Czy sauny są korzystne czy szkodliwe w przypadku autosomalnej dominującej policystycznej choroby nerek? Badanie z modelem myszy Ⅰ

Abstrakcyjne tło:Białka szoku cieplnego (Hsp), których ekspresja jest indukowana przezObróbka termiczna, pełni funkcję ochronną nerekprzeztłumienie apoptozyIutrzymanie żywotności kanalików nerkowych. Ponadto ostatnio wskazano, że ekspresja Hsp może być celem terapeutycznym w przypadku autosomalnej dominującej wielotorbielowatości nerek (ADPKD). Zbadaliśmyefekt terapii sauną suchąna myszach modelu ADPKD.

KLIKNIJ TUTAJ, ABY POBRAĆ NATURALNY ORGANICZNY EKSTRAKT Z CISTANCHE Z 25% ECHINAKOZYDEM I 9% AKTEOZYDEM NA FUNKCJĘ NEREK

Metody i wyniki:Myszy (samce myszy DBA/2FG-pay) podzielono na trzy grupy: kontrole, TS: myszy płatne poddane długotrwałej saunie z wodą zawierającą 4% sacharozy, SW: myszy płatne, którym podano wodę zawierającą 4% sacharozy. Grupa TS była poddawana sesjom w saunie dwa razy w tygodniu przez cztery tygodnie. Grupa TS osiągnęła temperaturę w odbycie i utrzymywała się na poziomie około 39,0 stopnia do czasu ostrożnego usunięcia ich z urządzenia emitującego daleką podczerwień. Po 4 tygodniach korzystania z sauny metodą enzymatyczną oznaczono poziom kreatyniny i azotu mocznikowego we krwi (BUN). Białko szoku cieplnego (HSP) lub białka związane ze wzrostem i wielkością komórek analizowano metodą Western blot. W grupie TS poziom kreatyniny i BUN był minimalnie wyższy niż w grupie kontrolnej i grupie SW, jednak różnice nie były istotne. Jednakże powiększenie torbieli w grupie ZT uległo znacznemu zmniejszeniu w porównaniu z grupą kontrolną. Ekspresja HSP90 była nieznacznie obniżona w grupach TS i SW w porównaniu z grupą kontrolną (p < 0.01 lub p < 0,001 w porównaniu z grupą kontrolną), podobnie jak ekspresja Erka , co jest powiązane z rozwojem i proliferacją cyst (p < 0,05, TS vs. kontrola). Poziom ekspresji i fosforylacji Hsp27 w grupie SW był porównywalny z poziomem w grupie kontrolnej. Jednakże grupa TS miała podwyższony poziom Hsp27 i fosforylacji (NS). Ekspresja prokaspazy-3 w grupie z TS była nieznacznie niższa niż w grupie kontrolnej. Jednakże aktywność kaspazy-3 we wszystkich grupach nie wykazała różnic.

Wniosek:Wyniki tego badania wykazały, że 4-tygodniowe leczenie w saunie może powodować przejściowe odwodnienie i związaną z nim dysfunkcję nerek oraz prowadzić do ryzyka stymulacji wzrostu cyst poprzez zwiększoną ekspresję Hsp27. Ponadto doszliśmy do wniosku, że zapobieganie odwodnieniu i rozwojowi cyst można zapobiec, pijąc odpowiednią ilość wody bezpośrednio po zabiegu w saunie.

I. Wstęp

Autosomalna dominująca wielotorbielowatość nerek(ADPKD) to choroba genetyczna charakteryzująca się wzrostem licznych cyst w obu nerkach. ADPKD jest spowodowane głównie mutacjami w genach policystycznej choroby nerek 1 (PKD1) i PKD2, które kodują odpowiednio policystynę 1 (PC1) i PC2. W ciągu kilkudziesięciu lat trwania choroby u pacjentów rozwijają się duże, wypełnione płynem torbiele nerek, które upośledzają czynność nerek. Obecnie liczbę pacjentów z ADPKD w Japonii szacuje się na 31,000, co stanowi około 3-5% wszystkich pacjentów dializowanych). U około 50% pacjentów z ADPKD schyłkowa niewydolność nerek rozwija się przed 602 rokiem życia). Tolwaptan, antagonista receptora wazopresyny 2 (V2), został zatwierdzony jako pierwszy środek terapeutyczny w leczeniu ADPKD, a jego zastosowanie kliniczne rozpoczęło się w maju 2014 roku w Japonii). Chociaż jest to skuteczny lek zmniejszający tempo wzrostu cyst, obecnie nie ma leku na ADPKD i nie jest możliwe zatrzymanie powstawania cyst w nerkach.

Terapia termiczna, w tym balneoterapia (BT) i terapia uzdrowiskowa (ST), jest często stosowana na całym świecie jako fizjoterapia lub terapia alternatywna. W warunkach klinicznych głównym celem terapii termicznej jest osiągnięcie skutecznych wyników leczenia bez uszkadzania normalnych tkanek. Niedawny przegląd systematyczny wykazał, że BT i ST zapewniają znaczną ulgę w bólu i poprawę jakości życia w przewlekłych chorobach układu mięśniowo-szkieletowego lub tkanki łącznej). Stymulacja termiczna indukuje białka szoku cieplnego (Hsp), które są niezbędne do przeżycia komórek ze względu na ich funkcję jako białka opiekuńcze. Rola Hsp w zdrowiu i chorobie nerek jest zmienna. Indukcja Hsp może być korzystna lub szkodliwa dla nerek, w zależności od konkretnego Hsp, typu komórki i kontekstu). W tkance nerek Hsp stanowią ważną część wewnątrzkomórkowego systemu obronnego, który jest aktywowany przez różne rodzaje stresu komórkowego. Różne Hsp wewnątrz komórki stabilizują struktury komórkowe i zwiększają odporność komórek na apoptozę i martwicę6), 7). W ostatnich latach donoszono, że Hsp odgrywają szkodliwą rolę w ADPKD i dlatego są celami terapeutycznymi8), 9). Dlatego też naszym celem było zbadanie wpływu sauny na zwierzęta modelowe ADPKD, gdy powtarzane jest obciążenie cieplne, które podnosi temperaturę w odbycie o około 2 stopnie i utrzymuje ją przez około 30 min. II Materiały i metody 1. Myszy model autosomalnej dominującej wielotorbielowatości nerek (ADPKD) Wszystkie procedury na zwierzętach przeprowadzono zgodnie z wytycznymi dotyczącymi opieki nad zwierzętami laboratoryjnymi i ich wykorzystywania zatwierdzonymi przez Uniwersytet Nauk o Zdrowiu Kumamoto (nr 18-07) . Samce myszy DBA/2FG-pcy (pcy)10), 11) (8 tygodni, n=12) (Kyudo, Kumamoto, Japonia) o początkowej masie ciała 20,9 ± 0,7 g wykorzystano jako myszy modelowe ADPKD w tym badaniu eksperyment. Samce myszy DBA (8 tygodni, n=3) wykorzystano jako punkt odniesienia dla mysiego modelu ADPKD. Ryc. 1 przedstawia wygląd i wyciętą nerkę jako typowe przykłady myszy Pcy (ryc. 1A, B). Wszystkie zwierzęta trzymano w kontrolowanej wilgotności i temperaturze, z cyklem światło/ciemność wynoszącym 12:12-h, i miały swobodny dostęp do standardowej karmy dla myszy i wody z kranu.

Dziewięć myszy pcy (w wieku 8 tygodni) podzielono losowo na następujące trzy grupy: grupa kontrolna: myszy pcy jako kontrola (n=3), grupa TS: myszy pcy narażone na powtarzaną ogólnoustrojową stymulację termiczną (n {{3} }); i grupa SW: myszy Pcy, którym podano wodę zawierającą 4% sacharozy (n=3). Myszom w grupie TS podano przez noc wodę zawierającą 4% sacharozy, po ogólnoustrojowej stymulacji termicznej, aby zapobiec odwodnieniu. W poprzednim badaniu odkryliśmy, że utrata masy ciała po ogólnoustrojowej stymulacji termicznej wynosiła około 3–4%12). Po podaniu myszom PCY wody z dodatkiem 4% sacharozy, ilość spożytej wody znacznie wzrosła z 5,6 ± 0,6 ml do 7,4 ± 0,7 ml (p < 0,001 , ryc. 1C). Spożycie wody w dawce 4% sacharozy w ciągu nocy było rzeczywiście wysokim spożyciem płynów odpowiadającym 14 ± 7% masy ciała. Grupa SW spożywała wodę przez noc z tą samą częstotliwością, co grupa TS.

Ryc. 1 A: Mysz DBA (Lt) i mysz 2FG-pcy (Rt). B: Nerka DBA (Lt) lub 2FG-pcy (Rt), pasek skali=1 cm. C: Spożyj odpowiednią ilość wody lub 4% wody z sacharozą przez noc po saunie myszom w wieku 8 tygodni. Dane przedstawiono jako średnią ± SD. n.=3. ＊＊＊ p < 0.001 (W analizie statystycznej wykorzystano test T dla par).

2. Ogólnoustrojowa stymulacja termiczna (sauna)

Intensywność ogrzewania sauny została ustalona na podstawie poprzedniego badania13). Jednakże temperatura w odbycie niektórych myszy pcy przekraczała 42 stopnie ze względu na ich małą objętość ciała w porównaniu z normalnymi myszami DBA i myszami 129X1/SvJ. Dlatego też podjęto próbę podniesienia temperatury w odbycie o 1 stopień, ale ze względu na ograniczenia w sterowaniu systemem sauny suchej dalekiej podczerwieni (dostarczanej przez Uniwersytet w Kagoshimie) temperatura w odbycie wzrosła do około 39 stopni. Nie znaleziono żadnych raportów na temat częstości występowania sau nas w przypadku ADPKD; dlatego przyjęto minimalną efektywną częstotliwość korzystania z sauny (dwa razy w tygodniu) ustaloną w badaniu Laukkanen i wsp.14 dotyczącym związku pomiędzy kąpielami w saunie a chorobami układu krążenia i innymi przyczynami śmiertelności. Konkretnie, myszy poddano działaniu sauny w temperaturze 43 stopni przez dziesięć minut, a następnie w temperaturze 37 stopni przez 35 minut, aby podnieść temperaturę w odbycie z 37,1 ± 0,1 stopnia do 39,3 ± 0,3 stopnia przy użyciu metody system suchej sauny dalekiej podczerwieni. Temperaturę w odbycie myszy utrzymywano na poziomie około 39,0 stopnia do czasu wyjęcia ich z sauny. Grupa TS przebywała w saunie przez cztery tygodnie, dwa razy w tygodniu.

3. Procedura analityczna

Pod koniec czterotygodniowego okresu badania od wszystkich myszy uzyskano dane fizjologiczne. Do klatek metabolicznych zbierano dwudziestoczterogodzinne próbki moczu i określano spożycie płynów. Pobrano próbki krwi z żyły głównej dolnej i zmierzono poziom kreatyniny w osoczu i azotu mocznikowego we krwi (BUN) za pomocą automatycznego analizatora Hitachi 7180 Biochemistry Automatic Analyzer (Hitachi High-Technologies Corporation, Tokio, Japonia) z Aqua-auto Kainos CRE -zestaw testowy II lub zestaw testowy UN-II (Kainos, Tokio, Japonia) przy użyciu metody enzymatycznej.

4. Badania histologiczne

Nerki utrwalono 4% roztworem buforu fosforanu paraformaldehydu i zatopiono w parafinie. Próbki nerek pocięto na skrawki w odstępach 2-µm i wybarwiono hematoksyliną i eozyną (H&E), a cysty w kanalikach oznaczono ilościowo na 2 skrawkach/mysz (prawa nerka) przy użyciu ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA). Obszary z rozdarciami tkanek i pęcherzykami, które zidentyfikowano przy większym powiększeniu (× 40), zostały wyłączone z analizy, jak podano wcześniej 15).

5. Western blot

Elektroforezę w żelu poliakryloamidowym z dodecylosiarczanem sodu (SDS-PAGE) i bloting przeprowadzono stosując standardowe procedury. Porcje zawierające 15 µg białka poddano SDS-PAGE. Zastosowano przeciwciała wytworzone przeciwko następującym białkom: Hsp27 (1:1,000, sc-9012, Santa Cruz Biotechnology), fosfo-Hsp27 (1:1,000, #2401S, Cell Signaling Technology), total-Akt (1:1,000, #9272, Cell Signaling Technology), fosfo-Akt (1:1,000, #9275, Cell Signaling Technology), Erk1 /2 (1:1,000, #9102, technologia sygnalizacji komórkowej), fosfo-Erk1/2 (1:1,000, #9101, technologia sygnalizacji komórkowej), mTOR (1:1 ,000, #2972, Cell Signaling Technology), fosfo-mTOR (1:1,000, #2971, Cell Signaling Technology), kaspaza 3 (1:500, ab4051, Abcam, Cambridge, UK), rozszczepiona kaspaza-3 (1:1,000, #9661, Cell Signaling Technology) i -aktyna (1:1,000, sc-130656, Biotechnologia Santa Cruz). Bloty wykrywano przy użyciu systemu wykrywania Western blot ECL Prime (GE Healthcare, Wielka Brytania) zgodnie z instrukcjami producenta. Dane wykazały względną ocenę ilościową względem -aktyny, którą zastosowano jako kontrolę wewnętrzną.

6. Analiza statystyczna

W celu analizy statystycznej dane pomiędzy grupami TS i SW porównano za pomocą testu U Manna-Whitneya. Grupy porównano za pomocą jednoczynnikowej analizy wariancji (ANOVA), a następnie testu Tukeya w celu zidentyfikowania różnic. Różnice uznano za istotne statystycznie przy p < 0,05. Dane wyrażono jako średnią ± odchylenie standardowe (SD) lub średnią ± błąd standardowy średniej (SEM). Do analizy statystycznej wykorzystano program GraphPad Prism 6 (GraphPad Software, San Diego, Kalifornia, USA).

Wsparcie dla Wecistanche – największego eksportera Cistanche w Chinach:

E-mail:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/tel:+86 15292862950

Kup więcej szczegółów specyfikacji:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop