Wykrywanie humoralnej i komórkowej odpowiedzi immunologicznej na szczepionkę przeciw SARS‑CoV‑2 BNT162b2 u kobiet karmiących piersią oraz osób naiwnych i wcześniej zakażonych

W badaniu tym oceniano humoralną i komórkową odpowiedź na szczepionkę mRNA przeciwko SARS-CoV-2 BNT162b2 u kobiet karmiących piersią oraz osób nieszczepionych wcześniej i seropozytywnych w ciągu pierwszych sześciu miesięcy po szczepieniu. Do badania włączono sześćdziesięciu jeden ochotników zaszczepionych dwiema dawkami szczepionki mRNA BNT162b2. Do ilościowego oznaczenia przeciwciał specyficznych dla SARS-CoV-2 RBD wykorzystano opracowany przez nas test ELISA. Ekspresję markera na powierzchni komórki i wewnątrzkomórkową analizę IFN przeprowadzono metodą cytometrii przepływowej. Stężenia IFN-, IL-6 i TNF oznaczono metodą ELISA. Znaczący wzrost poziomu przeciwciał anty-RBD IgG zaobserwowano 14 dni po pierwszej dawce szczepionki (str< 0.0001) in serum and milk. The expression of CD28 on CD4+ T cells was significantly higher compared to baseline (p< 0.05). There was a significant increase (p≤ 0.05) in the B cell lymphocyte subset after revaccination and an increased percentage of CD80+ B cells. The expression of IFN-γ in peripheral blood lymphocytes, CD3+ T cells, and serum was significantly increased (p< 0.05). No significant difference in immune response was observed between breastfeeding women and other study participants. The anti-SARS CoV-2 BNT162b2 mRNA vaccine induced measurable and durable immune response in breastfeeding women and naïve and previously infected individuals. 

Cistanche korzyści dla mężczyzn-wzmocnienie układu odpornościowego

Kliknij tutaj, aby wyświetlić produkty Cistanche Enhance Immunity

【Zapytaj o więcej】 E-mail:cindy.xue@wecistanche.com / Aplikacja Whats: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. Wstęp 

Globalne rozpowszechnienie wirusa SARS-CoV-2 po zarejestrowaniu pierwszego specjalnego przypadku 31 grudnia 2019 r. w Wuhan w Chinach doprowadziło do światowej pandemii choroby koronawirusowej-19 (COVID{{ 5}}), z około 648 milionami przypadków i 6,6 milionami zgonów do 18 grudnia 2022 r.1. Śmiertelność w przypadku Covid-19 została powiązana z nadmierną produkcją cytokin prozapalnych, takich jak IL-6, TNF- i IL-1, tzw. „burza cytokinowa”, która może prowadzić do zespołu ostrej niewydolności oddechowej i rozległego uszkodzenia tkanek skutkującego niewydolnością wielonarządową2. Oczekiwano jednak, że szybka poprawa diagnostyki, leczenia i wprowadzenie szczepień przyczyni się do stałego spadku liczby zakażonych, konieczności hospitalizacji i ostatecznie zmniejszenia śmiertelności. W Serbii pierwszy oficjalnie zarejestrowany przypadek miał miejsce 6 marca 2020 r., a szczepienia rozpoczęto 24 grudnia 2020 r. Obecnie dla ogółu populacji dostępne są cztery szczepionki: Vero Cell-Inactivated (Sinopharm), Vaxzevria (ChAdOx{{ 22}}S [rekombinowany], AstraZeneca), Sputnik V (Gam-COVID-Vac, Gamaleya) i Comirnaty (BNT162b2, BioNTech – Pfizer). Oprócz wytwarzania specyficznych przeciwciał skuteczna odpowiedź immunologiczna przeciwko SARS-CoV-2 wymaga aktywacji odporności komórkowej. Oczekuje się, że składniki odporności komórkowej, w tym pomocnicze limfocyty CD4+ i cytotoksyczne CD8+ T, komórki NK i komórki B, w ciągu pierwszych godzin i dni po ekspozycji na tego wirusa zmniejszają objawy choroby, zapobiegając postępowi choroby, hospitalizacji i śmierci. Aktywowane komórki pomocnicze T (T) mogą pośrednio zabijać zakażone komórki i wspierać funkcjonowanie komórek B i odpowiedź przeciwciał poprzez wytwarzanie interferonu-(IFN-)3,4. Wykazano, że fenotyp T1 jest powiązany z mniejszym nasileniem choroby COVID-195, dlatego strategie opracowywania szczepionek przeciwko COVID-19 powinny również uwzględniać możliwość aktywacji limfocytów T do produkcji IFN. Według doniesień odporność komórkowa na SARS-CoV-2 jest wykrywalna do 6 miesięcy po zakażeniu u ponad 90% osób6. Oczekiwano zatem, że szczepienie wywoła wymierną odporność komórkową, która przyczyni się do walki z pandemią. Nowe wyniki wykazały, że oprócz aktywacji limfocytów B w ośrodkach rozrodczych7 szczepionki mRNA przeciwko SARS-CoV-2 powinny generować odpowiedzi limfocytów T CD4+ i CD8+ specyficzne dla białka kolczastego8. Chociaż miano przeciwciał zwykle koreluje ze skutecznością szczepionki, komórki B i T odgrywają ważną rolę w ochronie po ponownej ekspozycji na antygeny wirusa. Oczekuje się, że te komórki pamięci B i T będą generowane przez szczepionki mRNA SARS-CoV-2 i powinny odgrywać rolę w kontrolowaniu replikacji wirusa, ograniczając jego rozprzestrzenianie się9. Chociaż nie zgłoszono żadnych poważnych działań niepożądanych, specyficzna reakcja na szczepienie przeciwko SARS-CoV-2 u kobiet w ciąży i karmiących piersią oraz u niemowląt, których matki otrzymały szczepionkę w okresie laktacji, jest nadal przedmiotem oceny i pozostaje tematem kontrowersyjnym10,11. Celem tego badania było po raz pierwszy zbadanie miesięcznych odpowiedzi humoralnych i komórkowych na szczepionkę mRNA przeciwko SARS-CoV-2 BNT162b2 u kobiet karmiących piersią oraz u osób wcześniej nieszczepionych i seropozytywnych w ciągu pierwszych sześciu miesięcy po szczepieniu w Serbii oraz dwuletnia, samodzielnie zgłaszana obserwacja dotycząca długoterminowego bezpieczeństwa.

Materiał i metody

Projekt badania oraz pobieranie i przetwarzanie próbek.

W sumie do badania włączono 61 ochotników (45 osób, które nie miały wcześniej zakażenia SARS-CoV-2, 16 osób nie miało wcześniej SARS-CoV-2, które według raportów potwierdzonych metodą PCR) włączono do badania i monitorowano w okresie od stycznia do 2 listopada{ {11}}21. Średni czas pomiędzy naturalnym zakażeniem a szczepieniem u osób zakażonych wcześniej wynosił 3,18±0,98 miesiąca, przy zakresie 2–5 miesięcy. Wszyscy uczestnicy mieli więcej niż 18 lat i w momencie szczepienia nie wykazywały żadnych objawów infekcji dróg oddechowych. Większość uczestników stanowili pracownicy służby zdrowia z Serbskiego Instytutu Onkologii i Radiologii (44; 72%). Uczestnicy zostali zaszczepieni dwiema dawkami szczepionki mRNA BNT162b2 (w odstępie 3 tygodni). Wszystkie pobieranie krwi przeprowadzono w zatwierdzonych ośrodkach medycznych zgodnie ze ścisłymi protokołami i obserwacją. Cztery uczestniczki to matki karmiące piersią, które zgłosiły się na ochotnika dopasowując próbki krwi i mleka. Próbki pobrano w 6-punktach czasowych: punkt 1 – przed szczepieniem (punkt wyjściowy), punkt 2–14 dni po szczepieniu podstawowym, punkt 3–1 miesiąc po szczepieniu podstawowym, punkt 4–2 miesiące po szczepieniu podstawowym, punkt 5–3 miesiące po szczepieniu podstawowym i punkt 6–6 miesięcy po szczepieniu podstawowym. W każdym punkcie czasowym pobierano 10–20 ml krwi obwodowej oraz 1 ml mleka od 4 kobiet karmiących piersią uczestniczących w badaniu. Surowicę uzyskano z krwi obwodowej poprzez odwirowanie bezpośrednio po pobraniu krwi i przechowywano w temperaturze -20°C. Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) wyizolowano z heparynizowanej krwi przy użyciu gradientu gęstości Lymphoprep (Nypacon, Oslo, Norwegia), odwirowano przy 500 g przez 40 minut i przemyto trzykrotnie w pożywce hodowlanej RPMI 1640 (CM) (Sigma, St. Louis , MO) uzupełniony 10% płodową surowicą cielęcą (FCS) (Sigma, St. Louis, MO). Po przemyciu PBMC natychmiast użyto do analizy immunofenotypowej. Badanie zostało zatwierdzone przez Komisję Etyki Instytutu Onkologii i Radiologii Serbii (nr 899–01 z dnia 01.04.2021 r.), a wszyscy uczestnicy podpisali świadomą zgodę. Ze wszystkimi uczestnikami przeprowadzono rozmowę z doświadczonym personelem medycznym. Długoterminową obserwację działań niepożądanych po szczepieniu, zgłaszaną przez samych pacjentów, przeprowadzono przez dwa lata po pierwszej dawce szczepionki.

cistanche tubulosa – poprawiają układ odpornościowy

Wykrywanie i oznaczanie ilościowe przeciwciał specyficznych dla SARS‑CoV‑2 RBD.

Ekspresję RBD białka kolczastego SARS-CoV-2 (NCBI: YP_009724390, AA319-541) przeprowadzono w linii komórek T HEK-293 zgodnie z wcześniej opublikowaną procedurą12 . Rekombinowane białko oczyszczono aż do uzyskania jednorodności, a uzyskana wydajność wyniosła 5{{20}}0 mg na l hodowli komórkowej. W skrócie, rekombinowane białko RBD zastosowano do pokrycia płytek z 96-dołkami z tłuszczowym dnem (Thermo Scientific NUNC-MaxiSorp, USA) w końcowym stężeniu 10 µg/ml (50 µl/studzienkę) w buforze do powlekania (15 mM Na2CO3/35 mM NaHCO3, pH 9,5) w temperaturze 4 stopni przez noc. Płytki przemyto TBS zawierającym 0,05% Tween 20 (TBST) i blokowano 1% BSA w TBST przez 2 godziny w temperaturze 37°C. Rozcieńczone surowice inkubowano w temperaturze 37 stopni przez 1 godzinę w TBST zawierającym 0,1% BSA, a następnie płytki przemywano TBST. W celu oznaczenia całkowitej swoistej IgG, kozie przeciwciało skoniugowane z ludzką IgG-AP (Novus Biologicals, USA) rozcieńczono 1/1000 w roztworze blokującym i dodano do dołków. Po inkubacji przez 1 godzinę w temperaturze 37 stopni, płytki przemyto 5 razy TBST i wywołano 4-fosforanem nitrofenylu przez 1 godzinę w temperaturze 37 stopni. Absorbancję mierzono przy 450 nm (A450).

Analiza metodą cytometrii przepływowej.

Immunofenotyp powierzchni komórek jednojądrzastych komórek krwi obwodowej (PBMC) zidentyfikowano przy użyciu następujących kombinacji bezpośrednio znakowanych przeciwciał monoklonalnych (mAb): CD3FITC/CD28PE/CD4PerCP, CD80PE/CD19PerCP, CD80PE/CD14PerCP (Becton Dickinson, San Jose, USA). Próbki przygotowano jak opisano wcześniej13, używając 1×105 świeżo wyizolowanych PBMC w 100 µl RPMI 1640 uzupełnionego 10% płodową surowicą cielęcą (FCS, Sigma), inkubowano przez 30 minut w temperaturze 4 stopni z 20 µl odpowiedniej kombinacji mAb, przemyto dwukrotnie lodowato zimną solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS) i utrwaloną 1% paraformaldehydem przed analizami FACS. Ekspresję markera powierzchniowego oznaczono ilościowo za pomocą cytometru przepływowego FACSCalibur (Becton – Dickinson, San Jose, USA). W sumie 10,000–50,000 zdarzeń bramkowanych zweryfikowanych jako limfocyty krwi obwodowej (PBL) i monocyty, zgodnie z ich charakterystyką fizyczną, charakterystyką rozproszenia w przód (FSC) i charakterystyką rozproszenia bocznego (SSC) ), zebrano na próbkę i analizowano przy użyciu oprogramowania CellQUEST. Podzbiory komórek wyrażono jako procent we krwi obwodowej.

Wewnątrzkomórkowa analiza IFN.

W celu wewnątrzkomórkowego barwienia IFN 1×, 106 PBMC inkubowano z 12-mirystynianem 13-octanem forbolu (PMA) (50 ng/ml) plus jonomycyną (500 ng/ml) przez 4 godziny w temperaturze 37 stopni i z Brefeldyną A (10 ug/ml) przez ostatnie 3 godziny, jak opisano wcześniej14. Komórki najpierw wybarwiono pod kątem antygenu powierzchniowego przeciwciałem CD3 PerCP, utrwalono, a po permeabilizacji roztworem permeabilizującym 2 BD FACS (BD Biosciences) wybarwiono pod kątem anty-IFN-PE (Becton Dickinson). Wewnątrzkomórkowy IFN wyraża się jako odsetek w PBL, jak również w limfocytach T CD3.

ELISA.

Stężenia IFN-, IL-6 i TNF w surowicy badanych uczestników oznaczono za pomocą dostępnych na rynku niepowlekanych zestawów ELISA, zgodnie z instrukcjami producenta (Invitrogen). Oznaczono stężenia cytokin w punktach 1 (przed szczepieniem), punkcie 3 (1 miesiąc po szczepieniu podstawowym) i punkcie 4 (2 miesiące po szczepieniu podstawowym). W skrócie, płytki ELISA opłaszczono odpowiednimi przeciwciałami wychwytującymi w buforze do powlekania i inkubowano przez noc w temperaturze 4°C. Najpierw płytki przemyto i zablokowano rozcieńczalnikiem ELISA/ELISAASPOT. Po 1 godzinie inkubacji płytki przemyto i do studzienek dodano próbki surowicy i standardy. Po inkubacji, przemyciu i aspiracji, zgodnie z instrukcjami producenta, do każdej studzienki dodano roztwór przeciwciała wykrywającego. Następnie płytki przemyto i odessano; Do dołków dodano roztwór awidyny-HRP i inkubowano przez 30 minut. Następnie płytki przemyto i do każdej studzienki dodano roztwór (3,3′,5,5′-tetrametylobenzydyny) TMB. Płytki inkubowano przez 15 minut w temperaturze pokojowej i reakcję enzymatyczną zakończono przez dodanie roztworu zatrzymującego. Absorbancję mierzono przy 450/520 nm przy użyciu czytnika płytek Multiskan EX Termo Labsystems15. Analiza statystyczna. Wyniki przedstawiono jako wartości indywidualne z błędem standardowym średniej (SEM). Różnice między wartościami porównano za pomocą testu t dla niesparowanych i testu rang Wilcoxona ze znakiem, a wyniki uznano za istotne statystycznie, jeśli p<0.05. The analysis was performed using GraphPad Prism 9.0 (GraphPad, La Jolla, CA, USA).

cistanche tubulosa – poprawiają układ odpornościowy

Wyniki

3.1 Uczestnicy badania i przetwarzanie surowicy/mleka.

Charakterystykę uczestników badania przedstawiono w Tabeli 1. Od 61 ochotników, którzy otrzymali szczepionkę mRNA przeciwko SARS-CoV-2 BNT162b2, pobrano łącznie 344 próbki surowicy w 6 punktach czasowych, zaczynając od wartości wyjściowych przed szczepieniem do 6 miesięcy po pierwszym szczepieniu. Większość uczestników badania (97%) zgłaszała miejscowe działania niepożądane po szczepieniu w postaci łagodnego bólu ramion/barków i zmęczenia, które trwały 1–2 dni. Tylko trzy uczestniczki otrzymały drugą dawkę szczepionki z opóźnieniem, dwie z powodu działań niepożądanych po szczepieniu podstawowym (wysypka skórna, alergia), a jedna z powodu stwierdzenia ciąży po pierwszej dawce. Nie zgłoszono żadnego zakażenia pomiędzy dwiema dawkami szczepionki. Po sześciu miesiącach monitorowania tylko 3 (5%) uczestników zostało zakażonych SARS-CoV-2 i nie wykryto żadnej poważnej formy choroby wymagającej hospitalizacji. Siedmiu uczestniczek zaszło w ciążę po szczepieniu, jedna po 2 tygodniach od pierwszej dawki, jedna po 4 miesiącach od pierwszej dawki i pięć po 12 miesiącach od pierwszej dawki. Długoterminowa obserwacja własna nie wykazała żadnych działań niepożądanych związanych ze szczepieniem w okresie do dwóch lat od podania pierwszej dawki, ani u kobiet karmiących piersią, ani u żadnej innej uczestniczki badania.

Kwantyfikacja przeciwciał specyficznych dla SARS‑CoV‑2 RBD w surowicy i mleku uczestników badania.

Analizując poziom poszczepiennych przeciwciał anty-RBD IgG w surowicy, zaobserwowano istotny wzrost poziomu przeciwciał anty-RBD IgG już po 14 dniach od podania pierwszej dawki szczepionki w całej analizowanej grupie w porównaniu do poziomu IgG przed szczepieniem (17,47±51,49 AU /ml vs. 7828,28±24157,29 AU/ml, p<0.0001) (Fig. 1a). Te serum levels of anti-RBD IgG continued to rise to 2 months post-vaccination, when a decrease was detected, which lasted up to 6 months, steadily. The levels of anti-RBD IgG antibodies were compared at each time point between naïve and previously infected individuals (Fig. 1b-c), and it was determined that the difference was statistically significant at baseline (point 1), as previously infected individuals had a higher level of antibodies before vaccination (7.23±0.77 AU/mL vs. 54.47±101.40 AU/mL, p<0.01). The difference was statistically significant also in points 2 (3979.48±3277.27 AU/mL vs. 22,581.99±49,570.63 AU/mL, p<0.05), 5 (2369.16±1934.31 AU/ mL vs. 6366.83±6875.85 AU/mL, p<0.01), and 6 (461.96±375.41 AU/mL vs. 766.04±317.35 AU/mL, p<0.05). The decline in antibody levels had the same dynamics in both groups but remained at higher levels in previously infected individuals for up to 6 months. No other analyzed parameters were correlated with a significantly different level of antibodies in serum (age, gender, smoking status). When comparing levels of anti-RBD IgG antibodies in other participants and breastfeeding women (Fig. 1d-e), no significant differences in serum antibody levels were observed in any of the comparisons. Anti-RBD IgG antibodies were also detected in the milk of 4 breastfeeding women (Fig. 1f). In lower levels, they presented with the same dynamics of rising and decline as detected in the serum. Comparing the levels of anti-RBD IgG antibodies in milk at each time point to baseline, (Fig. 1f), it was determined that the difference was statistically significant at points 2 (6.57±0.77 AU/mL vs. 152.13±35.83 AU/ mL, p<0.01) and 6 (6.57±0.77 AU/mL vs. 117.31±25.64 AU/mL, p<0.01).

Tabela 1. Charakterystyka uczestników badania.

Rycina 1. Poziom przeciwciał anty-RBD IgG w surowicy w (a) całej analizowanej grupie, (b naiwnie, c) osobach zakażonych wcześniej, (d) całej grupie bez kobiet karmiących piersią, (e) kobietach karmiących piersią oraz (f) w grupie mleko kobiet karmiących piersią. Wyniki przedstawiono jako indywidualne wartości z błędem standardowym średniej (SEM) trzech niezależnych powtórzeń. Różnice między wartościami porównano za pomocą niesparowanego testu t, a wyniki uznano za istotne statystycznie, jeśli p<0.05. * p<0.05; **p<0.01; *** p<0.0001.

Cytometria przepływowa i analizy wewnątrzkomórkowe IFN.

Dane uzyskane metodą cytometrii cytometrycznej wykazały, że ekspresja CD28 na limfocytach T CD4+ we krwi obwodowej 2 miesiące po drugiej dawce szczepionki była istotnie wyższa w porównaniu z wartościami przed szczepieniem (42,84±5,37% vs. 37,75 ±5,96%, s. 25<0.05, Wilcoxon signed-rank test) (Fig. 2a). Tere was a signifcant increase (p≤0.05, Wilcoxon signed rank test) in the prevalence of B cell lymphocyte subset (CD19+) from 6.87±1.17% to 8.73±1.54%, two months afer revaccination, as well as an increased percentage of CD80+ B cells from 1.72±0.28% to 1.99±0.28% (Fig. 2b). Furthermore, fve weeks afer revaccination, a signifcant (p≤0.05, Wilcoxon signed rank test) increase in the percentage of CD14+CD80+ cells from 1.15±0.38% to 5.87±0.95% was detected in the monocyte gate (Fig. 2c). Te expression of IFN-γ in PBLs, as well as in CD3+ T cells was signifcantly (p < 0.05, Wilcoxon signed rank test) increased at 1 week afer the second vaccine dose (1.84 ± 0.13% in PBL and 1.32 ± 0.10% in CD3+ T cells) compared to pre-vaccination baseline values (0.88 ± 0.13% in PBL and 0.72 ± 0.12% in CD3+ T cells) (Fig. 3a). Furthermore, serum levels of IFN-γ were signifcantly increased in all participants from the initial value of 16.69±0.29 pg/mL to 17.72±0.41 pg/mL (p<0.05, Wilcoxon signed rank test) (Fig. 3b), as well as in naive from 16.55±1.77 pg/mL to 17.26±2.53 pg/mL and in a group and previously infected individuals, from 15.93±2.01 pg/mL to 19.90±4.32 pg/mL at 1 week afer revaccination (Fig. 3c). Tere was no signifcant (p>0,05, test rang ze znakiem Wilcoxona) różnica w poziomach IL-6 i TNF- 1 w surowicy w tygodniu i pięciu tygodniach po drugiej dawce szczepionki w porównaniu do wartości ogółem przed szczepieniem grupa, a także u osób naiwnych lub wcześniej zakażonych (rysunek uzupełniający 1a – d).

Dyskusja

Wybuch infekcji dróg oddechowych SARS-CoV-2 miał głęboko negatywny wpływ na różne aspekty życia codziennego, w tym kwestie społeczne, edukacyjne i zdrowotne, niezwiązane bezpośrednio z samą chorobą COVID-1916–18 . Aby uzupełnić środki dystansujące w zwalczaniu choroby, konieczne było globalne podejście do szczepień, a w wielu badaniach analizowano skuteczność i skuteczność różnych rodzajów szczepionek rozprowadzonych na całym świecie w 2021 r. W Serbii dostępne są obecnie jedynie tymczasowe raporty na temat odporności humoralnej 2 i 3 miesiące po szczepieniu19 ,20 i są zgodne z danymi przedstawionymi w tym badaniu. W analizowanej przez nas kohorcie trwającej do 6 miesięcy po szczepieniu, po pierwszej dawce szczepionki wykryto 100% wskaźnik serokonwersji. Tylko 5% uczestników musiało otrzymać drugą dawkę szczepionki z opóźnieniem. Nie było doniesień o zakażeniu SARS-CoV-2 pomiędzy dwiema dawkami szczepionki. Do sześciu miesięcy monitorowania jedynie 5% uczestników zostało zakażonych, bez konieczności hospitalizacji. Miana przeciwciał anty-RBD SARS-CoV-2 IgG były znacząco wyższe w porównaniu do wartości wyjściowych nawet po pierwszej dawce szczepionki, co pozwala na założenie, że zastosowanie szczepionki mRNA BNT162b2 jest skuteczną metodą uzyskania szybkich odpowiedzi humoralnych przeciwko oryginalnej szczepy wirusów. Poziomy IgG w surowicy nadal rosły aż do 2 miesięcy po szczepieniu, kiedy wykryto stały spadek aż do analizowanego okresu 6 miesięcy. Stwierdzono, że u osób zakażonych wcześniej do 6 miesiąca życia występowało wyższe miano przeciwciał IgG w porównaniu z osobami nieszczepionymi wcześniej, co było jedynym czynnikiem wpływającym na różnice w poziomach przeciwciał. W naszym badaniu i niektórych wcześniejszych badaniach21 wykryto także przeciwciała anty-RBD IgG w mleku kobiet karmiących piersią21, przy czym dynamika miana odpowiadała wartościom uzyskanym w surowicy. Podobne doniesienia opublikowano dla przeciwciał IgA po naturalnej infekcji22. Ponieważ obecnie dostępne są ograniczone dane na temat zagrożeń i korzyści wynikających ze szczepienia kobiet karmiących piersią, wyniki te są obiecujące w świetle możliwej biernej immunizacji niemowląt karmionych mlekiem matki, nawet po 6 miesiącach od szczepienia matek. Nie zaobserwowano znaczących różnic w poziomach przeciwciał w surowicy między osobami wcześniej zakażonymi a kobietami karmiącymi piersią, co potwierdza obserwację, że laktacja nie ma wpływu na reakcję na szczepionki przeciw SARS-CoV-19. Aktualne zalecenia stanowią, że szczepienie należy rozważyć u wszystkich osób w wieku 6 miesięcy i starszych, w tym osób, które są w ciąży lub starają się o zajście w ciążę obecnie lub w przyszłości, a także karmią piersią, niezależnie od ich wcześniejszego statusu zakażenia-19 COVID23. Nasze badanie zwiększa ciężar dowodów24 sugerujących, że nie było bezpośredniej szkody dla kobiet karmiących piersią otrzymujących szczepionkę przeciw SARS-CoV-2 ani dla ich karmionych piersią niemowląt. Ponadto siedmiu uczestniczek badania zaszło w ciążę po szczepieniu, jedna po 2 tygodniach od pierwszej dawki, jedna po 4 miesiącach od pierwszej dawki i pięć po 12 miesiącach od pierwszej dawki. Niedawno przeprowadzone długoterminowe wywiady uzupełniające z uczestnikami badania potwierdziły, że dwa lata po otrzymaniu szczepionki przeciw SARS-CoV-2 nie wystąpiły żadne nieprzewidziane szkody dla kobiet karmiących piersią, ich karmionych piersią niemowląt ani jakichkolwiek innych uczestniczek.

Rysunek 2. Odsetek (a) limfocytów T CD3+CD28+ i CD4+CD28+, (b) limfocytów T CD19+ i CD{{6 }}Limfocyty B CD80+, (c) Monocyty CD14+CD80+ we krwi obwodowej. Wyniki przedstawiono jako pojedyncze wartości ze średnią ± błąd standardowy średniej (SEM). Różnice między wartościami porównano za pomocą testu rang ze znakiem Wilcoxona, a wyniki uznano za istotne statystycznie, jeśli p<0.05. * p<0.05.

Pojawienie się nowych budzących obawy wariantów, a także istnienie doniesień o szybkim spadku poziomu przeciwciał anty-SARS CoV-2 po naturalnej infekcji i szczepieniu25 wzbudziły niepewność co do roli składników odporności komórkowej. Kilka badań dotyczących odpowiedzi immunologicznej zaszczepionych osób w Serbii wykazało jedynie odporność humoralną19,20. W tym badaniu wykryto zwiększoną ekspresję receptorów kostymulujących CD28 na komórkach T CD4+ i CD80 na komórkach B 2 miesiące po podaniu drugiej dawki szczepionki. Co więcej, ekspresja CD80 na monocytach wzrosła 1-miesiąc po całkowitym szczepieniu.

Proliferacja i różnicowanie komórek T do komórek efektorowych lub pamięci wymaga prezentacji antygenu, kostymulacji i cytokin. Najlepiej chronionymi kostymulatorami limfocytów T są pary cząsteczek B7-1 (CD80) i B7-2 (CD86). Zazwyczaj ulegają one ekspresji na komórkach prezentujących antygen (APC), takich jak komórki dendrytyczne, komórki B, makrofagi, monocyty i komórki T. Ich ekspresja na monocytach jest również ważna dla aktywacji limfocytów i odporności nabytej26. Dwa główne receptory obecne na powierzchni limfocytów T, które wiążą CD80 i CD86, to CD28 i cytotoksyczne białko związane z limfocytami T 4 (CTLA-4). Wiązanie z CD28 aktywuje limfocyty i w konsekwencji wzmacnia odpowiedź immunologiczną27. Wyniki uzyskane w tym badaniu pokazują, że limfocyty T CD4+ są aktywowane przez epitopy pochodzące z antygenu S prezentowane na aktywowanych limfocytach B i monocytach 2 miesiące po drugiej dawce szczepionki. Różne dane sugerują, że limfocyty T CD4 były głównie aktywowane po szczepionce mRNA28,29, podczas gdy w niektórych badaniach stwierdzono, że zarówno limfocyty T CD4, jak i CD8 są jednakowo obecne i aktywowane30. Tan i in. niedawno zaobserwowali, że 3 miesiące po szczepieniu średnia liczba limfocytów T specyficznych dla Spike była równoważna tej, którą wykryto u pacjentów w okresie rekonwalescencji w podobnym czasie po zakażeniu SARS-CoV-231. Co więcej, wydaje się, że elementy odporności nabytej (zarówno u osób wcześniej zakażonych, jak i zaszczepionych) są regulowane niezależnie6,32,33 i brakuje korelacji między wytwarzaniem przeciwciał przeciwwirusowych a częstotliwością limfocytów T. Ponadto obecne szczepionki mRNA wywołują odpowiedź immunologiczną ograniczoną do białka Spike. Jednakże konieczna będzie również ocena potencjalnej ochronnej roli limfocytów T specyficznych dla innych białek strukturalnych i niestrukturalnych34. Pomysł, że szczepionki poliantygenowe mogą zapewniać większą kontrolę nad wariantami wirusa niż szczepionki monoantygenowe, takie jak szczepionki na bazie białka Spike’a, może mieć solidne uzasadnienie35,36.

Rycina 3. (a) Ekspresja IFN- we wszystkich limfocytach i limfocytach T CD3+ T krwi obwodowej. Poziom IFN w surowicy w (b) całej analizowanej grupie, (c) osobach nieleczonych i zakażonych wcześniej. Wyniki przedstawiono jako wartości indywidualne z błędem standardowym średniej (SEM). Różnice między wartościami porównano za pomocą testu rang ze znakiem Wilcoxona, a wyniki uznano za istotne statystycznie, jeśli p<0.05. * p<0.05.

W tym badaniu podwyższony poziom IFN- wykryto we wszystkich limfocytach i limfocytach T CD3+ 7 dni po całkowitym szczepieniu. Zaobserwowano także podwyższony poziom IFN- w surowicy wszystkich zaszczepionych osób, zarówno u osób wcześniej nieszczepionych SARS-CoV-2, jak i osób zakażonych wcześniej 7 dni po pełnym szczepieniu. Zatem indukowane szczepionką oparte na mRNA komórki T specyficzne dla Spike, które obficie wytwarzają IFN-. IFN- to kluczowa cytokina o właściwościach przeciwwirusowych, która, jak wykazano, hamuje replikację SARS-CoV-28. Szybka indukcja IFN- przez szczepionkę BNT162b2 wykazano w tym badaniu, co wskazuje na korzystną odpowiedź immunologiczną limfocytów T przeciwko wirusowi SARS-CoV-2. Reakcja immunologiczna wywołana przez SARS-CoV-2 obejmuje także produkcję licznych cytokin prozapalnych, przede wszystkim IL-6 i TNF-, a zmiany ich poziomu mogą mieć związek z rokowaniem choroby. Zgłaszano ciężkie i śmiertelne przypadki COVID-19 u osób ze podwyższonym poziomem cytokin37. Jednakże w tym badaniu nie wykryto istotnej różnicy w poziomach IL-6 i TNF- w surowicy od 7 dni do 1 miesiąca po pełnym szczepieniu, co może wynikać ze specyficznej charakterystyki kohorty i czasu pobierania próbek.

Dane te stanowią pierwsze opublikowane doniesienia na temat trwałej odporności, uwzględniające zarówno komponent humoralny, jak i komórkowy, skupiające się na kobietach karmiących piersią. Może to być szczególnie przydatne w przyszłych metaanalizach tej i innych wrażliwych podgrup populacji, ponieważ w większych międzynarodowych wysiłkach zwykle brakuje danych z obszaru Bałkanów na temat populacji słowiańskiej.

cistanche tubulosa – poprawiają układ odpornościowy

Wnioski

Szczepionka mRNA przeciwko SARS-CoV-2 BNT162b2 wywołała mierzalne i trwałe odpowiedzi humoralne i komórkowe u kobiet karmiących piersią oraz u osób wcześniej nieszczepionych i zakażonych w ciągu pierwszych sześciu miesięcy po szczepieniu w Serbii. Nie zgłoszono żadnych poważnych skutków ubocznych szczepienia, a tylko 5% uczestników zostało zakażonych SARS-CoV-2 w ciągu pierwszych sześciu miesięcy po szczepieniu, bez konieczności hospitalizacji. Dwa lata po otrzymaniu szczepionki przeciw SARS-CoV-2 nie zgłoszono żadnych nieprzewidzianych szkód dla kobiet karmiących piersią i ich karmionych piersią niemowląt. Kolejne badania w tej dziedzinie powinny skupiać się na badaniach i strategiach rozwoju szczepionek, które mogą pomóc w szybszej i długotrwałej kontroli nad wirusem COVID-19 i potencjalnymi podobnymi pandemiami. Należy również dołożyć starań, aby zapewnić wytyczne oparte na wiedzy, odpowiednio zająć się dezinformacją, zwłaszcza dotyczącą wrażliwych subpopulacji, takich jak kobiety karmiące piersią, ułatwić dostęp do szczepionek w okresach największej potrzeby oraz zwiększyć ogólne zaufanie do nauki.

Cistanche przynosi korzyści - wzmacnia układ odpornościowy

Bibliografia

1. Panel kontrolny WHO, WHO Światowej Organizacji Zdrowia (COVID-19). https://covid19.who.int/ (2022).

2. Hojyo, S. i in. Jak COVID-19 wywołuje burzę cytokin powodującą wysoką śmiertelność. Infamm. Regen. 40, (2020).

3. van Eeden, C., Khan, L., Osman, MS i Tervaert, JWC Dysfunkcja komórek naturalnych zabójców i jej rola w chorobie COVID-19. Wewnętrzne J. Mol. Nauka. 21, 6351 (2020).

4. Sette, A. i Crotty, S. Odporność adaptacyjna na SARS-CoV-2 i COVID-19. Komórka 184, 861–880 (2021).

5. Chen, G. i in. Cechy kliniczne i immunologiczne ciężkiej i umiarkowanej choroby koronawirusowej 2019. J. Clin. Inwestować. 130, 2620–2629 (2020).

6. Dan, JM i in. Pamięć immunologiczna SARS-CoV-2 oceniana do 8 miesięcy po zakażeniu. Nauka 80, 371 (2021).

7. Turner, JS i in. Szczepionki mRNA SARS-CoV-2 indukują trwałe odpowiedzi ludzkiego ośrodka rozrodczego. Nat. 596, 109–113 (2021).

8. Malarz, MM i in. Szybka indukcja limfocytów T CD4+ specyficznych dla antygenu jest powiązana ze skoordynowaną odpornością humoralną i komórkową na szczepienie mRNA SARS-CoV-2. Immunitet 54, 2133-2142.e3 (2021).

9. Goel, RR i in. Szczepienie mRNA indukuje trwałą pamięć immunologiczną wirusa SARS-CoV-2, po czym następuje ciągła ewolucja do wariantów budzących obawy. bioRxiv Preparat serw. Biol. https://doi.org/10.1101/2021.08.23.457229, (2021)

10. Muyldermans, J., De Weerdt, L., De Brabandere, L., Maertens, K. i Tommelein, E. Te skutki szczepienia przeciwko Covid-19 na kobiety w okresie laktacji: systematyczny przegląd literatury. Przód. Immunol. 13, 1498 (2022).

11. Golan, Y. i in. Szczepienie mRNA przeciwko Covid-19 w okresie laktacji: ocena zdarzeń niepożądanych i przeciwciał związanych ze szczepionką w diadach matka-dziecko. Przód. Immunol. 12, 777103 (2021).

12. Arbeitman, CR i in. Porównanie strukturalne i funkcjonalne domeny wiążącej receptor SARS-CoV-2-szpikowej wytwarzanej w komórkach Pichia pastoris i ssaków. Nauka. Rep. 10, 21779 (2020).

13. Konjevic, G. i in. Ocena zdolności funkcjonalnej komórek NK pacjentów z czerniakiem w modelu in vitro kontaktu komórek NK z liniami komórek nowotworowych K562 i femx. J. Członek. Biol. 250, 507–516 (2017).

14. Konjević, G. i in. Zmniejszona aktywacja CD161 i zwiększona ekspresja receptora hamującego CD158a na komórkach NK leży u podstaw upośledzonej cytotoksyczności komórek NK u pacjentów ze szpiczakiem mnogim. J. Clin. Patol. https://doi.org/10.1136/jclinpath-2016-203614 (2016).

15. Stanojković, TP i in. Ocena ekspresji cytokin i podzbiorów krążących komórek odpornościowych jako potencjalnych parametrów ostrej toksyczności popromiennej u pacjentów z rakiem prostaty. Nauka. Rep. 10, 19002 (2020).

16. Cavic, M. i in. Badanie rzeczywistego wpływu pandemii SARS-CoV-2 na diagnostykę molekularną pacjentów chorych na raka i osób wysokiego ryzyka. Ekspert ks. Mol. Diagnoza 21, 101–107 (2021).

17. Hassan, I., Mukaigawara, M., King, L., Fernandes, G. i Sridhar, D. Z perspektywy czasu jest rok 2020? Wnioski z globalnego zarządzania zdrowiem po roku od wybuchu pandemii. Nat. Med. 27, 396–400 (2021).

18. Cavic, M., Grahovac, J., Zec, R., Stefanovic, M. i Aleksic, E. Przegląd pierwszego roku pandemii SARS-CoV-2 w Serbii i hrabstwie Pirot. Pirota. Zb. 46, 1–23 (2021).

19. Lijeskić, O. i in. Prospektywne badanie kohortowe kinetyki specyficznych przeciwciał przeciwko zakażeniu sars-cov-2 i czterem szczepionkom SARS-CoV-2 dostępnym w Serbii oraz skuteczności szczepionki: 3-miesięczny raport okresowy. Szczepionki 9, (2021).

20. Petrović, V., Vuković, V., Patić, A., Marković, M. i Ristić, M. Immunogenność szczepionek BNT162b2, BBIBP-CorV i Gam-COVID-Vac a odporność po naturalnym SARS-CoV{{7 }} infekcja – badanie porównawcze z Nowego Sadu. Serbia. PLoS One 17, e0263468 (2022).

21. Yeo, KT i in. Aktywność neutralizująca i mRNA szczepionki SARS-CoV-2 Trwałość w surowicy i mleku matki po szczepieniu BNT162b2 u kobiet karmiących piersią. Przód. Immunol. 12, (2022).

22. Pace, RM i in. Mleko kobiet, u których zdiagnozowano COVID-19 nie zawiera RNA SARS-CoV-2, ale ma utrzymujący się poziom przeciwciał IgA-2-swoistych dla SARS-CoV. Przód. Immunol. 12, 5566 (2021).

23. CDC, C. w przypadku szczepionek przeciwko DC i P.-19 podczas ciąży lub karmienia piersią. https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/vacci nes/recommendations/pregnancy.html (2022).

24. Bethesda (MD), NI CH i HD Baza danych o lekach i laktacji (LactMed). Szczepionki przeciwko COVID-19. (2022).

25. Jo, DH i in. Gwałtownie spadające miano przeciwciał SARS-CoV-2 w ciągu 4 miesięcy po szczepieniu BNT162b2. Szczepionki 9, (2021).

26. Carreno, BM i Collins, M. Te Rodzina ligandów B7 i jej receptory: nowe szlaki kostymulacji i hamowania odpowiedzi immunologicznych. Annu. Ks. Immunol. 20, 29–53 (2002).

27. Esensten, JH, Helou, YA, Chopra, G., Weiss, A. i Bluestone, JA Kostymulacja CD28: od mechanizmu do terapii. Immunitet 44, 973–988 (2016).

28. Geers, D. i in. Niepokojące warianty SARS-CoV-2 częściowo wymykają się odpowiedzi humoralnej, ale nie odpowiedzi limfocytów T u rekonwalescencyjnych dawców i osób szczepionych na COVID-19. Nauka. Immunol. 6, (2021).

29. Tarke, A. i in. Wpływ wariantów SARS-CoV-2 na całkowitą reaktywność limfocytów T CD4 + i CD8 + u osób zakażonych lub zaszczepionych. Raporty komórek. Med. 2, (2021).

30. Sahin, U. i in. Szczepionka BNT162b2 indukuje przeciwciała neutralizujące i wieloswoiste limfocyty T u ludzi. Nat. 2021 5957868 595, 572–577 (2021).

31. Tan, AT i in. Szybki pomiar liczby limfocytów T SARS-CoV-2 w krwi pełnej od osób zaszczepionych i naturalnie zakażonych. J. Clin. Inwestować. 131, (2021).

32. Chia, WN i in. Dynamika odpowiedzi przeciwciał neutralizujących SARS-CoV-2 i czas trwania odporności: badanie podłużne. Te Lancet Microbe 2, e240–e249 (2021).

33. Reynolds, CJ i in. Niezgodna odpowiedź przeciwciał neutralizujących i komórek T w bezobjawowej i łagodnej infekcji SARS-CoV-2. Nauka. Immunol. 5, (2020).

34. Lopandić, Z. i in. Immunoreaktywność IgM i IgG rekombinowanego białka m SARS-CoV-2. Wewnętrzne J. Mol. Nauka. 22, (2021).

35. Altmann, DM, Boyton, RJ i Beale, R. Odporność na warianty SARS-CoV-2 budzące obawy. Nauka 371, 1103–1104 (2021).

36. Matchett, WE i in. Nowatorstwo: szczepionka nukleokapsydowa wywołuje niezależną od kolców odporność ochronną SARS-CoV-2. J. Immunol. 207, 376–379 (2021).

37. Costela-Ruiz, VJ, Illescas-Montes, R., Puerta-Puerta, JM, Ruiz, C. i Melguizo-Rodríguez, L. SARS-CoV-2 Zakażenie: rola cytokin w COVID{{ 7}} choroba. Czynnik wzrostu cytokin Rev. 54, 62 (2020).