Wielokierunkowe działanie bakuchiolu przeciwko komórkowym mechanizmom starzenia się twarzy – dowody eksperymentalne na holistyczne podejście do leczenia, część 1

Abstrakcyjny

Cel: Starzenie się skóry jest wieloczynnikowym procesem obejmującym powstawanie reaktywnych form tlenu, następujący po nim stan zapalny ze zmniejszoną żywotnością komórek naskórka i skóry właściwej, aw konsekwencji uszkodzenie macierzy pozakomórkowej. Skuteczne metody leczenia dermokosmetycznego powinny idealnie uwzględniać te cechy w podejściu holistycznym. Tutaj określiliśmy odpowiedni profil aktywności bakuchiolu, meroterpenu pochodzenia roślinnego, w szeregu badań in vitro, ex vivo i in vivo i porównaliśmy go z retinolem, obecnie uważanym za złoty standard w miejscowych kosmetykach przeciwstarzeniowych.

Glikozyd cistanche może również zwiększać aktywność SOD w tkankach serca i wątroby oraz znacznie zmniejszać zawartość lipofuscyny i MDA w każdej tkance, skutecznie wymiatając różne reaktywne rodniki tlenowe (OH-, H₂O₂, itp.) i chroniąc przed uszkodzeniami DNA spowodowanymi przez rodniki OH. Glikozydy fenyloetanoidowe Cistanche mają silne zdolności wymiatania wolnych rodników, wyższą zdolność redukującą niż witamina C, poprawiają aktywność SOD w zawiesinie plemników, zmniejszają zawartość MDA oraz mają pewien wpływ ochronny na funkcję błony plemników. Polisacharydy Cistanche mogą zwiększać aktywność SOD i GSH-Px w erytrocytach i tkankach płuc eksperymentalnie starzejących się myszy wywołaną przez D-galaktozę, a także zmniejszać zawartość MDA i kolagenu w płucach i osoczu oraz zwiększać zawartość elastyny, mają dobry efekt zmiatania DPPH, przedłuża czas niedotlenienia u starzejących się myszy, poprawia aktywność SOD w surowicy i opóźnia fizjologiczną degenerację płuc u doświadczalnie starzejących się myszy Eksperymenty z degeneracją morfologiczną komórek wykazały, że Cistanche ma dobrą zdolność przeciwutleniającą i ma potencjał, aby być lekiem do zapobiegania i leczenia chorób związanych ze starzeniem się skóry. Jednocześnie echinakozyd w Cistanche ma znaczną zdolność do wychwytywania wolnych rodników DPPH i może wychwytywać reaktywne formy tlenu, zapobiegać degradacji kolagenu wywołanej przez wolne rodniki, a także ma dobry wpływ naprawczy na uszkodzenia anionów wolnych rodników tyminy.

Kliknij na przeciwutleniacz Cistanche Tubulosa

【Więcej informacji:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Metody: Zdolność przeciwutleniająca i moc bakuchiolu i retinolu analizowano, mierząc redukcję 2,2′-difenylo-1-pikrylhydrazylu (DPPH) za pomocą odpowiednio rozpadu absorpcji i spektroskopii rezonansu spinowego elektronu. Wpływ na poziom prostaglandyny E2 (PGE2), czynnika hamującego migrację makrofagów (MIF), czynnika wzrostu fibroblastów 7 (FGF7), kolagenu typu I i VII (COL1A1, COL7A1), fibronektyny (FN), a także metabolizm rozpuszczalnego w wodzie tetrazolu 1 (WST-1) określono w ludzkich fibroblastach skórnych. Regenerację naskórka oceniano z wykorzystaniem modelu gojenia ran in vitro. Poziomy białka FN analizowano ex vivo po potraktowaniu preparatem zawierającym bakuchiol, retinol lub nośnik przy użyciu płynu pęcherzykowego do odsysania. Poprawę stanu skóry określono in vivo w badaniu porównawczym podzielonej twarzy po zastosowaniu bakuchiolu lub nośnika.

Wyniki: Bakuchiol w przeciwieństwie do retinolu wykazał wysoką skuteczność antyoksydacyjną. Poziomy PGE2 i MIF były znacznie obniżone zarówno przez bakuchiol, jak i retinol. Bakuchiol, ale nie retinol, znacząco zwiększył poziom białka FGF7. Poziomy metabolizmu WST{2}} zostały znacznie zwiększone przez bakuchiol i retinol. Zastosowanie bakuchiolu i retinolu doprowadziło do znacznego zwiększenia poziomów białek COL1A1, COL7A1 i FN. Rany uzupełnione bakuchiolem, ale bez retinolu, wykazywały znaczny wzrost regeneracji naskórka. Klinicznie obszary traktowane preparatem zawierającym bakuchiol wykazały statystycznie istotny wzrost wartości białka FN po 4-tygodniowej aplikacji w porównaniu z obszarami nietraktowanymi i obszarami traktowanymi nośnikiem.

Wniosek: Dane te dostarczają dowodów na wielokierunkową skuteczność bakuchiolu przeciwko komórkowym oznakom starzenia się skóry. Jego profil działania ma pewne wspólne cechy z retinolem, ale wykazuje kilka nieznanych dotąd pozytywnych efektów w naszych badaniach, a mianowicie stymulację krytycznego składnika macierzy zewnątrzkomórkowej FN oraz przyspieszenie regeneracji naskórka i gojenia się ran.

SŁOWA KLUCZOWE

przeciwstarzeniowe, bakuchiol, uzasadnienie oświadczenia in vivo/ex vivo/in vitro, retinol, fizjologia/struktury skóry

WSTĘP

Starzejąca się skóra charakteryzuje się zmarszczkami, nierówną pigmentacją, szorstkością i wiotkością. Te objawy kliniczne są wynikiem zmian strukturalnych i metabolicznych spowodowanych procesami starzenia wewnętrznego i zewnętrznego. Wewnętrzne starzenie się przypisano czynnikom, w tym skracaniu telomerów, przewlekłym stanom zapalnym, pojedynczym mutacjom mitochondrialnego DNA i wolnym rodnikom [1]. Starzejąca się skóra obejmuje ponadto zmniejszenie jej systemów antyoksydacyjnych[2]. Ponadto tempo proliferacji komórek spada z powodu biologicznego procesu starzenia prowadzącego do utraty struktury i funkcji skóry. Zewnętrzne starzenie jest wywoływane głównie przez promieniowanie UV i wpływy środowiska. Te zniewagi powodują uszkodzenia skóry, które wzmacniają chronologiczny spadek i przyspieszają starzenie się skóry. Ludzka skóra dodatkowo traci zdolność radzenia sobie ze stanami zapalnymi w miarę starzenia się, co skutkuje przewlekłym stanem prozapalnym.

Miejscowe stosowanie retinoidów, takich jak kwas retinowy, retinal czy retinol, jest uważane za kliniczny złoty standard skutecznej terapii przeciwstarzeniowej [3, 4]. Molekularne mechanizmy działania retinoidów zostały szeroko opisane [5–10]. Miejscowe retinoidy skutecznie redukują widoczne oznaki starzenia, takie jak zmarszczki, wiotkość czy szorstkość [4, 11] oraz zmniejszają depigmentację skóry fotouszkodzonej, w tym siateczki siateczkowatej i plam soczewicowatych [12]. Jednak miejscowe leczenie retinoidami może prowadzić do zależnego od stężenia wysuszenia i podrażnienia skóry [13]. Ponieważ stosowanie retinolu powoduje niewielkie działania niepożądane w porównaniu z innymi retinoidami, takimi jak kwas retinowy [6, 14], jest on szeroko stosowanym środkiem aktywnym w kosmetycznym leczeniu starzenia się twarzy.

W przeciwieństwie do retinolu, który jest stosowany w produktach do pielęgnacji skóry od 1984 roku [15], bakuchiol dopiero niedawno zyskał zainteresowanie jako związek przeciwstarzeniowy do stosowania miejscowego. Bakuchiol to meroterpen (ryc. 1), który pochodzi z nasion Psoralea corylifolia. Od wieków jest stosowany w tradycyjnej medycynie indyjskiej i chińskiej [16, 17] i jest dobrze tolerowany [18]. Sugerowano, że bakuchiol wykazuje funkcje podobne do retinolu, ponieważ w modelu substytutu skóry obie substancje wykazują podobne wzorce ekspresji genów in vitro [19] i poprawę fotouszkodzeń skóry in vivo [20]. W związku z tym określa się go również jako funkcjonalny analog retinoidu pochodzenia roślinnego [21]. Dalsze badania wykazały działanie bakuchiolu przeciwutleniające [19, 22–24], przeciwzapalne [19, 25–27], przeciwbakteryjne [28], a także antyproliferacyjne i przeciwnowotworowe [29, 30].

Aby skutecznie złagodzić i opóźnić wieloczynnikowe procesy starzenia się skóry, należy zająć się różnymi mechanizmami komórkowymi w ramach zintegrowanego podejścia. Bakuchiol jednocześnie moduluje różne cele, co czyni go obiecującym związkiem pod tym względem. Ponieważ stresy oksydacyjne i zapalne są ściśle związane ze starzeniem się skóry, zapobieganie im przez bakuchiol może sprzyjać ogólnej kondycji skóry. Jednak jakość obecnych dowodów naukowych została ostatnio poddana krytycznej ocenie [31]. W tym kontekście określiliśmy (i) właściwości przeciwutleniające i (ii) przeciwzapalne bakuchiolu i retinolu oraz zbadaliśmy ich zdolność do poprawy metabolizmu komórkowego i syntezy czynnika wzrostu 7 podsumowanego jako (iii) aktywność komórkowa. Następnie przeanalizowaliśmy, czy bakuchiol i retinol wpływają na ekspresję niektórych (iv) składników ECM i poprawiają (v) regenerację naskórka i ponowne nabłonkowanie. Na koniec przeprowadzono badanie in vivo w celu zweryfikowania klinicznej zdolności przeciwstarzeniowej bakuchiolu w ludzkiej skórze.

MATERIAŁY I METODY

Materiały testowe

Bakuchiol otrzymano z Sytheon Ltd (Boonton, New Jersey, Stany Zjednoczone). Retinol zakupiono od Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri, Stany Zjednoczone). Do eksperymentów z hodowlą komórkową obie badane substancje świeżo rozcieńczono w DMSO (Merck, Darmstadt, Niemcy). W przypadku roztworów podstawowych DMSO zastosowane stężenie badanych substancji było 1000-krotnie wyższe od najwyższego stężenia zastosowanego w hodowli komórkowej, uzyskując 0,1 procent DMSO w pożywce lub buforze. Dalsze rozcieńczenia przeprowadzono stosując pożywkę lub bufor z 0,1 procent DMSO. Dlatego wszystkie doświadczenia z kulturami komórkowymi przeprowadzono w obecności 0,1 procenta DMSO. W badaniach in vivo retinol do stosowania miejscowego sformułowano w tym samym nośniku co bakuchiol.

Badania in vitro

Oznaczanie pojemności antyoksydacyjnej

Bakuchiol, retinol (oba stosowane w stężeniu końcowym 100 μM) lub trolox o wysokim standardzie (Merck, stężenie końcowe 25 μM) rozcieńczono w DMSO. Pokrótce, 30 µl tych związków (10-krotnie wyższe stężenie niż końcowe stężenie w teście) dodano do 96-dołkowej płaskodennej płytki. Następnie do każdej studzienki szybko dodano 270 μl 39 ug/ml DPPH (Merck, rozcieńczonego w mieszaninie woda/etanol 1:1), uzyskując końcowe stężenie 10 procent DMSO. Jako kontrolę roztwór DPPH inkubowano z DMSO pozbawionym substancji testowych. Ponadto przeprowadzono ślepą próbę kontrolną przez inkubację bakuchiolu lub retinolu z wodą/etanolem (1:1) lub tylko mieszaniną woda/etanol (1:1) zawierającą 10 procent DMSO pod nieobecność DPPH. Po 10, 30 i 60 minutach zmierzono absorbancję przy 524 nm przy użyciu wielomodowego czytnika mikropłytek Spark (Tecan, Männedorf, Szwajcaria). Odjęto sygnały ślepych kontroli.

Oznaczanie siły antyoksydacyjnej

HDF wysiano na płytkach {{0}} studzienkowych z 150 000 komórkami/studzienkę w 2 ml pożywki zawierającej 10 procent surowicy cielęcej i inkubowano przez 24 godziny. Następnie starą pożywkę usunięto, a komórki potraktowano pożywką zawierającą 2% surowicy cielęcej i bakuchiol lub retinol w końcowym stężeniu 10 μM. Kontrolne HDF uzupełniono 0,1% DMSO bez bakuchiolu lub retinolu. Puste kontrole przeprowadzono przez inkubację pożywki bez komórek. Po 24 godzinach kondycjonowaną pożywkę przeniesiono do kolumn wirujących z koncentratorem białek Vivaspin (5000 MWCO; Sartorius, Getynga, Niemcy) i zatężono w przybliżeniu 10- krotnie. Objętości wszystkich supernatantów pożywki wyrównano przez ponowne dodanie przesączu. Poziomy białka FGF7 w zatężonej kondycjonowanej pożywce analizowano przy użyciu dostępnego w handlu zestawu ELISA zgodnie z instrukcjami producenta (Bio-Techne GmbH). Pomiary przeprowadzono przy użyciu wielomodowego czytnika mikropłytek Spark (Tecan). Sygnały otrzymane z ślepych kontroli odjęto i poziomy białka FGF7 znormalizowano do całkowitej liczby komórek, którą określono stosując licznik komórek (Scepter, Merck).

Oznaczanie metabolizmu WST-1

HDF wysiano w płytkach {{0}} studzienkowych z 3000 komórek/studzienkę w 100 μl pożywki zawierającej 10 procent surowicy cielęcej i inkubowano przez 24 godziny. Zubożoną pożywkę odrzucono, a komórki potraktowano 100 μl pożywki zawierającej retinol lub bakuchiol w końcowym stężeniu odpowiednio 1 μM lub 10 μM. Kontrolne HDF uzupełniono 0,1% DMSO bez bakuchiolu lub retinolu. Jako dalszą kontrolę, komórki traktowano 10% trytonem-X (Merck). Puste kontrole przeprowadzono przez inkubację pożywki bez komórek. Po 72 godzinach komórki barwiono przy użyciu dostępnego w handlu odczynnika do proliferacji komórek WST -1 zgodnie z instrukcjami producenta (Merck). Absorbancję mierzono przy 450 i 620 nm stosując czytnik mikropłytek Tecan infinity M200 (Tecan). Różnicę w tych pomiarach wykorzystano do analizy. Odjęto sygnały ślepych kontroli.

Oznaczanie poziomu białka COL1A1 i COL7A1

HDF wysiano w {{0}}dołkowych płytkach z 10  000 komórkami/dołek w 100 μl pożywki zawierającej 10 procent surowicy cielęcej i inkubowano przez 24 godziny. Bakuchiol lub retinol rozcieńczono w 100 μl pożywki bez surowicy cielęcej i dodano do tej pożywki w końcowym stężeniu odpowiednio 1 μM lub 10 μM. Kontrolę uzupełniono 100 μl pożywki bez surowicy, uzyskując stężenie 0,1 procenta DMSO odpowiadające traktowaniu retinolem i bakuchiolem. Jako wysoki standard zastosowano 10 ng/ml transformującego czynnika wzrostu- (TGF-) i 11 ug/ml askorbinianu sodu (oba firmy Merck). Puste kontrole przeprowadzono przez inkubację pożywki bez komórek. Po 4 godzinach poziomy białka COL1A1 i COL7A1 w kondycjonowanej pożywce analizowano przy użyciu dostępnych w handlu zestawów ELISA zgodnie z instrukcjami producenta (Novus Biologicals, Littleton, Colorado, Stany Zjednoczone). Pomiary przeprowadzono przy użyciu wielomodowego czytnika mikropłytek Spark (Tecan). Odjęto sygnały ślepych kontroli. Poziomy białek COL1A1 i COL7A1 znormalizowano do całkowitej ilości białka lizatu komórkowego, którą określono przy użyciu dostępnego w handlu zestawu do oznaczania kwasu bicynchoninowego (Thermo Fisher Scientific) zgodnie z instrukcjami producenta. Warunkiem wykorzystania wyników była pozytywna reakcja komórek na TGF- i askorbinian sodu o wysokim standardzie.

W celu analizy poziomów białka COL7A1 po przedłużonym czasie inkubacji, HDF wysiano w 96-płytkach z 3000 komórek/dołek w 100 μl pożywki zawierającej 10% surowicy cielęcej. Wszystkie zabiegi, kontrole i analizę przeprowadzono jak opisano powyżej, z wyjątkiem tego, że bakuchiol i retinol stosowano tylko w końcowym stężeniu 10 μM. Komórki zbierano, gdy osiągnięto stan subkonfluencji, w szczególności po 72 lub 96 godzinach.

Oznaczanie poziomu białka FN

HDF wysiano na płytkach {{0}} studzienkowych z 10 000 komórkami/studzienkę w 100 μl pożywki zawierającej 10 procent surowicy cielęcej i inkubowano przez 24 godziny. Starą pożywkę zastąpiono pożywką zawierającą 2% surowicę cielęcą i bakuchiol lub retinol w końcowym stężeniu 10 μM. Kontrolę uzupełniono 0,1% DMSO bez bakuchiolu lub retinolu. Puste kontrole przeprowadzono przez inkubację pożywki bez komórek. Po 24 godzinach poziomy białka FN w kondycjonowanej pożywce analizowano przy użyciu dostępnego w handlu zestawu ELISA zgodnie z instrukcjami producenta (R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, Stany Zjednoczone). Pomiary przeprowadzono przy użyciu wielomodowego czytnika mikropłytek Spark (Tecan). Odjęto sygnały ślepych kontroli. Poziomy białka FN normalizowano do całkowitej ilości białka lizatu komórkowego, którą określono jak wyżej.

Oznaczanie regeneracji naskórka w modelu gojenia się ran in vitro

Eksperymenty przeprowadzono w sposób opisany wcześniej [34]. Do leczenia modeli gojenia ran bakuchiol lub retinol rozcieńczano w DPBS i dodawano w końcowym stężeniu 100 μM do obszaru rany (5 μl na ranę). Rany referencyjne uzupełniono taką samą ilością DPBS zawierającego 0,1% DMSO bez bakuchiolu lub retinolu. Dodatkowe rany pozostawiono bez leczenia jako dalszą kontrolę. Modele gojenia ran inkubowano przez 43 godziny przy 95% wilgotności, 5% CO2 i 37 stopniach. Następnie próbki szybko zamrożono w izopentanie wstępnie schłodzonym ciekłym azotem i przechowywano w temperaturze -80 stopni. Reepitelializację oceniano w skrawkach kriostatu barwionych hematoksyliną i eozyną, mierząc długość zregenerowanego naskórka za pomocą mikroskopu Leica DMLS (10×), kamery Leica MC 170 HD CCD i oprogramowania Leica LAS V4.9 (Leica Microsystems, Wetzlar, Niemcy). Kwantyfikacja została przeprowadzona w sposób zaślepiony.

Badania in vivo I i II

W przypadku obu badań in vivo zalecenia aktualnej wersji Deklaracji Helsińskiej oraz wytyczne Międzynarodowej Konferencji w sprawie Harmonizacji Dobrej Praktyki Klinicznej zostały uznane za mające zastosowanie do badania kosmetycznego. Protokół badania I został zatwierdzony przez Niezależną Komisję Etyki we Freiburgu (kod feki 08/2610). W obu badaniach wszyscy ochotnicy wyrazili pisemną, świadomą zgodę. Badane miały zdrową skórę, należały do ​​typu skóry I do III wg Fitzpatricka, a rozpoczęcie lub zmiana leczenia hormonalnego było kryterium wykluczającym.

Podczas 10-dniowego okresu wstępnego kondycjonowania i przez cały okres badania uczestnicy musieli powstrzymać się od ekspozycji na promieniowanie UV w obszarach testowych. Czynności sprzyjające poceniu się były zabronione 24 godziny przed planowanymi ocenami.

Badacz zademonstrował prawidłowe stosowanie preparatów przy użyciu ilości, która odpowiadała zwykłemu schematowi pielęgnacji skóry badanych.

Badanie I: Oznaczanie ex vivo poziomów białka FN

Spośród 52 kobiet, które zostały włączone do tego badania kontrolowanego pojazdem, 33 osoby ukończyły badanie, a dane 31 osób (30–64 lata, średnia wieku: 50,9 lat) zostały uwzględnione w analizie danych. Rezygnacje nastąpiły z powodu pandemii SARS-CoV-2, przyczyn osobistych (13 osób) oraz reakcji niezgodności (5 osób, spowodowanych leczeniem retinolem). Reakcje niezgodności, w których pośredniczy retinol, a także problemy z pobieraniem próbek, spowodowały różną liczbę osób badanych pod kątem każdego schorzenia (szczegóły w wynikach).

Siedem dni przed planowanymi ocenami zakazano stosowania produktów do pielęgnacji skóry, środków czyszczących i mydeł na przedramionach. Pierwszego dnia badań wyznaczono cztery obszary testowe na wewnętrznych przedramionach. Na dwóch obszarach testowych zastosowano dwa preparaty verum zawierające odpowiednio {{0}},5% bakuchiolu lub 0,15% retinolu. W opinii opublikowanej przez Komitet Naukowy ds. Bezpieczeństwa Konsumentów w 2016 roku zastosowane stężenie retinolu zostało uznane za zabieg kosmetyczny [35]. W pozostałych dwóch obszarach testowych zastosowano odpowiedni pojazd lub obszar pozostawiono nietraktowany. Zmieniono położenie miejsc leczenia. Po 4 tygodniach stosowania preparatów testowych dwa razy dziennie ochotnicy wrócili do instytutu badawczego. W każdym obszarze testowym wygenerowano trzy pęcherze ssące (o średnicy 7 mm), jak opisano wcześniej [36, 37]. W skrócie, na obszarach testowych umieszczono wykonane na zamówienie blistry ssące i zastosowano próżnię 550–850 mbar. Po około 90–150 minutach, gdy utworzyły się pęcherze odsysające, próżnię zwolniono i za pomocą igły 24- odessano płyn z pęcherza. Płyny natychmiast zamrażano w temperaturze -80 stopni na suchym lodzie do czasu analizy. Poziomy białka FN oznaczano ilościowo w próbkach płynu pęcherzykowego do odsysania przy użyciu dostępnego w handlu zestawu ELISA (R&D Systems). Pomiary przeprowadzono przy użyciu wielomodowego czytnika mikropłytek Spark (Tecan). Poziomy FN znormalizowano do całkowitych poziomów białka w próbkach płynu pęcherzowego do odsysania, które określono jak wyżej.

Badanie II: Określenie in vivo poprawy stanu skóry

W sumie 43 ochotniczki zostały włączone do tego kontrolowanego pojazdu badania porównawczego podzielonej twarzy. Według ocen lekarskich badane osoby miały mieszane typy skóry (skóra sucha, normalna, tłusta i mieszana). Badanie ukończyły 34 osoby (39–66 lat, średnia wieku: 56,2 lat), które zostały włączone do analizy. Rezygnacje były spowodowane problemami technicznymi i niezgodnością (8 osób), a także reakcjami niezgodności (1 osoba, spowodowana leczeniem nośnikiem i bakuchiolem).

Na dwa tygodnie przed rozpoczęciem badania i przez cały okres badania ochotnicy byli zobowiązani do powstrzymania się od stosowania samoopalaczy oraz intensywnych zabiegów kosmetycznych twarzy (np. usuwania powierzchownych warstw skóry). Podczas 10-dniowego okresu przygotowania wstępnego i przez cały czas badania osoby badane proszono o powstrzymanie się od wykonywania makijażu permanentnego, zabiegów na rzęsy i brwi, masek na oczy i plastrów. Trzy dni przed pierwszą oceną poproszono badanych o powstrzymanie się od stosowania produktów do pielęgnacji twarzy. W wieczór poprzedzający wyznaczoną klasyfikację badane były proszone o zaprzestanie stosowania kosmetyków dekoracyjnych.

W ciągu pierwszych 7 dni 10-dniowej fazy kondycjonowania wstępnego uczestnicy otrzymywali słoiczek z kremem zawierającym badany nośnik (brak informacji o zawartości) i nakładali go dwa razy dziennie na całą twarz. Na początku ochotnicy dokonywali samooceny. W szczególności oceniali wizualnie ogólny wygląd swojej skóry twarzy, obserwując jej świeżość i promienność, a także wszelkie oznaki starzenia się skóry. W ten sposób zastosowano wizualną skalę analogową od 1 (bardzo zmęczona, starzejąca się) do 10 (bardzo świeża, bez oznak starzenia się skóry). Następnie badani otrzymywali dwa zaślepione słoiki z kremem zawierające odpowiednio verum (nośnik zawierający 0,5 procent bakuchiolu) lub nośnik, bez żadnej specyfikacji zawartości. W okresie badania trwającym 12 tygodni, jedną stronę twarzy traktowano dwa razy dziennie verum, podczas gdy drugą stronę twarzy traktowano dwa razy dziennie nośnikiem. Przydział zabiegów do miejsc testowych został permutowany. Po 12 tygodniach regularnego stosowania ochotnicy ponownie dokonali samooceny, jak wspomniano powyżej.

Analiza statystyczna

Analizy statystyczne przeprowadzono przy użyciu Microsoft Excel dla Office 365 (Microsoft Corporation, Redmond, Waszyngton, Stany Zjednoczone), SAS Software Package for Windows V9.4 (SAS Institute GmbH, Heidelberg, Niemcy) i GraphPad Prism V8 (GraphPad Software, San Diego , Kalifornia, Stany Zjednoczone).

Normalny rozkład danych oceniano za pomocą testu Shapiro-Wilka. Jeśli rozkład normalny został potwierdzony, przeprowadzono analizę wariancji z powtarzanymi pomiarami (RM-ANOVA) z porównaniem parami post hoc. Jeśli hipoteza normalności została odrzucona, przekształcone przez Bloma rangi oryginalnych danych zostały ocenione za pomocą RM-ANOVA z porównaniem parami post-hoc lub oryginalne dane zostały ocenione za pomocą testu rang znaków Wilcoxona. Wszystkie testy statystyczne były dwustronne na poziomie istotności alfa=0,05.

WYNIKI

Badania in vitro

Oznaczanie działania antyoksydacyjnego

Aby przeanalizować (i) działanie przeciwutleniające bakuchiolu i retinolu, wykonaliśmy dwa różne testy z użyciem DPPH jako cząsteczki wykrywającej.

Zdolność antyoksydacyjna

Zdolność antyoksydacyjną określono mierząc redukcję DPPH poprzez zanik jego absorpcji. Wysoki standard Trolox wykazał znacząco podwyższoną zdolność antyoksydacyjną w stosunku do kontroli (p=0.{2}} dla wszystkich wskazanych punktów czasowych), weryfikując prawidłowy pomiar (ryc. 2a). Jeśli chodzi o kontrolę, absorbancja w próbkach traktowanych bakuchiolem była również znacząco zmniejszona we wszystkich badanych punktach czasowych (10 min: p=0.0003, 30 i 60 min: p=0.0000 ) wykazując zwiększoną zdolność antyoksydacyjną. Natomiast Retinol nie wykazywał znaczącej zdolności antyoksydacyjnej w porównaniu z kontrolą.

【Więcej informacji:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】