Acteoside: badania nad działaniem przeciwutleniającym i przeciwnadciśnieniowym

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Działanie przeciwutleniające i przeciwnadciśnieniowe akteozydu i jego analogów

Chao-Hsiang CHEN1,2, Yin-Shiou LIN3, Mei-Yin CHIEN2,4, Wen-Chi HOU5,6,* i Miao-Lin HU1,*

Abstrakcyjny. Akteozyd(Act), glikozyd fenyloetanoidowy, jest związkiem aktywnym w kilku roślinach i tradycyjnych lekach ziołowych. Działają wraz z jego izomerem strukturalnym,izoakteozyd(Isoact) i analog 6-O-acet-lakteozyd (6-O-acetylakt), zostały wykorzystane w badaniu w celu zbadaniaprzeciwutleniacz, enzym konwertujący angiotensynę (ACE) i działanie hamujące hemolizęw witroi działanie przeciwnadciśnieniowe u szczurów z samoistnym nadciśnieniem (SHR)w żywy. Pokazaliśmy, że Act, Isoact i 6-O-acetylakt skutecznie zmiata rodniki 1,1-difenylo-2-pikrylohydrazylowe (z IC50 odpowiednio 11,4, 9,48 i 9,55 μM) oraz rodniki ponadtlenkowe (z IC50 wynoszącymi 66,0, 38,5 i 39,1 μM, odpowiednio). jako Isoact i 6-O-Acetyloakt miał podobne działanie wymiatające rodniki, tylko Act i Isoact zostały użyte do następnych badań. Zarówno Act, jak i Isoact hamowały aktywność oksydazy ksantynowej z IC50 odpowiednio przy 53,3 i 62,2 μM. Zarówno Act, jak i Isoact również znacząco hamowały aktywność ACE i hemolizę indukowaną przez dichlorowodorek 2,2'-azobis(2-amidynopropanu), ale działanie Act było silniejsze niż Isoact. Następnie podaliśmy doustnie pojedynczą dawkę Act lub Isoact (10 mg/kg masy ciała) SHR i mierzyliśmy zmiany skurczowego ciśnienia krwi (SBP) i rozkurczowego ciśnienia krwi (DBP) w ciągu 24 godzin. Act, ale nie Isoact, wykazywał działanie przeciwnadciśnieniowe w obniżaniu SBP i DBP. Wyniki sugerują potencjalną przydatność ustawy jako zdrowego produktu spożywczego dla:przeciwutleniaczochrona i regulacja ciśnienia krwi.

Słowa kluczowe: Akteozyd; Działanie przeciwnadciśnieniowe; Enzym konwertujący angiotensynę (ACE); przeciwutleniacz; Hemoliza.

aktywny składnik akteozyd w cistanche

Wprowadzanie

Akteozyd(Akt), glikozyd fenyloetanoidowy zawierający kwas kawowy, 3',4'-dihydroksyfenyloetanol, glukozę i ramnozę, został po raz pierwszy wyizolowany z kwiatówSyringa Vul- garis(Birkofer et al., 1968) oraz razem ze strukturalnym izomeremizoakteozyd(Isoact) i pochodna6-O-acetyloakteozyd(6-O-acetylakt), został znaleziony w wielu roślinach i lekach ziołowych, takich jak:Ligstrum purpurascens(Wong i in., 2001),Callicarpa dychotoma(Koo i in., 2006; Lee i in., 2006),Cistanche deserticolaorazBoschniakia rossica(Wu i in., 2006),Skrophularie ningpoenis(Huang i in., 2008),Rehmannia glutinosa(Li i in., 2006). Doniesiono, że akt ten wykazuje działanie przeciwprzerzutowe na komórki czerniaka B16 w modelach myszy C57BL/6 (Ohno i wsp., 2002). Act, Isoact i 6-OOstatnio wykazano, że -acetylakt hamuje aktywowaną przez IL-1 -ekspresję międzykomórkowej CAM-1 i naczyniowej CAM-1 w ludzkich komórkach śródbłonka żyły pępowinowej (Chen et al., 2009). Act chroni również bydlęce komórki śródbłonka płuc przed stresem oksydacyjnym wywołanym przez rodniki hydroksylowe (Chiou et al., 2004) oraz hamuje wytwarzanie tlenku azotu i TNF poprzez blokowanie aktywacji AP-1 w makrofagach stymulowanych lipopolisacharydami (Rao et al. , 2009). Act i Isoact wykazują działanie neuroprotekcyjnew witro(Koo i in., 2005). Koo i in. (2006) donoszą, że Act i jego aglikony skutecznie usuwają 1,1-difenyl-2-pikrylohydrazyl (DPPH) i tlenek azotuw witro. Jednak niewiele badań porównywało obok siebiew witro przeciwutleniaczdziałania Act i jego strukturalnie pokrewnych związków, takich jak Isoact i 6-O- acetyloakt.

W leczeniu nadciśnienia stosowano kilka klas środków farmakologicznych (Mark i Davis, 2000). Jedna klasa leków przeciwnadciśnieniowych, znana jako inhibitory konwertazy angiotensyny I (ACE) (tj. inhibitory peptydazy), charakteryzuje się małą częstością występowania działań niepożądanych i jest preferowaną klasą leków przeciwnadciśnieniowych.

w leczeniu pacjentów ze współistniejącymi chorobami wtórnymi (Fotherby i Panayiotou, 1999). ACE (hydrolaza peptydylodipeptydowa EC 3.4.15.1) jest egzopeptydazą zawierającą Zn uwalniającą dipeptydy, która usuwa dipeptyd z C-końca angiotensyny I, tworząc angiotensynę II, związek powodujący duże nadciśnienie. Kilkaprzeciwutleniaczpeptydy (zredukowany glutation i peptydy związane z karnozyną) wykazują działanie hamujące ACE (Hou i wsp., 2003). Pierwszy dostępny klinicznie, doustnie aktywny inhibitor ACE, kaptopril, został opracowany do leczenia nadciśnienia (Ondetti i wsp., 1977; Borer, 2007). Istnieją doniesienia, że ​​akt ten wywiera działanie rozluźniające, w którym pośredniczy tlenek azotu, na nienaruszone pierścienie aorty śródbłonka szczurów SD (Wong et al., 2001). Ahmad i in. (1995) donieśli, że Act indukuje zależny od dawki spadek skurczowego ciśnienia krwi (SBP) i rozkurczowego ciśnienia krwi (DBP) po wstrzyknięciu dożylnym szczurom Wistar, uśpionym pod ciśnieniem normalnym. Nie jest jednak jasne, czy podawany doustnie Act i/lub jego pokrewne izomery mają działanie przeciwnadciśnieniowew żywy. W niniejszym badaniu zbadaliśmyw witro przeciwutleniaczzdolności i działania hamujące ACE, a takżew żywydziałanie przeciwnadciśnieniowe Act, Isoact i/lub 6-O-acetylact przy użyciu szczurów z samoistnym nadciśnieniem (SHR). Oczekuje się, że badania te dostarczą przydatnych danych do opracowania Act jako zdrowego produktu spożywczego.

Materiały i metody

Materiały

2,2'-azobis(2-amidynopropano)dichlorowodorek (AAPH), ACE (jednostka I, płuco królika), butylowany hydroksytoluen (BHT), DPPH, N-(3-[{{7 }}furylo]akryloilo)-Phe-Gly-Gly (FAPGG), NADH, metosiarczan fenazyny (PMS), ksantynę i oksydazę ksantynową zakupiono z Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA). Kaptopril zakupiono w Calbiochem Co. (CA, USA). Act, Isoact i 6-O-acetylakt (Rysunek 1) zakupiono od Equal Corp. (czystość > 98 procent, Szanghaj, Chiny). Inne chemikalia i odczynniki pochodziły z Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO, USA).

Oczyszczanie działalność z Działać, Izoakt, oraz 6-O- acetyloakt przeciwko dPPH radykałowie za pomocą spektrofotometria

Objętość (0,3 ml) Act, Isoact i 6-O-acetylakt (końcowe stężenia wynosiły 1,56 do 50 µM), BHT i kwas askorbinowy (końcowe stężenia wynosiły 2,4 do 60 µM) dodano do 0,1 ml 1 M buforu Tris-HCl (pH 7,9 ), a następnie zmieszano z 0,6 ml 100 µM DPPH w metanolu do końcowego stężenia 60 µM przez 20 min pod osłoną przed światłem w temperaturze pokojowej (Liu i wsp., 2004; Lin i wsp., 2008). Zmierzono spadek absorbancji przy 517 nm i wyrażono jako ΔA517 nm. Jako ślepy eksperyment zastosowano wodę dejonizowaną. Oczyszczającą aktywność rodnika DPPH (w procentach) obliczono z równania: (ΔA517ślepa - ΔA517próbka) ÷ ΔA517ślepa × 100. IC50 oznacza stężenie połowicznego hamowania.

Hamujący działalność z Działać oraz Izoakt przeciwko ksantyna oksydaza

Aktywność oksydazy ksantynowej zmierzono przez określenie tworzenia kwasu moczowego przy 295 nm przy użyciu ksantyny jako substratu (Kalckar, 1947). Różne ilości Act i Isoact (końcowe stężenia wynosiły 25, 50 i 75 µM) zmieszano wstępnie z 50 µl 1 mU/ml oksydazy ksantynowej w 4 stopniach przez 1 godzinę, a następnie 300 µl 1 mM ksantyny zostały dodane. Zmiany absorbancji przy 295 nm rejestrowano w ciągu 2 min i wyrażano jako ΔA295 nm/min. Aktywność hamującą oksydazę ksantynową (w procentach) obliczono w następujący sposób: (ΔA295 nm/min czerni - ~A295 nm/min próbka) ÷ ~A295 nm/min czerni x 100. Jako ślepą próbę zastosowano wodę dejonizowaną zamiast roztworu próbki. IC50 oznacza stężenie połowicznego hamowania.

Oczyszczanie działalność z Działać, Izoakt, oraz 6-O- acetyloakt przeciwko ponadtlenek radykałowie za pomocą spektrofotometria

Rodnik ponadtlenkowy został wygenerowany przez system PMS-NA-DH (Liu i wsp., 2004; Lin i wsp., 2008). Wszystkie próbki 0,2 ml, zawierające różne ilości Act, Isoact i 6-O-acetylan (końcowe stężenie wynosiło 15,6, 31,3, 62,5, 125 i 250 µM), dodano kolejno do 0,2 ml 630 µM nitroblue tetrazolium, 0,2 ml 33 µM PMS i 0,2 ml 156 µM NADH w 100 mM buforze fosforanowym (pH 7,4). Jako ślepą próbę zastosowano wodę dejonizowaną zamiast roztworu próbki. Kwas askorbinowy (końcowe stężenie wynosiło 6, 9, 12 i 24 µM) zastosowano jako kontrolę pozytywną. Zmiany absorbancji przy 560 nm rejestrowano w ciągu 2 min i wyrażano jako ΔA560 nm/min. Wymiatające działanie rodników ponadtlenkowych (w procentach) obliczono w następujący sposób: (ΔA560 nm/min czerni - ΔA560 nm/min próbka) ÷ ΔA560 nm/min czerni × 100. IC50 oznacza stężenie półinhibicji.

determinacja z As hamujący działalność z Działać oraz Izoakt za pomocą HPLC

Każde 50 µL aktu (0.2, 0.4, 0.5 i 2.0 µmol) i Izoaktu ({{ 11}}.1, 0.2, 0.5, 1.0 i 2.0 µmol) zmieszano z 15 µl 1U/ml ACE przez 5 min, a następnie dodano 200 µl 0,5 mM FAPGG i poddano reakcji w temperaturze pokojowej przez 10 min (Anzenbacherova i wsp., 2001). Dodano 800 µl metanolu w celu zatrzymania reakcji. Pusty eksperyment był tylko FAPGG. W eksperymencie kontrolnym ACE reagował z FAPGG w tych samych warunkach. Rozdział chromatograficzny FAPGG i FAP przeprowadzono w systemie chromatograficznym Hitachi (Japonia) z pętlą 10 µL. Analizę HPLC przeprowadzono na kolumnie Biosil Aqua-ODS-W 5 µm (Biotic Chemical Co., Ltd., Tajwan, 250 x 4,6 mm id), wielkość cząstek 5 µm. Przereagowaną mieszaninę rozdzielono izokratycznie z fazą ruchomą składającą się z 0,02 M nonyloaminy (doprowadzonej do pH 2,4 kwasem fosforowym) i acetonitrylu w stosunku 67,5:32,5 (obj./obj.) (Anzenbacherova i wsp., 2001). Szybkość przepływu wynosiła 1 ml/min; objętość wtrysku wynosiła 10 µl; detektor ustawiono na 345 nm. Inhibicje ACE (w procentach) Act i Isoact obliczono w następujący sposób: [(Obszar FAPGGblank – Obszar kontroli FAPGG) – (Obszar FAPGGblank – Obszar próbki FAPGG) ÷ (Obszar FAPGGblank – Obszar kontroli FAPGG) × 100.

Hamujący działalność z Działać oraz Izoakt przeciwko za pośrednictwem AAPH hemoliza

Wolnorodnikowe utlenianie łańcuchowe czerwonych krwinek szczura (RBC) poprzez hemolizę za pośrednictwem AAPH (Miki i wsp., 1987). Krew szczura została umieszczona w heparynizowanych probówkach i odwirowana przy 1000 ×gprzez 10 min. Po trzykrotnym przemyciu 0,15 M NaCl, upakowane RBC otrzymano przez odwirowanie przy 1000 ×gprzez 1 0 min. Różne ilości Act i Isoact (końcowe stężenia wynosiły 2, 5 i 10 µM) zmieszano 25 µl 20% zawiesiny RBC (V/V, w 10 mM PBS) i 25 µl 500 mM roztworu AAPH w temperaturze 37 stopni przez 0 , 1, 1,5, 2, 2,5, 3 i 3,5 godz. delikatnie wstrząsając. Każdą mieszaninę odwirowano przy 1000 ×gprzez 10 min, a supernatant mierzono przy 536 nm. Zamiast roztworu AAPH lub roztworu próbki stosowano wodę dejonizowaną, odpowiednio, jako grupę ślepą lub jako grupę kontrolną. Hamowanie hemolizy (w procentach) Act i Isoact po 3 godz. lub po 3,5 godz. obliczono w następujący sposób: (ΔA536 nmkontrola - ΔA536 nmpróbka) ÷ ΔA536 nmkontrola × 100.

Przeciwnadciśnieniowe efekty z Działać oraz Izoakt na SHr

Wpływ doustnie podawanego Act, Isoact i kaptoprilu przez sondę (2.0 × 80 mm) na obniżone SBP i zmniejszone DBP określono zgodnie z metodą z poprzednich raportów (Lin et al., 2006; Lin et al., 2008; Han et al., 2011). Wszystkie procedury doświadczalne na zwierzętach były zgodne z opublikowanymi wytycznymi (National Science Council, 1994). Samce SHR (w wieku 8 tygodni, National Laboratory Animal Center, Taipei) były trzymane pojedynczo w stalowych klatkach utrzymywanych w temperaturze 24 stopni w 12-h cyklu światło-ciemność i miały swobodny dostęp do standardowej karmy dla myszy/szczurów ( Prolab RMH2500, dieta 5P14, PMI Nutrition International, Brentwood, MO) i woda. SHR zostały losowo podzielone na grupy kontrolne i próbki do oznaczeń SBP i DBP (sześć szczurów na grupę). W krótkotrwałym eksperymencie przeciwnadciśnieniowym, 0,5 ml 10 mg Act lub Isoact/kg SHR lub 5 mg kaptoprilu/kg SHR podano doustnie raz i mierzono ciśnienie krwi w ogonie po 2, 4, 6 i 24 h po pojedynczym podaniu doustnym. Do ślepego eksperymentu użyto 0,5 ml wody destylowanej. Pośredni miernik ciśnienia krwi (BP-98A, Softron Co. Ltd. Tokio, Japonia) został użyty do czterokrotnego pomiaru SBP i DBP przy każdym oznaczeniu dla każdego leczenia.

dane analiza

Wartości przedstawiono jako średnie ± SD i analizowano przy użyciu jednokierunkowej analizy ANOVA, a następnie testu post hoc Tukeya dla wielokrotnych porównań średnich. Uczniowiet-test przeprowadzono, gdy porównano tylko dwie grupy danych (takich jak między Act i Isoact w tym samym stężeniu). Wartość p < 0,05="" jest="" uważana="" za="" statystycznie="" istotną.="" analizę="" statystyczną="" przeprowadzono="" przy="" użyciu="" programu="" spss="" dla="" windows,="" wersja="" 10="" (spss,="" inc.,="" chicago,="" il,="">

akteozydw cistanche, aby poprawić pamięć

Wyniki

Oczyszczanie działalność z PPH oraz ponadtlenek radykałowie

Akt, Izoakt i 6-O-acetylakt wykazywał zależną od dawki aktywność zmiatania DPPH przy pH 7,9 (Figura 2). Wartości IC50 wynosiły odpowiednio 11,4, 9,48 i 9,55 µM dla Act, Isoact i 6-O-acetylakt. Wartości IC50 kontroli pozytywnych kwasu askorbinowego i BHT wynosiły odpowiednio 13,1 i 18,5 µM.

Zahamowanie z ksantyna oksydaza działalność

Wykazano, że Act i Isoact wykazują zależne od dawki hamowanie oksydazy ksantynowej (Figura 3). IC50 obliczono na odpowiednio 53,3 i 62,2 µM dla Act i Isoact.

Zahamowanie z ponadtlenek dysmutaza działalność

Ponieważ zarówno Act, jak i Isoact hamowały aktywność oksydazy ksantynowej, zastosowaliśmy system PMS-NADH do generowania rodników ponadtlenkowych (Liu i wsp., 2004; Lin i wsp., 2008). Działać,

Isoact i 6-O-acetylakt wykazywał zależną od dawki aktywność zmiatania rodników ponadtlenkowych (Figura 4). Wartości IC50 wynosiły odpowiednio 66,0, 38,5 i 39,1 µM dla Act, Isoact i 6-O-acetylakt. Wartości IC50 kontroli pozytywnej kwasu askorbinowego wynosiły 9,0 µM. Z wyników wykresów 2 i 4 jasno wynikało, że Isoact i 6-O-acetylan miał podobne działanie wymiatające rodniki wobec DPPH i rodników ponadtlenkowych, a zatem do dalszych badań przesiewowych aktywności biologicznej wybrano tylko Act i Isoact.

As hamujący zajęcia z Działać oraz Izoakt

We wstępnym teście stwierdziliśmy, że Act i Isoact zakłócały absorbancję substratu ACE FAPGG i jego zhydrolizowanego produktu FAP przy 345 nm, stosowanego w ciągłym teście spektrofotometrycznym (Holmquist i wsp., 1979). Dlatego też rozdział połączony z wykrywaniem Act lub Isoact i FAPGG metodą HPLC zastosowano do monitorowania aktywności hamujących ACE. Figury 5A do Figury 5D są typowymi chromatogramami HPLC z 10 µl mieszanin reakcyjnych próby ślepej (tylko FAPGG, Figura 5A); test kontrolny (ACE poddany reakcji z FAPGG w celu wytworzenia FAP, Rysunek 5B); 0,5 µmola Act (312,5 µg), ACE i FAPGG (Figura 5C); oraz 0,5 µmola Isoact (312,5 µg), ACE i FAPGG (Figura 5D). Powierzchnia FAPGG na Figurze 5B była najmniejsza, a na Figurze 5A najwyższa z czterech typowych chromatogramów HPLC. Obszary FAPGG na Figurach 5C i 5D są zależne od aktywności hamującej ACE różnych stężeń Act i Isoact. Obliczone inhibicje ACE Act i Isoact przedstawiono na Figurze 5E. Akt wykazał wyższą aktywność hamującą ACE niż Isoact, a IC50 tego pierwszego obliczono na 472 µM na powierzchnię na chromatogramach HPLC.

Hamujący działalność z Działać oraz Izoakt przeciwko za pośrednictwem AAPH hemoliza

Aktywności hamujące Act i Isoact przeciwko hemolizie, w której pośredniczy AAPH, w stężeniach 2, 5 i 10 µM oceniano przez 3,5 godziny (Miki i wsp., 1987). Wyniki z Figury 6A pokazują, że hemoliza w RBC szczura dramatycznie wzrosła (wyrażona jako ΔA536 nm) po 3-h lub 3.5-h reakcjach w obecności rodników AAPH (jako grupy kontrolne, symbol białego cyklu ). Niewielką lub brak hemolizy zaobserwowano przy braku rodników AAPH podczas reakcji 3.5-h (jako ślepe grupy, czarny symbol cyklu). Dlatego hamowanie hemolizy Act i Isoact po 3 godz. lub po 3,5 godz. obliczono w następujący sposób: (ΔA536 nmkontrola - ΔA536 nmpróbka) ÷ ΔA536 nmkontrola × 100. Rysunek 6B

pokazuje, że zarówno Act, jak i Isoact przy 2, 5 i 10 µM wykazywały zależne od stężenia hamowanie hemolizy indukowanej AAPH, przy czym hamujące działanie Act było znacznie silniejsze niż Isoact w każdym zastosowanym stężeniu.

Przeciwnadciśnieniowe efekty z Działać oraz Izoakt na SHr

SHR otrzymywali jednorazowo doustnie Act i Isoact (10 mg/kg SHR), a zmiany w SBP i DBP rejestrowano w ciągu 24 godzin. Wcześniej informowaliśmy, że ciśnienie krwi (SBP i DBP) SHR zmieniało się w ciągu 24-h (Lin i in., 2006; Han i in., 2011). Dlatego też zastosowano porównanie w ustalonym czasie (takim jak 2, 4, 6, 8 i 24 godz.) pomiędzy ślepą próbą a próbką zamiast przed i po samym podaniu doustnym. Stwierdzono, że Act, ale nie Isoact, skutecznie zmniejszał SBP i DBP SHR w porównaniu z grupą ślepą (woda destylowana). SBP było istotnie zmniejszone w grupie Act po 2, 4 i 6 godzinach odpowiednio o 18,8, 16,5 i 14,9 mmHg, ale zmniejszenie SBP (3,3 mmHg) po 24 godzinach po leczeniu Act nie było stabilne.

istotne artystycznie (ryc. 7A). Jak pokazano na rycinie 7B, DBP zmniejszyło się w grupie Act po 2, 4 i 6 godzinach (odpowiednio o 8,5, 7,6 i 12 0 mmHg), chociaż tylko wynik uzyskany po 6 godzinach był statystycznie istotny (P< 0.05).="" zauważono,="" że="" act="" i="" kaptopryl="" (jako="" kontrola="" pozytywna)="" miały="" podobny="" wpływ="" na="" sbp="" we="" wczesnych="" stadiach="" (2,="" 4="" i="" 6="" godzin)="" po="" podaniu="">

akteozydw cistanche mają dobry wpływ na antyoksydanty

DYSKUSJA

Aktywne formy tlenu i reakcje, w których pośredniczą wolne rodniki, biorą udział w procesach zwyrodnieniowych lub patologicznych, takich jak starzenie się, nowotwór, choroba wieńcowa i choroba Alzheimera (Ames, 1983; Gey, 1990; Smith i wsp., 1996). Kilka raportów skupiło się na badaniu przesiewowymprzeciwutleniaczdziałania z zasobów naturalnych. W niniejszym badaniu najpierw porównaliśmyprzeciwutleniaczdziałalność Act, Isoact i 6-O-acetylan. Act i Isoact są izomerami strukturalnymi, w których składnik ugrupowania kwasu kawowego jest związany z grupą hydroksylową C-4 glukozy w pierwszym i z grupą hydroksylową C-6 glukozy w drugim. Podczas gdy składniki ramnozy i 3',4'-dihydroksyfenyloetanolu są odpowiednio związane z grupami hydroksylowymi C-3 i C-1 ugrupowania glukozy w tej samej cząsteczce Act i Isoact, { {8}}O-acetylakt jest pochodną Act, w której kwas octowy jest związany z grupą hydroksylową C-6 w ugrupowaniu glukozy (Figura 1). Koo i in. (2006) donosili, że Act i jego aglikony wykazywały aktywność zmiatania DPPH, a kolejność tych aktywności (wyrażona jako IC50) to Act (1,28 µM) > kwas kawowy (2,22 µM) > 3',4'-dihydroksyfenyloetanol ( 7,72 µM) >-tokoferol (15,1 µM). W niniejszym raporcie (Rysunek 2) kolejność działań związanych z oczyszczaniem DPPH (wyrażona jako IC50) wynosi 6-O-acetylan (9,55 µM) ≈ Izoakt (9,48 µM) > Akt (11,4 µM). Wartości te były porównywalne lub lepsze niż te dla kwasu askorbinowego (IC50 13,1 µM) i BHT (IC50 18,5 µM) dla zmiatania rodników DPPH. Wyższe IC50 Act w niniejszym raporcie może pochodzić z końcowego stężenia 60 µM DPPH zamiast 30 µM stosowanego przez Koo et al. zgłoszone (2006). Ponieważ oznaczenie rodnikowe DPPH należy do reakcji przeniesienia elektronu (Huang et al., 2005), spekuluje się, że pochodna w grupie hydroksylowej C-6 ugrupowania glukozy, taka jak grupa acetylowa w {{21 }}O- ugrupowanie acetylanu i kwasu kawowego w Isoact mogą łatwiej zapewnić reakcję przeniesienia elektronu niż te z wolnej grupy hydroksylowej C-6 w ugrupowaniu glukozy w Act dla testu zmiatania DPPH.

Akt, 6-ODoniesiono, że -acetylan i Isoact wykazują aktywność zmiatania ponadtlenków in vitro przy użyciu układu ksantyna/oksydaza ksantyna do generowania rodników ponadtlenkowych (Wang i wsp., 1996; Gao i wsp., 1999). Jednak nasze obecne badanie wykazało, że Act wykazywał działanie hamujące oksydazę ksantynową (Figura 3). Dlatego rodnik ponadtlenkowy został wygenerowany przy użyciu systemu PMS-NADH w niniejszym raporcie (Liu i wsp., 2004; Lin i wsp., 2008) zamiast układu ksantyna/oksydaza ksantynowa. Rzeczywiście, stosując układ ksantyna/oksydaza ksantynowa do generowania rodników ponadtlenkowych, Wang et al. (1996) uzyskali IC50 63 µM Act wobec rodników ponadtlenkowych, a wartość ta jest zbliżona do hamowania aktywności oksydazy ksantynowej przez Act, jak podano w niniejszym badaniu (53,3 µM). Doniesiono, że kwas kawowy wykazuje działanie hamujące oksydazę ksantynową (Chiang i wsp., 1994). Można spekulować, że aktywność zmiatania ponadtlenków przy użyciu układu generującego ksantynę/oksydazę ksantynową niektórych fitochemikaliów ze strukturami związanymi z kwasami kawowymi, takimi jak Act lub Isoact (Wang i wsp., 1996; Gao i wsp., 1999), może mieć przynajmniej częściowo przyczyniły się do hamowania oksydazy ksantynowej. Co ciekawe, Wang i in. (1996) stwierdzili, że Act (0,5 i 2,5 mM) nie hamuje aktywności oksydazy ksantynowej, którą określano elektrodą tlenową pod kątem zużycia tlenu podczas utleniania ksantyny. Dlatego należy pamiętać, że różne metody oznaczania aktywności zmiatania ponadtlenków mogą dawać sprzeczne dane.

Li i in. (1993) opisali podobny stopień hamowania Act i Isoact przeciwko hemolizie zależnej od AAPH w RBC myszy. Jednakże wykazaliśmy tutaj, że Act wykazywał znacznie wyższą aktywność hamującą przeciw hemolizie wywołanej przez AAPH w RBC szczurów niż Isoact (Figura 6). Nie jest jasne, czy taka niespójność mogła wynikać z różnicy w gatunkach gryzoni.

Kang i in. (2003) donieśli, że Act wykazywał aktywność hamującą ACE, a IC50 wynosiło 373,3 µg/ml, które obliczono na 598 µM przy użyciu Hip-His-Leu jako substratów. W niniejszym raporcie Act wykazał wyższą aktywność hamującą ACE niż Isoact, a IC50 tego pierwszego obliczono na 472 µM na obszar na chromatogramach HPLC (Figura 5). Doniesiono, że działanie to wywiera działanie rozluźniające, w którym pośredniczy tlenek azotu, na nienaruszone śródbłonkowe pierścienie aorty szczurów SD (Wong et al., 2001). Chociaż wykazano, że Act ma działanie przeciwnadciśnieniowe u szczurów rasy Wistar,

w badaniu zastosowano dożylną iniekcję Act uśpionego szczura w celu wykluczenia czynnika adsorpcji (Ahmad i wsp., 1995). Tutaj podaliśmy Act ustnie SHR i ustaliliśmy zmiany ciśnienia krwi. Odkryliśmy, że podawanie doustne, ale nie Isoact, wykazywało działanie przeciwnadciśnieniowe poprzez obniżenie SBP i DBP w ciągu 24 godzin po pojedynczym podaniu (ryc. 7). Act w dawce 10 mg/kg masy ciała miał wpływ zbliżony do kaptoprilu w dawce 5 mg/kg SHR w obniżaniu SBP i był lepszy niż kaptopril w obniżaniu DBP.

Podsumowując, ustawa wystawionaprzeciwutleniaczaktywności, działania hamujące ACE i działanie przeciwnadciśnieniowe na SHR. Przedstawione tu wyniki przyniosą korzyści w wysiłkach zmierzających do opracowania leków ziołowych lub produktów pokrewnych przy użyciu Ustawy, która została znaleziona w wielu roślinach i lekach ziołowych, w celu ochrony przeciwutleniającej i działania terapeutycznego w przyszłości.

Cistancheakteozydprzeciwutleniające i przeciwstarzeniowe

1 Wydział Nauk o Żywności i Biotechnologii, Narodowy Uniwersytet Chung Hsing, Taichung, Tajwan

2Ko Da Pharmaceutical Co., Ltd, Tao-Yuan, Tajwan

3Szkoła Farmacji, Uniwersytet Medyczny w Tajpej, Tajpej, Tajwan

4Graduate Institute of Biomedical Materials and Engineering, Taipei Medical University, Taipei, Taiwan

5 Centrum Badań Tradycyjnych Ziołolecznictwa, Szpital Uniwersytecki w Tajpej, Tajpej, Tajwan

6 Absolwent Instytutu Farmakognozji, Uniwersytet Medyczny w Tajpej, Tajpej, Tajwan

(Otrzymano 12 marca 2012 r.; Zaakceptowano 20 kwietnia 2012 r.)

CYTOWANA LITERATURA

Ahmad, M., GH Rizwani, K. Aftab, VU Ahmad, AH Gilani i SP Ahmad. 1995.Akteozyd: nowy lek przeciwnadciśnieniowy. Fitoter. Res. 9: 525-527.

Ames, BN 1983. Dietetyczne czynniki rakotwórcze i przeciwrakowe: rodniki tlenowe i choroby zwyrodnieniowe. Nauka 221:1256-1264.

Anzenbacherova, E., P. Anzenbacher, K. Macek i J. Kvetina. 2001. Oznaczanie inhibitorów enzymu (konwertazy angiotensyny) na podstawie reakcji enzymatycznej, a następnie HPLC.J. Farmaceuta. Biomed. Analny. 24: 1151-1156.

Birkofer, L., C. Kaiser i U. Thomas. 1968.Akteozydi neoakteozyd: Zuckerester aus Syringa vulgaris. Naturforsc- hang 23B: 1051-1058.

Borer, JS 2007. Hamowanie enzymu konwertującego angiotensynę: przełomowy postęp w leczeniu chorób sercowo-naczyniowych. Eur. Serce J. Suppl. 9 (Suplement E): E2-E9.

Chen, CH, TY Song, YC Liang i ML Hu. 2009.Akteozydi 6-O-acetyloakteozyd obniża poziom cząsteczek adhezyjnych komórek indukowanych przez IL-1 poprzez hamowanie ERK i JNK w ludzkich komórkach śródbłonka naczyniowego. J. Rolnictwo. Żywność

Chem. 57: 8852-8859.

Chiang, HC, YJ Lo i FJ Lu. 1994. Inhibitory oksydazy ksantynowej z liści Alsophila spinulosa (Hook) Tryon. J. Hamowanie enzymów. 8: 61-71.

Chiou, WF, LC Lin i CF Chen. 2004.Akteozydchroni komórki śródbłonka przed stresem oksydacyjnym wywołanym przez wolne rodniki. J. Pharm. Pharmacol. 56: 743-748.

Fotherby, MD i B. Panayiotou. 1999. Terapia hipotensyjna w profilaktyce udaru mózgu: co, kiedy i dla kogo? Narkotyki 58: 663-674.

Gao, JJ, K. Igalashi i M. Nukina. 1999. Zmiatająca aktywność glikozydów fenylopropanoidowych w Caryopteris incana. Biosci. Biotechnologia. Biochem. 63: 983-988.

Gey, KF 1990przeciwutleniaczhipoteza chorób układu krążenia: epidemiologia i mechanizmy. Biochem. Soc. Przeł. 18: 1041-1045.428 Studia botaniczne, t. 53, 2012

Han, CH, JC Liu, KH Chen, YS Lin, CT Chen, CT Fan, HL Lee, DZ Liu i WC Hou. 2011. Działanie przeciwnadciśnieniowe przetworzonego czosnku u szczurów z nadciśnieniem spontanicznym i ludzi z nadciśnieniem. Nerw. Stadnina. 52: 277-283.

Holmquist, B., P. Bunning i JF Riordan. 1979. Ciągły test spektrofotometryczny dla enzymu konwertującego angiotensynę. Analny. Biochem. 95: 540-548.

Hou, WC, HJ Chen i YH Lin. 2003. Peptydy przeciwutleniające o działaniu hamującym enzym konwertujący angiotensynę i zastosowania do oczyszczania enzymu konwertującego angiotensynę. J. Rolnictwo. Chemia Spożywcza 51: 1706-1709.

Huang, D., B. Ou i RL Prior. 2005. Chemia zaprzeciwutleniacztesty wydajności. J. Rolnictwo. Chemia Spożywcza 53: 1841-1856.

Huang, CG, YJ Shang, J. Zhang, JR Zhang, WJ Li i BH Jiao. 2008. Hipourycemiczne działanie glikozydów fenylopropanoidowychakteozydScrophularia ningpoenis na stężenie kwasu moczowego w surowicy u myszy wstępnie leczonych oksonianem potasu. Amer. J.

Podbródek. Med. 36: 149-157.

Lee, KY, EJ Jeong, HS Lee i YC Kim. 2006.AkteozydCallicarpa dichotoma łagodzi zaburzenia pamięci wywołane skopolaminą. Biol. Farmacja Byk. 29: 71-74.

Li, J., P. Wang, R. Zheng, Z. Liu i Z. Jia. 1993. Ochrona glikozydów fenylopropanoidowych z Pedicularis przed hemolizą oksydacyjną in vitro. Planta Med. 59: 315-317.

Li, H., GX Chou, ZT Wang i ZB Hu. 2006. HPLC oznaczanieakteozydw Radix Rehmanniae. Zhongguo Zhong Yao Za Zhi 31: 822-824.

Lin, SY, CC Wang, YL Lu, WC Wu i WC Hou. 2008.Przeciwutleniacz, anty-semikarbazydowa oksydaza aminowa oraz przeciwnadciśnieniowe działanie geraniiny wyizolowanej z Phyllanthus urinaria. Chemia Spożywcza Toksykol. 46: 2485-2492.

Liu, DZ, YS Lin i WC Hou. 2004. Wykaz monohydroksamatów kwasu asparaginowego i kwasu glutaminowegoprzeciwutleniaczi aktywności hamujące enzym konwertujący angiotensynę. J. Agric. Food Chem. 52: 2386-2390.

Kalckar, HM 1947. Spektrofotometria różnicowa związków purynowych za pomocą określonego enzymu. J. Biol. Chem.167: 429-443.

Kang, DG, YS Lee, HJ Kim, YM Lee i HS Lee. 2003. Glikozydy fenylopropanoidowe hamujące enzym konwertujący angiotensynę z Clerodenron trichotomum. J. Etnofarmakol. 89: 151-154.

Koo, KA, SH Sung, JH Park, SH Kim, KY Lee i YC Kim. 2005. Neuroprotekcyjne działanie glikozydów fenyloetanoidowych z Callicarpa dichotoma in vitro. Planta Med.71: 778-780.

Koo, KA, SH Kim, TH Oh i YC Kim. 2006.Akteozyda jego aglikony chronią pierwotne hodowle szczurzych komórek korowych przed ekscytotoksycznością indukowaną glutaminianem. Życie Sci. 79:709-716.

Lin, CL, SY Lin, YH Lin i WC Hou. 2006. Wpływ białka spichrzowego bulw pochrzynu (Dioscorea alata cv. Tainong No.1) i jego hydrolizatów trawiennych na szczury z samoistnym nadciśnieniem. J. Sci. Rolnictwo żywności. 86: 1489-1494.

Mark, KS i TP Davis. 2000. Udar: rozwój, profilaktyka i leczenie inhibitorami peptydazy. Peptydy 21:1965-1973.

Miki, M., H. Tamai, M. Mino, Y. Yamamoto i E. Niki. 1987. Wolnorodnikowe utlenianie łańcucha czerwonych krwinek szczura przez tlen cząsteczkowy i jego hamowanie przez -tokoferol. Arch Biochem. Biofizyka. 258: 373-380.

Krajowa Rada Nauki. 1994. Przewodnik dotyczący opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych. Krajowa Rada Naukowa, Tajwan.

Ohno, T., M. Inoue, Y. Ogihara i I. Saracoglu. 2002. Aktywność przeciwprzerzutowaakteozyd, glikozyd fenyloetanoidowy.Biol. Farmacja Byk. 25: 666-668.

mgr Vendetti, B. Rubin, DW Cushman. 1977. Projekt specyficznych inhibitorów enzymu konwertującego angiotensynę: nowa klasa doustnych leków przeciwnadciśnieniowych. Nauka 196: 441-444.

Rao, YK, SH Fang, SC Hsieh, TH Yeh i YM Tzeng. 2009. Składniki Anisomeles India i ich działanie przeciwzapalne. J. Etnofarmakol. 121: 292-296.

Smith, MA, G. Perry, PL Richey, LM Sayre, VE Anderson, MF Beal i N. Kowal 1996. Uszkodzenia oksydacyjne w chorobie Alzheimera. Nature 382: 120-121. Wang, P., J. Kang, R. Zheng, Z. Yang, J. Lu, J. Gao i Z. Jia.

1996. Zmiatający wpływ glikozydu fenylopropanoidowego z Pedicularis na anion ponadtlenkowy i rodnik hydroksylowy metodą pułapkowania spinu. Biochem. Pharmacol. 51: 687- 691.

Wong, IYF, Y. Huang, ZD He, CW Lau i ZY Chen. 2001. Relaksujące działanie ekstraktu Ligstrum purpurascens i oczyszczonegoakteozydw pierścieniach aorty szczura. Planta Med. 67:317-321.

Wu, YT, LC Lin, JS Sung i TH Tsai. 2006. Wyznaczenieakteozydu Cistanche deserticola i Boschniakia rossica oraz jej farmakokinetykę u swobodnie poruszających się szczurów przy użyciu LC-MS/MS. J. Chromatogr. B 844: 89-95.