Cistanche Tubulosa chroni neurony dopaminergiczne poprzez regulację apoptozy i czynnika neurotroficznego pochodzącego z komórek glejowych: in vivo i in vitro-Ⅱ

Testy behawioralne

Test pływania (Zhu i in., 2014)

Koordynację ruchów ciała u myszy mierzono za pomocą testu pływania. Myszy umieszczono pojedynczo w zbiorniku na wodę (25 cm wysokości i 10 cm średnicy) zawierającym 10 cm wody i testowano w cichym otoczeniu, aby zarejestrować czas ich bezruchu przez 5 minut.

Test otwartego pola (Kawai i in., 1998)

Aktywność lokomotoryczną mierzono za pomocą testu otwartego pola. Myszy testowano w cichym i słabo oświetlonym otoczeniu i pojedynczo umieszczano w przezroczystym akrylowym pojemniku o wymiarach 30 cm x 30 cm x 15 cm z siatką oddzielającą o wymiarach 6 cm x 6 cm na dnie. Myszom dano 10 minut na przystosowanie się do środowiska, a następnie pięciokrotnie zmierzono liczbę siatek i częstotliwość wychowywania poszczególnych myszy w celu uzyskania wartości średnich.

NATURALNY CISTANCHE TUBULOSA DLA POPRAWY FUNKCJI SEKSUALNYCH PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Pobieranie próbek tkanki mózgowej

Przed pobraniem próbek tkanek myszy karmiono ad libitum ze swobodnym dostępem do wody i podawano im lek przez 14 kolejnych dni. Wybrano cztery myszy z każdej grupy i szybko je dekapitowano. SN (Bregma: -2,75 mm -2,92 mm) od każdego zwierzęcia izolowano i umieszczano na lodzie. Tkanki mózgu przepłukano 0,9% lodowatym roztworem chlorku sodu w celu usunięcia wszelkiej krwi i wysuszono na bibule filtracyjnej przed przechowywaniem w temperaturze -80°C. Cztery myszy z każdej grupy znieczulano dootrzewnowo i otwierano im klatki piersiowej. Następnie do lewej komory każdego zwierzęcia wprowadzono igłę infuzyjną. Aby usunąć krew z układu krążenia, odcięto uszka prawego przedsionka i zwierzęciu podano normalną sól fizjologiczną o temperaturze 4°C, aż wątroba zbladła, aby zapewnić ciągłą perfuzję. Gdy wyciek z prawego przedsionka stał się klarowny, każde zwierzę perfundowano 4% utrwalaczem paraformaldehydowym. Po perfuzji tkankę mózgową każdego zwierzęcia następnie ostrożnie wycięto i utrwalono w 4% paraformaldehydzie przez 24 godziny. Utrwalone tkanki mózgowe następnie przepłukano pod bieżącą wodą, odwodniono w stopniowanej serii roztworów etanolu i oczyszczono w roztworze ksylenu. Następnie przeprowadzono zanurzanie i zatapianie w parafinie.

Zmiany ilości DA mierzone metodą HPLC

Nanoproszek SN z każdej grupy umieszczono w łaźni lodowej zawierającej 0,9% roztwór chlorku sodu (w stosunku 1:9). Tkankę mózgową homogenizowano przy użyciu ultradźwiękowego urządzenia do rozbijania komórek i wirowano przy 1200 obr./min przez 20 minut w temperaturze 4°C w celu otrzymania supernatantu. Do HPLC zastosowano kolumnę Hypersil AA-ODS (2,1 mm x 200 mm, 5 µm) w temperaturze kolumny 30°C. Detekcję fluorescencji przeprowadzono przy 280 nm λex i 340 nm λem. Objętość wstrzyknięcia wynosiła 10 µl.

Ekspresja TH, GDNF, GFR 1 i Ret wykryta metodą immunohistochemiczną

Od każdego zwierzęcia wyizolowano skrawki parafinowe (grubość 5 µm) pojedynczej tkanki mózgowej i umieszczono w łaźni wodnej o temperaturze 40◦C w celu spłaszczenia i przyklejenia do szkiełek. Wszystkie szkiełka tkankowe inkubowano w piecu o temperaturze 60°C przez 3–6 godzin, a następnie odparafinowano w ksylenie, odwodniono w gradiencie etanolu i odzyskano antygen poprzez inkubację w buforze kwasu cytrynowego i ogrzewanie w kuchence mikrofalowej przez 20 minut. Następnie szkiełka tkankowe inkubowano w 3% roztworze H2O2 w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Po trzykrotnym przemyciu w PBS, szkiełka tkankowe inkubowano z normalną surowicą w zamkniętej komorze w temperaturze pokojowej przez 20 minut. Barwienie immunohistochemiczne przeprowadzono zgodnie z instrukcjami producenta. Do obliczenia wartości zintegrowanej gęstości optycznej w dodatnio wybarwionych komórkach zastosowano analizator obrazu Motic Med 6.0.

Analiza Western Blot w tkankach mózgu myszy

W badaniu tym oceniano ekspresję białek hydroksylazy tyrozynowej (TH), GDNF, GFR 1, Ret, Bcl2 i Bax. Lizat mózgu z każdej grupy homogenizowano przez 3{{10}} min na lodzie, a następnie wirowano w niskiej temperaturze, 20,000 obr./min., w temperaturze 4 ◦C przez 5 minut na zebranie supernatantu. Próbki białek rozdzielono pod stałym ciśnieniem przy użyciu 10% żelu SDS-PAGE, jak opisano powyżej. Stężenie przeciwciał pierwotnych: TH 0,15 mg/ml, GDNF 0,5 mg/ml, GFR 1 0,8 mg/ml, Ret 0,63 mg/ml, Bcl-2 0,34 mg/ml i Bax 0,11 mg/ml. Procedura była taka sama jak powyżej.

NATURALNY CISTANCHE TUBULOSA DLA PRZECIW STARZENIU PRZECIWALZHEIMER PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Analiza statystyczna

W badaniu tym do przetwarzania i analizy danych wykorzystano oprogramowanie statystyczne SPSS 20.0. Wartości parametrów wyrażono jako średnią ± odchylenie standardowe (¯x ± S). Do jednoczynnikowej analizy danych zastosowano analizę ANOVA. Do porównania grup zastosowano LSD lub test Gamesa-Howella. P< 0.05 (or P < 0.01) was considered as a statistically significant difference.

WYNIKI

Aktywne składniki nanoproszku C. tubulosa

W zakresie skanowania 200–400 nm, ECH w C. tubulosa i VER w 330 nm miały maksymalny pik absorpcji, który pojawił się w ciągu 20 minut. ICA miał maksymalne piki absorpcji przy 270 nm i pojawił się po 20 minutach (Rysunek 1A). Wyniki pokazały, że próbki ujemne nie zakłócały detekcji (Rysunek 1B). Próbki i kontrola miały te same piki chromatograficzne, a próbka ujemna nie miała żadnego. Wykazało to, że inne składniki w próbce nie zakłócały mierzonego składnika. Co więcej, trzy składniki i sąsiednie piki mogą osiągnąć linię bazową rozdziału, a stopień rozdziału był większy niż 1,5.

C. tubulosa Nanoproszek o zmniejszonej zawartości MPP+ -Cytotoksyczność indukowana w komórkach MES23.5

Żywotność komórek MES23.5 znacznie spadła wraz ze wzrostem stężenia MPP+. Figura 2F pokazuje znaczącą cytotoksyczność różnych stężeń MPP+.

Nanoproszek C. tubulosa zmniejsza cytotoksyczność indukowaną MPP+- i zwiększa żywotność komórek MES23.5. Figura 2G pokazuje, że dawki nanoproszku C. tubulosa wynoszące 10–250 µg/ml wywierały zależne od dawki działanie ochronne na komórki MES23.5 traktowane MPP+-.

Cytomorfologiczne działanie nanoproszku C. tubulosa

Normalne komórki MES23.5 miały dobrą adhezję komórkową i miały wrzecionowaty kształt z wyraźnymi granicami komórek i synapsami. Komórki MES23.5 uszkodzone przez MPP+- wykazywały słabą adhezję i kurczliwość komórek, a wiele z nich było zawieszonych w ośrodku ze skurczonymi synapsami. Komórki te były agregowane, skurczone i okrągłe, z wakuolami w środku, a jądra uległy rozpadowi lub zapadnięciu. Nanoproszek C. tubulosa w różnych dawkach poprawiał cytomorfologię komórek MES23.5 w różnym stopniu poprzez poprawę adhezji komórek i klirensu synaptycznego grupy nośnika. Komórki MES23.5 w grupie leczonej dużą dawką C. tubulosa wykazywały morfologię podobną do normalnej grupy kontrolnej (ryc. 2A – E).

Wpływ nanoproszku C. tubulosa na ekspresję TH i apoptozę w komórkach

Figura 3 pokazuje znaczące zmniejszenie ekspresji białka TH w grupie nośnika. Ekspresja białka TH wzrosła w różny sposób w grupach leczonych różnymi dawkami C. tubulosa. Jednakże test LSD wykazał, że nie było znaczącej różnicy pomiędzy trzema leczonymi grupami.

Figura 4 przedstawia wyniki oceny apoptozy przy użyciu cytometrii przepływowej. Szybkość apoptozy w grupie otrzymującej nośnik była znacząco wyższa niż w innych grupach. Komórki traktowane różnymi dawkami nanoproszku C. tubulosa wykazywały różny stopień spadku tempa apoptozy w porównaniu z grupą nośnika. Komórki w grupie leczonej średnią i dużą dawką C. tubulosa wykazały najbardziej znaczącą poprawę szybkości apoptozy w porównaniu z innymi grupami leczonymi C. tubulosa. Test LSD wykazał, że nie było znaczącej różnicy pomiędzy dwiema leczonymi grupami, ale była także znacząca różnica pomiędzy grupą otrzymującą małą dawkę.

Wpływ nanoproszku C. tubulosa na ekspresję białka Bcl2/Bax w komórkach

Figura 5 pokazuje, że ekspresja białka Bcl2 w komórkach grupy nośnika była znacząco niższa w porównaniu z normalną grupą kontrolną. Natomiast ekspresja białka Bax w komórkach grupy nośnika była znacząco wyższa niż w normalnej grupie kontrolnej. Grupy poddane działaniu C. tubulosa wykazały zwiększoną ekspresję białka Bcl2 i zmniejszoną ekspresję białka Bax w komórkach MES23.5 traktowanych MPP+-. Pomiędzy trzema leczonymi grupami wystąpiły znaczące różnice w teście LSD. Działania te były zależne od dawki.

Testy behawioralne

Wyniki testu pływania sugerują, że myszy w grupie otrzymującej nośnik miały stosunkowo długi czas bezruchu, który wydłużał się z czasem. W dniu 14 myszy w grupie otrzymującej nośnik miały znacznie dłuższy czas bezczynności niż myszy w normalnej grupie kontrolnej. Czas stacjonarnego przebywania myszy w

niska dawkaC. tubulosaleczona nie różniła się znacząco od grupy myszy otrzymujących nośnik. Jednakże czas postoju myszy w grupie leczonej dużą dawką C. tubulosa był znacznie krótszy niż u myszy w grupie otrzymującej nośnik.

Wyniki testu otwartego pola sugerują, że po uszkodzeniu wywołanym przez MPTP u myszy, myszy w grupie otrzymującej nośnik wykazywały znaczny spadek swojej zdolności do spontanicznej aktywności, na co wskazuje częstotliwość odchowu. Po 14-dniowym podaniuNanoproszek C. tubulosa, myszy w grupach leczonych umiarkowaną i dużą dawką miały znacznie większą częstotliwość hodowli w porównaniu z myszami w grupie otrzymującej nośnik (Figury 6A, B).

Wpływ nanoproszku C. tubulosa na zawartość DA u myszy

Zmiany zawartości DA w SN określono metodą HPLC. Stwierdzono, że zawartość DA w mózgu grupy otrzymującej nośnik została znacząco obniżona. Zawartość DA w mózgach myszy z PD w grupie leczonej małą dawką C. tubulosa nie różniła się znacząco od myszy w grupie otrzymującej podłoże. Jednakże,Leczenie C. tubulosazwiększyło poziomy DA w mózgach myszy z PD w sposób zależny od dawki. Mózgi myszy z PD leczonych dużą dawką C. tubulosa miały znacznie wyższą zawartość DA niż mózgi myszy w grupie otrzymującej nośnik (Figura 6C).

Wpływ nanoproszku C. tubulosa na ekspresję TH u myszy

Liczba komórek TH-dodatnich i poziom ekspresji białka TH w SN myszy z PD indukowanych MPTP były niższe w porównaniu z myszami w grupie kontrolnej. Po leczeniu C. tubulosa liczba komórek TH-dodatnich i poziom ekspresji białka TH w SN myszy z PD indukowanych MPTP wzrosły, ze znaczącą różnicą pomiędzy grupą leczoną dużą dawką C. tubulosa a grupą otrzymującą podłoże za pomocą testu LSD; i istniały znaczące różnice pomiędzy trzema leczonymi grupami (ryc. 7).

Wpływ nanoproszku C. tubulosa na ekspresję białka GDNF i jego receptorów, GFR 1 i Ret u myszy

Ekspresję białka GDNF i jego receptorów, GFR 1 i Ret, w dodatnio wybarwionych komórkach oceniano za pomocą immunohistochemii. Do oceny poziomów ekspresji białka w SN różnych grup myszy wykorzystano analizę Western blot. Wyniki dla różnych grup były podobne przy zastosowaniu dwóch metod wykrywania. Ekspresja GDNF i jego białek receptorowych, GFR 1 i Ret, w dodatnio wybarwionych komórkach w SN myszy w grupie nośnika była znacząco niższa niż u myszy w normalnej grupie kontrolnej. Różne dawki leczenia C. tubulosa zwiększały liczbę komórek GDNF-, GFR 1- i Ret-dodatnich (ryc. 8A – S).

Ekspresja białka GDNF, GFR 1 i Ret w SN myszy w grupie otrzymującej nośnik była znacząco niższa niż u myszy w grupie kontrolnej. Zwiększanie stężeń leczniczychNanomoc C. tubulosaznacząco zwiększył ekspresję tych białek. Ekspresja białek GDNF, GFR 1 i Ret w SN myszy w grupie leczonej dużą dawką C. tubulosa była znacząco wyższa niż u myszy w grupie otrzymującej nośnik (P< 0.01; Figures 8T, U). 

Wpływ nanoproszku C. tubulosa na ekspresję białka Bcl2/Bax u myszy

Ekspresja białka Bcl2 była znacząco zmniejszona, a ekspresja białka Bax była znacząco zwiększona w SN myszy w grupie nośnika (P< 0.01) compared with the mice in the normal control group. High-dose C. tubulosa treatment significantly increased Bcl2 protein expression and significantly reduced Bax protein expression in the brains of the vehicle mice (P < 0.01; Figure 9). LSD test showed there was no significant difference between the middle-dose and high-dose groups but a significant difference between the low-dose group. 

DYSKUSJA

PD i apoptoza

PD jest chorobą neurodegeneracyjną. Według Zhanga i in. (2005) częstość występowania wynosi 10,7% w populacji Chin w wieku powyżej 55 lat i 1,67% w populacji osób w wieku powyżej 65 lat. Liczba pacjentów z ChP rośnie co roku wraz z przyspieszeniem globalnego starzenia się, co stanowi duże obciążenie finansowe dla rodzin pacjentów i społeczeństwo jako całość. W mózgu neurony dopaminergiczne biorą udział głównie w syntezie i wydzielaniu DA. Są szeroko rozpowszechnione w ośrodkowym układzie nerwowym i zlokalizowane głównie w SN (80%). TH jest kluczowym enzymem ograniczającym szybkość syntezy DA. Zatem hamowanie aktywności TH zmniejsza syntezę DA (Huot i Parent, 2007). Głównymi zmianami patologicznymi i biochemicznymi w PD są apoptoza neuronów dopaminergicznych w SN, znaczne zmniejszenie DA nigrostriatalnego oraz tworzenie ciał Lewy'ego w neuronach dopaminergicznych (Dexter i Jenner, 2013). Etiologia choroby Parkinsona obejmuje powiązane czynniki genetyczne, środowiskowe i starzenie się układu nerwowego (Allam i in., 2005). Patogeneza PD pozostaje we współczesnej medycynie niejasna. Od końca lat sześćdziesiątych XX wieku terapia zastępcza lewodopą jest z powodzeniem stosowana w leczeniu PD i została uznana za główny punkt zwrotny w leczeniu PD. Jednak długotrwałe stosowanie tej terapii powoduje skutki uboczne i terapia nie leczy przyczyn leżących u podstaw choroby Parkinsona (Del Sorbo i Albanese, 2008). Dlatego też aktywne badania nad nowymi lekami lub metodami leczenia ukierunkowanymi na ochronę neuronów dopaminergicznych mają kluczowe znaczenie w leczeniu choroby Parkinsona.

We wcześniejszych badaniach zastosowanie znakowania nick-end dUTP za pośrednictwem terminalnej transferazy deoksynukleotydowej wskazywało, że 0,6–4,8% neuronów dopaminergicznych w SN pacjentów z chorobą Parkinsona wykazywało apoptozę (Mochizuki i in., 1996). Mikroskopia elektronowa wykazała cechy apoptozy, w tym kondensację chromatyczną i ciała apoptotyczne w komórkach dopaminergicznych (Anglade i in., 1997). Tompkins i in. (1997) przeprowadzili analizę ultrastrukturalną sekcji zwłok tkanki mózgowej pacjentów z ChP, AD i rozsianą chorobą z ciałami Lewy’ego (DLBD). Znaleźli ciała apoptotyczne w gęstej warstwie SN u pacjentów z PD i DLBD, dostarczając niezbitych dowodów na apoptozę neuronów w PD i chorobach pokrewnych. Dlatego redukcja lub supresja apoptozy w neuronach dopaminergicznych ma zasadnicze znaczenie w leczeniu PD.

Poprzednie badania wykazały, że MPTP wywołuje objawy podobne do choroby Parkinsona. MPTP przenika przez barierę krew-mózg i jest metabolizowany przez monoaminooksydazy typu B w astrocytach. Następnie ulega przemianie do toksycznego MPP+, który gromadzi się w mitochondriach neuronów dopaminergicznych poprzez spożycie białka przez transporter DA. W ten sposób wytwarza nadmiar wolnych rodników tlenowych, które hamują aktywność kompleksu I mitochondrialnego łańcucha oddechowego i syntezę ATP. Zdarzenia te dodatkowo sprzyjają tworzeniu się wolnych rodników i reakcjom stresu oksydacyjnego, a ostatecznie prowadzą do zwyrodnienia i śmierci neuronów dopaminergicznych. Dlatego też w tym badaniu wykorzystano MPP+ do ustalenia nośnika in vitro w neuronach dopaminergicznych MES23.5 oraz MPTP do nakłonienia myszy będącej nośnikiem do wzajemnej weryfikacji. Zgodnie z wynikami testu MTT, MPP+ znacząco zmniejsza żywotność komórek MES23.5, co sugeruje, że MPP+ jest cytotoksyczny dla neuronów dopaminergicznych. Wyniki wykazały również, że C. tubulosa skutecznie zwiększa ekspresję białek antyapoptotycznych i hamuje wzrost apoptozy indukowanej MPP+-.

PD i GDNF

GDNF jest czynnikiem neurotroficznym, który po raz pierwszy został wyizolowany przez Lin i wsp. (1993). Lin i in. (1993) wykazali także, że GDNF wywiera specyficzny wpływ żywieniowy na neurony dopaminergiczne w śródmózgowiu szczurów. GDNF, neurturyna (NTN), persefina (PSP) i artemina (ART) tworzą rodzinę GDNF. Są to białka wydzielnicze podobne strukturalnie i funkcjonalnie (Kotzbauer i in., 1996; Baloh i in., 1998; Milbrandt i in., 1998; Woodbury i in., 1998).

Receptor GDNF składa się z dwóch składników. Pierwszy składnik, GFR, jest przymocowany do zewnętrznej błony glikozylofosfatydyloinozytolu (GPI) i zakotwiczony na powierzchni koneksyny. Drugim składnikiem jest białko Ret. Badania wykazały, że istnieją cztery różne typy GFR: GFR 1, GFR 2, GFR 3 i GFR 4. GFR 1 jest receptorem GDNF o wysokim powinowactwie (Onochie i in., 2000; Chen i in., 2001; Lindahl i in., 2001). Białko Ret jest funkcjonalnym receptorem GDNF. Cząsteczka homodimeru GDNF bezpośrednio wiąże się z GFR 1, tworząc kompleksy i oddziałuje z Ret, powodując dimeryzację i aktywację Ret. Ze względu na autofosforylację Ret, Ret aktywuje kilka powszechnych szlaków sygnalizacyjnych TH. W przypadku braku białka Ret, GDNF powoduje fosforylację białek MAPK, PI-3 i PLC-, oprócz ekspresji mRNA i aktywności funkcjonalnej C-fos poprzez jego białko receptorowe, GFR 1 (He i in., 2008).

Badania wykazały, że GDNF najsilniej działa ochronnie na neurony dopaminergiczne (Rangasamy i in., 2010; Campos i in., 2012). W pojazdach wykorzystujących MPTP i 6-hydroksydopaminę (6-OHDA) do wywoływania uszkodzeń neuronów dopaminergicznych, GDNF chroni neurony dopaminergiczne poprzez zmniejszenie apoptozy i promowanie wzrostu aksonów w celu indukowania różnicowania komórek macierzystych (Lucas i in., 2012; Littrell i in., 2013). Lin i in. (1993) wykazali, że GDNF specyficznie promuje żywotność, różnicowanie i wzrost aksonów neuronów dopaminergicznych, aby promować wychwyt DA w neuronach. Badanie wykazało również, że GDNF nie tylko zapobiegał ostrej toksyczności, ale także łagodził długoterminową toksyczność MPP+ lub 6-OHDA w neuronach dopaminergicznych, a ponadto zapobiegał śmierci komórek w komórkach zestresowanych lub uszkodzonych (Yu i in., 2010). Ponadto GDNF promuje proliferację i różnicowanie nerwowych komórek macierzystych w kierunku neuronów dopaminergicznych w śródmózgowiu (Lindsay, 1995), aby uratować neurony dopaminergiczne przed zwyrodnieniem wstecznym (Hong-Juan i in., 2011).

Badania wykazały, że ekspresja GDNF w SN była znacznie zmniejszona w pojazdach zwierzęcych (Yang i in., 2010). Sugeruje to, że może to być jeden z mechanizmów patogenezy u szczurów z chorobą Parkinsona. Wstrzyknięcie 5–15 µg/d GDNF do komory bocznej lub prążkowia zwierzęcia będącego nośnikiem indukowanego MPTP przez trzy kolejne miesiące sprzyjało nigrostriatalnej naprawie układu dopaminergicznego u zwierzęcia będącego nośnikiem (Grondin i in., 2002). Badania nad leczeniem GDNF w leczeniu PD w pojazdach zwierzęcych wykazały, że śródmózgowe wstrzyknięcie GDNF do różnych obszarów mózgu, takich jak SN, jądro ogoniaste i komora boczna, łagodzi zaburzenia ruchowe związane z modelami zwierzęcymi PD, w tym zmniejszoną aktywność motoryczną, sztywność mięśni i drżenie (Grondin i in., 2002). Jednakże GDNF nie może bezpośrednio przejść przez barierę krew-mózg. Dlatego też miejscowe wstrzyknięcie GDNF do mózgu wiąże się ze znacznym ryzykiem i trudnościami w zastosowaniu klinicznym. Nadal badane są zastosowania wprowadzenia egzogennego GDNF poprzez mikrosfery o kontrolowanym uwalnianiu, kapsułki o przedłużonym uwalnianiu i geny wirusowe (Liang i in., 2010; Yang i in., 2010; Qiao i in., 2012). Biorąc pod uwagę ograniczenia różnych technik wprowadzania egzogennego GDNF do mózgu, środki neuroprotekcyjne, które promują uwalnianie endogennego GDNF, są istotne w zastosowaniach klinicznych.

P.D. iC. tubulosaNanoproszek

PD występuje częściej u dorosłych w średnim wieku i osób starszych. Teoria TCM zakłada, że ​​choroba Parkinsona jest zlokalizowana głównie w mózgu i jest spowodowana głównie niedoborami wątroby i nerek, a także brakiem energii życiowej i krwi. Zgodnie z tą teorią leczenie choroby Parkinsona powinno zatem koncentrować się na pobudzaniu nerek i szpiku kostnego.Yang i in. (2010)wykorzystał randomizowane, podwójnie ślepe i kontrolowane placebo badania kliniczne i odkrył, że terapia skojarzona z użyciem Madoparu i receptur tonizujących nerki łagodzi dysfunkcje motoryczne pacjentów z chorobą Parkinsona. Efekt leczenia był lepszy niż pojedyncza terapia preparatem Madopar. Skuteczność leczenia monoterapii TCM lub przepisanego związku w PD została potwierdzona w modelach zwierzęcych PD i zastosowaniach klinicznych. Zastosowania TCM do tonizacji nerek i wspomagania krążenia krwi zmniejszyły dawkę Madoparu w monoterapii PD. Niektóre badania sugerują, że TCM łagodzi objawy PD i chroni neurony dopaminergiczne, co może być ściśle powiązane z promowaniem endogennej ekspresji GDNF.Hong-Juan i in., 2011; Qiao i in., 2012).

Związek tonizujący nerki zastosowany w tym badaniu,C. tubulosazawarty nanoproszekCistanche, epimedium, IRhizoma wielokątna. Współczesne badania sugerują, że skład chemicznyCistancheto ECH, który chroni neurony dopaminergiczne w SN u myszy z PD indukowaną MPTP i hamuje redukcję DA i transportera DA (Zhao i in., 2010). Ponadto zapobiega 6-indukowanemu przez OHDA zmniejszeniu DA i chroni neurony dopaminergiczne prążkowia (Chen i in., 2007). Epimedium hamuje aktywację kaspazy-3 i pełni rolę neuroprotekcyjną (Liu i in., 2011). Flawonoidy epimedium skutecznie promują proliferację i różnicowanie nerwowych komórek macierzystych (Yao i in., 2010).

W tym badaniuC. tubulosananoproszek przeciwdziałał wzrostowi MPP+-indukowana apoptoza w sposób zależny od dawki. Znacząco poprawił ekspresję TH win vitronośnikiem i miał znaczące działanie antyapoptotyczne w neuronach dopaminergicznych. Myszy będące pojazdami indukowane MPTP wykazywały zaburzenia zachowania i znacząco obniżoną ekspresję TH w tkankach śródmózgowia oraz poziomy DA, które są typowymi cechami patologicznymi PD. Różne dawkiC. tubulosananoproszek skrócił czas postoju, zwiększył aktywność autonomiczną, poprawił zaburzenia zachowania, podniósł poziom DA w mózgu i zwiększył ekspresję TH w pojazdach. Wyniki te na to wskazywałyC. tubulosananoproszek wywierał działanie ochronne na neurony dopaminergiczne, poprawiając w ten sposób zaburzenia zachowania pojazdów. Różne dawkiC. tubulosananoproszek zwiększał ekspresję białka GDNF i jego białek receptorowych w mózgu myszy będących pojazdami. Wysoka dawkaC. tubulosaleczenie znacząco zwiększyło ekspresję Bcl2 i zmniejszyło ekspresję Bax, co sugerowało toC. tubulosananoproszekmoże promować ekspresję i wydzielanie GDNF w mózgu myszy uszkodzonym przez MPTP. Ponadto może wywierać działanie neuroprotekcyjne na neurony dopaminergiczne i minimalizować apoptozę neuronów poprzez neurotroficzną rolę wspomagającą GDNF.

To badanie to wykazałoC. tubulosaw obu przypadkach nanoproszek wywierał działanie ochronne na neurony dopaminergicznein vitroIna żywoi zwiększoną ekspresję TH w celu poprawy zawartości DA. Poprawiło także zaburzenia zachowania u myszy będących nośnikami indukowanych MPTP, regulowało ekspresję białka GDNF i jego białek receptorowych w SN oraz miało działanie przeciwapoptotyczne u myszy PD. Mechanizm leżący u podstaw efektów klinicznychC. tubulosananoproszek w PD może wiązać się ze zwiększeniem zawartości endogennego GDNF w mózgu, a tym samym zmniejszeniem uszkodzeń neuronów dopaminergicznych.

NATURALNY CISTANCHE TUBULOSA DLA POPRAWY FUNKCJI SEKSUALNYCH PHGS75% ECH 30% ACT 12