4.6. Substancje reagujące z kwasem tiobarbiturowym (TBAR)

Zawartość TBARs wykorzystano jako wskaźnik lipoperoksydacji. Do tkanki mózgowej dodano 50 mM bufor fosforanowy (pH 7,4) do stężenia 25 mg/ml (wag./obj.) i zawiesinę homogenizowano przez sonikację przez 10 sekund. Do 30 µl homogenatu dodano 250 µl 1% kwasu fosforowego i 75 µl 0,6% kwasu tiobarbiturowego (TBA). Mieszaninę odczynników inkubowano w 100 ◦C w łaźni wodnej przez 45 min, po czym schłodzono w łaźni lodowej, a następnie wirowano przy 3000 x g przez 10 min w 4 ◦C. Z każdej próbki pobrano objętość 150 µl supernatantu. Fluorescencję mierzono stosując czytnik mikropłytek FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ortenberg, Badenia-Wirtembergia, Niemcy) z filtrem wzbudzenia ustawionym na 485 nm (szerokość pasma 5 nm) i filtrem emisji ustawionym na 530 nm (szerokość pasma 5 nm). Krzywą kalibracyjną sporządzono stosując dialdehyd malonowy (MDA) jako wzorzec. Wyniki wyrażono w pmolach MDA/mg białka.

Glikozyd cistanche może również zwiększać aktywność SOD w tkankach serca i wątroby oraz znacznie zmniejszać zawartość lipofuscyny i MDA w każdej tkance, skutecznie wymiatając różne reaktywne rodniki tlenowe (OH-, H₂O₂, itp.) i chroniąc przed uszkodzeniem DNA spowodowanym przez rodniki OH. Glikozydy fenyloetanoidowe Cistanche mają silne zdolności wymiatania wolnych rodników, wyższą zdolność redukującą niż witamina C, poprawiają aktywność SOD w zawiesinie plemników, zmniejszają zawartość MDA oraz mają pewien wpływ ochronny na funkcję błony plemników. Polisacharydy Cistanche mogą zwiększać aktywność SOD i GSH-Px w erytrocytach i tkankach płuc eksperymentalnie starzejących się myszy wywołaną przez D-galaktozę, a także zmniejszać zawartość MDA i kolagenu w płucach i osoczu oraz zwiększać zawartość elastyny, mają dobry efekt zmiatania DPPH, przedłuża czas niedotlenienia u starzejących się myszy, poprawia aktywność SOD w surowicy i opóźnia fizjologiczną degenerację płuc u doświadczalnie starzejących się myszy Eksperymenty z degeneracją morfologiczną komórek wykazały, że Cistanche ma dobrą zdolność przeciwutleniającą i ma potencjał, aby być lekiem do zapobiegania i leczenia chorób związanych ze starzeniem się skóry. Jednocześnie echinakozyd w Cistanche ma znaczną zdolność wychwytywania wolnych rodników DPPH i ma zdolność wychwytywania reaktywnych form tlenu i zapobiegania degradacji kolagenu wywołanej przez wolne rodniki, a także ma dobry wpływ naprawczy na uszkodzenia anionowe wolnych rodników tyminy.

Kliknij Gdzie mogę kupić Cistanche

【Więcej informacji:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

4.7. Aktywność enzymatyczna głównych enzymów przeciwutleniających

W celu określenia aktywności enzymatycznej w tkance mózgowej, bufor do lizy zawierający 50 mM bufor fosforanowy (pH 7,4) i antyproteazy (1 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 g/ml pepstatyny i 1 g/ml leupeptyny) dodawano do stężenie 50 mg/ml (wag./obj.). Następnie zawiesinę poddawano działaniu ultradźwięków przez 30 s w łaźni lodowej, a homogenat wirowano przy 10, 000 x g przez 15 min w 4°C. Zebrano supernatanty w celu określenia aktywności enzymatycznej enzymów przeciwutleniających.

Aktywność dysmutazy ponadtlenkowej (SOD) mierzono śledząc hamowanie autoutleniania pirogalolu przy 420 nm [69]. Jedna jednostka enzymu została zdefiniowana jako ilość enzymu wymagana do zahamowania szybkości samoutleniania pirogalolu o 50 procent. Aktywność enzymatyczną SOD wyrażono jako jednostki międzynarodowe (IU)/mg białka. Aktywność katalazy (CAT) mierzono w supernatantach traktowanych Tritonem-X-100 (1 procent, obj./obj.), śledząc zanik nadtlenku wodoru (H2O2) przy długości fali 240 nm [70], a aktywność enzymu podano jako substrat ( µmol H2O2) przekształcony/min · mg białka. Całkowitą peroksydazę glutationową (GPx) oznaczano po utlenieniu NADPH przy 340 nm w obecności nadmiaru GR, GSH i wodoronadtlenku kumenu [71]. Aktywność GPx wyrażono jako transformowany substrat (nmol NADPH/min mg białka). Aktywność reduktazy glutationowej (GR) analizowano po utlenieniu NADPH przy 340 nm w obecności GSSG [72] i wyrażano jako substrat (nmol NADPH) transformowany/min · mg białka. Aktywności GR i obu GPx skorygowano pod kątem spontanicznej reakcji przy braku próbek biologicznych (przy braku enzymu).

4.8. Test aktywności BACE1

Protokół testu BACE1 polega na wykorzystaniu swoistego dla sekretazy substratu (peptydu), który jest sprzężony z dwiema cząsteczkami reporterowymi, tj. EDANS i DABCYL, co skutkuje uwolnieniem sygnału fluorescencyjnego [73,74]. Aktywność BACE1 mierzono zarówno w lizatach kory, jak i hipokampa. Reakcję prowadzono w temperaturze 37°C przez 1 godzinę stosując 10 µM substratu w 50 mM buforze octanu sodu (pH 4,5). Pomiary intensywności fluorescencji wykonano przy użyciu czytnika mikropłytek FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ortenberg, Badenia-Wirtembergia, Niemcy) z filtrem wzbudzenia ustawionym na 360 nm (szerokość pasma 5 nm) i filtrem emisji ustawionym na 530 nm (szerokość pasma 5 nm). Poziom aktywności enzymatycznej sekretazy jest proporcjonalny do reakcji fluorometrycznej, a dane wyrażono jako x-krotny wzrost fluorescencji w stosunku do kontroli tła (reakcje bez substratu lub tkanki). Aktywność BACE1 normalizowano ze stężeniem białka. Aktywność BACE1 myszy traktowanych kwercetyną lub rutyną wyrażono jako procent aktywności myszy kontrolnych TgAPP.

4.9. Ekspresja genu RT-PCR głównych enzymów przeciwutleniających, APP, BACE1, ADAM10, kaspazy-3 i kaspazy-6 oraz cytokin zapalnych

4.9.1. Ekstrakcja i oczyszczanie całkowitego RNA

Przeanalizowaliśmy różne obszary mózgu, a mianowicie korę i hipokamp, ​​przechowywane w temperaturze -80 ◦C. Do znanej ilości tkanki mózgowej dodano bufor do lizy Triomol® w stosunku 1:10 (wag./obj.). Próbki homogenizowano przez 30 s przy użyciu silnika Cordless (Pellet pestle, Sigma-Aldrich) i inkubowano przez 5 minut w temperaturze 25°C, aby umożliwić całkowitą dysocjację kompleksów nukleoproteinowych. Następnie dodano 0,2 ml chloroformu na każdy ml użytego buforu do lizy Triomol®. Probówki energicznie wytrząsano przez 15 si inkubowano w temperaturze 25°C przez 3 min. Następnie wirowano je przy 11,000× g przez 15 min w 4°C. Po odwirowaniu otrzymano trzy fazy, z RNA w górnej fazie.

Aby wyizolować RNA, górną fazę przeniesiono do innej probówki i wytrącono dodając 0,5 ml izopropanolu. Po dokładnym wymieszaniu izopropanolu i roztworu wodnego przez odwrócenie, mieszaninę inkubowano w temperaturze pokojowej przez 10 minut w celu ułatwienia wytrącania i wirowano przy 12, 000 x g przez 10 minut w temperaturze 4°C. Supernatanty usunięto, osady przemyto 75% etanolem i odwirowano przy 7500 x g przez 5 minut w temperaturze 4°C. Osady wysuszono w temperaturze pokojowej i rozpuszczono w 50 ul wody potraktowanej DEPC. Aby usunąć ślady DNA, dodano 2,5 µl DNazy (wolnej od RNazy) i inkubowano w temperaturze 37°C przez 30 min. Na koniec próbki inkubowano w temperaturze 64 ◦C przez 5 minut w celu inaktywacji DNazy.

Następnie mierzono stężenia RNA w spektrofotometrze UV-VIS (BMG LABTECH, Ortenberg, Badenia-Wirtembergia, Niemcy) przy 260 nm i oceniano czystość biorąc pod uwagę stosunek absorbancji przy 260 i 280 nm (A260/A280).

Oznaczenie integralności i czystości RNA przeprowadzono za pomocą elektroforezy w 1% żelu agarozowym wybarwionym GelRed i wizualizowano w świetle UV, gdzie, jeśli RNA było nienaruszone, dwa górne prążki odpowiadające rybosomalnemu RNA (28S i 18S) i dwa dolne prążki należało zaobserwować transfer RNA (tRNA) i rybosomalny RNA 5S.

4.9.2. Synteza komplementarnego DNA (cDNA).

cDNA jest znacznie bardziej stabilny niż RNA i dlatego pozwala na wygodniejsze i bezpieczniejsze obchodzenie się z próbkami. cDNA zsyntetyzowano z mRNA przez retrotranskrypcję przy użyciu zestawu First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-qPCR (Fermentas Life Sciences).

Aby przeprowadzić retrotranskrypcję do syntezy cDNA na 2 µg RNA, dodano 11 µl wody potraktowanej DEPC i 1 µl 10X Random starterów. Następnie mieszaninę inkubowano w temperaturze 65°C przez 10 min w celu denaturacji RNA. Po tym czasie probówki natychmiast przeniesiono do 4°C na 5 min, aby uniknąć renaturacji RNA. Mieszankę odczynników do syntezy cDNA pokazano w tabeli S1 (dane uzupełniające).

Do każdej próbki dodano osiem µl mieszaniny reakcyjnej. Całą objętość przeniesiono na dno probówek i inkubowano w temperaturze 42°C przez 60 min. Ostatecznie reakcję zatrzymano przez inaktywację odwrotnej transkryptazy poprzez ogrzewanie jej w temperaturze 70°C przez 10 min.

4.9.3. PCR w czasie rzeczywistym

Główną cechą PCR w czasie rzeczywistym jest to, że analiza produktów odbywa się podczas procesu amplifikacji poprzez oznaczenie fluorescencji. W ten sposób procesy amplifikacji i detekcji zachodzą jednocześnie w tej samej probówce lub fiolce, bez konieczności podejmowania dalszych działań. Do PCR w czasie rzeczywistym stosuje się termocyklery, które mogą jednocześnie wzmacniać i wykrywać fluorescencję. Wykorzystaliśmy termocykler czasu rzeczywistego LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Niemcy).

Tabela S2 (dane uzupełniające) zawiera listę odczynników wymaganych do PCR w czasie rzeczywistym, przy użyciu starterów specyficznych dla sekwencji i barwnika wiążącego DNA (SYBR Green I, Roche Molecular Systems, Inc., Rotkreuz, Szwajcaria) jako system wykrywania.

Do zaprojektowania starterów dla różnych oznaczonych ilościowo markerów zastosowano program bioinformatyczny Primer3Plus, dla którego pobraliśmy sekwencje cDNA interesujących genów z ogólnodostępnej bazy danych Medline. Startery dostarczyła firma Merck (Sigma-Aldrich). Temperaturę hybrydyzacji i sekwencję różnych zastosowanych starterów przedstawiono w tabeli S3 (dane uzupełniające).

Warunki reakcji dla amplifikacji genów będących przedmiotem zainteresowania przedstawiono w tabeli S4 (dane uzupełniające).

Na koniec próbki poddano programowi topnienia: 95 ◦C przez 15 s, 65 ◦C przez 3{5}} s i do 98 ◦C z szybkością 0,1 ◦C/s z ciągłą rejestracją fluorescencji.

Do kwantyfikacji poziomów cDNA zastosowano metodę porównania progu cyklu (Ct) [75], używając GADPH jako gospodyni. Amplifikację gospodyni przeprowadzono równolegle z analizowanym genem. Wartości Ct obliczono przy użyciu oprogramowania 4.{2}} dostarczonego przez firmę LightCycler (Roche Diagnostics, Mannheim, Niemcy). Oprogramowanie pozwala na rozróżnienie fluorescencji na podstawie amplifikacji próbki i tła. Rejestrowano również krzywe topnienia. Określenie temperatury topnienia amplifikowanego fragmentu pozwoliło na scharakteryzowanie zamplifikowanego produktu. Wielkość prążków sprawdzono na 1,5% żelu agarozowym.

Zmienność ekspresji badanego genu z traktowaniem kwercetyną lub rutyną wyrażano jako funkcję kontrolnego TgAPP (myszy bez traktowania) i normalizowania tej ekspresji z poziomami GADPH. Fałd zmian (2-∆∆Ct) reprezentuje liczbę modyfikacji genu będącego przedmiotem zainteresowania podczas szczególnego traktowania myszy kontrolnych.

4.10. Analizy statystyczne

Wszystkie testy przeprowadzono co najmniej w dwóch powtórzeniach iw trzech różnych eksperymentach. Otrzymane wyniki wyrażono jako średnią ± błąd standardowy. Jednokierunkową analizę wariancji (ANOVA) przeprowadzono po przetestowaniu danych i wykazaniu, że pasują one do rozkładu normalnego. Przeprowadzono testy post-hoc wielokrotnych porównań Newmana-Keulsa, badając średnie różnice między grupami. Wartości p < 0.{5}}5 uznano za znaczące. Do analiz statystycznych wykorzystano oprogramowanie SigmaPlot 11.0.

5. Wnioski

Nawyki żywieniowe i suplementacja mogą wpływać na stan redoks komórek. Na tej podstawie dążyliśmy do poprawy komórkowej homeostazy redoks w mysim modelu AD z dietą flawonoidową zawierającą kwercetynę lub rutynę w celu złagodzenia patologii amyloidu, biorąc pod uwagę wzajemne oddziaływanie między komórkowym statusem redoks a cechami amyloidu zależnymi od proteasomu w bezobjawowym AD. Nasze zbiory danych są istotne, ponieważ efekty flawonoidów wyświetlane w mysim modelu TgAPP są zgodne z tymi zgłoszonymi wcześniej w naszych modelach in vitro i ex vivo.

Podsumowując, nasze odkrycia pokazują, że rozpoczęcie leczenia dietą na etapie bezobjawowym lub na początku objawów podobnych do AD może przywrócić komórkowy status redoks i fizjologiczne przetwarzanie APP poprzez jednoczesną regulację ekspresji APP i aktywności BACE1.

Chociaż trudno jest ekstrapolować nasze odkrycia na kondycję człowieka, mogą one mieć szerokie implikacje dla reakcji człowieka na przyszłe terapie. Spośród dwóch flawonoidów, rutyna, z ogólnie bardziej widocznymi efektami in vivo, wydaje się najbardziej odpowiednia do włączenia do codziennej diety jako terapia wspomagająca w AD, oparta na zwiększeniu wewnątrzkomórkowej homeostazy redoks w mózgu.

Materiały uzupełniające:Poniższe informacje pomocnicze można pobrać ze strony internetowej. Literatura [76] jest cytowana w materiałach uzupełniających.

Autorskie Wkłady:PB-B. i SM-A. wpadł na pomysł i projekt eksperymentu, pomagał w eksperymentach, interpretował uzyskane wyniki i napisał manuskrypt. KLJ-A. przeprowadził eksperymenty, przeprowadził analizę danych i zinterpretował uzyskane wyniki. JB pomógł w analizie danych i rewizji manuskryptu. Wszystkie dane zostały wygenerowane we własnym zakresie i nie użyto żadnej papierni. Wszyscy autorzy zgadzają się ponosić odpowiedzialność za wszystkie aspekty pracy, zapewniając integralność i dokładność. Wszyscy autorzy przeczytali i zaakceptowali opublikowaną wersję manuskryptu.

Finansowanie:Badania te zostały sfinansowane przez Medical Research Foundation «Mutua Madrileña» (czwarta edycja grantów na medyczne projekty badawcze), hiszpańskie Ministerstwo Edukacji i Nauki (ref. AGL2008-04892-C{1}}) oraz Hiszpańskie Ministerstwo Nauki i Innowacji (Ref. CTQ2010-16170).

Oświadczenie Instytucjonalnej Komisji Rewizyjnej:Protokoły dotyczące zwierząt zostały zatwierdzone przez Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) na Uniwersytecie Complutense w Madrycie i były w pełni zgodne z dyrektywą europejską 2010/63/w sprawie ochrony zwierząt wykorzystywanych do celów naukowych oraz hiszpańskimi przepisami dotyczącymi dobrostanu zwierząt ( dekret królewski 53/2013, 1 lutego 2013 r.).

Oświadczenie o świadomej zgodzie:Nie dotyczy.

Oświadczenie o dostępności danych:Dane potwierdzające wyniki tego badania są dostępne u odpowiedniego autora na uzasadnione żądanie.

Podziękowanie:Dziękujemy Fundacji Folch za stypendium przeddoktoranckie dla KLJA.

Konflikt interesów:Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Skróty

AD, choroba Alzheimera; ADAM{0}}, białko zawierające domenę dezintegryny i metaloproteinazy 10; APP, białko prekursorowe amyloidu; APPswe, szwedzka mutacja białka prekursorowego amyloidu; A, amyloid-; BACE1, enzym rozszczepiający APP w miejscu 1; CAT, katalaza; GPx, peroksydaza glutationowa; GR, reduktaza glutationu; GSH, Zredukowany glutation; GSSG, utleniony glutation; SOD, dysmutaza ponadtlenkowa.

Bibliografia

1. Ebenau, JL; Pelkmans, W.; Verberk, IMW; Verfaillie, SCJ; van den Bosch, KA; van Leeuwenstijn, M.; Collij, LE; Scheltens, P.; Prins, Dakota Północna; Barkhof, F.; i in. Związek CSF, osocza i obrazowania markerów neurodegeneracji z postępem klinicznym u osób z subiektywnym spadkiem funkcji poznawczych. Neurology 2022, 98, e1315 – e1326. [CrossRef] [PubMed]

2. Dominguez, LJ; Veronese, N.; Vernuccio, L.; Catanese, G.; Inzerillo, F.; Salemi, G.; Barbagallo, M. Odżywianie, aktywność fizyczna i inne czynniki związane ze stylem życia w zapobieganiu spadkowi funkcji poznawczych i demencji. Składniki odżywcze 2021, 13, 4080. [Odsyłacz]

3. Tsarbopoulos, A. Choroba Alzheimera: badanie „skrzyni lekarskiej” natury w poszukiwaniu nowych środków terapeutycznych. Biomol. Pojęcia 2020, 11, 201–208. [CrossRef] [PubMed]

4. Ashe, KH; Zahs, KR Badanie biologii choroby Alzheimera u myszy. Neuron 2010, 66, 631–645. [CrossRef] [PubMed]

5. Zahs, KR; Ashe, KH „Zbyt wiele dobrych wiadomości” — czy modele myszy z chorobą Alzheimera próbują nam powiedzieć, jak zapobiegać, a nie leczyć chorobę Alzheimera? Trendy Neurosci. 2010, 33, 381–389. [Odnośnik]

6. Foley AM; Ammar, ZM; Lee, RH; Mitchell, CS Przegląd systematyczny związku między poziomami amyloidu a pomiarami deficytu poznawczego myszy transgenicznych w chorobie Alzheimera. Choroba J. Alzheimera. 2015, 44, 787–795. [Odnośnik]

7. Anand David, A.; Arulmoli, R.; Parasuraman, S. Przeglądy biologicznego znaczenia kwercetyny: bioaktywny flawonoid. Farmacja. Obj. 2016, 10, 84–89.

8. Habtemariam, S. Rutin jako naturalna terapia choroby Alzheimera: wgląd w jej mechanizmy działania. bież. Med. chemia 2016, 23, 860 –873. [Odnośnik]

9. Martín-Aragón, S.; Jiménez-Aliaga, K.; Benedi, J.; Bermejo-Bescós, P. Reakcje neurohormetyczne kwercetyny i rutyny w linii komórkowej z nadekspresją białka prekursorowego amyloidu (komórki APPswe). Fitomedycyna 2016, 23, 1285–1294. [Odnośnik]

10. Zhou, W.; Qing, H.; Tong, Y.; Song, ekspresja genu W. BACE1 i degradacja białek. Ann. NY Acad. nauka 2004, 1035, 49–67. [Odnośnik]

11. Gutbier, S.; Wiosna, AS; Delp, J.; Schildknecht, S.; Karreman, C.; Suciu, I.; Brunner, T.; Groettrup, M.; Leist, M. Zapobieganie apoptozie neuronów przez astrocyty poprzez modulację odpowiedzi na stres za pośrednictwem tiolu i przyspieszoną regenerację po stresie proteotoksycznym. Różnica śmierci komórki. 2018, 25, 101–117. [CrossRef] [PubMed]

12. Aoyama, K. Glutation w mózgu. Int. J. Mol. nauka 2021, 22, 5010. [CrossRef] [PubMed]

13. Scholey, A. Składniki odżywcze dla neurokognicji w zdrowiu i chorobie: środki, metodologie i mechanizmy. proc. Nutr. soc. 2018, 77, 73–83. [CrossRef] [PubMed]

14. Apelt, J.; Bigl, M.; Wunderlich, P.; Schliebsm, R. Związany ze starzeniem wzrost stresu oksydacyjnego koreluje ze wzorcem rozwojowym aktywności beta-sekretazy i tworzenia płytek beta-amyloidowych u transgenicznych myszy Tg2576 z patologią podobną do choroby Alzheimera. Int. J. Dev. Neuronauka. 2004, 22, 475–484. [CrossRef] [PubMed]

15. Howlett, DR; Richardson, JC Patologia myszy transgenicznych APP: model choroby Alzheimera czy po prostu nadekspresja APP? Histol. Histopatol. 2009, 24, 83–100. [PubMed]

16. Cencioni, C.; Spallotta, F.; Martelli, F.; Valente S.; Mai, A.; Zeiher AM; Gaetano, C. Stres oksydacyjny i regulacja epigenetyczna w starzeniu się i chorobach związanych z wiekiem. Int. J. Mol. nauka 2013, 14, 17643–17663. [Odnośnik]

17. Tsang, AH; Chung, KK Stres oksydacyjny i nitrozowy w chorobie Parkinsona. Biochim. Biofiza. Acta 2009, 1792, 643–650. [Odnośnik]

18. Mandal, PK; Saharan, S.; Tripathi, M.; Murari, G. Poziomy glutationu w mózgu — nowy biomarker łagodnych zaburzeń poznawczych i choroby Alzheimera. Biol. Psychiatria 2015, 78, 702–710. [Odnośnik]

19. Chen, JJ; Thiyagarajah, M.; Piosenka, J.; Chen, C.; Herrmann, N.; Gallagher, D.; Rapoport, MJ; Czarny, SE; Ramirez, J.; Andreazza, AC; i in. Zmieniony centralny i glutation we krwi w chorobie Alzheimera i łagodnych zaburzeniach poznawczych: metaanaliza. Choroba Alzheimera Res. Ter. 2022, 14, 23. [Odsyłacz]

20. Pocernich, CB; Butterfield, DA Podwyższenie poziomu glutationu jako strategia terapeutyczna w chorobie Alzheimera. Biochim. Biofiza. Acta (BBA)-mol. Podstawa Dis. 2012, 1822, 625–630. [Odnośnik]

21. Raza, A.; Xie, W.; Kim, KH; Dronamraju, VR; Williams, J.; Vince R.; Więcej, dipeptyd SS ψ-GSH hamuje stres oksydacyjny i zapalenie nerwów w mysim modelu choroby Alzheimera. Przeciwutleniacze 2022, 11, 1075. [CrossRef] [PubMed]

22. Yang, H.; Xie, Z.; Wei, L.; Ding, M.; Wang, P.; Bi, J. Mimetyk glutationu D609 łagodzi deficyty pamięci i zmniejsza odkładanie się amyloidu w transgenicznym modelu myszy A PP/PS1. Neuroreport 2018, 29, 833–838. [CrossRef] [PubMed]

23. Guerrero-Gómez, D.; Mora-Lorca, JA; Saenz-Narciso, B.; Naranjo-Galindo, FJ; Muñoz-Lobato, F.; Parrado-Fernández, C.; Goikolea, J.; Cedazo-Minguez, A.; Łącze, płyta CD; Neri, C.; i in. Utrata homeostazy redoks glutationu upośledza proteostazę poprzez hamowanie degradacji białek zależnej od autofagii. Różnica śmierci komórki. 2019, 26, 1545–1565. [CrossRef] [PubMed]

24. Lefaki, M.; Papaevgeniou, N.; Chondrogianni, N. Regulacja redoks funkcji proteasomu. Redoks Biol. 2017, 13, 452–458. [CrossRef] [PubMed]

25. Bonet-Costa, V.; Pomatto, LC; Davies, KJ Proteasom i stres oksydacyjny w chorobie Alzheimera. przeciwutleniacz. Sygnał redoks. 2016, 25, 886–901. [Odnośnik]

26. Belkacemi, A.; Ramassamy, C. Sekwencja czasowa stresu oksydacyjnego w mózgu z modeli transgenicznych myszy choroby Alzheimera związanych z kaskadą amyloidu. Wolny Radic. Biol. Med. 2012, 52, 593–600. [Odnośnik]

27. Tanigawa, S.; Fujii, M.; Hou, DX Działanie Nrf2 i Keap1 w ekspresji NQO1 za pośrednictwem ARE przez kwercetynę. Wolny Radic. Biol. Med. 2007, 42, 1690–1703. [Odnośnik]

28. Chondrogianni, N.; Kapeta S.; Chinou, I.; Vassilatou, K.; Papassideri, I.; Gonos, ES Przeciwstarzeniowe i odmładzające działanie kwercetyny. Do potęgi. Gerontol. 2010, 45, 763–771. [Odnośnik]

29. Bodendorf, U.; Danner S.; Fischer, F.; Stefani, M.; Sturchler-Pierrat, C.; Wiederhold, KH; Staufenbiel, M.; Paganetti, P. Ekspresja ludzkiej beta-sekretazy w mózgu myszy zwiększa poziom beta-amyloidu w stanie stacjonarnym. J. Neurochem. 2002, 80, 799–806. [Odnośnik]

30. Yamakawa, H.; Yagishita, S.; Futai, E.; Ishiura, S. moc inhibitora beta-sekretazy jest zmniejszona przez nieprawidłową lokalizację rozszczepienia beta „szwedzkiego zmutowanego” białka prekursorowego amyloidu. J. Biol. chemia 2010, 285, 1634–1642. [Odnośnik]

31. Keller, D.; Erö, C.; Markram, H. Gęstości komórek w mózgu myszy: przegląd systematyczny. Przód. Neuroanat. 2018, 12, 83. [CrossRef] [PubMed]

32. Mladenovic Djordjevic, AN; Kapetanou, M.; Loncarevic-Vasiljkovic, N.; Todorović S.; Athanasopoulou, S.; Jovic, M.; Prvulovic, M.; Taoufik, E.; Matsas, R.; Kanazir, S.; i in. Interwencja farmakologiczna w transgenicznym modelu myszy poprawia fenotyp patologiczny związany z chorobą Alzheimera: udział aktywacji proteasomu. Wolny Radic. Biol. Med. 2021, 162, 88–103. [CrossRef] [PubMed]

33. Tamagno, E.; Bardini, P.; Guglielmotto, M.; Danni, O.; Tabaton, M. Różne stany agregacji beta-amyloidu 1-42 pośredniczą w różnym wpływie na stres oksydacyjny, neurodegenerację i ekspresję BACE-1. Wolny Radic. Biol. Med. 2006, 41, 202–212. [CrossRef] [PubMed]

34. Jorissen, E.; Prox, J.; Bernreuther, C.; Weber, S.; Schwanbeck, R.; Serneels, L.; Snellinx, A.; Craessaerts, K.; Thathiah, A.; Tesseur, I.; i in. Dezintegryna/metaloproteinaza ADAM10 jest niezbędna do powstania kory mózgowej. J. Neurosci. 2010, 30, 4833–4844. [Odnośnik]

35. Kuhn, PH; Wang, H.; Dislich, B.; Colombo, A.; Zeitschel, U.; Elwart, JW; Kremmer, E.; Rossner, S.; Lichtenthaler, SF ADAM10 jest fizjologicznie istotną, konstytutywną -sekretazą białka prekursorowego amyloidu w neuronach pierwotnych. EMBO J. 2010, 29, 3020–3032. [Odnośnik]

36. Postina, R.; Schroeder, A.; Dewachter, I.; Bohl, J.; Schmitt, U.; Kojro, E.; Prinzen, C.; Endres, K.; Hiemke, C.; Błogosławieństwo, M.; i in. Dezintegryna-metaloproteinaza zapobiega tworzeniu się płytki amyloidowej i defektom hipokampa w mysim modelu choroby Alzheimera. J. Clin. badać. 2004, 113, 1456–1464. [Odnośnik]

37. Elfiky, AM; Mahmud, AA; Elreedy, Ha; Ibrahim, KS; Ghazy, MA Kwercetyna stymuluje szlak nieamyloidogenny poprzez aktywację ekspresji genów ADAM10 i ADAM17 w szczurzym modelu choroby Alzheimera wywołanej chlorkiem glinu. Nauka o życiu. 2021, 285, 119964. [Odsyłacz]

38. Copanaki, E.; Chang, S.; Vlachos, A.; Tschape, JA; Müller, UC; Kögel, D.; Deller, T. sAPPalpha przeciwdziała degeneracji dendrytycznej i śmierci neuronów wywołanej stresem proteasomalnym. Mol. Neuronauka o komórkach. 2010, 44, 386–393. [Odnośnik]

39. Renziehausen, J.; Hiebel, C.; Nagel, H.; Kundu, A.; Kins, S.; Kogel, D.; Behl, C.; Hajieva, P. Produkt rozszczepienia prekursora białka beta amyloidu sAbetaPPalpha moduluje zależne od BAG{2}} tworzenie agresomów i wzmacnia komórkową aktywność proteasomów. Choroba J. Alzheimera. 2015, 44, 879–896. [Odnośnik]

40. Livingstone, RW; Starszy MK; Singh, A.; Westlake, CM; Tate, WP; Abraham, WC; Williams, JM Sekretne białko prekursorowe amyloidu-alfa wzmacnia LTP poprzez syntezę i handel przepuszczalnymi receptorami AMPA Ca2 plus. Przód. Mol. Neuronauka. 2021, 14, 660208. [Odsyłacz]

41. Crawford, HC; Dempsey, PJ; Brązowy, G.; Adam L.; Moss, ML ADAM10 jako cel terapeutyczny dla raka i stanów zapalnych. bież. Farmacja. Des. 2009, 15, 2288–2299. [CrossRef] [PubMed]

42. Saftig, P.; Lichtenthaler, SF Sekretaza alfa ADAM10: Metaloproteaza o wielu funkcjach w mózgu. Wałówka. neurobiol. 2015, 135, 1–20. [CrossRef] [PubMed]

43. Borreca, A.; Gironi, K.; Amadoro, G.; Ammassari-Teule, M. Opposite Dysregulation of Fragile-X Mental Retardation Protein and Heteronuclear Ribonucleoprotein C Protein Associates with Enhanced APP Translation in Alzheimer disease. Mol. neurobiol. 2016, 53, 3227–3234. [CrossRef] [PubMed]

44. Augustyn S.; Rimbach, G.; Augustyn K.; Schliebs, R.; Wolffram S.; Cermak, R. Wpływ krótko- i długoterminowego leczenia ekstraktem z Ginkgo biloba na poziomy białka prekursorowego amyloidu w transgenicznym modelu myszy istotnym dla choroby Alzheimera. Łuk. Biochem. Biofiza. 2009, 481, 177–182. [CrossRef] [PubMed]

45. Borreca, A.; Walerij F.; De Luca, M.; Ernst L.; Russo, A.; Nobili, A.; Cordella, A.; Corsetti, V.; Amadoro, G.; Mercuri, NB; i in. Przejściowa regulacja w górę wydajności translacji u myszy Tg2576 z objawami prodromalnymi i wczesnymi objawami przyczynia się do patologii A. neurobiol. Dis. 2020, 139, 104787. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​D'Amelio, M.; Sheng, M.; Cecconi, F. Caspase-3 w ośrodkowym układzie nerwowym: Poza apoptozą. Trendy Neurosci. 2012, 35, 700–709. [Odnośnik]

47. Ertürk, A.; Wang, Y.; Sheng, M. Lokalne przycinanie dendrytów i kolców przez mechanizmy zależne od kaspazy -3- i ograniczone do proteasomów. J. Neurosci. 2014, 34, 1672–1688. [Odnośnik]

48. D'Amelio, M.; Cavallucci, V.; Middei, S.; Marchetti, C.; Pacioni S.; Ferri, A.; Diamantini, A.; De Zio, D.; Carrara, P.; Battistini, L.; i in. Kaspaza-3 wyzwala wczesną dysfunkcję synaptyczną w mysim modelu choroby Alzheimera. Nat. Neuronauka. 2011, 14, 69–76. [Odnośnik]

49. Gervais, FG; Xu, D.; Robertson, GS; Vaillancourt, JP; Zhu, Y.; Huang, J.; LeBlanc, A.; Smith, D.; Rigby, M.; Shearman, MS; i in. Udział kaspaz w rozszczepianiu proteolitycznym białka prekursorowego amyloidu-beta w chorobie Alzheimera i tworzeniu amyloidogennego peptydu beta. Komórka 1999, 97, 395–406. [Odnośnik]

50. Park, G.; Nhan, HS; Tyan, SH; Kawakatsu, Y.; Zhang, C.; Navarro, M.; Koo, EH Aktywacja kaspazy i rozszczepienie APP za pośrednictwem kaspazy jest związane z utratą synaps wywołaną amyloidem w chorobie Alzheimera. Przedstawiciel komórki 2020, 31, 107839. [CrossRef]

51. Lu, DC; Rabizadeh, S.; Chandra, S.; Shayya, RF; Ellerby, LM; Tak, X.; Salvesen, GS; Koo, EH; Bredesen, DE Drugi cytotoksyczny peptyd proteolityczny pochodzący z prekursora beta-białka amyloidu. Nat. Med. 2000, 6, 397–404. [CrossRef] [PubMed]

52. LeBlanc, AC Caspase-6 jako nowy wczesny cel w leczeniu choroby Alzheimera. Eur. J. Neurosci. 2013, 37, 2005–2018. [Odnośnik]

53. Albrecht S.; Bogdanovic, N.; Ghetti, B.; Winblad, B.; LeBlanc, AC Aktywacja kaspazy -6 w mózgach z rodzinną chorobą Alzheimera niosących białko prekursorowe amyloidu lub mutacje prezeniliny I lub prezeniliny II. J. Neuropatol. Do potęgi. Neurol. 2009, 68, 1282–1293. [CrossRef] [PubMed]

54. Morihara, T.; Teter, B.; Yang, F.; Lim, lekarz ogólny; Boudinot S.; Boudinot, FD; Frautschy SA; Cole, GM Ibuprofen hamuje indukcję przez interleukinę-1beta proamyloidogennej alfa1-antychymotrypsyny w celu złagodzenia patologii beta-amyloidu (Abeta) w modelach choroby Alzheimera. Neuropsychofarmakologia 2005, 30, 1111–1120. [CrossRef] [PubMed]

55. Niu, YL; Zhang, WJ; Wu, P.; Liu, B.; Słońce, GT; Yu, DM; Deng, JB Ekspresja białek związanych z apoptozą kaspazy -3 i NF-kappaB w hipokampie myszy Tg2576. Neuronauka. Byk. 2010, 26, 37–46. [Odnośnik]

56. Fuller, S.; Steele, M.; Munch, G. Astroglej aktywowany podczas przewlekłego stanu zapalnego w chorobie Alzheimera – czy zaniedbują one swoje neurowspomagające role? Zmień. Rez. 2010, 690, 40–49. [Odnośnik]

57. Lee, M.; Cho, T.; Jantaratnotai, N.; Wang, YT; McGeer, E.; McGeer, PL Wyczerpanie GSH w komórkach glejowych wywołuje neurotoksyczność: znaczenie dla starzenia się i zwyrodnieniowych chorób neurologicznych. FASEB J. 2010, 24, 2533–2545. [Odnośnik]

58. Hensley, K. Zapalenie nerwów w chorobie Alzheimera: mechanizmy, konsekwencje patologiczne i możliwość manipulacji terapeutycznej. Choroba J. Alzheimera. 2010, 21, 1–14. [Odnośnik]

59. Lu, J.; Wu, DM; Zheng, YL; Centrum.; Zhang, ZF; Shan, Q.; Zheng, ZH; Liu, CM; Wang, YJ Kwercetyna aktywuje kinazę białkową aktywowaną przez AMP poprzez zmniejszenie ekspresji PP2C, chroniąc stary mózg myszy przed neurotoksycznością wywołaną wysokim cholesterolem. J. Patol. 2010, 222, 199–212. [Odnośnik]

60. Chen, JC; Ho, FM; Chao, PDL; Chen, CP; Jeng, KC; Hsu, HB; Lee, ST; Wen Tung, W.; Lin, WW Hamowanie ekspresji genu iNOS przez kwercetynę odbywa się za pośrednictwem hamowania kinazy IkappaB, czynnika jądrowego-kappa B i STAT1 i zależy od indukcji oksygenazy hemowej -1 w mikrogleju myszy BV-2. Eur. J. Pharmacol. 2005, 521, 9–20. [Odnośnik]

61. Dwivedi, D.; Megha, K.; Mishra, R.; Mandal, PK Glutation w mózgu: przegląd jego konformacji, funkcji, charakterystyki biochemicznej, ilościowej i potencjalnej roli terapeutycznej w zaburzeniach mózgu. Neurochem. Rez. 2020, 45, 1461–1480. [CrossRef] [PubMed]

62. Rossner S.; Sastre, M.; Bourne, K.; Lichtenthaler, SF Transkrypcyjna i translacyjna regulacja ekspresji BACE1 – implikacje dla choroby Alzheimera. Wałówka. neurobiol. 2006, 79, 95–111. [CrossRef] [PubMed]

63. Westerman, MA; Cooper-Blacketer, D.; Mariasz, A.; Kotilinek L.; Kawarabayashi, T.; Younkin, LH; Carlson, Georgia; Younkin, SG; Ashe, KH Związek między Abeta a pamięcią w mysim modelu choroby Alzheimera Tg2576. J. Neurosci. 2002, 22, 1858–1867. [CrossRef] [PubMed]

64. Irizarry, MC; Locascio, JJ; Hyman, BT Ekspresja mRNA enzymu rozszczepiającego APP w miejscu beta u myszy transgenicznych APP: anatomiczne nakładanie się z ekspresją transgenu i poziomami statycznymi wraz ze starzeniem. Jestem. J. Patol. 2001, 158, 173–177. [CrossRef] [PubMed]

65. Hsiao, K.; Chapman, P.; Nilsen S.; Eckman, C.; Harigaya, Y.; Younkin, S.; Yang, F.; Cole, G. Korelacyjne deficyty pamięci, podwyższenie Abeta i blaszki amyloidowe u myszy transgenicznych. Nauka 1996, 274, 99–102. [CrossRef] [PubMed]

66. Hsiao, K. Myszy transgeniczne wykazujące ekspresję białek prekursorowych amyloidu Alzheimera. Do potęgi. Gerontol. 1998, 33, 883–889. [Odnośnik]

67. Szymon AM; Schiaparelli, L.; Salazar-Colocho, P.; Cuadrado-Tejedor, M.; Escribano, L.; López de Maturana, R.; Del Rio, J.; Pérez-Mediavilla, A.; Frechilla, D. Nadekspresja ludzkiego APP typu dzikiego u myszy powoduje deficyty poznawcze i cechy patologiczne niezwiązane z poziomami Abeta. neurobiol. Dis. 2009, 33, 369–378. [Odnośnik]

68. Senft, AP; Dalton, TP; Shertzer, HG Oznaczanie glutationu i dwusiarczku glutationu za pomocą sondy fluorescencyjnej aldehydu oftalowego. Analny. Biochem. 2000, 280, 80–86. [Odnośnik]

69. Marklund, S.; Marklund, G. Udział anionowego rodnika ponadtlenkowego w samoutlenianiu pirogalolu i wygodny test dysmutazy ponadtlenkowej. Eur. J. Biochem. 1974, 47, 469-474. [Odnośnik]

70. Aebi, H. Katalaza in vitro. Metody Enzymol. 1984, 105, 121–126.

71. Barja de Quiroga, G.; Perez-Campo, R.; Lopez Torres, M. Obrona przeciwutleniająca i peroksydacja w wątrobie i mózgu starszych szczurów. Biochem. J. 1990, 272, 247–250. [CrossRef] [PubMed]

72. Massey, V.; Williams, CH, Jr. O mechanizmie reakcji drożdżowej reduktazy glutationowej. J. Biol. chemia 1965, 240, 4470–4480. [Odnośnik]

73. Jash, K.; Gondalija, P.; Sunkaria, A.; Kalia, K. MikroRNA-29b moduluje aktywność sekretazy w linii komórkowej SH-SY5Y i mózgu myszy z cukrzycą. Komórka Mol. neurobiol. 2020, 40, 1367–1381. [CrossRef] [PubMed]

74. Jimenez-Aliaga, K.; Bermejo-Bescos, P.; Benedi, J.; Martin-Aragon, S. Kwercetyna i rutyna wykazują działanie antyamyloidogenne i rozbijające fibryle in vitro oraz silne działanie przeciwutleniające w komórkach APPswe. Nauka o życiu. 2011, 89, 939–945. [CrossRef] [PubMed]

75. Ramos, Kalifornia; Bowman, TA; Boles, Karolina Północna; Kupiec, AA; Zheng, Y.; Parra, I.; Fuqua, SA; Shaw, Kalifornia; Goodell, MA Dowody na różnorodność profili transkrypcyjnych pojedynczych hematopoetycznych komórek macierzystych. PLoS Genet. 2006, 2, e159.

76. Schmued, LC; Stowers, CC; Skallet, AC; Xu, L. Fluoro-Jade C skutkuje ultrawysoką rozdzielczością i znakowaniem kontrastowym zdegenerowanych neuronów. Mózg Res. 2005, 1035, 24–31. [CrossRef] [PubMed]

Zastrzeżenie/Uwaga wydawcy:Oświadczenia, opinie i dane zawarte we wszystkich publikacjach należą wyłącznie do poszczególnych autorów i autorów, a nie do MDPI i/lub redaktorów. MDPI i/lub redaktorzy zrzekają się odpowiedzialności za jakiekolwiek szkody wyrządzone ludziom lub mieniu wynikające z jakichkolwiek pomysłów, metod, instrukcji lub produktów, do których odnosi się treść.

【Więcej informacji:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】