obecny antygen szczepionkowy [177-179]; oraz włączenie cząsteczek kostymulujących, takich jak cytokiny i chemokiny [180-182]. Jednak wyniki tych szczepionek są nadal niewystarczające, aby można je było stosować jako leczenie i pozostają one w fazie badań przedklinicznych [171].

3.2. Szczepionki oparte na DC

W wyniku zidentyfikowanych zmian w prezentacji antygenu (etap 2 i 3), szczepionki terapeutyczne z użyciem DC stały się w ostatnich latach obiecującą opcją leczenia [183]. Wykorzystanie DC do opracowania terapeutycznych szczepionek przeciwko rakowi opiera się na ich zdolności do prezentowania antygenów i indukowania skutecznej odpowiedzi immunologicznej poprzez priming oraz stymulację proliferacji i aktywacji limfocytów T [184]. Obecnie eksperymenty z terapeutycznymi szczepionkami przeciwnowotworowymi opartymi na DC obejmują ich ekspozycję na antygeny HPV, inne rodzaje białek antygenowych, peptydów lub lizatów nowotworowych ex vivo, infekcję lub transfekcję DC DNA lub RNA kodującym antygeny HPV, a następnie dostarczanie DC pacjentom [183,185–187]. Niektóre badania wykazały skuteczność w leczeniu raka szyjki macicy w stadiach przedklinicznych.

Na przykład DC pulsowane białkiem fuzyjnym, utworzonym przez funkcjonalny peptyd białka szoku termicznego Mycobacterium tuberculosis (MTBHsp70) połączone z zewnątrzkomórkową domeną receptora peptydu formylowego 1 (FPR1), wykazało rosnące dojrzewanie DC, jak również zdolność do zwiększania produkcji IL-12p70, IL-1, TNF i wzmacniania cytotoksycznych efektów cytotoksycznych komórek T (CTL) u myszy [187]. W rzeczywistości w niedawnym badaniu egzosomy pochodzące z DC obciążone peptydem E7 i poli (I: C) zostały użyte w modelach in vitro i in vivo, które indukowały wytwarzanie i proliferację cytotoksycznych komórek T CD8 plus wraz z wzrost wydzielania IL-2 i IFN- oraz zmniejszenie uwalniania IL-10 [186]. Ponadto badania in vitro z użyciem kombinacji biologicznej RIX-2 (składającej się z: IL-1 , IL-2, IL-6, IL-8, TNF , GM-CSF i IFN ) w komórkach LC wykazały regulację w górę markerów dojrzewania, podwyższoną produkcję IL-12p70, CXCL10 i CCL2, zwiększoną ekspresję CCR7 i migrację komórek, jak również zwiększoną proliferację i aktywację cytotoksycznych limfocytów T CD8 plus [188]. Jednak należy wyjaśnić szereg poważnych kwestii, aby zwiększyć skuteczność tych szczepionek oraz poprawić infiltrację i retencję efektorowych komórek T, w tym identyfikację receptorów błonowych i aktywatorów DC oraz określenie, które konkretne podtypy DC mogą brać udział w tym procesie w celu skutecznej stymulacji i aktywacji limfocytów T [189].

3.3. Szczepionki oparte na komórkach T

Zmiany obserwowane w krokach od 4 do 7 CIC dały początek strategiom terapeutycznym, które koncentrują się na poprawie funkcji komórek T. Tak więc istnieją dowody na to, że limfocyty T CD4 plus i CD8 plus specyficzne dla epitopu E6 i E7 HPV można wytwarzać in vitro, stosując limfocyty wyekstrahowane z węzłów chłonnych pacjentów z rakiem szyjki macicy [190]. Ponadto badania kliniczne fazy II u pacjentek z rakiem szyjki macicy z przerzutami, z zastosowaniem infuzji limfocytów T traktowanych ex vivo i wybranych jako reaktywne wobec E6 i E7; zaobserwowano w niektórych przypadkach całkowitą lub częściową regresję raka [191]. Jednak obecnie odnotowano skuteczność około 30% wraz z rozwojem oporności terapeutycznej [191-193]. Ponadto zmienną odpowiedź na tę formę leczenia można wytłumaczyć zarówno indywidualną zmiennością genetyczną, jak i heterogenicznością komórek nowotworowych. Na potwierdzenie tego zaobserwowano mutacje w receptorach interferonu gamma 1 i HLAA [194]. Ponadto istnieją dowody na to, że reaktywność limfocytów T wobec guzów raka szyjki macicy zakażonych HPV{19}} różni się od reaktywności obserwowanej w nowotworach zakażonych HPV{20}} [195]. Tak więc, zanim będzie można go zastosować w celu poprawy skuteczności tego leczenia, zaprojektowanie tego typu terapii wymaga bardziej dogłębnych badań genetyki każdego osobnika i charakterystyki guza przed podaniem leczenia ex vivo pacjentowi. limfocyty T.

3.4. Terapie oparte na niekodującym RNA

Badania nad opornością na immunoterapię wykazały, że niekodujące RNA mogą modulować te procesy [196]. Wśród mikroRNA badanych w raku szyjki macicy stwierdzono, że ekspresję PD-L1 można obniżyć poprzez stymulację miR140/142/340/383 i supresję miR-18a [197]. Strategia ta ma wielką wartość, ponieważ zastosowanie przeciwciał anty-PD-1/PD-L1 w badaniach klinicznych I i II fazy w raku szyjki macicy wykazało niską skuteczność i oporność na leczenie [198, 199]. Inne badanie wykazało, że podawanie miR-34a i sPD-1 przy użyciu podskórnych kationowych mikropęcherzyków lipidowych u myszy prowadziło do zwiększonej produkcji IFN- związanej ze zwiększoną przeciwnowotworową odpowiedzią immunologiczną [200]. Niedawno inne przedkliniczne badania raka szyjki macicy zalecały indukowanie ekspresji E-kadheryny poprzez stymulację ekspresji miR-185-5p [201], przy użyciu miR-126 do indukcji cytotoksyczności, w której pośredniczą TNF- i FasL [ 202] oraz przy użyciu lncRNA HOX (HOTAIR — długi niekodujący RNA HOX transkrypt antysensowny), który działa kompetycyjnie wobec miR-148a i wykazał zdolność do udziału w regulacji ekspresji HLA-G [203]. Dowody sugerują jednak, że nadal konieczne jest ulepszenie tych strategii.

3.5. Edycja genów CRISPR/Cas9

Nowym narzędziem do eliminacji ekspresji onkoprotein HPV, E6 i E7, jest narzędzie do edycji genów CRISPR/Cas9. Inturi i Jemth [204] wykazali, że nokaut tych onkoprotein przez CRISPR/Cas9 umożliwił przywrócenie szlaków sygnałowych p53/p21 i pRb/p21, co indukowało starzenie się tych komórek. W odniesieniu do zdolności systemu CRISPR/Cas do hamowania wzrostu komórek guza szyjki macicy u nagich myszy zaobserwowano, że objętość guza była znacznie mniejsza u myszy, które przeszły cięcie mRNA E6/E7 przez system CRISPR/Cas niż w przypadku grupa kontrolna [205,206]. Inne badanie wykazało, że przerwanie onkogenów HPV przez CRISPR/Cas9 w HPV-dodatnim raku płaskonabłonkowym jamy ustnej i gardła (OPSCC) skutkuje przywróceniem szlaku cGAS-STING. Wynik ten dostarcza nowych informacji na temat leczenia wymaganego do zwalczania infekcji HPV, jak również raka szyjki macicy, ponieważ STING został uznany za potencjalny nowy cel immunoterapeutyczny w raku szyjki macicy [207, 208].

W niedawnym badaniu, w którym wykorzystano humanizowane myszy SCID z ksenoprzeszczepem komórek SiHa, blokowanie szlaku PD-1 przez CRISPR/Cas9 analizowano razem z nokautem onkogenów HPV. Wyniki wykazały, że funkcja limfocytów została przywrócona wraz ze zwiększoną liczbą limfocytów T CD8 plus i CD4 plus, jak również komórek dendrytycznych [209]. Dodatkowo badanie przeprowadzone przez Zhen i wsp. [210] wykazało, że dostarczenie liposomów CRISPR/cas9 in vivo może wyeliminować HPV, co skutkuje zwiększoną liczbą limfocytów T CD8 i ekspresją cytokin prozapalnych. Zaobserwowano również zmniejszenie liczby limfocytów T reg i mieloidalnych komórek supresorowych.

Innowacyjne formy dostarczania systemu CRISPR/Cas stanowią ogromny postęp, ponieważ umożliwiają przyjęcie nowych podejść klinicznych do leczenia HPV i raka szyjki macicy, a jego skuteczność została wykazana wybitnie zarówno in vivo, jak i in vitro. Dostarczenie składników CRISPR/Cas, wstrzykniętych do guza, wykazało zauważalne zmniejszenie tempa wzrostu guza i nowotworu, a także zachowanie sąsiednich struktur i zapewnienie, że technologia ma dobre warunki bezpieczeństwa dla normalnych komórek. Ogólnoustrojowe dostarczanie CRISPR/Cas zostało również odnotowane w literaturze i otworzyło nowe i potencjalne zastosowania terapeutyczne, które nie są ograniczone do miejsca aplikacji [211].

4. Konkluzje

Na podstawie wyników wspomnianych powyżej badań wyraźnie widać, że badanie przeciwnowotworowej odpowiedzi immunologicznej wiąże się z dużym stopniem złożoności, ponieważ istnieje kilka odchyleń we wszystkich fazach komórkowej adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej przeciwko rakowi szyjki macicy [212]. Podobnie cytotoksyczne limfocyty T CD8 plus odgrywają kluczową rolę w niszczeniu komórek nowotworowych. Jednak dowody sugerują, że same te czynniki nie wystarczą do uzyskania skutecznej przeciwnowotworowej odpowiedzi immunologicznej. Dlatego konieczne jest zbadanie badania w połączeniu z innymi typami komórek zaangażowanych w CIC. Na przykład funkcje różnych podtypów APC mogą wpływać zarówno na pobudzanie i aktywację komórek T, jak i na ich zdolność migracyjną i efektorową. Należy również wziąć pod uwagę immunosupresyjną funkcję komórek Treg, ponieważ istnieje stała i dynamiczna interakcja między różnymi typami komórek odpornościowych i komórek nowotworowych. Ponadto, ponieważ wiele badań prowadzi analizę raka szyjki macicy w sposób holistyczny, istnieją pewne sprzeczne wyniki między podtypami raka szyjki macicy, takimi jak ADC i SCC. Dlatego rozdzielenie badań według ich podtypu histologicznego mogłoby pomóc w skuteczniejszym wyjaśnieniu mechanizmów zaangażowanych w odpowiedź immunologiczną.

Obecnie strategie przyjęte w celu zwalczania tych zmian nie są wystarczająco skuteczne i tylko niewielka grupa pacjentów odniosła korzyści [196, 213]. Może to wynikać z faktu, że większość zidentyfikowanych celów terapeutycznych była wynikiem analiz redukcjonistycznych, które znacząco przyczyniły się do lepszego zrozumienia mechanizmów odpowiedzi immunologicznej. Niemniej jednak odpowiedź immunologiczna jest wysoce zintegrowana i wymaga terapii, które docierają do wielu celów, jednocześnie zapobiegając powstawaniu oporności na leczenie przez mechanizmy kompensacyjne. Podobnie przyszłe podejścia terapeutyczne powinny mieć bardziej spersonalizowany pogląd. Na przykład należy dalej badać różnice w odpowiedzi immunologicznej na raka szyjki macicy spowodowane zmiennymi, takimi jak podtypy histologiczne, szczepy HPV, wiek i stadium kliniczne.

Autorskie Wkłady:

Konceptualizacja, WZP i ECC; wyszukiwanie literatury, WZP i ECC; pisanie — przygotowanie pierwotnego projektu, WZP; pisanie — recenzja i redakcja, BMC i ECC; nadzór, ECC i BMC Wszyscy autorzy przeczytali i zaakceptowali opublikowaną wersję manuskryptu.

Finansowanie:

Badanie to zostało częściowo sfinansowane przez Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior – Brasil (CAPES) – Finance Code 001.

Konflikt interesów:

Autorzy oświadczają, że nie mają sprzecznych interesów.

Bibliografia

Śpiewane, H.; Ferlay, J.; Siegel, RL; Laversanne, M.; Soerjomataram, I.; Jemal, A.; Bray, F. Global Cancer Statistics 2020: Szacunki GLOBOCAN dotyczące zachorowalności i śmiertelności na całym świecie dla 36 nowotworów w 185 krajach. CA Rak J. Clin. 2021, 71, 209–249. [Odnośnik]

2. Stelzle, D.; Tanaka, LF; Lee, KK; Ibrahim Khalil, A.; Baussano, I.; Szach, ASV; McAllister, DA; Gottlieb, SL; Klug, SJ; Winkler AS; i in. Szacunki globalnego obciążenia rakiem szyjki macicy związanym z HIV. Lancet Glob. Zdrowie 2021, 9, e161–e169. [Odnośnik]

3. Bhatla, N.; Aoki, D.; Sharma, DN; Sankaranarayanan, R. Rak szyjki macicy: aktualizacja z 2021 r. Int. J. Gynecol. Obstet. 2021, 155 (Suplement S1), 28–44. [Odnośnik]

4. Wiemann, B.; Starnes, CO Toksyny Coleya, czynnik martwicy nowotworów i badania nad rakiem: perspektywa historyczna. Farmakol. Ter. 1994, 64, 529-564. [CrossRef] [PubMed]

5. McCarthy, EF Toksyny Williama B. Coleya i leczenie mięsaków kości i tkanek miękkich. Iowa Orthop. J. 2006, 26, 154–158.

6. Guo, ZS Nagroda Nobla z medycyny 2018 trafia do immunoterapii nowotworów. Rak BMC 2018, 18, 1086. [Odsyłacz]

7. Pionierzy immunoterapii raka zdobywają nagrodę Nobla w dziedzinie medycyny. Dostępne online: https://www.science.org/content/article/cancerimmunotherapy-pioneers-win-medicine-nobel (dostęp: 16 grudnia 2022 r.).

8. Farhood, B.; Najafi, M.; Mortezaee, K. CD8 plus cytotoksyczne limfocyty T w immunoterapii raka: przegląd. J. Komórka. Fizjol. 2019, 234, 8509–8521. [CrossRef] [PubMed]

9. Maskey, N.; Maskey, N.; Thapa, N.; Thapa, N.; Maharjan, M.; Maharjan, M.; Shrestha, G.; Shrestha, G.; Maharjan, N.; Maharjan, N.; i in. Infiltracja limfocytów CD4 i CD8 w środowisku szyjki macicy zakażonej HPV. Zarządzanie rakiem. Rez. 2019, 11, 7647–7655. [CrossRef] [PubMed]

10. Borst, J.; Ahrends, T.; Bąbała, N.; Melief, CJM; Kastenmüller, W. CD4 plus pomoc limfocytów T w immunologii raka i immunoterapii. Nat. Wielebny Immunol. 2018, 18, 635–647. [Odnośnik]

11. Najafi, M.; Farhood, B.; Mortezaee, K. Wkład regulatorowych komórek T w raka: przegląd. J. Komórka. Fizjol. 2018, 234, 7983–7993. [Odnośnik]

12. Moynihan, KD; Irvine, DJ Role dla odporności wrodzonej w kombinowanych immunoterapiach. Rak Res. 2017, 77, 5215–5221. [CrossRef] [PubMed]

13. DeMaria, O.; Cornen S.; Daëron, M.; Morel, Y.; Miedżitow, R.; Vivier, E. Wykorzystanie wrodzonej odporności w terapii raka. Przyroda 2019, 574, 45–56. [CrossRef] [PubMed]

14. Kametani, Y.; Miyamoto, A.; Seki, T.; Ito, R.; Habu, S.; Tokuda, Y. Znaczenie humanizowanych modeli myszy do oceny humoralnej odpowiedzi immunologicznej na szczepionki przeciwnowotworowe. os. Med. Uniw. 2018, 7, 13–18. [Odnośnik]

15. Varn, FS; Mullins, DW; Arias-Pulido, H.; Wypalanie, S .; Cheng, C. Programy odporności adaptacyjnej w raku piersi. Immunologia 2016, 150, 25–34. [Odnośnik]

For more information:1950477648nn@gmail.com