Skuteczność skojarzonego leczenia ekstraktów Laminaria Japonica i Cistanche Tubulosa we wzroście włosów

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

Kyungha Shin1# i inni

Ponieważ wypadanie włosów na skórze głowy ostatnio nasiliło się nawet u młodych ludzi, co poważnie wpływa na jakość życia jednostek,wzrost włosów-działanie stymulujące wyciągu z Laminaria japonica (LJE) orazCistanche tubulosaekstrakt (CTE). Po potwierdzeniu fazy anagenowej mieszków włosowych podczas golenia, samcom myszy C57BL/6 podawano na skórę 3% minoksydylu lub podawano doustnie kombinacje LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)przez 21 dni. Minoksydyl promował odrost włosów i zwiększał aktywność transpeptydazy glutamylowej (-GTP) i fosfatazy alkalicznej (ALP). Ponadto, poziom Minoksydyl zwiększa poziom czynnika wzrostu naskórka (EGF) i czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF). Jednoczesne podawanie LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)przy 54 mg/kg LJE plus 162 mg/kg, CTE (Cistanche tubulosawyciąg)wywarł synergiczny wpływ na odrost włosów, porównywalny z 3% minoksydylem. LJE preferencyjnie zwiększał aktywność ALP, podczas gdy CTE（Cistanche tubulosawyciąg)zwiększyły zarówno aktywności -GTP i ALP, jak i ekspresję EGF i VEGF. Model zapalenia worka powietrznego in vivo, wysięk naczyniowy indukowany karageniną oraz zwiększone stężenia tlenku azotu i prostaglandyny E2 w wysiękach były synergistycznie tłumione przez jednoczesne podawanie LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg). Ponadto naciek komórek zapalnych został znacznie zahamowany przez leczenie skojarzone. Wyniki sugerują, że skojarzone leczenie doustne z LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)nieodpowiednie dawki i proporcje zapobiegają wypadaniu włosów i łagodzą łysienie, które może być częściowo spowodowane ich działaniem przeciwzapalnym.

Słowa kluczowe Wzrost włosów, zapalenie, Laminaria japonica,Cistanche tubulosa, leczenie skojarzone

Cistanche tubulosaekstrakt pełni wiele funkcji

Ostatnio wypadanie włosów na skórze głowy nasila się nawet u młodych ludzi, co poważnie wpływa na jakość życia danej osoby. Chociaż łysienie nie jest jednym z problemów zdrowotnych, może powodować głęboki psychologicznie nieprzyjemny stres społeczny. Dlatego też bardzo interesujące jest opracowanie nowych materiałów zapobiegawczych i/lub terapeutycznych do wypadania i odrastania włosów. Pomimo miliardowego rynku dostępnych jest obecnie kilka skutecznych produktów [1].
Mieszki włosowe przebudowują się podczas cyklicznych okresów wzrostu (anagen), regresji (katagen), spoczynku (telogen) i wypadania (egzogen) [2]. Podczas katagenu wiele komórek pęcherzykowych przechodzi programowaną śmierć komórkową (apoptozę) [3], zmniejszając rozmiar pęcherzyka, gdy pęcherzyki wchodzą w telogen. Aktywacja rzadko cyklicznych nabłonkowych komórek macierzystych zlokalizowanych w obszarze wybrzuszenia pęcherzyków powoduje regenerację pęcherzyka na początku kolejnej fazy anagenu [4]. Potomstwo komórek macierzystych tworzy nową macierz pęcherzykową podczas wczesnego anagenu, a łodyga włosa i wewnętrzna osłonka korzenia pochodzą z tych stosunkowo niezróżnicowanych komórek macierzy [5]. Dobrze wiadomo, że wielkość mieszka włosowego i czas trwania fazy anagenu regulują odpowiednio wielkość (średnicę) i długość łodygi włosa. Ten cykliczny wzrost włosów jest regulowany przez różne czynniki wzrostu.

Minoksydyl, finasteryd i Propecia są dostępne w handlu, aby spowolnić wypadanie włosów i ułatwić odrost włosów. Minoksydyl jest środkiem rozszerzającym naczynia krwionośne, który wywiera efekt uboczny ułatwiającywzrost włosów[6], co może wynikać z jego aktywności dostarczającej składniki odżywcze i otwierającej kanały potasowe [7,8]. Minoksydyl jest skuteczny w leczeniu łysienia androgenowego, między innymi w leczeniu łysienia, chociaż jego skuteczność zanika w ciągu kilku miesięcy po zaprzestaniu leczenia. Dla porównania, finasteryd i Propecia, leki łagodnego przerostu prostaty i raka prostaty, zostały zarejestrowane w wielu krajach na łysienie androgenowe (łysienie typu męskiego). Finasteryd i Propecia to syntetyczne antyandrogeny, hamujące reduktazę 5- typu II, enzym przekształcający testosteron w dihydrotestosteron (DHT) w komórkach brodawki dolnej mieszków włosowych [9].

Laminaria japonica, Undaria pinnatifida i Cladosiphon okamuranus, szeroko rozpowszechnione w wielu krajach, były od dawna stosowane jako terapeutyki w medycynie Wschodu. We wcześniejszych badaniach, fukoidan, kompleks polisacharydów siarczanowych, został wyekstrahowany i zidentyfikowany z wodorostów morskich i potwierdzono jego działanie przeciwutleniające, przeciwzakrzepowe, przeciwnowotworowe i przeciwzapalne [10,11]. Następnie wykazano korzystny wpływ fukoidanu na choroby zapalne, niedokrwienie, dysfunkcję immunologiczną i nowotwory [12,13]. Z drugiej strony,Cistanche tubulosaekstrakt (CTE) jest również szeroko stosowany w tradycyjnych lekach w Chinach. CTE（Cistanche tubulosawyciąg)poprawia przepływ krwi poprzez obniżenie poziomu cholesterolu we krwi [14]. Ostatnio doniesiono, że CTE zmniejszyło wytwarzanie czynnika martwicy nowotworu (TNF- ) i interleukiny-4 (IL-4), które są głównymi czynnikami wytwarzania tlenku azotu (NO) w szlaku zapalnym [15]. Wykazaliśmy również, że fukoidan z ekstraktu Laminaria japonica (LJE) i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)synergistycznie łagodził stan zapalny in vitro i in vivo [16]. Warto zauważyć, że wykazano ścisły związek zapalenia skóry (zwłaszcza gruczołów łzowych) z łysieniem [17]. W ten sposób pojawiają się przeciwzapalne aspekty leczenia łysienia [18].
W oparciu o działania poprawiające przepływ krwi i stany zapalne badamy skojarzoną skuteczność LJE i CTE（Cistanche tubulosa wyciąg)na wzrost włosówi mechanizm(y) leżący u podstaw, w porównaniu z 3% Minoxidilem (Hyundai Pharmaceutical, Seul, Korea), dobrze znanymwzrost włosówwzmacniacz.

Cistanche tubulosaekstrakt jest dobry naWzrost włosów

Materiały i metody

Materiały

LJE i CTE (Cistanche tubulosawyciąg)zostały uzyskane od Misuba RTech Co., Ltd. (Asan, Korea). Wysuszony proszek Laminaria japonica był ekstrahowany w oczyszczonej wodzie w temperaturze 60oC przez 24 godziny, filtrowany przez membranę 0,45 μm, dezynfekowany i suszony rozpyłowo.Cistanche tubulosazostał wyekstrahowany w 80% etanolu, zdezynfekowany, zagęszczony i wysuszony. LJE i CTE (Cistanche tubulosawyciąg)trzymano w 4oC, mieszano (1:3) i rozpuszczono w oczyszczonej wodzie przed użyciem i podawano doustnie w objętości 5 ml/kg.
Zwierząt
Samce myszy C57BL/6 dlawzrost włosówi samce myszy ICR do badania stanu zapalnego zostały zakupione od Daehan Biolink (Eumseong, Korea) i trzymane w pomieszczeniu o stałych warunkach środowiskowych (23±2°C; 45-65 procent wilgotności względnej; 12-godziny światła -cykl ciemności; jasność 150-300 luksów). Pasza peletowa i oczyszczona woda były dostępne ad libitum. Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) Chungbuk National University (CBNU), Korea i przeprowadzone zgodnie ze standardowymi procedurami operacyjnymi (SOP) Laboratory Animal Research Center, CBNU.

Kuracja na porost włosów

Po potwierdzeniu fazy anagenowej poprzez obserwację jednorodnego różowego koloru skóry na grzbiecie myszy C57BL/6 (6 tygodni, n=8/grupę) po przycięciu w fazie telogenu, włosy zostały zgolone [1,19 ,20]. Od następnego dnia wybierano myszy bez widocznych zadrapań i doustnie
leczonych LJE (18 lub 54 mg/kg), CTE (54 lub 162 mg/kg) lub ich mieszaniną (18 plus 54 lub 54 plus 162 mg/kg) raz dziennie przez 21 dni. Niskie dawki LJE (18 mg/kg) i CTE (54 mg/kg) były szacowane na podstawie szacowanych dawek u ludzi 100 mg/ciało (70 kg) i 300 mg/ciało po przeliczeniu na powierzchnię masy ciała (Km{14} } odpowiednio dla człowieka/Km=3 dla myszy). Wysokie dawki LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)zostały ustalone trzykrotnie, pojedynczo lub w połączeniu, w celu oceny maksymalnych efektów synergicznych [16]. Minoksydyl (3 procent, 0,2 ml) nakładano miejscowo raz dziennie na ogoloną skórę według tego samego schematu, co leczenie LJE/CTE.

Obserwacja brutto wzrostu włosów

W dniach w 3-dniowych odstępach po goleniu i podczas leczenia myszy były lekko znieczulane eterem dietylowym i robiono zdjęcia ich tyłkom. Stosunek odrastania włosów (obszar odrastania/obszar ogolony) na zdjęciach analizowano za pomocą komputerowego systemu analizy obrazu (Imageinside, Daejeon, Korea).

Badanie mikroskopowe mieszków włosowych

W 14 i 21 dniu myszy uśmiercono w głębokim znieczuleniu eterem dietylowym i usunięto im skórę grzbietową [1]. Skórę grzbietową pocięto na dwie części. Utrwalone w formalinie, zatopione w parafinie skrawki tkanek (o średnicy 5 μm) jednej części wybarwiono hematoksyliną-eozyną w celu zbadania liczby mieszków włosowych i wyników histologicznych. Drugą część tkanki zamrożono w ciekłym azocie do testu enzymatycznego i testu immunologicznego.

Test aktywności enzymatycznej

Tkankę skóry homogenizowano w 4 objętościach buforu fosforanowego (pH 7,4). Homogenat wirowano przy 3,000 obr./min przez 20 min, a supernatant użyto do oznaczenia aktywności transpeptydazy glutamylowej (-GTP) i fosfatazy alkalicznej (ALP) przy użyciu fosforanu p-nitrofenylu (PNPP)-DEAV jako podłoże [1,21].

Cistanche tubulosa

Kwantyfikacja czynników wzrostu

Czynnik wzrostu naskórka (EGF) i czynnik wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF) oznaczono ilościowo za pomocą zestawów ELISA (Enzym-linked immunosorbent assay) (R&D Systems, Minneapolis, USA) zgodnie z instrukcjami producenta [1,22].

Leczenie zapalenia

Myszy ICR (7 tygodni, n=8/grupę) leczono doustnie LJE (18 lub 54 mg/kg), CTE（Cistanche tubulosawyciąg)(54 lub 162 mg/kg) lub ich mieszanina (18 plus 54 lub 54 plus 162 mg/kg) raz dziennie przez 7 dni [16]. Pierwszego dnia LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)leczenia, myszom wstrzykiwano podskórnie 10 ml sterylnego powietrza w tył, aby utworzyć woreczek [16,23,24]. Po 2 i 5 dniach do woreczka ponownie wstrzyknięto 5 ml powietrza. Godzinę po ostatnim LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)leczenia, do woreczka wstrzyknięto 1 ml karageniny (1% w soli fizjologicznej; Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) lub jej nośnika (sól fizjologiczna).

Analiza wysięków

Torebkę powietrzną przepłukano 1 ml zimnej soli fizjologicznej 6 godzin po wstrzyknięciu karageniny i zarejestrowano objętość netto płynu z płukania [16]. Całkowitą liczbę komórek zapalnych, w tym neutrofili, monocytów i limfocytów oznaczono za pomocą licznika Colter.

Stężenia NO i prostaglandyny E2 (PGE2) oznaczono odpowiednio odczynnikiem Griessa (Sigma-Aldrich) i immunoenzymatycznym (EIA) przy użyciu zestawu Correlate-EIA (Assay Designs, Ann Arbor, USA) [16].

Analiza statystyczna

Dane są prezentowane jako średnia ± błąd standardowy. Istotność statystyczną określono za pomocą jednokierunkowej analizy wariancji, a następnie testu wielokrotnych porównań post hoc Tukeya. Wartości P<0.05 were="" considered="" to="" be="" statistically="">

Wyniki

Zastosowanie Minoksydylu (3 procent), materiału odniesienia, znacznie ułatwiłowzrost włosówmyszy C57BL/6, wykazujących prawie pełne pokrycie (92,4 procent) ogolonego obszaru (ryc. 1, 2B) w porównaniu z 29,2 proc. w normalnym wzroście (ryc. 1, 2A) w dniu 21. Chociaż mniej skuteczne niż aplikacja Minoksydyl , doustne leczenie LJE również ułatwiłowzrost włosów, co prowadzi do pokrycia 33,5 i 69,1 procent odpowiednio przy 18 i 54 mg/kg (ryc. 1, 2C, 2D). CTE（Cistanche tubulosawyciąg)był również skuteczny we wzmacnianiuwzrost włosów, osiągając 73,6 i 80,4 procent pokrycia odpowiednio przy 54 i 162 mg/kg (ryc. 1, 2E, 2F). Warto zauważyć, że terapia skojarzona z wysokimi dawkami LJE (54 mg/kg) i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)(162 mg/kg) znacznie poprawiłowzrost włosówod 12. dnia porównywalny z efektem minoksydylu (ryc. 1, 2H), chociaż niskie dawki LJE (18 mg/kg) i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)(54 mg/kg) wywierają efekt synergiczny tylko we wczesnej fazie (Figury 1, 2G).

Rycina 1. Przebieg w czasie odrastania włosów myszy leczonych Minoksydylem lub ekstraktem z Laminaria japonica (LJE) i/lubCistanche tubulosaekstrakt (CTE). ,

○normalny; ●, aplikacja Minoksydyl (3 procent); △, 18 mg/kg LJE; ▼, 54 mg/kg LJE; □, 54 mg/kg CTE; ■, 162 mg/kg CTE; ◇, 18 mg/kg LJE plus 54 mg/kg CTE; ◆, 54 mg/kg LJE plus 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosawyciąg).

Rysunek 2. Reprezentatywne ogólne wyniki odrastania włosów myszy leczonych Minoksydylem lub ekstraktem z Laminaria japonica (LJE) i/lubCistanche tubulosaekstrakt (CTE) w dniu 21.

A, normalne; B, aplikacja Minoksydyl (3 procent); Cmax 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; E, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosawyciąg); F, 162 mg/kg CTE; G, 18 mg/kg LJE plus 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE plus 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosawyciąg).

W porównaniu do normalnych mieszków włosowych (ryc. 3A), aplikacja Minoksydylu poprawiła integralność mieszków włosowych, pokazując większe mieszki włosowe i grubsze łodygi włosa (ryc. 3B). Takie efekty stwierdzono również w skórze myszy leczonych LJE i/lub CTE（Cistanche tubulosawyciąg)(Rysunki 3C-3H). Zwłaszcza skuteczność skojarzonego leczenia LJE i CTE wzmacniająca mieszki włosowe (Cistanche tubulosawyciąg)był porównywalny do Minoksydylu.

Rysunek 3. Reprezentatywne wyniki mikroskopowe odrastania włosów myszy leczonych minoksydylem lub ekstraktem z Laminaria japonica (LJE) i/lubCistanche tubulosaekstrakt (CTE) w dniu 21.

A, normalne; B, aplikacja Minoksydyl (3 procent); Cmax 18 mg/kg LJE; D, 54 mg/kg LJE; E, 54 mg/kg CTE（Cistanche tubulosawyciąg); F, 162 mg/kg CTE（Cistanche tubulosawyciąg); G, 18 mg/kg LJE plus 54 mg/kg CTE; H, 54 mg/kg LJE plus 162 mg/kg CTE

Zastosowanie minoksydylu zwiększyło aktywność -GTP, która indukuje mieszki włosowe do fazy anagenu o 90-120 procent w dniach 14 i 21, w porównaniu z poziomem normalnej skóry (ryc. 4). LJE (54 mg/kg) również zwiększał aktywność enzymatyczną, chociaż występowały duże różnice. CTE wywarło podobne efekty, znacząco wzmacniając aktywność -GTP w dniu 14. Co ciekawe, leczenie skojarzone LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)dodatkowo zwiększał aktywność enzymu wyższą niż w przypadku stosowania samych ekstraktów.
Aktywność ALP, markera wzrostu kości i angiogenezy, znacząco wzrosła w skórze w dniach 14 i 21 po miejscowym zastosowaniu minoksydylu (ryc. 5). LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)zwiększała również aktywność ALP po podaniu doustnym w sposób zależny od dawki. Warto zauważyć, że aktywność enzymatyczna została synergistycznie wzmocniona przez leczenie skojarzone z LJE i CTE.

Rysunek 4. Wpływ minoksydylu (MXD, 3 procent) lub ekstraktu z Laminaria japonica (LJE) i/lubCistanche tubulosaekstrakt (CTE) (w mg/kg) na aktywność transpeptydazy glutamylowej (-GTP) w dniach 14 (A) i 21 (B) leczenia.

*Znacznie różni się od normalnej kontroli (Nor) (P<>

Rysunek 5. Wpływ minoksydylu (MXD, 3 procent) lub ekstraktu z Laminaria japonica (LJE) i/lubCistanche tubulosaekstrakt (CTE) (w mg/kg) na aktywność fosfatazy alkalicznej (ALP) w 14 (A) i 21 (B) dniu leczenia.

*Znacznie różni się od normalnej kontroli (Nor) (P<>

W analizie EFG dobrze znanywzrost włosówczynnik, aplikacja Minoksydylu zwiększyła poziom EGF 3,5-krotnie w stosunku do normalnej kontroli w obu dniach 14 i 21 (Figura 6). LJE (18 mg/kg) zwiększał EGF dopiero w 21. dniu, podczas gdy CTE (162 mg/kg) znacznie zwiększał jego produkcję w 14. i 21. dniu. Warto zauważyć, że skojarzone leczenie LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)nawet przy niskich dawkach wykazywał wyraźne efekty synergistyczne.

Traktowanie minoksydylem również zwiększyło poziom VEGF o 50-80 procent powyżej wartości kontrolnej (Figura 7). Chociaż LJE był nieskuteczny, CTE (Cistanche tubulosawyciąg)wywarł niezwykłe efekty wzmacniające. Dodatkowo terapia skojarzona LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)wykazywał aktywność synergistyczną we wczesnej fazie w dniu 14.

Rysunek 6. Wpływ minoksydylu (MXD, 3 procent) lub ekstraktu z Laminaria japonica (LJE) i/lubCistanche tubulosaekstrakt (CTE) (w mg/kg) na zawartość naskórkowego czynnika wzrostu (EGF) w 14 (A) i 21 (B) dniu leczenia.

*Znacznie różni się od normalnej kontroli (Nor) (P<>

Rysunek 7. Wpływ minoksydylu (MXD, 3 procent) lub ekstraktu z Laminaria japonica (LJE) i/lubCistanche tubulosaekstrakt (CTE) (w mg/kg) na zawartość czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF) w dniach 14 (A) i 21 (B) leczenia.

*Znacznie różni się od normalnej kontroli (Nor) (P<>

Wstrzyknięcie karageniny do woreczka z powietrzem myszy ICR zwiększyło objętość wysięku w woreczku sześciokrotnie w stosunku do poziomu kontrolnego (Tabela 1). Taki zwiększony wysięk był znacznie osłabiony przez leczenie LJE (18 i 54 mg/kg) lub CTE（Cistanche tubulosawyciąg)(54 i 162 mg/kg). Warto zauważyć, że leczenie skojarzone LJE i CTE dodatkowo zmniejszało objętość wysięku w porównaniu z indywidualnymi efektami. Liczba komórek zapalnych drastycznie wzrosła po wstrzyknięciu karageniny: 34,6, 4,2 i 24,9 razy więcej niż poziom kontrolny dla neutrofili, monocytów i limfocytów (Tabela 1). Jednak LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)znacznie zmniejszył liczbę komórek zapalnych w sposób zależny od dawki, w którym LJE był nieco lepszy od CTE（Cistanche tubulosawyciąg). Prawdopodobnie efekt synergiczny w nacieku komórek zapalnych osiągnięto przez jednoczesne podawanie LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg).
Równolegle z naciekiem komórek zapalnych w woreczku, zawartość NO i PGE2 w woreczku również drastycznie wzrosła po wstrzyknięciu karageniny (tab. 1). W porównaniu z łagodnym efektem LJE, CTE（Cistanche tubulosawyciąg)znacznie obniżył stężenie NO. Leczenie skojarzone LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)dalej obniżył poziom NO w sposób zależny od dawki. W podobny sposób podwyższony poziom PGE2 był synergistycznie tłumiony przez skojarzoną terapię LJE i CTE (Tabela 1).

Dyskusja

Ludzka głowa ma średnio 100000 mieszków włosowych. W ciągu życia każdy mieszek włosowy rośnie i wypada około 20 razy, wykazując dzienną utratę 100 pasm [25]. Wypadanie włosów, w tym łysienie i łysienie, jest niepokojącym stanem dla mężczyzn i kobiet, zwłaszcza we współczesnym społeczeństwie. Dlatego bardzo ważne jest opracowywanie nowych terapii, które zapobiegają wypadaniu włosów i przyspieszają ich odrost. Pod tym względem medycyna alternatywna wzbudziła zainteresowanie badaczy.

Związane ze starzeniem się morfologiczne, histochemiczne i biochemiczne aspekty łysienia typu męskiego zostały ujawnione w serii badań na makakach kikutów. W łysieniu typu męskiego faza telogenu uległa wydłużeniu, natomiast faza anagenowa została skrócona. Dlatego uważa się, że dla poprawy wypadania włosów bardzo ważne jest utrzymanie wydłużenia mieszków włosowych od wczesnego do średniego anagenu [26]. W niniejszym badaniu wykazaliśmy, żewzrost włosów-ułatwiające działanie leczenia skojarzonego LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg). Co najważniejsze, łączne przepisywanie LJE (54 mg/kg) i CTE (162 mg/kg) wykazywało doskonałe działanie na odrastanie włosów, pomimo doustnego podawania ekstraktów. Warto zauważyć, że efekt terapii skojarzonej był porównywalny do efektu stosowania na skórę wysokiego stężenia (3 procent) oczyszczonego związku Minoksydyl, chociaż stężenia składników aktywnych LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)w skórze po podaniu doustnym nie zostało potwierdzone.
W skórze myszy rowerowych aktywność -GTP jest wyraźna podczas anagenu, ale znacznie zmniejszona podczas telogenu [27]. W skórze enzym ten występuje wyłącznie w zewnętrznej i wewnętrznej osłonie korzeni mieszków włosowych poniżej poziomu gruczołów łojowych, w których nie występuje -GTP [27]. Dla porównania, ALP jest wyraźnie wyrażana w jednostkach włosowo-łojowych, a aktywność wzrasta w obszarze odrastania włosów. ALP jako czynnik angiogenny poprawia dostarczanie składników odżywczych do brodawek skórnych, a tym samym indukuje grubość podczas anagenu [28]. Potwierdzono jednak, że aktywność ALP zmniejszyła się w skórze z łysieniem [21]. W badaniu mechanistycznym, związek odniesienia Minoksydyl znacznie wzmocnił aktywność -GTP i ALP, co sugeruje, że Minoksydyl ułatwiawzrost włosównie tylko poprzez indukcję mieszków włosowych
do fazy anagenu, ale także poprzez poprawę przepływu krwi poprzez angiogenezę. Ponieważ LJE zwiększył aktywność ALP, sugeruje się, że LJE wykazuje korzystny wpływ nawzrost włosówpoprzez swój potencjał angiogenny, jak wnioskowano z poprzedniego badania, że ​​fukoidan, aktywny składnik LJE, ma działanie poprawiające przepływ krwi [29]. Dla porównania, CTE（Cistanche tubulosawyciąg)wzmocnił zarówno aktywność -GTP, jak i ALP, co sugeruje jego wpływ na indukcję fazy anagenowej oraz poprawę przepływu krwi. Zgodnie z synergicznym działaniem na enzymy -GTP i ALP uważa się, że szybszy odrost włosów można osiągnąć przez jednoczesne podawanie LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg).
Powszechnie wiadomo, że różne cytokiny i czynniki wzrostu, w tym EGF i VEGF, biorą udział w regulacji morfogenezy i wzrostu włosów [30, 31]. Warto zauważyć, że czynniki pochodzące z komórek brodawek skórnych mają działanie chemotaktyczne na otaczające komórki, co z kolei prowadzi do promowaniawzrost włosów[32]. EGF jest wyrażany w związku z rozwojem mieszków włosowych [33,34]. Chociaż ekspresja zarówno EGF, jak i jego receptora (EGFR) w zewnętrznej osłonce korzenia jest obniżona wraz z zakończeniem wzrostu pęcherzyka, ich ekspresja powraca, gdy komórki pęcherzyka wchodzą w fazę anagenu. VEGF odgrywa ważną rolę w angiogenezie podczas reakcji zapalnej i rozwoju nowotworu [35]. W szczególności sieć naczyniowa jest ściśle związana z cyklem wzrostu włosów [36-38]. W związku z tym potwierdzono, że ekspresja genów VEGF zmienia się w zależności od cyklu ludzkiego włosa [39].

Na podstawie wyników przedstawionych w niniejszym badaniu wyjaśnia się, żewzrost włosów-działanie promujące Minoksydylu może wynikać z jego potencjalnej regulacji w górę EGF i VEGF, które ułatwiają wzrost pęcherzyków oraz angiogenezę. Chociaż LJE nie wpływał na ekspresję VEGF, zwiększał zawartość EGF w skórze po podaniu doustnym. Dla porównania, CTE（Cistanche tubulosawyciąg)był skuteczny w ekspresji zarówno EGF, jak i VEGF. W szczególności LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)wywierał addytywny wpływ na ekspresję czynników wzrostu.

Oprócz wydłużenia włosów, integralność mieszków włosowych uległa znacznej poprawie po leczeniu minoksydylem, LJE i/lub CTE（Cistanche tubulosawyciąg)w badaniu mikroskopowym. We wczesnej fazie wypadania włosów i łysienia u pacjentów ludzkich i modeli zwierzęcych, integralność mieszków włosowych była zaburzona, a grubość łodygi włosa zmniejszona, podczas gdy integralność mieszków włosowych i grubość łodygi powróciły we włosach regenerujących. Co ciekawe, tak pozytywny wpływ na integralność i odrost składników włosa osiągnięto przy doustnym podawaniu LJE plus CTE（Cistanche tubulosawyciąg), w którym efekt był porównywalny do miejscowego stosowania wysokiego stężenia Minoksydylu. W związku z tym oczekuje się, że skojarzenie do doustnego przyjmowania LJE plus CTE（Cistanche tubulosawyciąg)może być receptą stosunkowo wygodną w porównaniu do stosowania na skórę Minoksydylu.
W mysim modelu łysienia steroidowrażliwy naciek limfocytów wokół mieszków włosowych jest powszechny, wykazując wzór podobny do immunoterapii ludzkiego łysienia z zapaleniem gruczołu łzowego [17, 40]. W niniejszym badaniu zapalenie skóry wywołane karageniną zostało znacznie złagodzone przez LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)leczenie; tj. wysięk naczyniowy i naciek komórek zapalnych zostały synergistycznie stłumione. W analizie ilościowej główne mediatory stanu zapalnego NO i PGE 2 były istotnie kontrolowane po jednoczesnym doustnym podaniu LJE i CTE (Cistanche tubulosawyciąg). Co ciekawe, ponieważ LJE wykazywał aktywność przeciwzapalną wyższą niż półoczyszczony fukoidan [16], przypuszcza się, że oprócz fukoidanu może występować dodatkowy składnik aktywny, oprócz fukoidanu.

Podsumowując, wyniki wskazują, że skojarzone leczenie doustne LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)poprawia wypadanie włosów poprzez regulację czynników wzrostu i powiązanych aktywności enzymów, a częściowo poprzez potencjał przeciwzapalny. Dlatego sugeruje się, aby połączenie obejmujące LJE i CTE（Cistanche tubulosawyciąg)nieodpowiednie dawki i proporcje kliniczne mogą być kandydatem na receptę dla pacjentów z wypadaniem włosów.

Cistanche tubulosaprodukty ekstraktu

Podziękowanie

Badania te były wspierane finansowo przez Leading Industry Development for Economic Region of the Chungcheong Leading Industry Office, Korea Institute for Advancement of Technology (KIAT) i Ministerstwo Gospodarki Wiedzy (MKE), a częściowo przez program rozwoju technologii żywności o wysokiej wartości dodanej , Ministerstwo Rolnictwa, Żywności i Spraw Wsi (MAFRA; numer dotacji 113034-3).

Konflikt interesów

Autorzy deklarują, że nie ma finansowego konfliktu interesów, aby opublikować te wyniki.

Od: „Skuteczność skojarzonego leczenia ekstraktów z Laminaria japonica i Cistanche tubulosa we wzroście włosów” autorstwaKyungha Shin1# i inni

--- Lab Anim Res 2015: 31(1), 24-32http://dx.doi.org/10.5625/lar.2015.31.1.24

BIBLIOGRAFIA

1. Kim JS, Kang BS, Park HJ, Kim DY, Hwang SY, Nam SY, Yun YW, Lee BJ. Promujący wpływ mieszanek ekstraktów ziołowych na odrost włosów u myszy C3H/HeJ. J Biomed Res 2009; 10(3): 99-108.
2. Paus R, Cotsarelis G. Biologia mieszków włosowych. N Engl J Med 1999; 341(7); 491-497.
3. Cotsarelis G. Mieszek włosowy: umiera, by zwrócić na siebie uwagę. Am J Pathol 1997; 151(6): 1505-1509.
4. Cotsarelis G, Sun TT, Lavker RM. Komórki zachowujące etykietę znajdują się w obszarze wybrzuszenia jednostki włosowo-łojowej: implikacje dla komórek macierzystych pęcherzyka, cyklu włosowego i karcynogenezy skóry. Komórka 1990; 61(7): 1329-1337.
5. Oshima H, Rochat A, Kedzia C, Kobayashi K, Barrandon Y. Morfogeneza i odnowa mieszków włosowych z dorosłych multipotencjalnych komórek macierzystych. Komórka 2001; 104(2): 233-245.
6. Burton JL, Marshall A. Nadmierne owłosienie spowodowane minoksydylem. Br J Dermatol 1979; 101(5): 593-595.
7. Meisheri KD, Cipkus LA, Taylor CJ. Mechanizm działania rozszerzenia naczyń wywołanego siarczanem minoksydylu: rola zwiększonej przepuszczalności K plus. J Pharmacol Exp Ther 1988; 245(3): 751-760.
8. Buhl AE, Waldon DJ, Baker CA, Johnson GA. Siarczan minoksydylu to aktywny metabolit, który stymuluje mieszki włosowe. J Invest Dermatol 1990; 95(5): 553-557.
9. Kaufman KD, Dawber RP. Finasteryd, inhibitor typu 2 5alfa-reduktazy, stosowany w leczeniu mężczyzn z łysieniem androgenowym. Expert Opin Investig Drugs 1999; 8(4): 403-415.
10. Feldman SC, Reynaldi S, Stortz CA, Cerezo AS, Damont EB. Właściwości przeciwwirusowe frakcji fukoidanu z Leathesia difformis. Fitomedycyna 1999; 6(5): 335-340.
11. Wang J, Zhang Q, Zhang Z, Song H, Li P. Potencjalna zdolność antyoksydacyjna i antykoagulacyjna frakcji fukoidanu o niskiej masie cząsteczkowej wyekstrahowanych z Laminaria japonica. Int J Biol Macromol 2010; 46(1): 6-12.
12. Bojakowski K, Abramczyk P, Bojakowska M, Zwolińska A, Przybylski J, Gaciong Z. Fucoidan poprawia nerkowy przepływ krwi we wczesnym stadium uszkodzenia nerkowo-reperfuzyjnego u szczura. J Physiol Pharmacol 2001; 52(1): 137-143.
13. Li N, Zhang Q, Song J. Ocena toksykologiczna fukoidanu wyekstrahowanego z Laminaria japonica u szczurów Wistar. Food Chem Toxicol 2005; 43(3): 421-426.
14. Shimoda H, Tanaka J, Takahara Y, Takemoto K, Shan SJ, Su MH. Hipocholesterolemiczne działanie ekstraktu z Cistanche tubulosa, tradycyjnej chińskiej surowej medycyny, u myszy. Am J Chin Med 2009; 37(6): 1125-1138.
15. Yamada P, Iijima R, Han J, Shigemori H, Yokota S, Isoda H. Hamujące działanie akteozydu wyizolowanego z Cistanche tubulosa na uwalnianie mediatora chemicznego i wytwarzanie zapalnych cytokin przez komórki RBL-2H3 i KU812. Planta Med 2010; 76(14): 1512-1518.
16. Kyung J, Kim D, Park D, Yang YH, Choi EK, Lee SP, Kim TS, Lee YB, Kim YB. Synergiczne działanie przeciwzapalne wyciągu z Laminaria japonica fucoidan i Cistanche tubulosa. Lab Anim Res 2012; 28(2): 91-97.
17. Chee E, Fong KS, Al Jajeh I, Nasiri N, Rootman J. Związek zapalenia gruczołu łzowego z łysieniem plackowatym. Orbita 2015; 34(1): 45-50.
18. Brzezińska-Wcisło L, Bergler-Czop B, Wcisło-Dziadecka D, LisSwiety A. Nowe aspekty leczenia łysienia plackowatego. Postepy Dermatol Alergol 2014; 31(4): 262-265.
19. Hattori M, Ogawa H. Analiza biochemicznawzrost włosówod aspektów starzenia się i aktywności enzymów. J Dermatol 1983; 10(1): 45-54.
20. Lee SH, Lee HJ, Baek IJ, Yon JM, Nam SY, Lee BJ, Yun YW, Kim YB, Hwang SY, Hong JT. Wpływ balsamu do skóry głowy DREAMMO® nawzrost włosówpromocja w modelu łysienia myszy C57BL/6. Lab Anim Res 2006; 22(1): 91-96.
21. Handjiski BK, Eichmüller S, Hofmann U, Czarnetzki BM, Paus R. Aktywność i lokalizacja fosfatazy alkalicznej podczas cyklu włosowego myszy. Br J Dermatol 1994; 131(3): 303-310.
22. Krzyż MJ, Dixelius J, Matsumoto T, Claesson-Welsh L. Transdukcja sygnału receptora VEGF. Trendy Biochem Sci 2003; 28(9): 488-494.
23. Shin S, Jeon JH, Park D, Jang JY, Joo SS, Hwang BY, Choe SY, Kim YB. Działanie przeciwzapalne wyciągu etanolowego z Angelica gigas w modelu zapalenia typu Carageenan-air pouch. Eksperyment animowany 2009; 58(4): 431-436.
24. Kim D, Park D, Kyung J, Yang YH, Choi EK, Lee YB, Kim HK, Hwang BY, Kim YB. Działanie przeciwzapalne ekstraktu nadkrytycznego z Houttuynia cordata w modelu zapalenia torebki karagenina-powietrze. Lab Anim Res 2012; 28(2): 137-140.
25. Rebora A. Patogeneza łysienia androgenowego. J Am Acad Dermatol 2004; 50(5): 777-779.
26. Shirai A, Ikeda J, Kawashima S, Tamaoki T, Kamiya T. KF19418, nowa mieszanka dowzrost włosówpromocja modeli mysich in vitro i in vivo. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 213-218.
27. Kawabe TT, Kubicek MF, Johnson GA, Buhl AE. Wykorzystanie aktywności transpeptydazy gamma-glutamylowej jako markera cyklu włosowego i indukcji anagenu w mieszkach włosowych myszy. J Invest Dermatol 1994; 103(1): 122-126.
28. Hamada K, Suzuki K. Ocena wskaźników biochemicznych jako markera cyklu włosowego u myszy C3H. Eksperyment animowany 1996; 45(3): 251-256.
29. Park SJ, Lee KW, Lim DS, Lee S. Siarczanowany fukoidan polisacharydowy stymuluje różnicowanie osteogenne ludzkich komórek macierzystych pochodzących z tkanki tłuszczowej. Komórki macierzyste, opracowanie 2012; 21(12): 2204-2211.

30. Danilenko DM, Pierścień BD, Pierce GF. Czynniki wzrostu i cytokiny w rozwoju i cyklu mieszków włosowych: najnowsze spostrzeżenia z modeli zwierzęcych i możliwości terapii klinicznej. Mol Med Dzisiaj 1996; 2(11): 460-467.
31. Ozeki M, Tabata Y. In vivo promował wzrost mieszków włosowych myszy poprzez kontrolowane uwalnianie czynników wzrostu. Biomateriały 2003; 24(13): 2387-2394.
32. Fujie T, Katoh S, Oura H, Urano Y, Arase S. Chemotaktyczny wpływ czynnika pochodzącego z komórek brodawki skórnej na komórki osłonki zewnętrznej korzenia. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 206-212.
33. Stenn KS, Paus R. Kontrola cyklu mieszków włosowych. Physiol Rev 2001; 81(1): 449-494.
34. Chapman RE, Hardy MH Wpływ wstrzykiwanego śródskórnie i miejscowo mysiego naskórkowego czynnika wzrostu na wzrost wełny, skóry i mieszków włosowych owiec merynosów. Aust J Biol Sci 1988; 41(2): 261-268.
35. Dvorak HF, brązowy LF, Detmar M, Dvorak AM. Czynnik przepuszczalności naczyń/czynnik wzrostu śródbłonka naczyń, hiperprzepuszczalność naczyń mikrokrążenia i angiogeneza. Am J Pathol 1995; 146(5): 1029-1039.
36. Ellis RA, Moretti G. Wzory naczyniowe związane z katagenowymi mieszkami włosowymi w ludzkiej skórze głowy. Ann NY Acad Sci 1959; 83: 448-457.
37. Stenn KS, Fernandez LA, Tirrell SJ. Angiogenne właściwości mieszków włosowych wibrysy szczura są związane z cebulką. J Invest Dermatol 1988; 90(3): 409-411.
38. Yano K, Brown LF, Detmar M. Kontrolawzrost włosówi wielkość pęcherzyka przez angiogenezę za pośrednictwem VEGF. J Clin Invest 2001; 107(4): 409-417.
39. Lachgar S, Charveron M, Ceruti I. Dystrybucja obojętnych etapów mieszków włosowych VEGF mRNA przez hybrydyzację fluorescencyjną in situ w połączeniu z konfokalną mikroskopią laserową. W: Hair Research for the Next Millenium (Van Neste DJJ, red.), Elsevier, Amsterdam, 1996; str. 407-12.
40. Freyschmidt-Paul P, Sundberg JP, Happle R, McElwee KJ, Metz S, Boggess D, Hoffmann R. Skuteczne leczenie łysienia plackowatego za pomocą kontaktowego uczulacza estru dibutylowego kwasu kwadratowego (SADBE) u myszy C3H/HeJ . J Invest Dermatol 1999; 113(1): 61-68.